專利名稱：：嘧啶二酮衍生物用于預(yù)防或治療丙型肝炎的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及嘧啶二酮衍生物或其藥物可接受的鹽用于預(yù)防或治療丙型肝炎的用途。
背景技術(shù)：
：在過去的二十年中，丙型肝炎病毒(HCV)感染所造成的丙型肝炎已被廣泛研究，但因?yàn)殛P(guān)于HCV的信息并不完全，因而它仍難以治療。目前，只有一種藥物，利巴韋林(Ribavirin)，被美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)用于治療丙型肝炎(Thomas等人，//^"^/c^v20(4):440，1994)，它是一種嘌呤核苷衍生物。干擾素-a對(duì)廣譜DNA和RNA病毒具有抗病毒活性，并已被建議作為丙型肝炎的治療劑。然而，由于其具有嚴(yán)重的副作用和低療效，而被認(rèn)為不適于臨床應(yīng)用。盡管使用利巴韋林-干擾素-a組合的治療己經(jīng)顯示出改善的結(jié)果，但除了諸如貧血癥和抑郁癥等伴隨副作用之外，它對(duì)丙型肝炎病毒仍表現(xiàn)出低的特異性且療效低。因此，需要一種用于治療丙型肝炎的治療活性改善和副作用降低的新藥劑。一些嘧啶二酮衍生物己被開發(fā)用作治療愛滋病(AIDS)的抗病毒藥物。例如，韓國(guó)專利未審查公開2000-65885披露了通過在嘧啶二酮的N-l位引入碳環(huán)、烷基或烷基羰基甲基而合成的新型嘧啶二酮衍生物。其公開內(nèi)容表明，所述嘧啶二酮衍生物對(duì)人免疫缺陷病毒(HIV)具有強(qiáng)藥理活性，并且沒有毒性。我們意外地發(fā)現(xiàn)，這種嘧啶二酮衍生物可有效地預(yù)防或治療丙型肝炎。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的是提供一種有效地預(yù)防或治療丙型肝炎的方法。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供下式(I)的嘧啶二酮衍生物或其藥物可接受的鹽用于預(yù)防或治療丙型肝炎的用途<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(I)其中，R'是任選用至少一個(gè)羥基C廣C4烷基取代的C3C6環(huán)烷基或C廣C6環(huán)烯基；X是氧、硫或羰基；n是l或2;以及R2、RS和I^每一個(gè)獨(dú)立地是氫或C廣C4烷基。具體實(shí)施例方式可用于本發(fā)明中的式(I)的優(yōu)選嘧啶二酮衍生物是其中W是C3C6環(huán)烷基、環(huán)戊烯基或羥基甲基環(huán)戊烯基的相應(yīng)化合物。本發(fā)明中使用的代表性化合物列于表l中。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本發(fā)明中使用的嘧啶二酮衍生物可以通過韓國(guó)專利未審査公開2000-65885中記載的方法制備。例如，本發(fā)明中使用的嘧啶二酮衍生物可以根據(jù)以下反應(yīng)方案制備:反應(yīng)方案其中，R^R4、X和n與式(I)中的定義具有相同含義，Lie指離去基團(tuán)，例如鹵素、烷基磺?；头蓟酋；?。在反應(yīng)方案中用作原料的式(II)化合物可以通過常規(guī)方法制備，例如根據(jù)WO93/02044和WO95/18109?？梢酝ㄟ^在堿存在下使式(II)的化合物與式(III)的化合物反應(yīng)來制備式(I)的嘧啶二酮衍生物。式(II)和式(III)的化合物的當(dāng)量比優(yōu)選為l:0.81:1.5。上述反應(yīng)中使用的堿可以選自無水碳酸氫鈉、無水碳酸鈉、氫化鈉、碳酸鉀和其混合物；反應(yīng)中使用的有機(jī)溶劑可以是極性溶劑，如二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亞砜和其混合物。反應(yīng)可以在10100。C下進(jìn)行148小時(shí)。此外，本發(fā)明中使用的嘧啶二酮衍生物可以是通過使式(I)的嘧啶二酮衍生物與無機(jī)酸或有機(jī)酸或者堿反應(yīng)而制得的藥物可接受的鹽的形式。所述酸可以包括諸如鹽酸和硫酸等無機(jī)酸以及諸如乙酸和馬來酸等有機(jī)酸。所述堿可以包括堿或堿土金屬，如鈉、鉀、鎂和鈣。根據(jù)本發(fā)明，嘧啶二酮衍生物或其藥物可接受的鹽由于抑制丙型肝炎病毒活性的程度高于利巴韋林，因而可以有利地用于預(yù)防或治療丙型肝炎。因此，本發(fā)明提供了一種預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其含有式(I)的嘧啶二酮衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分，并優(yōu)選與藥物可接受的載體或添加劑混合?？梢愿鶕?jù)任何常規(guī)過程制備藥物制劑。在制備制劑時(shí)，活性成分優(yōu)選與載體混合或被其稀釋，或者密封在載體、小袋或其他容器內(nèi)。當(dāng)載體用作稀釋劑時(shí)，它可以是固體、半固體或液體材料，作為活性成分的載體、賦形劑或介質(zhì)。因此，制劑可以是片劑、丸劑、粉劑、香粉、酏劑、懸浮液、乳液、溶液、糖漿、氣霧劑、軟和硬明膠膠囊、無菌注射溶液、無菌包裝粉末等的形式。適合的載體、賦形劑和稀釋劑的例子是乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油。制劑還可以包括填料、抗凝集劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、調(diào)味劑、乳化劑、防腐劑等。本發(fā)明的組合物可以配制成在通過使用本領(lǐng)域公知的任何過程給予至哺乳動(dòng)物之后可以快速、持續(xù)或延遲釋放活性成分。此外，本發(fā)明提供一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中丙型肝炎的方法，所述方法包括將式(I)的嘧啶二酮衍生物給予至所述哺乳動(dòng)物。活性成分的劑量可以根據(jù)各種有關(guān)因素調(diào)節(jié)，例如待治療的受試者的健康狀況、疾病的類型和嚴(yán)重性、給藥速率以及醫(yī)生的意見。式(I)的化合物可以口服或腸胃外給藥，在哺乳動(dòng)物(包括人)的情況下，單劑量或分劑量的有效量為約1100mg/kg(體重)/天，優(yōu)選550mg/kg(體重)/天。在某些情況下，小于上述劑量的量可以是適合的?？梢允褂么笥谏鲜鰟┝康牧?，除非會(huì)引起有害的副作用，并且這種量可以每天分劑量給予。下面的實(shí)施例僅用于說明目的，并非意在限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例l:為評(píng)估本發(fā)明中使用的嘧啶二酮衍生物作為預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物的功效，使用牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)進(jìn)行抗BVDV藥物篩選分析。BVDV是基因組、復(fù)制周期和感染類型與丙型肝炎病毒相似的病毒，因?yàn)楸透窝撞《静荒苓M(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)而使用BVDV。(步驟l)細(xì)胞和病毒的制備在篩選的前一天，對(duì)之前已繼代培養(yǎng)的MDBK細(xì)胞系(Mardin-Darby牛腎，ATTCCCL22)進(jìn)行胰蛋白酶化并鋪在培養(yǎng)板上，然后計(jì)數(shù)形成的細(xì)胞集落。然后，混合等量的DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)和Ham'sF-12,并將10%胎牛血清加到所得的混合物中，制得組織培養(yǎng)基。將MDBK細(xì)胞接種到培養(yǎng)基中，濃度為6xl(^個(gè)細(xì)胞/ml，然后將所得的細(xì)胞溶液加到96孔平底板上，其量為100)il/孔。此外，將以預(yù)定濃度儲(chǔ)存在-80。C冷凍機(jī)中的BVDV(ATCCVR534)轉(zhuǎn)移到生物安全柜中，并在室溫下解凍。用對(duì)于每孔中的病毒足量的組織培養(yǎng)基稀釋病毒，使得在病毒感染6天后達(dá)到85~95%的細(xì)胞死亡。(步驟2)樣品化合物的制備制備特定嘧啶二酮衍生物(SAMJINPharmaceuticals)作為試驗(yàn)化合物，治療丙型肝炎的常規(guī)藥物利巴韋林(Sigma)用作比較藥物。將每種試驗(yàn)化合物溶解在DMSO中，制得樣品溶液。然后，使用通過混合等量的DMEM和Ham'sF-12制備的混合物稀釋所得的樣品溶液，按照每次稀釋IO倍系列，稀釋3次，制得樣品稀釋物。(步驟3)病毒和樣品化合物的處理將MDBK細(xì)胞加到96孔板1天之后，除去板上的培養(yǎng)液中，向其中加入步驟2中得到的各樣品稀釋物，調(diào)節(jié)終濃度為l100叫/ml。將比較藥物利巴韋林加到板的各對(duì)照孔中，濃度為l100嗎/ml?？装灏▋H含有MDBK細(xì)胞的'細(xì)胞對(duì)照組孔'；含有MDBK細(xì)胞和BVDV病毒的'病毒對(duì)照孔'；含有MDBK細(xì)胞和各種樣品化合物的'藥物毒性對(duì)照孔'，用于評(píng)估每種樣品的細(xì)胞毒性；僅含有一種樣品化合物的'藥物比色對(duì)照孔'；以及含有MDBK細(xì)胞、BVDV病毒和一種樣品化合物的'實(shí)驗(yàn)組孔'。(步驟4)篩選板用的MTS染色將孔板放置在37°(:的5%C02培育器中6天，然后，用細(xì)胞增殖分析試劑盒(CellTiter96②AQuEousOneSolution,Promega)進(jìn)行分析。分析包括通過比色法計(jì)數(shù)活細(xì)胞的步驟，試劑盒含有MTS(—種新的四唑鹽化合物，當(dāng)加入試驗(yàn)化合物時(shí)形成穩(wěn)定的溶液)和PES(—種電子偶聯(lián)劑)。在具有劇烈新陳代謝的細(xì)胞中，線粒體脫氫酶所產(chǎn)生的NADPH或NADH使可溶性MTS變?yōu)椴蝗苄约着H(formazan)晶體的形式。因此，在培養(yǎng)基中，甲臜晶體的量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。將10^1的€611丁^^6*八(^1301;8OneSolution試劑加到培養(yǎng)板的各孔中，并在37。C的培育器中培養(yǎng)4小時(shí)。然后，用板粘合密封劑蓋住培養(yǎng)板，混合甲臜晶體。使用MolecularDevicesVmax板閱讀器(MolecularDevices)測(cè)量490nm下的每個(gè)孔的吸光度。使用內(nèi)部電腦程序和細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)分析每種樣品化合物的毒性，然后計(jì)算細(xì)胞活性％，治療指數(shù)(TI)。結(jié)果示于表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>在表2中，ECso指對(duì)于50y。的群體存在所期望的響應(yīng)的劑量，即對(duì)于50n/。的MDBK細(xì)胞抑制BVDV感染的樣品化合物的濃度；丁(:5()指對(duì)于50%的群體細(xì)胞死亡達(dá)到50%的劑量，即對(duì)于MDBK細(xì)胞樣品化合物的細(xì)胞毒作用。TI(TC5o/EC5。)指引起治療效果的治療劑的量與引起毒性效果的量之比。從定量上來講，它是產(chǎn)生毒性效果所需的劑量除以治療劑量所得的比值。如表2所示，根據(jù)本發(fā)明的嘧啶二酮物衍生物表現(xiàn)出與對(duì)照藥物利巴韋林類似的TI值或更優(yōu)的TI值，這意味著它們可用于預(yù)防或治療丙型肝炎。盡管己經(jīng)結(jié)合上述具體實(shí)施方案說明了本發(fā)明，但應(yīng)該意識(shí)到，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以做出各種修改和變化，這些修改和變化也落入所附權(quán)利要求限定的本發(fā)明的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.下式(I)的嘧啶二酮衍生物用于預(yù)防或治療丙型肝炎的用途其中，R1是任選用至少一個(gè)羥基C1～C4烷基取代的C3～C6環(huán)烷基或C3～C6環(huán)烯基；X是氧、硫或羰基；n是1或2；以及R2、R3和R4每一個(gè)獨(dú)立地是氫或C1～C4烷基。2.如權(quán)利要求l所述的用途，其中Ri是C3C6環(huán)垸基、環(huán)戊烯基或羥基甲基環(huán)戊烯基。3.如權(quán)利要求l所述的用途，其中所述嘧啶二酮衍生物選自1)1-環(huán)丙基甲基-6-(3,5-二甲基-苯基硫烷基)-5-異丙基-1//-嘧啶-2,4-二酮；2)1-環(huán)丙基甲基-6-(3,5-二甲基-苯氧基)-5-乙基-1//-嘧啶-2,4-二酮；3)1-環(huán)丁基甲基-6-(3，5-二甲基-苯基硫垸基)-5-異丙基-17/-嘧啶-2，4-二酮；4)1-環(huán)戊基甲基-6-(3,5-二甲基-苯基硫垸基)-5-異丙基-1//-嘧啶-2，4-二酮；5)1-環(huán)戊烯基-1-甲基-6-(3,5-二甲基-苯基硫垸基)-5-異丙基-1//-嘧啶-2,4陽(yáng)二酮；6)l-環(huán)戊烯基-l-甲基-6-(3,5-二甲基-苯氧基)-5-乙基-lif-嘧啶-2,4-二酮；7)1-環(huán)戊烯基-1-甲基-6-(3,5-二甲基-苯氧基)-5-異丙基-1//-嘧啶-2,4-二酮；8)1-環(huán)戊烯基-1-甲基-6-(3,5-二甲基-苯甲?；?-5-乙基-17/-嘧啶-2，4-二酮；9)1-環(huán)戊烯基-1-甲基-6-(3，5-二甲基-苯甲?；?-5-異丙基-1//-嘧啶-2,4國(guó)二酮；10)1-環(huán)戊烯基-3-甲基-5-異丙基-6-苯基硫垸基-1仏嘧啶-2,4-二酮；11)l-環(huán)己基甲基-6-(3,5-二甲基-苯基硫烷基)-5-異丙基-17f-嘧啶-2,4-二酮；12)1-(2-環(huán)戊基-乙基)-6-(3,5-二甲基-苯基硫烷基)-5-異丙基-1//-嘧啶-2,4-二酮；13)1-(2-環(huán)戊烯基-2-乙基)-6-(3,5-二甲基-苯氧基)-5-異丙基-1//-嘧啶-2,4-二酮；14)l-(2-環(huán)戊烯基-3-乙基)-6-(3,5-二甲基-苯基硫垸基)-5-乙基-liZ-嘧啶-2,4-二酮；15)1-(2-環(huán)戊烯基-2-乙基)-6-(3,5-二甲基-苯甲酰基)-5-異丙基-17/-嘧啶-2,4-二酮；以及16)6-(3，5-二甲基-苯甲?；?-5-乙基-l-(4-羥基甲基-環(huán)戊烯基-l-甲基)-1//-嘧啶-2,4-二酮。4.一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中丙型肝炎的方法，所述方法包括將下式(I)的嘧啶二酮衍生物給予至所述哺乳動(dòng)物(I)其中，R^是任選用至少一個(gè)羥基C廣C4烷基取代的C3C6環(huán)烷基或C3C6環(huán)烯基；X是氧、硫或羰基；n是l或2;以及R2、R^和I^每一個(gè)獨(dú)立地是氫或C廣C4垸基。x全文摘要式(I)的嘧啶二酮衍生物或其藥物可接受的鹽對(duì)丙型肝炎病毒表現(xiàn)出優(yōu)異的抑制活性。文檔編號(hào)A61K31/505GK101384262SQ200780005103公開日2009年3月11日申請(qǐng)日期2007年2月8日優(yōu)先權(quán)日2006年2月10日發(fā)明者周定垀,明炫男,曹義煥,權(quán)鎬晰,李在雄,李淳煥,李瑛熙,鄭淳侃,金鉉泰申請(qǐng)人:三進(jìn)制藥株式會(huì)社