一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒，該試劑盒由試劑R單液體組分組成，包括的成分及相應(yīng)含量為：試劑R：Tris緩沖液50~150 mmol/L、磷酸烯醇式丙酮酸0.3~1.7 g/L、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.5~2.5 KU/L、蘋(píng)果酸脫氫酶1.2~3.8 g/L、NADH 1.0~5.0 KU/L、氯化鈉180~220 mmol/L、碳酸酐酶1.5~6.5 KU/L、顯色劑0.1~0.9 g/L，其溶劑為純化水，制備方法為：按照組分含量配制好試劑；將待測(cè)樣本與試劑R混合，使其充分反應(yīng)；用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值；根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的二氧化碳的濃度。本發(fā)明具有操作方便、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】
一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒及 其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 血液內(nèi)二氧化碳的含量對(duì)人體內(nèi)酸堿平衡的調(diào)節(jié)起著重要的作用，主要反應(yīng)代謝 性的酸堿平衡紊亂，血液pH的恒定是維持生命活動(dòng)必不可少的條件，血漿中的多種緩沖系 統(tǒng)中以碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)最為重要，直接影響到血液的pH值，單純代謝性酸或堿中毒時(shí)，血 液碳酸氫根HC0 3_下降或升高，總二氧化碳也隨之下降或升高。而單純呼吸性酸或堿中毒時(shí)， 血清碳酸氫根升高或下降。
[0003] 目前，測(cè)定二氧化碳的方法有量壓法，量壓法主要采用瓦式呼吸機(jī)進(jìn)行測(cè)定，需在 密閉的環(huán)境下，條件要求苛刻，操作要求高，這樣也就大大降低了測(cè)定的準(zhǔn)確度，且需要特 殊儀器。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是為了克服現(xiàn)有的二氧化碳方法測(cè)定不準(zhǔn)確以及操 作復(fù)雜的缺陷，而提供一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒及其制備方法。
[0005] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題提供的技術(shù)方案是:本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定二氧化碳的 試劑盒，該試劑盒由試劑R單液體組分組成，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R: Tris緩沖液 5CK150 mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 0.3~1.7 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 0.5~2.5 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 1.2~3.8 g/L NADH 1.0-5.0 KU/L 氯化鈉 180~220 mmol/L 碳酸酐酶 1.5~6.5 KU/L 顯色劑 0.1~0.9g/L 其溶劑為純化水。
[0006] 作為優(yōu)選，本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒，該試劑盒由試劑R單液體組 分組成，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R: Tris緩沖液 100 mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 1.0 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 1.5 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 2.5 g/L NADH 3.0 KU/L 氯化鈉 200 mmol/L 碳酸酐酶 4.0 KU/L 顯色劑 0.5 g/L 其溶劑為純化水。
[0007]作為優(yōu)選，所述的試劑R中，所述的Tris緩沖液的pH值為6~9。
[0008]作為優(yōu)選，所述的顯色劑采用酚紅。
[0009] 作為優(yōu)選，本發(fā)明還公開(kāi)了上述測(cè)定二氧化碳的試劑盒的制備方法和使用方法， 包括以下步驟： (a)按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R: Tris緩沖液 50~150 mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 0.3~1.7 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 0.5~2.5 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 1.2~3.8 g/L NADH 1.0-5.0 KU/L 氯化鈉 180~220 mmol/L 碳酸酐酶 1.5~6.5 KU/L 顯色劑 0.1~0.9 g/L 其溶劑為純化水。
[0010] (b)將待測(cè)樣本與試劑R混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的二氧化碳的濃度。
[0011] 本發(fā)明的檢測(cè)原理是:碳酸氫根與磷酸烯醇式丙酮酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 的作用下生成草酰乙酸和磷酸，草酰乙酸與還原型輔酶在蘋(píng)果酸脫氫酶的作用下生成蘋(píng)果 酸，同時(shí)NADH被氧化成NAD+，通過(guò)測(cè)定相應(yīng)波長(zhǎng)吸光度，可計(jì)算出樣本中碳酸氫根的含量。
[0012] 樣品中C〇2活性
式中：A Au/min待測(cè)樣品平均每分鐘的吸光度變化值 A AB/min校準(zhǔn)液平均每分鐘的吸光度變化值 Cs校準(zhǔn)液中C02的濃度 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益優(yōu)點(diǎn)：與傳統(tǒng)的C02檢測(cè)方法相比，電極法需要 定時(shí)維護(hù)電極，且維護(hù)成本高，量壓法需要特殊儀器，操作起來(lái)不方便，且耗時(shí)長(zhǎng)，而本發(fā)明 所述的測(cè)定二氧化碳的試劑盒采用的酶法可應(yīng)用于全自動(dòng)生化分析儀，方便操作且速度 快，而且由于酶法反應(yīng)速度快，顯色穩(wěn)定，顏色變化靈敏，測(cè)定準(zhǔn)確度更高。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不僅限于這些實(shí)施例。
[0014] 實(shí)施例1 本發(fā)明的試劑盒包括試劑R單液體組分，其中 試劑R: Tris緩沖液 100 mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 1.0 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 1.5 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 2.5 g/L NADH 3.0 KU/L 氯化鈉 200 mmol/L 碳酸酐酶 4.0 KU/L 酚紅 0.5 g/L 其溶劑為純化水。
[0015] 實(shí)施例2 本發(fā)明的試劑盒包括試劑R單液體組分，其中 試劑R: Tris 緩沖液 50mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 1.7 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 2.0 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 1.2 g/L NADH 1.0 KU/L 氯化鈉 220 mmol/L 碳酸酐酶 1.5 KU/L 酚紅 0.9 g/L 其溶劑為純化水。
[0016] 實(shí)施例3 試劑盒的制備和使用方法 1、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R: Tris緩沖液 100 mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 1.0 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 1.5 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 2.5 g/L NADH 3.0 KU/L 氯化鈉 200 mmol/L 碳酸酐酶 4.0 KU/L 酚紅 0.5 g/L 其溶劑為純化水。
[0017] 2、 全自動(dòng)生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a)檢測(cè)溫度:37°C; (b) 檢測(cè)波長(zhǎng):主波長(zhǎng)405nm; (c) 反應(yīng)時(shí)間：10min，其中，加入試劑R孵育時(shí)間5min，然后測(cè)定讀取吸光度Al，5min 后讀取吸光度A2，計(jì)算吸光度變化A A=A2-A1; (d) 反應(yīng)方向：負(fù)反應(yīng)。
[0018] 3、檢測(cè)步驟 (a) 取200ul試劑R與2ul待測(cè)樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min，然后測(cè)定讀取吸光度Al，5min后讀取吸 光度A2,計(jì)算吸光度變化AA=A2-A1 ; (c) 根據(jù)C02活性>計(jì)算出樣本中的二氧化碳的濃 度。
[0019] 實(shí)施例4 試劑盒的制備和使用方法 1、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R: Tris 緩沖液 50mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 1.7 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 2.0 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 1.2 g/L NADH 1.0 KU/L 氯化鈉 220 mmol/L 碳酸酐酶 1.5 KU/L 酚紅 0.9 g/L 其溶劑為純化水。
[0020] 2、 全自動(dòng)生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測(cè)溫度:37°C; (b) 檢測(cè)波長(zhǎng):主波長(zhǎng)405nm; (c) 反應(yīng)時(shí)間：10min，其中，加入試劑R孵育時(shí)間5min，然后測(cè)定讀取吸光度Al，5min 后讀取吸光度A2，計(jì)算吸光度變化A A=A2-A1; (d) 反應(yīng)方向：負(fù)反應(yīng)。
[0021] 3、檢測(cè)步驟 (a) 取200ul試劑R與2ul待測(cè)樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min，然后測(cè)定讀取吸光度Al，5min后讀取吸 光度A2,計(jì)算吸光度變化AA=A2-A1 ; (c) 根據(jù)0)2活性
計(jì)算出樣本中的二氧化碳的濃 度。
[0022] 表1為實(shí)施例1所制得的測(cè)定二氧化碳的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的測(cè)定二氧化 碳的試劑盒分別對(duì)質(zhì)控品1進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果，其中質(zhì)控品1中的二氧化碳的濃度為14.1 mmol/L，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1:
由表1可知，本發(fā)明所制得的測(cè)定二氧化碳的試劑盒對(duì)質(zhì)控品1的測(cè)定結(jié)果偏差較小， 因此測(cè)定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0023] 表2為實(shí)施例1所制得的測(cè)定二氧化碳的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的測(cè)定二氧化碳的 試劑盒分別對(duì)質(zhì)控品2進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果，其中質(zhì)控品2中的二氧化碳的濃度為19.1 mmol/L， 測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2:
由表2可知，本發(fā)明所制得的測(cè)定二氧化碳的試劑盒對(duì)質(zhì)控品2的測(cè)定結(jié)果偏差較小， 因此測(cè)定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0024] 表3為實(shí)施例3所制得的測(cè)定二氧化碳的試劑盒對(duì)同一待測(cè)樣本進(jìn)行的多次反復(fù) 測(cè)定以及實(shí)施例4所制得的測(cè)定二氧化碳的試劑盒對(duì)同一待測(cè)樣本進(jìn)行的多次反復(fù)測(cè)定， 對(duì)所得的結(jié)果進(jìn)行SD和CV的計(jì)算，結(jié)果如下：
由表3可知本發(fā)明所制得的測(cè)定二氧化碳的試劑盒的精密度比較好，而且由表1可知， 實(shí)施例3為最優(yōu)的選擇。
[0025] 上述實(shí)施例僅例示性說(shuō)明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟 悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因 此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完 成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒，其特征在于:該試劑盒由試劑R單液體組分組成，包括 的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R: Tris緩沖液 50~150 mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 0.3~1.7 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 0.5~2.5 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 1.2~3.8 g/L NADH 1.0-5.0 KU/L 氯化鈉 180~220 mmol/L 碳酸酐酶 1.5~6.5 KU/L 顯色劑 0.1~0.9g/L 其溶劑為純化水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒，其特征在于：該試劑盒由試劑R 單液體組分組成，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R: Tris緩沖液 100 mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 1.0 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 1.5 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 2.5 g/L NADH 3.0 KU/L 氯化鈉 200 mmol/L 碳酸酐酶 4.0 KU/L 顯色劑 0.5 g/L 其溶劑為純化水。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒，其特征在于：所述的試劑R 中，所述的Tris緩沖液的pH值為6~9。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒，其特征在于:所述的顯色劑 采用酚紅。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定二氧化碳的試劑盒的制備方法和使用方法，其特 征在于:包括以下步驟： (a)按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R: Tris緩沖液 50~150 mmol/L 磷酸烯醇式丙酮酸 0.3~1.7 g/L 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 0.5~2.5 KU/L 蘋(píng)果酸脫氫酶 1.2~3.8 g/L NADH 1.0-5.0 KU/L 氯化鈉 180~220 mmol/L 碳酸酐酶 1.5~6.5 KU/L 顯色劑 0.1~0.9g/L 其溶劑為純化水 (b) 將待測(cè)樣本與試劑R混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的二氧化碳的濃度。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK105928937SQ201610273290
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年4月28日
【發(fā)明人】蔡曉輝, 莊慶華, 吳錚, 徐運(yùn)
【申請(qǐng)人】安徽伊普諾康生物技術(shù)股份有限公司