°C;UV檢測:可變化(200-500nm)。
[0425] 微波加熱：
[0426] · Discover?CEM儀器，裝備有IOmL及35mL容器；
[0427] · Biotage Initiator Sixty。
[0428] 對于結構呈現的一般注釋
[0429] 具有立體異構中心的化合物:繪于下文實驗部分中的結構未必顯示化合物的所有 立體化學可能性，而是僅顯示一種。然而，在這些情形下，例如"反式-外消旋混合物"或"順 式-外消旋混合物"等術語添加在所繪示結構之后以指示其它立體化學選擇。
[0430]下文給出實例。展示的結構式為
[0432] 反式-外消旋混合物。
[0433] 所添加的術語"反式_外消旋混合物"指出第二種立體化學選擇：
[0437]本原則還適用于其它所繪的結構。
[0438]起始化合物：
[0439]實施例1A(反式_外消旋混合物）
[0441] 反式-外消旋混合物
[0442] 在0°C，將2.00g(13.9mmol)反式-環(huán)丁烷-1，2-二甲酸與16mL EtOH混合，并緩慢添 加2.21mL(30.5mmol)亞硫酰氯。將混合物升溫至室溫并攪拌1小時。在減壓下移除溶劑，并 通過活性堿性氧化鋁墊來過濾產物。獲得2.71g(98 % )產物。
[0443] HPLC-MS(方法I):Rt=I .34分鐘
[0444] MS(ESI pos):m/z = 201(M+H) + 〇
[0445] 以下實施例以與實施例1A的制備類似的方式使用相應的二酸作為原料來合成。
[0446]
[0447]實施例2A(外消旋混合物）
[0449] 將8 · 00g(89 · 7mmol )2_ 氨基-丙酸與 88 · 0mL(0 · 93mol)乙酸酐及88 · OmL吡啶混合。 將反應混合物在l〇〇°C攪拌135分鐘。在減壓下移除溶劑。向殘留物中添加甲苯并在減壓下 移除溶劑，隨后添加204mL(816mmol )HC1 (4M水溶液），并將混合物回流3小時。在減壓下移除 溶劑。向殘留物中添加1-丁醇(20mL)，并在減壓下移除溶劑。獲得11.6g標題化合物的鹽酸 鹽。
[0450] MS(ESI pos):m/z = 88(M+H) + 〇 [0451 ]實施例3A(反式-外消旋混合物）
[0453] 反式-外消旋混合物
[0454] 將 1.0(^(4.09111111〇1)5-氨基-1-(4,4-二氟-環(huán)己基)-1!1-吡唑-4-甲酸酰胺（參見 PCT專利申請WO 2010/026214的實施例8A)與15mL無水EtOH混合，添加2.46g(12.3mmol)實 施例IA及0.66g(16.4mmo 1)氫化鈉(在礦物油中的60 %懸浮液）。將反應混合物在微波爐中 加熱至140°C，保持30分鐘。將混合物冷卻至室溫，并添加氫氧化鈉溶液(4M水溶液）。在減壓 下移除溶劑。通過制備型HPLC (洗脫液A:水+0.13 % TFA，洗脫液B: MeOH)純化殘留物。獲得 0.70g(49%)產物。
[0455] HPLC-MS(方法I):Rt=I .24分鐘
[0456] MS(ESI pos) :m/z = 353(M+H) + 〇
[0457] 以下實施例以與實施例3A的制備類似的方式使用相應的酰胺及酯作為原料來合 成（對于原料，可參考PCT專利公布WO 2010/026214、W02009/121919及WO 2004/09921)。
[0461] 反式-外消旋混合物
[0462] 將0 · 200g(0 · 568mmol)實施例3A與0 · 157mL( 1 · Hmmol)三乙胺及5mL DMF混合。向 混合物中添加〇. 237g(0.624mmol )HATU，隨后將反應混合物在室溫攪拌10分鐘。向混合物中 添加0.042g(0.568mmol)乙酰肼，并將反應混合物在室溫攪拌1小時。通過制備型HPLC(洗脫 液A:水+0.13 % TFA，洗脫液B: MeOH)純化混合物。獲得30mg產物。
[0463] HPLC-MS(方法1): Rt= 1.03 分鐘
[0464] MS(ESI pos) :m/z = 409(M+H) + 〇
[0465] 實施例5A(反式-外消旋混合物）
[0467] 反式-外消旋混合物
[0468] 將0.150g(0.426mmol)實施例3A與2mL THF混合。將混合物冷卻至0°C，并添加 0.036mL(0.426mmol)草酰氯及一滴DMF。將反應混合物在0°C攪拌1小時。向反應混合物中添 加2mL ACN及0.426mL (0.85 Immo 1)三甲基甲硅烷基重氮甲烷（2M的己烷溶液）。將混合物攪 拌2小時，隨后緩慢添加0.213mL HCl (4M的二P惡烷溶液）。將反應物攪拌3小時。向混合物中 添加乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉水溶液。將有機層用水及鹽水洗滌并經硫酸鈉干燥。部分蒸 發(fā)溶劑，直至達到約2mL的體積?；旌衔镂唇涍M一步純化即用于下一步驟中。
[0469] HPLC-MS(方法I):Rt = 1 ·40分鐘
[0470] MS(ESI pos):m/z = 385/387(Cl)〇
[0471] 以下實施例以與實施例5A的制備類似的方式使用相應的酸作為原料來合成。
[0475]反式-立體異構體混合物
[0476]將0 · 200g(0 · 628mmo 1)實施例3B與 ImL DMF混合。添加0 · 26ImL(1 · 89mmo 1)三乙胺 及0.2 228(0.691111111〇1)181'1]。將反應混合物在室溫攪拌10分鐘。隨后添加0.0 788 (0.628mmo 1)實施例2A，并將混合物在室溫攪拌1小時。通過制備型HPLC (洗脫液A:水+ 0.13 % TFA，洗脫液B: MeOH)純化混合物。獲得190mg產物。
[0477] HPLC-MS(方法3):Rt=I .03分鐘
[0478] MS(ESI pos):m/z = 388(M+H) + 〇 [0479]實施例7A(反式-外消旋混合物）
[0481] 反式-外消旋混合物
[0482] 將0 · 200g(0 · 628mmol)實施例3B與ImL DMF混合。添加0 · 174mL( 1 · 26mmol)三乙胺 及0.2 228(0.691111111〇1打81'1]。將反應混合物在室溫攪拌10分鐘。隨后添加0.0668 (0.628mmol)2，2-二甲氧基乙胺，并將混合物在室溫攪拌1小時。隨后添加 HCl (2M水溶液）， 并通過制備型HPLC (洗脫液A:水+0.13 % TFA，洗脫液B: MeOH)純化混合物。將殘留物與5mL丙 酮及ImL HCl (2M水溶液)混合，并在氮氣中攪拌過夜。隨后用DCM萃取混合物。蒸發(fā)有機層， 并通過制備型HPLC(洗脫液A:水+0.13 % TFA，洗脫液B: MeOH)進行純化。獲得170mg產物。
[0483] HPLC-MS(方法3):Rt = 1 · 01 分鐘
[0484] MS(ESI pos) :m/z = 360(M+H) + 〇
[0485] 實施例8A(反式_立體異構體混合物）
[0487] 反式-立體異構體混合物
[0488] 將0 · 200g(0 · 568mmo 1)實施例3A與 1 · OmL DMF混合。添加0 · 432mL(2 · 84mmoI)DIPEA 及0.200g(0.624mmol)TBTU。將反應混合物在室溫攪拌10分鐘。隨后添加0.140g(l. Hmmol) 實施例2A，并將混合物在室溫攪拌2小時。通過制備型HPLC (洗脫液A:水+0.13 % TFA，洗脫液 B: MeOH)純化混合物。獲得70mg(29 % )產物。
[0489] HPLC-MS(方法I):Rt = 1 · 23分鐘
[0490] MS(ESI pos):m/z = 422(M+H) + 〇
[0491] 以下實施例以與實施例8A的制備類似的方式使用相應的親核試劑作為原料來合 成。
[0492]
[0493]實施例9A(反式_外消旋混合物）
[0495]反式-外消旋體混合物
[0496] 將0 · 182g(0 · 430mmol)戴斯-馬丁過鵬燒（Dess-Martin periodinane)與2 · 5mL DCM混合。在室溫添加在2.5mL DCM中的0.16(^(0.391臟〇1)實施例80。將反應混合物在室溫 攪拌30分鐘并在30°C攪拌30分鐘。向混合物中添加 IOmL硫代硫酸鈉溶液（10 %水溶液)及 IOmL飽和碳酸氫鈉溶液，并將混合物攪拌20分鐘。分離有機層，并用DCM萃取水性層。將有機 層用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，干燥并蒸發(fā)。獲得93mg( 58 % )產物。
[0497] HPLC-MS(方法I):Rt=I · 18分鐘
[0498] MS(ESI pos) :m/z = 408(M+H) + 〇
[0499] 以下實施例以與實施例9A的制備類似的方式使用相應的醇作為原料來合成。
[0503]反式-立體異構體混合物
[0504] 將0.450g實施例3C與3.5mL DMF及0.2738(2.21111111〇1)實施例24混合。添加1.0011^ (6.64mmol )DIPEA及0.390g( 1.22mmol )TBTU，并將混合物攪拌1小時。通過制備型HPLC(洗脫 液A:水+0.13 % TFA，洗脫液B: MeOH)純化混合物。獲得360mg(83 % )產物。
[0505] HPLC-MS(方法I):Rt = O.85分鐘
[0506] MS(ESI pos):m/z = 395(M+H) + 〇 [0507]實施例1lA(反式_外消旋混合物）
[0509]反式-外消旋混合物
[0510] 在氮氣中，將300mg(1.23mmol)5-氨基-卜(4,4_二氟-環(huán)己基)-1Η-吡唑-4-甲酸酰 胺（參見WO 2010/026214的實施例8A)與4mL無水Et0H、326mg(3.07mmol)反式-環(huán)丁烷-l，2-二腈及0.197g(4.91mmol)氫化鈉(在礦物油中的60%懸浮液)混合。將反應混合物在微波爐 中加熱至140°C，保持45分鐘。在減壓下移除溶劑。通過制備型HPLC(洗脫液A:水+0.13% TFA，洗脫液B: MeOH)純化殘留物。獲得21 Omg (51 % )標題化合物。
[0511] HPLC-MS(方法3):Rt = 1 · 19分鐘
[0512] MS(ESI pos) :m/z = 334(M+H) + 〇 [0513]實施例1lB(反式-外消旋混合物）
[0515]反式-外消旋混合物
[0516] 在室溫，在氮氣中，向〇.8g(3.805mmol)5-氨基-卜（四氫-啦喃-4-基M-H-啦唑-4-甲酸酰胺（參見PCT專利申請WO 2010/026214)在8mL無水EtOH中的溶液中添加0.457g (19.6mmo 1)氫化鈉(在礦物油中的60 %懸浮液）。攪拌1小時后，添加1.2g(11.42mmo 1)反式-環(huán)丁烷-1，2-二腈，并將反應混合物在微波爐中加熱至140°C，保持45分鐘。在減壓下移除溶 劑。將殘留物溶解于DCM中，添加水并分離各相。有機層經硫酸鈉干燥并在減壓下蒸發(fā)。通過 快速色譜(Cy/EtOAc，自80/20至100 % )純化粗物質，獲得黃色固體狀標題化合物。（0.64g， 55%)
[0517] HPLC-MS(方法IEh):Rt = 6 · 21 分鐘
[0518] MS(APCI) :m/z = 300(M+H) + 〇 [0519]實施例1lC(反式-外消旋混合物）
[0521] 反式-外消旋混合物
[0522] 在室溫，在氮氣中，向0.85g(3.91mmol)5-氨基-1-(4-甲基-吡啶-3-基)-1Η-吡唑-4-甲酸酰胺（參見PCT專利申請WO 2004/09921)在IOmL無水EtOH中的溶液中添加0.47g (11.74mmol)氫化鈉(在礦物油中的60%懸浮液）。攪拌1小時后，添加1.28g(ll .74mmol)反 式-環(huán)丁烷-1，2-二腈，并將反應混合物在微波爐中加熱至140°C，保持45分鐘。隨后將反應 混合物裝載于SCX筒上，收集氨部分并蒸發(fā)，并通過快速色譜(DCM/MeOH 90 :10)純化殘留 物，獲得白色固體狀標題化合物。（〇. 63g，52 % )。
[0523] HPLC-MS(方法IEh):Rt = 5.92分鐘
[0524] MS(APCI pos) :m/z = 307(M+H) + 〇 [0525]實施例12A(反式-外消旋混合物）
[0527] 反式-外消旋混合物
[0528] 將 190mg (0 · 570mmo 1)實施例 11A與0 · 28 ImL甲苯及0 · 093mL(2 · 30mmo 1)無水MeOH混 合。在0°C緩慢添加0.103mL(1.45mmo 1)乙酰氯。將混合物在室溫攪拌12小時。在減壓下移除 溶劑。向殘留物中添加〇. 5mL MeOH。隨后在0°C添加0.407mL(2.85mmol)氨(7M的MeOH溶液）， 并將混合物升溫至室溫。30分鐘后，用水處理反應混合物，并通過添加 TFA將pH調節(jié)至pH = 1。通過制備型HPLC(洗脫液A:水+0.13 % TFA，洗脫液B: MeOH)純化混合物，得到I IOmg(42 % ) 三氟乙酸鹽形式的產物。
[0529] HPLC-MS(方法3):Rt=I .04分鐘
[0530] MS(ESI pos):m/z = 351(M+H) + 〇 [0531]實施例12B(反式-外消旋混合物）
[0533] 反式-外消旋混合物
[0534] 向在0°C冷卻的無水Et0H(5mL)與無水CHCl3(5mL)的混合物中緩慢添加乙酰氯 (2.27mL，30.82mmol)，并將混合物攪拌20分鐘。0°C。逐滴添加實施例llB(0.410g， 1.027mmol)在無水CHCh(5mL)中的溶液，并將混合物在室溫攪拌過夜。在減壓下蒸發(fā)溶劑， 將殘留物溶解于無水Et0H(5mL)中，并添加6.4mL氨在MeOH中的7. OM溶液(30.82mmol)。將混 合物在室溫攪拌12小時。在減壓下移除溶劑。最終產物系以鹽酸鹽形式獲得，且未經進一步 純化即用于下一步驟中。（0.37g，通過HPLC-MS估計含量為50% )。
[0535] HPLC-MS(方法IEh):Rt = 5.38分鐘
[0536] MS(APCI pos) :m/z = 317(M+H) + 〇
[0537] 實施例12C(反式_外消旋混合物）
[0539] 反式-外消旋混合物
[0540] 向在0°C冷卻的無水EtOH(4mL)與無水CHCl3 (IOmL)的混合物中緩慢添加乙酰氯 (4.38!1^，61.7_〇1)，并將混合物攪拌20分鐘。0°(3。逐滴添加實施例11(：(0.638,2.057臟〇1) 在無水CHCl 3 (5mL)中的溶液，并將混合物在室溫攪拌過夜。在減壓下蒸發(fā)溶劑，將殘留物溶 解于無水MeOH(IOmL)中，并添加10.3mL氨在MeOH中的7.OM溶液(72mmol)。將混合物在室溫 攪拌12小時。在減壓下移除溶劑。以鹽酸鹽形式獲得的最終產物未經進一步純化原樣用于 下一步驟中。（0.85g，通過IH-NMR估計含量為84% )。
[0541 ] HPLC-MS(方法IEh):Rt = 5 · 15分鐘
[0542] MS(APCI pos) :m/z = 324(M+H) +
[0543]實施例13A(反式-外消旋混合物）
[0545] 向 1.6g(10.24mmol)2-乙酰基-環(huán)丁烷甲酸甲酯(如J.MecLChem，25，109，1982中所 述來制備）在無水Et0H(12mL)中的溶液中依次添加丙炔胺（1.4mL，20.4mmol)&0.122g (0· 307mmol)三氯金鈉 （sodium gold trichloride)。將反應混合物在微波爐中加熱至140 °C，保持45分鐘，過濾固體并蒸發(fā)有機物。通過快速色譜(Cy/EtOAc 70: 30)純化粗物質，獲 得黃綠色油狀標題化合物。（0.1 Sg，9.2 % )。
[0546] HPLC-MS(方法IEh) :Rt = 0.87分鐘
[0547] MS(APCI pos) :m/z = 192(M+H) + 〇
[0548] 實施例式實施方式
[0549]實施例1(反式-外消旋混合物）
[0551]反式-外消旋混合物
[0552] 將22 · Omg(0 · 306mmol)丙-2-酮肟與2mL無水THF混合，并向混合物中小心地添加 0.471mL(l. 22mmol)正丁基鋰(2.6mol/L，在甲苯中）。將反應混合物在室溫攪拌30分鐘。經 10分鐘小心地添加在ImL無水THF中的0.110g(0.278mmol)實施例8BJ0分鐘后，將反應混合 物添加至〇.28mL H2SO4與4mL THF/水(4:1)的混合物中。將混合物回流1.5小時。添加飽和碳 酸氫鈉水溶液，并用乙酸乙酯萃取。干燥有機層并蒸發(fā)溶劑。通過制備型HPLC(洗脫液A:水+ 0 · 13 % TFA，洗脫液B: MeOH)純化殘留物。獲得8mg(8 % )產物。
[0553] HPLC-MS(方法I):Rt=I .40分鐘
[0554] MS(ESI pos) :m/z = 390(M+H) + 〇 [0555]實施例2(反式-外消旋混合物）
[0557] 反式-外消旋混合物
[0558] 將0· 190g實施例6A與3mL DME及0.273g(l · 14mmol)Burgess試劑混合。將反應混合 物在微波爐中加熱至130°C，保持1小時。蒸發(fā)溶劑，并通過制備型HPLC (洗脫液A:水+0.13 % TFA，洗脫液B: MeOH)純化殘留物。獲得70mg(55 % )產物。
[0559] HPLC-MS(方法I): Rt = 1 · 11 分鐘
[0560] MS(ESI pos):m/z = 370(M+H) + 〇
[0561] 以下實施例以與實施例2的制備類似的方式使用相應的酰胺作為原料來合成。

[0564]實施例9