烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物及其制備方法及應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種烷氧基嘧啶拼接3?吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物，本發(fā)明以各種取代的烷氧基嘧啶拼接3?烯鍵氧化吲哚衍生物與肌氨酸，多聚甲醛，在有機(jī)溶劑中回流，進(jìn)行1,3?偶極子3+2環(huán)加成反應(yīng)，獲得烷氧基嘧啶拼接3?吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物，該類骨架包含潛在的生物活性嘧啶骨架和3?吡咯螺環(huán)氧化吲哚骨架，是一類重要的醫(yī)藥中間體類似物和藥物分子類似物，可以為生物活性篩選提供化合物源，對藥物的篩選和制藥行業(yè)具有重要的應(yīng)用價值，本發(fā)明針對這些衍生物對三種腫瘤細(xì)胞株進(jìn)行腫瘤生長抑制活性篩選，證明這些衍生物發(fā)現(xiàn)具有一定的抑制腫瘤細(xì)胞生長活性，可預(yù)期作為抗腫瘤藥物用途。
【專利說明】
烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物及其制備方法及 應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚 衍生物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 把具有生物活性基團(tuán)拼接到一個分子骨架中在有機(jī)化學(xué)和醫(yī)藥化學(xué)中是極其重 要的研究領(lǐng)域。（1)多官能團(tuán)氧化吲哚廣泛存在天然產(chǎn)物和合成藥物分子中，其中，尤其3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚因為具有廣泛的生物活性，吸引了許多化學(xué)工作者及醫(yī)藥化學(xué)團(tuán)隊的廣 泛關(guān)注，例如，天然產(chǎn)物螺環(huán)氧化 11引噪horsfiline和elacomine具有多重生物活性;重要的 是，甚至非天然產(chǎn)物螺環(huán)氧化吲哚III和IV已被證明完全抑制tsFT210細(xì)胞，在阻斷細(xì)胞分 裂的G2/M期，是一種重要的非肽p53-MDM2結(jié)合抑制劑。p53-MDM2結(jié)合抑制劑是一種治療癌 癥的新療法。（2)目前上市或即將上市的抗腫瘤或抗病毒感染的藥物相當(dāng)多都是烷氧基嘧 啶衍生而成。例如：齊多夫定（zidovudine，AZT)、ddC(雙脫氧胞苷)及Lamivudine(拉米夫 定)等是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑;烷氧基嘧啶化合物V-X為藥物分子或具有廣泛的生物活性分 子。鑒于3-烯鍵氧化吲哚骨架化合物和烷氧基嘧啶骨架化合物具有潛在的生物活性。因此， 把烷氧基嘧啶骨架拼接到3-烯鍵氧化吲哚骨架化合物上，合成一系列新的潛在多活性官能 團(tuán)取代的嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物，可以為生物活性篩選提供化合物源，對藥 物的篩選和制藥行業(yè)具有重要的應(yīng)用價值。（如附圖7所示）。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是:提供一種烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物及其制備 方法與應(yīng)用，它是一類重要的醫(yī)藥中間體類似物和藥物分子類似物，對藥物篩選和制藥行 業(yè)具有重要的應(yīng)用價值，且其合成方法非常經(jīng)濟(jì)簡便。
[0004] 本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物，該化合 物具有如下通式(I)的結(jié)構(gòu)：
[0005]
[0006] 式中，R1為烷基或氫或苯基;R2為烷基或鹵素或H;R3為烷基;R 4為鹵素或烷氧基或 H ;R5為鹵素或烷氧基。
[0007] 烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物的制備方法，由各種取代的烷氧基嘧 啶拼接3-烯鍵氧化吲哚衍生物與肌氨酸及多聚甲醛，按摩爾比為2: 3:6的比例在有機(jī)溶劑 中回流，進(jìn)行1，3_偶極子3+2環(huán)加成反應(yīng)，獲得烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生 物。
[0008] 所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物的制備方法，其特征在于:所 述的有機(jī)溶劑為乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、乙醚、四氫呋喃、苯、甲苯、二甲苯、三甲苯、 二氧六環(huán)、乙二醇二甲醚、異丙醚、氯仿、二氯甲烷或硝基苯。
[0009] 所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物的制備方法，其特征在于：各 種取代的烷氧基嘧啶拼接3-烯鍵氧化吲哚衍生物與肌氨酸，多聚甲醛，按摩爾比為2:3:6的 比例，在有機(jī)溶劑中的反應(yīng)溫度為50-100°C，反應(yīng)時間為5-20小時。
[0010] 所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物，其特征在于:在制備防治腫 瘤疾病藥物中的應(yīng)用。
[0011]本發(fā)明的反應(yīng)原理如下：
[0012]
[0013]式中，R1為烷基或氫或苯基;R2為烷基或鹵素或Η;#為烷基;R 4為鹵素或烷氧基或 H ;R5為鹵素或烷氧基。
[0014]通過采用上述技術(shù)方案，以各種取代的烷氧基嘧啶拼接3-烯鍵氧化吲哚衍生物與 肌氨酸及多聚甲醛，按特定比例在有機(jī)溶劑中回流，進(jìn)行1，3_偶極子3+2環(huán)加成反應(yīng)，獲得 烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物，該類骨架包含多重生物活性的3-吡咯螺環(huán)氧 化吲哚骨架拼接到烷氧基嘧啶骨架，可以為生物活性篩選提供化合物源，對多靶點(diǎn)多用途 藥的篩選和制藥行業(yè)具有重要的應(yīng)用價值。本發(fā)明操作簡單易行，原料合成便宜易得，可以 在各種有機(jī)溶劑中進(jìn)行，也具有較好的空氣穩(wěn)定性，適用性廣，對于各種取代基都有很好的 兼容性。
【附圖說明】
[0015] 附圖1及附圖2為本發(fā)明的實(shí)施例1的化合物3a譜圖數(shù)據(jù)；
[0016] 附圖3及附圖4為本發(fā)明的實(shí)施例1的化合物3b譜圖數(shù)據(jù)；
[0017]附圖5及附圖6為本發(fā)明的實(shí)施例1的化合物3c譜圖數(shù)據(jù)；
[0018] 附圖7為本發(fā)明的化合物的合成應(yīng)用；
[0019] 附圖8為本發(fā)明的實(shí)施例1的化合物3g，3 j和3〇單晶圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]本發(fā)明的實(shí)施例1:在反應(yīng)管中依次加入89. lmg雙甲氧基嘧啶拼接3-烯鍵氧化吲 噪la(0 · 3mmol)，53 · 4mg肌氛酸2(0 · 6mmol)和27 · Omg多聚甲酸(0 · 9mmol)和8 .OmL甲苯溶液， 加熱回流反應(yīng)12h，直接上樣經(jīng)柱層析（洗脫劑：V(石油醚）：V(乙酸乙酯）= 3:1)純化得 94.5mg化合物3a，白色固體，恪點(diǎn)：107.5-109.3°C ;產(chǎn)率89%，>20: ldr。核磁共振和高分辨 質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：111匪1?(0)(：13,4001抱）5:2.48(8,3!〇,2.63((1，了 = 8.0抱，1!〇,3.08-3.10(m,lH),3.14-3.17(m,4H),3.69-6.70(m,lH),3.78(s,6H),4.14-4.18(m,lH),6.62(d, J = 8.0Hz,lH) ,6.76-6.79(m,lH) ,7.03-7.09(m,2H) ,8.04(s, 1H) ；13C NMR(CDC13,100MHz) 5:26.3,42.4,44.8,53.9,58.3,59.7,66.8,102.3,107.2,121.7,124.1,127.9,131.4, 143.4，154.7，168.3，168.4，180.4;HRMS(ESI-T0F)m/z:Calcd.for Ci9H22N4Na〇3[M+Na]+: 377.1590；Found:377.1591.
[0021] 化合物3b_3t的制備方法同化合物1，投料比與化合物3a相同，可得到化合物3b-3t，反應(yīng)產(chǎn)率和dr值見表1和表2,但需強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合物不限于表1和表2所表示的 內(nèi)容。
[0022] 表1為烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其體外活性測試 結(jié)果
[0023]
[0024] 表2為烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其體外活性測試 結(jié)果
[0025]
[0026] 本實(shí)施例制備化合物3b:白色固體，產(chǎn)率79% ; 18: ldr;熔點(diǎn):82.9-84.6°C ;核磁共 振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz )δ : 2.93-2.95(m，3H)，3.62-3.65 (m，2H)，3.84(s，7H) ,4.27-4.32(m，2H) ,6.76-6.79(m，lH) ,6.85-6.86(m，lH)，6.94((1, J = 8.0Hz，lH)，7.02-7.06(m，lH)，8.14(s，lH)，9.30(br s，1H);13C 匪R(CDC13，100MHz)S: 29.7.42.7.43.2.54.1.57.9.58.9.109.9.122.0. 124.2.128.7.130.9.141.0.155.5， 168· 1 ;HRMS(ESI-T0F)m/z:Calcd·for Ci8H2〇N4Na〇3[M+Na] +:363· 1433;Found:363· 1430·
[0027] 本實(shí)施例制備化合物3c:白色固體，產(chǎn)率90% ; >20: ldr;熔點(diǎn)：144.4-145.8°C。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.56( s，3H)，2.80(d，J = 9·6Ηζ，1Η)，3·11-3.19(m，lH)，3.25(d，J=9.6Hz，lH)，3.78(s，7H)，4·30-4.35(m，lH),4.74 (d，J=15.6Hz，lH)，5.04(d，J= 15 ·6Ηζ，1Η)，6.53(d，J = 7.9Hz，lH) ,6.78-6.81(m，lH)， 6.96-6.98(m，1H)，7.19-7.22(m，3H),7.23-7.30(m，3H)，8.12(s，1H); 13C 匪R(CDC13， 100MHz)δ：42.3,43.7,44.1,53.8,58.4,59.2,66.8,101.8,108.2,121.6,124.5,127.1, 127.5.127.8.128.7.136.0. 142.6.154.8.168.3.180.0；HRMS(ESI-T0F)m/z:Calcd.for C25H26N 4Na〇3 [M+Na]+: 453.1903 ； Found: 453.1907.
[0028] 本實(shí)施例制備化合物3d:黃色固體，產(chǎn)率87%;>20:1扣 ;熔點(diǎn)：133.3-134.5°(：。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.51 (s，3H)，2.89(d，J = 9·6Ηζ，1Η)，3· 11-3.14(m，lH)，3.32((1, J = 9.6Hz，lH) ,3.83-3.84(m，7H) ,4.30-4.35(m, lH),6.71(d,J=8.1Hz,lH),6.84-6.86(m,lH),7.01-7.02(m,lH),7.26-7.27(m,lH),7.38-7.41(m，3H)，7.48-7.52(m，2H)，8.13(s，1H) ;13C NMR(CDC13，100MHz)S:42.2,45.0,54.0， 58.9.59.2.66.8.101.8.108.6.122.0. 124.6.125.8.127.5.127.7.129.3.130.9.134.8, 142·9，154·8，168·3，179·1;HRMS(ESI-TOF)m/z:Calcd·for C24H24N4Na〇3[M+Na] +: 439.1746；Found :439.1747.
[0029] 本實(shí)施例制備化合物3e:黃色固體，產(chǎn)率86%;>20:1扣 ;熔點(diǎn)：152.5-154.0°(：。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.51 (s，3H)，2.73(d，J = 9·6Ηζ，1Η),2.95-2.99(m，lH),3.09-3.13(m，lH)，3.15(s，3H),3.74-3.77(m，lH)，3.85(s， 6H) ,4.22-4.26(m,lH) ,6.52(d ,J = 7.8Hz , 1H), 7.03-7.06(m, 1H), 7.27-7.31 (m, 1H), 8.10 (s,1H)；13C NMR(CDC13,100MHz)5：26.3,42.0,44.7,53.9,58.6,58.7,65.8,101.7,107.8, 125.0. 126.8.127.5.133.1.141.8.154.9.168.1，179.2;HRMS(ESI-T0F)m/z:Calcd.for Ci9H 2iClN4Na03[M+Na] +:411.1200 ；Found :411.1202.
[0030] 本實(shí)施例制備化合物3f:黃色固體，產(chǎn)率89% ; >20: ldr;熔點(diǎn)：146.5-148.4°C。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.47( s，3H)，2.70(d，J = 9·6Ηζ，1H),2.90-2.95(m，lH)，3.08(d，J=9.5Hz，lH)，3.12(s，3H)，3·71-3.74(m，lH),3.83 (s,6H),4.18-4.22(m,lH) ,6.46(d,J = 8.4Hz,lH) ,7.14-7.17(m,lH),7.42(d,J = 4.0Hz, 1H)，8.08(s，lH);13C 匪R(CDC13,100ΜΗζ)δ:26.4,42.2,44.8,54.1,58.7,58.8,65.9, 101.8,108.5，114.3,127.9,130.6,133.6,142.4,155.0,168.2,179.2;HRMS(ESI-T0F)m/z: Calcd.for Ci9H2iBrN4Na〇3[M+Na]+:455.0695；Found:455.0697.
[0031] 本實(shí)施例制備化合物3g:黃色固體，產(chǎn)率80% ; >20 : ldr;熔點(diǎn)：88.5-90.2°C。核磁 共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.47-2.49(m，3H)，2.73(d，J = 9.2Hz,lH) ,3.03-3.08(m,lH) ,3.17(d,J = 9.6Hz,lH) ,3.70-3.73(m,lH) ,3.75(s,6H), 4.25-4.30(m,lH),5.25(d,J=16.2Hz,1H),5.41(d,J=16.2Hz,1H),6.68-6.73(m,1H), 6.92-6.95(m，lH),7.12-7.17(m，2H)，7.22-7.26(m，4H),8.13(s，lH);13C 匪R(CDC13, 100MHz)δ：42.3,44.7,44.8,53.9,58.2,59.2,67.6,101.9,114.5,122.6,123.4,126.5, 127.1.128.6.130.4.134.3.138.0. 138.7.155.0.168.3.180.6;HRMS(ESI_T0F)m/z: Ca 1 cd. for C25H25CIN4O3 [M+Na ]+: 464.1615 ； Found: 464.1617.
[0032] 本實(shí)施例制備化合物3h:黃色固體，產(chǎn)率87 % ; 19:1 dr;熔點(diǎn)：69 · 5-71 · 2°C。核磁共 振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下:? NMR(CDCl3,400MHz)S:2.91(s，3H)，2.80(d，J = 9.6Hz， lH)，2.93-2.96(m，lH)，3.14(d，J=9.4Hz，lH)，3.78-3.80(m，7H)，4.35-4.39(m，lH)，4.77-4.89(m，2H)，6.36(d，J=7.8Hz，lH),6.90-6.97(m，lH),7.07-7.10(m，2H),7.24-7.28(m， 4H)，7 ·42-7·43(ι?，1H)，8.13(s，lH) ;13C 匪R(CDC13，100MHz)S :42.2,43.9,44.2,54.0， 58.3.58.9.66.4.101.5.109.1.125.7.127.0. 127.1.127.7.128.9.129.0.133.1.135.6， 141·2，155·2，168·3，168·4，179·1;HRMS(ESI_T0F)m/z:Calcd·for C25H25ClN4Na〇3[M+Na] +: 487.1513；Found:487.1513.
[0033] 本實(shí)施例制備化合物3i :黃色固體，產(chǎn)率84% ; >20:1 dr;熔點(diǎn)：138.3-140.1°C。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.18(s，3H)，2.56(s，3H)， 2.81(d，J = 9.6Hz，lH) ,3.09-3.13(m，lH)，3.25(d，J = 9.6Hz，lH)，3.78-3.80(m，7H) ,4.30- 4.33(m,lH) ,4.74(d,J= 15.6Hz, 1H) ,4.99(d,J= 15.6Hz, 1H) ,6.40 (d,J = 7.9Ηζ,1Η), 6.75-6.78(m,lH),7.07(s,lH),7.17-7.19(m,2H),7.26-7.28(m,3H),8.12(s,lH)； 13C NMR (CDC13，100MHz)S:21.0,42.3,43.7,44.1,53.8,58.4,59.0,66.7,101.8,107.9,125.5， 127.0. 127.4.128.0.128.6.130.9.136.1.140.2.154.8.168.3，179.9;HRMS(ESI-TOF)m/z: Calcd · for C26H28N4Na〇3[M+Na] +: 467 · 2059;Found: 467 · 2057 ·
[0034] 本實(shí)施例制備化合物3 j :白色固體，產(chǎn)率90% ; >20: ldr;熔點(diǎn)：177.2-179.0°C。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.11 (s，3H)，2.51 (s，3H)， 2 · 75(d，J = 9.6Hz，1Η)，3.08-3 · 10(m，1Η)，3.23(d，J = 9.4Hz，lH)，3.73-3.76(m，lH) ,3.78 (s，6H)，4.28-4.32(m，lH)，5.02(d，J=16·8Ηζ，1Η)，5·26-5.33(m，lH)，6.68-6.71(m，2H), 7.02-7.04(m，2H),7.18-7.19(m，lH)，7.23-7.26(m，3H),8.11(s，1H);13C 匪R(CDC13, 100MHz)δ：18.8,42.4,44.6,45.0,53.9,57.8,59.4,67.8,102.1,118.8,121.7,122.7, 125.7.125.8.125.9.127.1.128.9.129.0. 131.8.131.9.138.2.140.7.154.8.168.4， 181 · 2 ;HRMS(ESI-T0F)m/z: C26H28N4Na〇3[M+Na] +: 467 · 2059 ;Found: 467 · 2062 ·
[0035] 本實(shí)施例制備化合物3k:白色固體，產(chǎn)率80% ; >20: ldr;熔點(diǎn)：139.1-140.9°C。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ: 1.29-1.34(m，6H)，2.50(s， 3H),2.76(dJ = 9.2Hz,lH),3.01-3.02(m,lH),3.19-3.21(m,lH),3.79-3.84(m,lH),4.10-4.26(m,4H),4.35-4.39(m,lH),4.73(d,J=15.6Hz,1H),5.01(d,J=15.6Hz,1H),6.45(d,J =8.0Hz,lH),6.75-6.78(m,lH),6.91-6.95(m,lH),7.13-7.15(m,2H),7.22-7.26(m,3H), 7.34(d，J=11·2Hz，1H)，8.05(s，lH) ;13C 匪R(CDC13，100MHz)S:14.6,42.2,43.7,44.2, 58.6.59.0. 62.7.67.2.101.8.102.9.108.4.121.6.124.8.127.0.127.1.127.5.127.8， 128·8，131·4，136·1，142·7，154·9，168·1，180·0;HRMS(ESI-T0F)m/z:C27H3〇N4Na〇3[M+Na] +: 481.2216；Found:481.2218.
[0036] 本實(shí)施例制備化合物31:黃色固體，產(chǎn)率82%;>20:1乜;熔點(diǎn)：216.5-217.9°(：。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下： 111匪1?(〇)(：13,40010^)6:0.96-0.99(111，6!1)，1.73-1.80(m，4H)，2.48(s，3H)，2.63-2.66(m，lH)，3.13-3.15(m，lH)，3.19-3.22(m，lH)，3.74-3.76(m,lH),4.10-4.19(m,4H),4.24-4.26(m,1H),6.73-6.77(m,2H),6.96-6.99(m,1H), 7.12(d,J = 7.8Hz,lH),8.02(s,lH),9.16(br s,1H)；13C NMR(CDC13,100ΜΗζ)δ： 10.8,22.3, 34.0. 42.2.44.4.51.9.58.7.68.6.103.0.109.4.121.6.124.4.127.9.131.5.141.0， 154.7,168.2,183.5；HRMS(ESI-T0F)m/z:C22H28N4Na03[M+Na] + :419.2059；Found:419.2060.
[0037] 本實(shí)施例制備化合物3m:白色固體，產(chǎn)率80%;>20:ldr;熔點(diǎn)：175.2-177.0°C。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 〇. 90-0.93(m，6H)，1. Μι .46(m，4H)， 1.70-1.75(m，4H) ，2.48(s ，3H)，2.64(d， J=8.4Hz，lH) ,3.09-3.14(m，lH)， 3·17-3·21(m，1H),3.71-3.74(m，lH),4.11-4.18(m，3H),4.21-4.26(m，2H)，6·72-6·75(ι?， 2H)，6 ·96-7·02(ι?，1H)，7.12(d，J = 8.1Hz，lH)，8.03(s，lH)，8.72(br s，lH) ;13C 匪R (CDC13，100MHz)S:13.9,19.4,31.0,34.0,42.2,44.5,51.9,58.7,66.8,103.0,109.2， 121.7，124.5，127.9，140.8，154.7，168.2，183.2;HRMS(ESI-TOF)m/z:C24H 32N4Na〇3[M+Na]+: 447.2372；Found :447.2375.
[0038] 本實(shí)施例制備化合物3n:白色固體，產(chǎn)率76% ; >20: ldr;熔點(diǎn)：182.7-184.7°C。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 〇. 88-0.90(m，12H)，1.60- 1.68(m，4H),1.70-1.77(m，2H)，2.47(s，3H)，2.63(d，J=8.4Hz，lH),3.08-3.12(m，lH)， 3.18(d，J=8.1Hz，lH),3.69-3.72(m，lH)，4.13-4.18(m，2H)，4.23-4.31(m，3H),6.73-6.78 (m，2H)，6.97-6.99(m，lH),7.10-7.11(m，lH)，8.03(s，lH)，9.21(br s，1H);13C NMR(CDC13， 100MHz)δ：22.4,22.7,25.1,37.6,42.2,44.5,58.8,65.5,102.1,109.4,121.6,124.4, 127.9,131.7,141·0,154.7,168.2,183.6;HRMS(ESI-TOF)m/z:C26H 36N4Na〇3[M+Na] + : 475.2685；Found :475.2687.
[0039] 本實(shí)施例制備化合物3o:黃色固體，產(chǎn)率88 % ; 14: ldr;熔點(diǎn)：134 · 2-136 · 1°C。核磁 共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ : 2.48(s，3H)，2.79(d，J = 12·4Ηζ，1Η)，2.88-2.92(m，lH)，3.01(d，J=12.4Hz，lH)，3.53(s，3H)，3.77-3.82(m，lH)， 3.92(s，3H),4.36-4.40(m，lH),6.68-6.72(m，lH),6.97-7.00(m，lH),7.21-7.25(m，lH)， 8.19(s，1H); 13C 匪R(CDC13，100MHz)S:30.0,41.9,48.4,54.7,58.4,58.6,66.6，115.1， 117.7,122.5,123.1,130.6,133.5,139.3,155.4,160.1,168.5,179.7;HRMS(ESI-T0F)m/z: Calcd. for Ci8Hi8Cl2N4Na〇2[M+Na] +: 415.0705 ；Found:415.0707.
[0040] 本實(shí)施例制備化合物3p:黃色固體，產(chǎn)率81 % ; 17: ldr;熔點(diǎn)：148.2-150.1°C。核磁 共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下匪R(CDCl3,400MHz)S:1.46-1.50(m，3H)，2.43(s， 3H),2.77-2.80(m,2H),2.91-2.93(m,lH),3.09(s,3H),3.75-3.79(m,lH),4.34-4.45(m, 3H)，6.47-6.51(m，lH)，6.70-6.75(m，lH)，7.15-7.21(m，lH)，8.11(s，lH); 13C NMR(CDC13， 100MHz)δ：14.3,26.7,41.6,48.2,58.2,59.2,63.8,65.9,107.9,112.6,112.9,114.2, 114.4,117.5,132.5,132.6,139.4,155.4,155.5,157.5,159.9,160.5,167.9,178.8；HRMS (ESI-TOF)m/z:Ci9H2〇ClFN4Na02[M+Na] +:413.1157 ；Found :413.1157.
[0041 ] 本實(shí)施例制備化合物3q:黃色固體，產(chǎn)率79% ; >20: ldr;熔點(diǎn)：117.1-118.7°C。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ: 1.49-1.53(m，3H)，2.49(S， 3H),2.85-2.89(m，2H)，3.02-3.03(m，lH)，3.81-3.84(m，lH)，4.37-4.40(m，lH),4.46-4.53 (m,2H),4.68(d,J=15.8Hz,1H),4.98(d,J=16.0Hz,1H),6.41-6.43(m,lH),6.63-6.66(m, 1H),7.2卜7.24(m，6H),8.19(s，lH); 13C 匪R(CDC13，100MHz)S:14.3,41.7,44.4,47.9, 58.2,59·3,63·8,66·5,100.0,109.1,109.2,113.1,114.2,114.5,117.4,127.4,127.8， 128.8.128.9.132.5.135.4.138.6.155.5.157.4.159.8.160.7.167.9.168.0. 178.8;HRMS (ESI-T0F)m/z: C25H24ClFN4Na〇2[M+Na] +: 489 · 1470 ;Found: 489 · 1474 ·
[0042] 本實(shí)施例制備化合物3r:黃色固體，產(chǎn)率81 % ; 18:1 dr;熔點(diǎn)：163.5-165.2 °C。核磁 共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下匪R(CDCl3,400MHz)S:1.49-1.53(m，3H)，2.52(s， 3H),2.93-3.00(m,2H),3.14(d,J=9.2Hz,lH),3.87-3.91(m,lH),4.39-4.54(m,3H),6.63 (d J = 7.8Hz,lH),6.82-6.86(m,lH),6.98-7.02(m,lH),7.35-7.49(m,6H),8.19(s,lH)； 13C 匪R(CDC13，100MHz)S:14.3,41.9,48.6,58.6,59.1,63.8,66.9,109.1,117.9,122.2, 124.8.126.4.128.0. 128.2.129.6.134.6.143.4.155.4.160.6.168.2.178.7；HRMS(ESI-T0F)m/z: C24H23ClN4Na〇2[M+Na] +: 457.1407 ；Found: 457.1409.
[0043] 本實(shí)施例制備化合物3s:黃色固體，產(chǎn)率80% ; >20: ldr;熔點(diǎn)：114.5-116.2°C。核 磁共振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下：4 NMR(CDC13，400MHz)δ: 2.49(s，3H)，2.73-2.75(m， 1H),3.01-3.08(m，lH)，3·19-3.23(m，lH),3.67-3.72(m，lH)，3.73(s，6H),3.80(s，3H)， 4.22-4.25(m，lH)，4.75(d，J= 15.8Hz，1H)，4.96((1, J= 15.2Hz，1H)，6.49((1, J = 7.8Hz， 1H),6.78-6.80(m，lH),6.93-6.95(m，lH)，7·15-7.19(m，3H),7.21-7.26(m，4H); 13C NMR (CDCI3,100ΜΗζ)δ:42·5,43·8,44·1，53·8,54·5,58·5,59·3,67·0,94·2,108.3,121.7， 124.8,127.1,127.2,127.3,127.5,127.8,128.8,136.2,142.7,162.5,169.9,180.3；HRMS (ESI-TOF)m/z: C26H28N4Na〇4[M+Na] +: 483 · 2008 ;Found: 483 · 2008 ·
[0044] 本實(shí)施例制備化合物3t:黃色固體，產(chǎn)率75% ; 17: ldr;熔點(diǎn)：88.3-89.8°C。核磁共 振和高分辨質(zhì)譜測試等結(jié)果如下:4 NMR(CDC13，400MHz)δ: 2.52(s，3H)，2.81 (d，J = 7.8Hz， 1H)，2.93-2.96(m，lH)，3·17(d，J=7.8Hz，lH),3.73-3.77(m，lH),3.81(s，6H)，3.86(s， 3H)，4.34-4.38(m，lH)，4.82-4.89(m，2H)，6.38(d，J=7.2Hz，lH)，6.93-6.94(m，lH)，7.10-7.12(m,2H),7.24-7.28(m,3H),7.47-7.48(m,lH)； 13C NMR(CDC13,100ΜΗζ)δ：42.1,43.6, 43.9,53.8,54.4,58.1,58.8,66.2,93.7,108.9,125.7,126.7,126.8,126.9,127.4,127.5, 128 · 6，128·7，133·2，135·5，141·1，162·5，169·7，179·1;HRMS(ESI-T0F)m/z:C26H27ClN4Na〇4 [M+Na] +:517.1619；Found:517.1621.
[0045] 本發(fā)明的式（1)化合物具有重要的生物活性，人前列腺癌細(xì)胞(PC-3)，人肺癌細(xì)胞 (A549)以及人白血病細(xì)胞(K562)共三株腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性試驗表明：此類式（1)所示的 結(jié)構(gòu)的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物對腫瘤細(xì)胞生長具有抑制作用，有可能 發(fā)展成為新的防治腫瘤藥物。但需強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合物不限于人肺癌細(xì)胞(A549)，人 前列腺癌細(xì)胞(PC-3)和人白血病細(xì)胞(K562)表示的細(xì)胞毒性。
[0046]藥理實(shí)施例1:化合物3a_3t對PC-3細(xì)胞的細(xì)胞毒性，但需強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合 物不限于化合物3a-3t對PC-3 (人前列腺癌）的細(xì)胞毒性。
[0047] PC-3(人前列腺癌）細(xì)胞用RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清， 100U/mL青霉素及100U/mL的鏈霉素。細(xì)胞以每孔5000個細(xì)胞的濃度加入到96孔中，在37°C 含5 % C02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
[0048]細(xì)胞存活率的測定用改良MTT法。細(xì)胞經(jīng)過24小時的孵育后，分別將新配的化合物 3a-3t的二甲基亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最終濃度分別為5μπι〇1/ 1^，104111〇1/1^，2(^1]1〇1/1^，4(^1]1〇1/1^和8(^1]1〇1/1^。48小時后，每孔加入1(^1^]\11'1'(511^/1111^)的憐 酸鹽緩沖液，再繼續(xù)在37°C培養(yǎng)4小時后，離心5分鐘除去未轉(zhuǎn)化的ΜΤΤ，每孔中加入150yL二 甲基亞砜。以溶解還原的MTT晶體甲臜(formazan)，用酶標(biāo)儀在490nm波長測定0D值。其中化 合物3a-3t對PC-3細(xì)胞半抑制濃度IC 5Q由spss軟件（19版本)分析得至I」?；衔?a-3t對PC-3 腫瘤細(xì)胞的IC5Q為見表1和表2;而陽性對照順鉑對PC-3腫瘤細(xì)胞的IC 5Q為24.4ymol/L。
[0049] 實(shí)驗結(jié)論:PC-3細(xì)胞是測試化合物對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性的有效工具和評價指 標(biāo)。本實(shí)驗表明此類式（1)所示的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物對PC-3細(xì)胞 具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，部分化合物和腫瘤治療一線用藥順鉑同一數(shù)量級，有可能發(fā)展成新 的具有抗腫瘤作用的藥物。
[0050] 藥理實(shí)施例2:化合物3a-3t對A549細(xì)胞的細(xì)胞毒性，但需強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合 物不限于化合物3a-3t對A549細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
[00511 A549(人非小細(xì)胞肺癌肺癌）用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清， 100U/mL的青霉素和100U/mL鏈霉素。細(xì)胞以每孔4000個細(xì)胞的濃度加入到96孔中，在37°C 含5 % C02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
[0052] 細(xì)胞存活率的測定用改良MTT法。具體方法如藥理實(shí)施例1?；衔?a-3t對A549月中 瘤細(xì)胞的IC5Q為見表1和表2;而陽性照順鉑對A549腫瘤細(xì)胞的IC5Q為28. ΙμL?ο?/L。
[0053]實(shí)驗結(jié)論:A549細(xì)胞是測試化合物對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性的有效工具和評價指 標(biāo)。本實(shí)驗表明此類式（1)所示的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物對A549細(xì)胞 具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，部分化合物和腫瘤治療一線用藥順鉑同一數(shù)量級，有可能發(fā)展成新 的具有抗腫瘤作用的藥物。
[0054]藥理實(shí)施例3:化合物3a_3t對K562細(xì)胞的細(xì)胞毒性，但需強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合 物不限于化合物3a-3t對A549細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
[0055] K562(人慢性髓系白血病細(xì)胞）用RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛 血清，100U/mL的青霉素和100U/mL鏈霉素。細(xì)胞以每孔5000個細(xì)胞的濃度加入到96孔中，在 37 °C含5 % C02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
[0056] 細(xì)胞存活率的測定用改良MTT法。具體方法如藥理實(shí)施例1?；衔?a_3t對K562細(xì) 胞的IC5Q為見表1和表2;而陽性對照順鉑對K562腫瘤細(xì)胞的IC5Q為26.8ymol/L。
[0057]實(shí)驗結(jié)論:K562細(xì)胞是測試化合物對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性的有效工具和評價指 標(biāo)。本實(shí)驗表明此類式（1)所示的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物對K562細(xì)胞 具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，部分化合物和腫瘤治療一線用藥順鉑同一數(shù)量級，有可能發(fā)展成新 的具有抗腫瘤作用的藥物。
[0058]從以上藥理實(shí)施例中我們可以看出這些化合物對這三株腫瘤細(xì)胞都顯示有一定 的細(xì)胞毒性。但需強(qiáng)調(diào)的是本發(fā)明的化合物不限于人前列腺癌細(xì)胞(PC-3)，人肺癌細(xì)胞 (A549)以及人白血病細(xì)胞(K562)表示的細(xì)胞毒性?？梢娺@些化合物具有開發(fā)成為抗腫瘤藥 物的潛力，值得繼續(xù)深入研究下去。
【主權(quán)項】
1. 一種烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物，其特征在于：該化合物具有如通 式(I)所示的結(jié)構(gòu)：式中，R1為烷基或氫或苯基;R2為烷基或鹵素或H; R3為烷基;R4為鹵素或烷氧基或H; R5為 鹵素或烷氧基。2. -種如權(quán)利要求1所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物的制備方法， 其特征在于:各種取代的烷氧基嘧啶拼接3-烯鍵氧化吲哚衍生物與肌氨酸及多聚甲醛，按 摩爾比為2:3:6的比例在有機(jī)溶劑中回流，進(jìn)行1，3_偶極子3+2環(huán)加成反應(yīng)，獲得烷氧基嘧 啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物的制備方法，其 特征在于:所述的有機(jī)溶劑為乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、乙醚、四氫呋喃、苯、甲苯、二 甲苯、三甲苯、二氧六環(huán)、乙二醇二甲醚、異丙醚、氯仿、二氯甲烷或硝基苯。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物的制備方法，其 特征在于:各種取代的烷氧基嘧啶拼接3-烯鍵氧化吲哚衍生物與肌氨酸，多聚甲醛，按摩爾 比為2:3:6的比例，在有機(jī)溶劑中的反應(yīng)溫度為50-100°C，反應(yīng)時間為5-20小時。5. -種如權(quán)利要求1所述的烷氧基嘧啶拼接3-吡咯螺環(huán)氧化吲哚衍生物在制備防治腫 瘤疾病藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK106008532SQ201610573327
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月20日
【發(fā)明人】劉雄利, 劉歡歡, 王丹丹, 楊超, 陳智勇, 周英, 俸婷婷, 余章彪
【申請人】貴州大學(xué)