3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1,6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6 ...的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種3?（6?溴?4?氧?4H?色酮）?1?苯基?5?對(duì)甲氧基苯基?1,6a?二氫吡咯啉[3,4?c]吡唑?4,6（3aH,5H）?二酮及其制備方法與應(yīng)用，該制備方法用1,3?偶極環(huán)加成方法在N?對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo)入了色酮的結(jié)構(gòu)，從而合成一個(gè)新型的3?（6?溴?4?氧?4H?色酮）?1?苯基?5?對(duì)甲氧基苯基?1,6a?二氫吡咯啉[3,4?c]吡唑?4,6（3aH,5H）?二酮，上述化合物對(duì)于腫瘤細(xì)胞株具有良好的抑制作用，其中對(duì)于白血病細(xì)胞等具有更好的抑制率和選擇性，在制備抗腫瘤藥物等方面，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】
3-(6-漠-4-氧-4H-色酬)-1 -苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1 , 6a-二 氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH, 5H)-二酮及其制備方法與 應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001] 本發(fā)明涉及一種新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺衍生物， 具體是指3- (6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1，6a-二氫吡咯啉[3，4-c ]吡 唑-4,6(3aH，5H)_二酮及其制備方法與應(yīng)用。 【背景技術(shù)】：
[0002] N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺，化學(xué)名：1-對(duì)甲氧基苯基吡咯烷-2，5-二酮，化學(xué)結(jié) 構(gòu)式如T ·
[0003] 1-對(duì)甲氧基苯基吡咯烷-2, 5-二酮
[0004] 1，3_偶極環(huán)加成反應(yīng)以其良好的區(qū)域和主體選擇性而成為合成五元雜環(huán)化合物 最主要的方法，也是雜環(huán)藥物化學(xué)研究中較為活躍的一類反應(yīng)。近幾年來(lái)，由于色酮廣泛的 生物活性，諸如抗癌、抗菌、抑制血小板凝聚等而倍受關(guān)注。所以，無(wú)論是從藥理學(xué)還是從合 成角度考慮，這類雜環(huán)化合物都有很高的合成價(jià)值。
[0005] 吡唑衍生物作為一類有用的中間體以及它們本身所顯示出來(lái)的多種藥物活性而 受到人們的廣泛關(guān)注。本發(fā)明通過(guò)研究不同雜環(huán)在同一分子中聚集而對(duì)藥理活性所產(chǎn)生的 影響，從而提供一種全新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺衍生物。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0006] 本發(fā)明的第一方面目的是提供一種新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲氧基苯基 馬來(lái)酰亞胺衍生物。
[0007] 本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
[0008] 一種含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺衍生物，其化學(xué)名稱為： 3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6 (3aH，5H)_二酮，其結(jié)構(gòu)式如下：
[0009]
[0010] 該化合物相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：
[0011] ο.
[0012]
【申請(qǐng)人】通過(guò)研究發(fā)現(xiàn):使用色酮衍生物在吡唑的結(jié)構(gòu)上進(jìn)行取代，對(duì)Ν-對(duì)甲氧基 苯基馬來(lái)酰亞胺進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，獲得了一種全新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類Ν-對(duì)甲氧基苯基 馬來(lái)酰亞胺衍生物，該化合物可以改變藥理活性。
[0013] 本發(fā)明的第二方面目的是提供一種上述含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類Ν-對(duì)甲氧基苯基 馬來(lái)酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:將順丁烯二酸酐和對(duì)甲氧基苯 胺反應(yīng)合成Ν-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺（3)，然后采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應(yīng)合成6-溴代色酮苯腙(4)，最后將Ν-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺(3)和6-溴代色酮苯腙(4)進(jìn)行偶極 環(huán)加成反應(yīng)，合成3-(6-溴-4-氧-4Η-色酮)-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1，6a-二氫吡咯啉[3， 4-c ]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二酮（5)。
[0014] 本發(fā)明涉及的反應(yīng)方程式如下：
[0015]
[0016] 近一步的，所還的一柙旲-4-氧-411-芭0|3」）-1-本.-；3-對(duì)中氧盎本.-1，6&-二氫吡咯啉[3，4-c ]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0017] (1)、N_對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺的合成：
[0018] 將順丁烯二酸酐和對(duì)甲氧基苯胺溶解于丙酮溶劑中，在攪拌下反應(yīng)并逐步產(chǎn)生淡 黃色沉淀，室溫反應(yīng)1小時(shí)后，取少量沉淀，經(jīng)水洗、干燥，依次加入醋酸錳、三乙胺和醋酐， 升溫后，沉淀逐步溶解，在50~60°C下反應(yīng)2小時(shí)，溶液由橙黃變成紅黑，逐漸出現(xiàn)新的沉 淀，冷卻至室溫，水中沉淀經(jīng)水洗、干燥，用丙酮重結(jié)晶得到產(chǎn)物N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞 胺⑶；
[0019] (2)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0020] 所述的6-溴代色酮苯腙(4)為已知化合物，CAS號(hào)為68287-82-1，本發(fā)明采用6-溴 代色酮與苯肼脫水反應(yīng)生成席夫堿的方法進(jìn)行合成:取2mmol的苯肼加入盛有10mL四氫呋 喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmol 6-溴代色酮的無(wú)水 乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn);連續(xù)沸水浴回流攪 拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水?dāng)嚢瑁S色沉淀顏色變深，抽濾得6-溴代色酮苯腙，為黃 紅色針狀產(chǎn)物，用無(wú)水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(4);
[0021] (3)、3-(6-溴-4-氧-紐-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1，6&-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3 &!1，5!〇-二酮的合成：
[0022] 將lmmol N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺（3)和l.lmmol 6-溴代色酮苯腙(4)于20mL 乙醇中，再加入1.2mL氯胺T，回流12小時(shí)，將沉淀過(guò)濾，清洗，用甲醇再結(jié)晶，真空干燥后得 到產(chǎn)物3-(6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH，5H)-二酮（5)。
[0023]更進(jìn)一步的設(shè)置在于：
[0024]所述的步驟(1)中，反應(yīng)得到的淡黃色沉淀需進(jìn)行減壓過(guò)濾。
[0025] 本發(fā)明的第三方面目的是提供一種3-(6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲氧基 苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH，5H)_二酮在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。通 過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證:上述化合物，對(duì)于不同瘤株如人肝癌細(xì)胞、口腔癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì) 胞、白血病細(xì)胞、腸癌細(xì)胞等，均具有抑制作用，其中對(duì)于白血病細(xì)胞具有更佳的抑制率和 選擇性，可單獨(dú)制備抗腫瘤藥物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合 物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
[0026] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0027] 本
【申請(qǐng)人】經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，使用色酮衍生物在吡唑的結(jié)構(gòu)上進(jìn)行取代，對(duì)N-對(duì)甲氧基 苯基馬來(lái)酰亞胺進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，獲得了一種全新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲氧基苯基 馬來(lái)酰亞胺衍生物，該化合物可以改變藥理活性，經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)及分析，研究不同雜環(huán)在同 一分子中聚集而對(duì)藥理活性所產(chǎn)生的影響，
【申請(qǐng)人】通過(guò)偶極環(huán)加成反應(yīng)合成了含有色酮結(jié) 構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺衍生物，該方法制備的新型含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類 N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺衍生物，在制備抗腫瘤藥物方面，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】：
[0028] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述，但實(shí)施例不應(yīng)解釋為限定本發(fā)明的范 圍。
[0029]實(shí)施例1、N_對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺的合成：
[0030] 將順丁烯二酸酐和對(duì)甲氧基苯胺溶解于一定量的丙酮溶劑中，在攪拌下將對(duì)甲氧 基苯胺溶液滴加至含有順丁烯二酸酐溶液的反應(yīng)瓶，反應(yīng)放熱并逐步產(chǎn)生淡黃色沉淀，室 溫反應(yīng)1小時(shí)后，取少量沉淀，經(jīng)水洗、干燥，依次加入醋酸錳、三乙胺和醋酐，升溫后，沉淀 逐步溶解，在50~60°C下反應(yīng)2小時(shí)，溶液由橙黃變成紅黑，逐漸出現(xiàn)新的沉淀，冷卻至室 溫，水中沉淀經(jīng)大量水洗、干燥，用丙酮重結(jié)晶得到產(chǎn)物N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺(3)。
[0031] 實(shí)施例2、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0032] 取2mmol的苯肼加入盛有10mL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩 慢滴加入20mL溶有2mmo 1 6-溴代色酮的無(wú)水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴 鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水?dāng)嚢?，淡黃色 沉淀顏色變深，抽濾得苯腙，黃紅色針狀產(chǎn)物。用無(wú)水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴 代色酮苯腙(4)。
[0033] 實(shí)施例3、3-(6_溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-l，6a-二氫吡咯啉
[3,4-c]吡唑-4,6(3&!1，5!〇-二酮的合成：
[0034] 將lmmol N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酰亞胺（3)和l.lmmol 6-溴代色酮苯腙（4)于20mL 乙醇中，再加入1.2mL氯胺T，回流12小時(shí)，將沉淀過(guò)濾，清洗，用甲醇再結(jié)晶，真空干燥后得 到產(chǎn)物3-(6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH，5H)-二酮(5)。產(chǎn)物為淡黃色結(jié)晶，產(chǎn)率37·5%，m·p·163·5-165°C。
[0035]化合物（5)結(jié)構(gòu)確認(rèn):C27H18BrN3〇5
[0036] 咕匪1?(0150)3:7.245-7.502(111，12!1，八『-!1)，6.47(8，1!1，〇 = (：-!1)，5.82((1，了 = 1010Hz，lH)，5.34(d，J = 1014Hz，lH)，3.78(s，3H，0CH3)
[0037] IR 3457(N-C = 0) ,3085(ArH), 1720(C = 0), 1577(C = N), 1296(C-〇-C)cm_1
[0038] m/e:543.04(100.0 % ),545.04(97.6 % ),544.05(29.6 % )〇
[0039] Anal.calcd.for C27Hi8BrN3〇5:C，59.57;H，3.33;N，7.72 〇
[0040] 應(yīng)用實(shí)施例4:采用MTT法檢測(cè)受試化合物(5)對(duì)不同瘤株的的抗腫瘤活性。
[0041 ]將上述實(shí)施例制備的化合物（5)，分別以不同瘤株[腫瘤細(xì)胞Bel-7402(人肝癌細(xì) 胞）、KB(口腔癌細(xì)胞）、SGC7901(胃癌細(xì)胞）、H08901 (卵巢癌細(xì)胞）、HL-60(白血病細(xì)胞）、 ECA109(腸癌細(xì)胞）]為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，測(cè)試化合物(5)對(duì)于不同瘤株的體外抑制作用：實(shí)驗(yàn)采用 四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT法），活性用半數(shù)抑制濃度表示（IC 50)。
[0042]具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：
[0043]將化合物（5)用DMS0溶解，稀釋，腫瘤細(xì)胞Bel-7402(人肝癌細(xì)胞）、KB(口腔癌細(xì) 胞）、SGC7901 (胃癌細(xì)胞）、H08901 (卵巢癌細(xì)胞）、HL-60(白血病細(xì)胞）、ECA109(腸癌細(xì)胞)在 96孔板上種入4000個(gè)/200yL/孔，每孔加入化合物2yL，終濃度為12. ΟμΜ，6. ΟμΜ，3. ΟμΜ，1.5μ Μ，共同于37°C、5%C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育72小時(shí)，以DMS0(1 % )為空白對(duì)照。72小時(shí)后，加入 終濃度為〇. 25mg/mL的MTT，置于37°C、5 %C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中4小時(shí)，之后吸干溶劑，每孔加入 100μ1 DMS0，用酶聯(lián)免疫儀于570nm處測(cè)定吸光度(0D值），所得數(shù)據(jù)用于計(jì)算IC5Q值。挑選抑 制活性高的化合物，測(cè)定不同濃度下的化合物作用時(shí)間不同對(duì)人腫瘤細(xì)胞周期和凋亡的影 響。
[0044] 不同濃度的受試化合物用96孔板進(jìn)行粗篩，根據(jù)所得的抑制率，計(jì)算IC5Q值，結(jié)果 見(jiàn)下表。
[0045] 表1、化合物(5)對(duì)六種腫瘤細(xì)胞株的1(：50值
[0046] τC
'
[0047] 通過(guò)上表數(shù)據(jù)可以看出：本發(fā)明制備的化合物，對(duì)于六種腫瘤細(xì)胞株均具有抑制 作用，其中對(duì)于HL-60(白血病細(xì)胞)具有更好的抑制率和選擇性，可以單獨(dú)制備抗腫瘤藥 物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前 景。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.3-(6-漠-4-氧-4H-色酬)-I-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-I，6a-二氨化咯嘟[3，4-cM挫- 4,6(3aH，甜)-二酬，其結(jié)構(gòu)式如下：2. -種3-(6-漠-4-氧-4H-色酬)-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1，6a-二氨化咯嘟[3，4-C] 化挫-4,6(3址，5H)-二酬的制備方法，其特征在于，包括W下步驟:將順下締二酸酢和對(duì)甲 氧基苯胺反應(yīng)合成N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酷亞胺，然后采用6-漠代色酬與苯阱脫水反應(yīng)合成 6-漠代色酬苯腺，最后將N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酷亞胺和6-漠代色酬苯腺進(jìn)行偶極環(huán)加成反 應(yīng)，合成3-( 6-漠-4-氧-4H-色酬)-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1，6a-二氨化咯嘟[3，4-C ]化 挫-4,6(3址，5H)-二酬。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種3-(6-漠-4-氧-4H-色酬)-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1， 6a-二氨化咯嘟[3，4-C ]化挫-4，6 (3址，5H)-二酬的制備方法，其特征在于，包括W下步驟： (1) 、N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酷亞胺的合成： 將順下締二酸酢和對(duì)甲氧基苯胺溶解于丙酬溶劑中，在攬拌下反應(yīng)并逐步產(chǎn)生淡黃色 沉淀，室溫反應(yīng)1小時(shí)后，取少量沉淀，經(jīng)水洗、干燥，依次加入醋酸儘、S乙胺和醋酢，升溫 后，沉淀逐步溶解，在50~60°C下反應(yīng)2小時(shí)，溶液由澄黃變成紅黑，逐漸出現(xiàn)新的沉淀，冷 卻至室溫，水中沉淀經(jīng)水洗、干燥，用丙酬重結(jié)晶得到產(chǎn)物N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酷亞胺； (2) 、6-漠代色酬苯腺的合成： 取2mmol的苯阱加入盛有IOmL四氨巧喃的燒瓶中，沸水浴回流攬拌至溶解，然后緩慢滴 加入20mL溶有2mmol 6-漠代色酬的無(wú)水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攬拌比，滴加10滴鹽酸， 有淡黃色沉淀出現(xiàn);連續(xù)沸水浴回流攬拌化，停止水浴，加人20mL蒸饋水?dāng)埌?，淡黃色沉淀 顏色變深，抽濾得6-漠代色酬苯腺，為黃紅色針狀產(chǎn)物，用無(wú)水乙酸沖洗多次，真空干燥得 產(chǎn)物； (3) 、3-(6-漠-4-氧-4H-色酬）-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-l，6a-二氨化咯嘟[3,4-c]化 挫-4,6(3址，5H)-二酬的合成： 將Immol N-對(duì)甲氧基苯基馬來(lái)酷亞胺和1. Immol 6-漠代色酬苯腺于20mL乙醇中，再加 入1.2mL氯胺T，回流12小時(shí)，將沉淀過(guò)濾，清洗，用甲醇再結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物3-(6- 漠-4-氧-4H-色酬）-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-l，6a-二氨化咯嘟[3,4-c]化挫-4,6(3aH, 甜）-二酬。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種3-(6-漠-4-氧-4H-色酬)-1-苯基-5-對(duì)甲氧基苯基-1， 6a-二氨化咯嘟[3，4-C ]化挫-4，6 (3址，5H)-二酬的制備方法，其特征在于:所述的步驟（1) 中，反應(yīng)得到的淡黃色沉淀需進(jìn)行減壓過(guò)濾。5. -種權(quán)利要求1所述化合物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105906634SQ201610282190
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月29日
【發(fā)明人】鄧?yán)蚱? 王瑋, 陳國(guó)慶, 胡純琦, 吳春雷, 莫憶偉, 李琰
【申請(qǐng)人】紹興文理學(xué)院