專利名稱：鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬一種鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝。
目前，鱟試劑的生產(chǎn)工藝有各式各樣，如1979年2月出版的《福建醫(yī)藥》雜志第35頁《東方鱟血細(xì)胞溶解物的制備及其靈敏度測(cè)定》，生產(chǎn)的鱟試劑靈敏度低，在10ng～0.1ng/ml，鱟試劑自身空白陰性觀察時(shí)間短，僅為2～4小時(shí)，質(zhì)量差，產(chǎn)品穩(wěn)定性差。
本發(fā)明目的在于提供一種鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)的鱟試劑用于檢測(cè)對(duì)人體有害的細(xì)菌內(nèi)毒素，靈敏度高，質(zhì)量好，并更好地保護(hù)鱟原料資源。
本發(fā)明用抗凝劑、助懸洗滌劑、破解劑、增敏劑、至敏保護(hù)劑進(jìn)行處理，通過兩次離心分離，其生產(chǎn)工藝如下1、將新鮮活鱟洗凈，用75％的乙醇消毒，心門采血，加入抗凝劑，在10～15℃制得鱟血；2、在750～800轉(zhuǎn)/分的速度下將鱟血離心分離，棄藍(lán)色血清，將余下的白色細(xì)胞按體積比1∶4加入助懸洗滌劑，處理后，加入細(xì)胞破解劑，劇搖至血細(xì)胞完全破解，在0℃下存放獲得細(xì)胞內(nèi)溶物；3、加入體積比為1∶0.8～0.6的CHCl3，在2～5℃下劇搖，在2500轉(zhuǎn)/分～3000轉(zhuǎn)/分的速度下離心分離，收集細(xì)胞內(nèi)溶物即鱟試劑原液，加入增敏劑，預(yù)檢，再加至敏保護(hù)劑，分裝，在零下45℃～55℃凍干，在35℃以下封口，質(zhì)檢、印字即成成品。
加入抗凝劑是使用0.025～0.03M的NaOH或HCl溶液加熱40分鐘，除去溶媒中的細(xì)菌內(nèi)毒素，調(diào)PH值至中性，加入預(yù)配好的無菌輔料溶液稀釋，使含茶堿0.025M，NaCl0.5M，用tris-Hcl調(diào)PH值為7.6～7.8，加入0.6％活性碳吸附脫色，加熱15分鐘抽濾分裝再在120℃高壓消毒60分鐘，抗凝劑與鱟血體積比為1∶4.5±0.2。
加入助懸洗滌劑是用0.025MNaOH或Hcl溶液加熱40分鐘，破壞溶媒中污染菌，調(diào)PH值中性，加入NaCl溶液使含量為0.5M，用tris-Hcl調(diào)PH值為7.6～7.8，加入0.6％活性碳吸附脫色，抽濾分裝，在120℃高壓滅菌備用，洗滌劑與鱟血細(xì)胞存余量之比為1∶4；破解劑是用0.08M-0.12MNaOH或溶液加熱40分鐘，調(diào)PH值中性，用0.03Mtris-Hcl溶液調(diào)PH7.6～7.8，加0.6％活性碳吸附脫色，抽濾分裝，高壓消毒備用，破解劑與離心分離出的鱟血細(xì)胞體積比1∶8～10。
增敏劑用0.15～0.2MNaOH或Hcl溶液加熱40分鐘調(diào)PH值中性，加入NaCl溶液為1.5M，加入CaCl2溶液為0.31M，加入MgCl2溶液為0.41M，加碳0.6％吸附脫色，加熱15分鐘抽濾分裝，高壓滅菌備用。增敏劑與鱟試劑原液體積比7～9％。
至活調(diào)節(jié)保護(hù)劑，又稱至敏保護(hù)劑，用0.05-0.1MNaOH或Hcl溶液加熱40分鐘，調(diào)PH值中性，加活性物保護(hù)劑，此試劑主要用于加入試劑原液中，作鱟試劑敏感度的可控實(shí)驗(yàn)之用。
本發(fā)明各試劑的濃度適宜，不會(huì)造成細(xì)胞壁萎縮變性呈塊，不會(huì)導(dǎo)致破解困難和抑制凝固旦白酶的活性；也不會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞提前溶脹而破裂。并且，對(duì)溶媒進(jìn)行無熱原處理，防止鱟試劑受污染，提高溶媒純度。因此，本發(fā)明制血鱟試劑得率質(zhì)量高，產(chǎn)品靈敏度提高到0.05～0.006ng/ml，比有關(guān)技術(shù)的10ng～0.1ng/ml提高200倍以上，自身空白陽性觀察時(shí)間長(zhǎng)達(dá)12～24小時(shí)，比有關(guān)資料報(bào)道的高6倍，產(chǎn)品存放效期從一年延長(zhǎng)至二年以上，產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)到美國FDA質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，且保護(hù)了鱟資源、避免了盲目生產(chǎn)造成產(chǎn)品積壓和浪費(fèi)，提高企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。
本發(fā)明原料主要來源于中國鱟，雌雄不限，為保證鱟血質(zhì)量，在采血前鱟脫離水面后，不能超過兩天，并保證個(gè)體不受傷。生產(chǎn)前，所有生產(chǎn)容器必須嚴(yán)格無熱原處理，對(duì)各種輔助試劑的配制，首先對(duì)溶媒進(jìn)行熱原預(yù)除處理，然后采用稀釋法進(jìn)行配制，以保證各種試劑質(zhì)量。采血層次嚴(yán)格，首先將活鱟用自來水沖洗干凈，徹底消毒后，用適當(dāng)大小針頭接管采血(不宜過小以免堵塞)，藍(lán)色血液自然流入接收瓶中，首次離心分離為750～800轉(zhuǎn)/分，以免細(xì)胞破裂。首次分離出的血細(xì)胞由于量較少，不利于成批生產(chǎn)，故一般加用助懸洗滌劑輕搖使細(xì)胞混懸，以便歸瓶之用，洗滌次數(shù)應(yīng)視血細(xì)胞在瓶中的存留量而定，破解時(shí)加入破解劑劇搖，在0℃急凍保存細(xì)胞內(nèi)溶物。凍干前，為提高產(chǎn)品靈敏度，必須加入CHCL3(按體積比例1∶0.8～0.6)使細(xì)胞內(nèi)溶物中的抗脂多糖因子沉淀?xiàng)壋?，在分裝前應(yīng)先做預(yù)檢保證產(chǎn)品質(zhì)量。
權(quán)利要求
1.一種鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝，用抗凝劑、洗滌劑、破解劑、增敏劑，至敏保護(hù)劑對(duì)鱟血進(jìn)行處理，通過兩次離心分離，其特征在于生產(chǎn)工藝如下A、將新鮮活鱟洗凈，用75％的乙醇消毒，心門采血，加入抗凝劑，在10～15℃制得鱟血；B.在750～800轉(zhuǎn)/分的速度下將鱟血離心分離，棄藍(lán)色血清，將余下的白色細(xì)胞按體積比1∶4加入助懸洗滌劑，處理后，加入細(xì)胞破解劑，劇搖至血細(xì)胞完全破解，在0℃下存放獲得細(xì)胞內(nèi)溶物；C、加入體積比為1∶0.8～0.6的CHC13，在2～5℃下劇搖，在2500轉(zhuǎn)/分～3000轉(zhuǎn)/分的速度下離心分離，收集細(xì)胞內(nèi)溶物即鱟試劑原液，加入增敏劑，預(yù)檢，再加至敏保護(hù)劑，分裝，在零下45℃～55℃凍干，在35℃以下封口制成品；
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝，其特征在于加入抗凝劑是使用0.025～0.03M的NaOH或HCl溶液加熱40分鐘，除去溶媒中的細(xì)菌內(nèi)毒素，調(diào)PH值至中性，加入預(yù)配好的無菌輔料溶液稀釋，使含茶堿0.025M，NaCl0.5M，用tris-Hcl調(diào)明值為7.6～7.8，加入0.6％活性碳吸附脫色，加熱15分鐘抽濾分裝再在120℃高壓消毒60分鐘，抗凝劑與鱟血體積比為1∶4.5±0.2；
3.據(jù)權(quán)利要求1所述的鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝，其特征在于加入助懸洗滌劑是用0.025MNaOH或Hcl溶液加熱40分鐘，破壞溶媒中污染菌，調(diào)PH值中性，加入NaCl溶液使含量為0.5M，用tris-Hcl調(diào)PH值為7.6～7.8，加入0.6％活性碳吸附脫色，抽濾分裝，在120℃高壓滅菌備用，洗滌劑與鱟血細(xì)胞存余量之比為1∶4；
4.據(jù)權(quán)利要求1所述的鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝，其特征在于破解劑是用0.08M-0.12MNaOH或溶液加熱40分鐘，調(diào)PH值中性，用0.03M tris-Hcl溶液調(diào)PH7.6～7.8，加0.6％活性碳吸附脫色，抽濾分裝，高壓消毒備用，破解劑與離心分離出的鱟血細(xì)胞體積比1∶8～10；
5.據(jù)權(quán)利要求1所述的鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝，其特征在于增敏劑用0.15～0.2MNaOH或Hcl溶液加熱40分鐘調(diào)PH值中性，加入NaCl溶液為1.5M，加入CaCl2溶液為0.31M，加入MgCl2溶液為0.41M，加碳0.6％吸附脫色，加熱15分鐘抽濾分裝，高壓滅菌備用。增敏劑與鱟試劑原液體積比7～9％；
6.據(jù)權(quán)利要求1所述的鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝，其特征在于至活調(diào)節(jié)保護(hù)劑，又稱至敏保護(hù)劑，用0.05-0.1MNaOH或Hcl溶液加熱；分鐘，調(diào)PH值中性，加活性物保護(hù)劑。
全文摘要
一種鱟試劑的活性定向生產(chǎn)工藝，用抗凝劑、洗滌劑、破解劑、增敏劑、至敏保護(hù)劑，通過兩次離心分離，使鱟血細(xì)胞壁不易萎縮變性呈塊，易于破解，增強(qiáng)凝固蛋白酶的活性，制得鱟試劑不易受污染，靈敏度高，自身空白陰性觀察時(shí)間長(zhǎng)，產(chǎn)品穩(wěn)定性高。本發(fā)明保護(hù)了鱟資源，避免了盲目生產(chǎn)造成產(chǎn)品的積壓和浪費(fèi)，提高企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)G01N33/579GK1144337SQ9510565
公開日1997年3月5日 申請(qǐng)日期1995年6月9日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月9日
發(fā)明者莫水晶 申請(qǐng)人:莫水晶