將0.2mmol 5-氨基水楊酸、0.2mmol鄰香草醛、0.2mmol Cd(OAc)2.3H20和5ml甲醇在40_80°C的溫度范圍內(nèi)加熱攪拌I小時(shí)，然后將混合溶液轉(zhuǎn)移15ml的硬質(zhì)玻璃管中，再在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱三天，然后以l°C/h的速度程序緩慢降溫至室溫，用乙醚(2*3ml)洗滌，得到配合物I的晶體。
[0020]將0.1mmol2，2-聯(lián)(1比啶、0.2_01 5_氛基水楊酸、0.2mmol 鄰香草酸、0.2mmol Cd(OAc)2.3H20和5ml甲醇在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱攪拌I小時(shí)，然后將混合溶液轉(zhuǎn)移15ml的硬質(zhì)玻璃管中，再在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱三天，然后以l°C/h的速度程序緩慢降溫至室溫，用乙醚(2*3ml)洗滌，得到配合物2的晶體。
[0021 ]將0.1mmol 4，4_聯(lián)卩比啶、0.2mmol 5-氨基水楊酸、0.2mmol 鄰香草酸、0.2mmol Cd(OAc)2.3H20和5ml甲醇在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱攪拌I小時(shí)，然后將混合溶液轉(zhuǎn)移15ml的硬質(zhì)玻璃管中，再在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱三天，然后以l°C/h的速度程序緩慢降溫至室溫，用乙醚(2*3ml)洗滌，得到配合物3的晶體。
[0022]如圖2配合物1-3的紅外譜圖所示，分別對(duì)應(yīng)于配合物1、2和3來說，1708，1647，1761屬于羧基C=O伸縮振動(dòng)吸收峰；1643，1647，1668屬于C=N雙鍵的伸縮振動(dòng)峰；1589，1558，1541屬于苯環(huán)的特征吸收峰;644,644，650則屬于Ar-H面外彎曲振動(dòng)吸收峰。
[0023]如圖3所示，通過測(cè)定配合物1-3的XRD圖譜，證明得到了純度較高的理想的晶體。
[0024]如圖4所示，在配合物1-4中配體的配位方式中，配合物I采用Model、Π、ΙΠ配位方式，配合物2采用ModeI1、ΙΠ配位方式，配合物3采用Mode IV、V配位方式。
[0025]如圖5所示，其中，a)配合物I的最小不對(duì)稱單元結(jié)構(gòu);b)在配合物I中，配體的三種配位模式中配體內(nèi)的扭曲角度，其中四個(gè)配體與三個(gè)Cd原子是近似一個(gè)平面的，配體內(nèi)的二面角是7.32°，近似屬于一個(gè)平面的。配合物I的配體內(nèi)兩個(gè)苯環(huán)的的角度可以看到只有
7.32°，這是個(gè)近乎平面的角度。如圖平面中所有的配體苯環(huán)都在形同的平面上，可以看出化合物的平面性是非常的好的。
[0026]如圖6本發(fā)明中配合物2的結(jié)構(gòu)表征示意圖所示，a)配合物2的最小不對(duì)稱單元結(jié)構(gòu);b)在配合物2中，配體的三種配位模式中配體內(nèi)的扭曲角度。配合物2得化合物雖然具有配體平面較好的9.34°，然而相對(duì)稱的配體可由圖看出不在一個(gè)平面，同時(shí)從軸向圖看出相鄰平面性不好的配體會(huì)形成位阻作用，阻礙其與DNA的作用。
[0027]如圖7所示，是本發(fā)明中配合物3的結(jié)構(gòu)表征示意圖:a)配合物3的最小不對(duì)稱單元結(jié)構(gòu)；b)在配合物3中，配體的兩種配位模式中配體內(nèi)的扭曲角度，以及配體之間通過4，4
聯(lián)吡啶橋聯(lián)而得到的一維鏈。
[0028]如圖8和圖9所示，MTT實(shí)驗(yàn)方法表明的4種物質(zhì)的抗癌活性，其中平面性最好的配合物I，表現(xiàn)出對(duì)2種細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞都具有良好的活力值，IC50值對(duì)應(yīng)為2umol/L和5umol/L左右。相對(duì)于其他的化合物，其平面性能十分的優(yōu)異是很特殊的。
[0029]如圖1O和圖11所示，對(duì)活性最好的配合物I進(jìn)行時(shí)間依賴性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在16和32umol/L的濃度下，癌細(xì)胞的抑制率都上升，細(xì)胞死亡的數(shù)目隨時(shí)間增長(zhǎng)死亡愈多。
[0030]從細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化中可以看出，二種乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231在配合物I的作用下，隨著濃度的增大，細(xì)胞凋亡的比例增大，死細(xì)胞呈現(xiàn)圓球狀從培養(yǎng)皿中脫落下來，活細(xì)胞依然把保持著鐵壁的狀態(tài)，在顯微鏡下，死細(xì)胞相對(duì)于活細(xì)胞亮度更大，差別很明顯。
[0031]用流式實(shí)驗(yàn)法對(duì)配合物I作用下的細(xì)胞凋亡進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)，流式實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)細(xì)胞凋亡最有效也是最受廣泛認(rèn)可的方法，能在短時(shí)間內(nèi)，檢測(cè)上萬個(gè)細(xì)胞，并且能分辨每個(gè)細(xì)胞的周期狀態(tài)，以及凋亡狀態(tài)。在化合物作用于細(xì)胞24小時(shí)后，隨著濃度遞增，細(xì)胞凋亡的數(shù)目越多，并呈現(xiàn)明顯上升的趨勢(shì)。
[0032]同樣的條件下，4種化合物分別做紫外光譜圖，在30umol/L的對(duì)應(yīng)化合物濃度中分別添加DNA 3ul/次，體系中濃度遞增，變化值為9umo 1/L每次，五種化合物的紫外光譜圖測(cè)試表明:首次減色效應(yīng)，平面性較好的lin3號(hào)化合物最高，為24.24%。平面性較好的配合物I與DNA結(jié)合常數(shù)最大，屬于插入結(jié)合，隨著化合物平面性能的降低，結(jié)合常數(shù)逐漸下降，配體最低。平面性能的好壞對(duì)DNA結(jié)合影響很大。
[0033]EB-DNA體系中，EB本身熒光的性能不強(qiáng)，在和DNA的作用下熒光性能變強(qiáng)，加入的希夫堿小分子化合物和DNA結(jié)合的時(shí)候會(huì)置換出DNA中的EB，導(dǎo)致熒光的減弱，通過參考文獻(xiàn)的方法對(duì)數(shù)值進(jìn)行計(jì)算可以得到置換常數(shù)，從結(jié)果可以看出，平面性好的配合物I置換EB的能力更強(qiáng)，熒光減弱的效應(yīng)更加的明顯，從而證明化合物的結(jié)合能力更加的強(qiáng)。
[0034]DNA是結(jié)構(gòu)緊湊的雙螺旋結(jié)構(gòu)，由于小分子的插入DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生伸長(zhǎng)變化，體系的粘度和DNA的長(zhǎng)度成正比的，所以由此可以判斷DNA和化合物的作用強(qiáng)弱，從圖12中年度的變化可以得知，平面性好的的化合物，再和DNA的作用的時(shí)候，會(huì)發(fā)生插入作用，隨著配合物濃度和DNA濃度的比值增大DNA的粘度明顯的升高，相對(duì)比于其他的化合物則沒有配合物I變化明顯。
[0035]本發(fā)明不局限于上述最佳實(shí)施方式，任何人在本發(fā)明的啟示下都可得出其他各種形式的產(chǎn)品，但不論在其形狀或結(jié)構(gòu)上作任何變化，凡是具有與本申請(qǐng)相同或相近似的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種具有抗乳腺癌活性的鎘希夫堿金屬配合物的合成方法，其特征在于:將0.2mmol5-氨基水楊酸、0.2mmol鄰香草醛、0.2mmol Cd(OAc)2.3H20和5ml甲醇在40_80°C的溫度范圍內(nèi)加熱攪拌I小時(shí)，然后將混合溶液轉(zhuǎn)移15ml的硬質(zhì)玻璃管中，再在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱三天，然后以l°C/h的速度程序緩慢降溫至室溫，用乙醚(2*3ml)洗滌，得到配合物I的晶體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗乳腺癌活性的鎘希夫堿金屬配合物的合成方法，其特征在于:將0.1mmol 2，2-聯(lián)P比啶、0.2mmol 5-氛基水楊酸、0.2mmol鄰香草酸、0.2mmol Cd(OAc)2.3H20和5ml甲醇在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱攪拌I小時(shí)，然后將混合溶液轉(zhuǎn)移15ml的硬質(zhì)玻璃管中，再在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱三天，然后以l°C/h的速度程序緩慢降溫至室溫，用乙醚(2*3ml)洗滌，得到配合物2的晶體。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗乳腺癌活性的鎘希夫堿金屬配合物的合成方法，其特征在于:將0.1mmol 4，4-聯(lián)啦啶、0.2_01 5-氨基水楊酸、0.2mmol鄰香草酸、0.2mmol Cd(OAc)2.3H20和5ml甲醇在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱攪拌I小時(shí)，然后將混合溶液轉(zhuǎn)移15ml的硬質(zhì)玻璃管中，再在40-80°C的溫度范圍內(nèi)加熱三天，然后以l°C/h的速度程序緩慢降溫至室溫，用乙醚(2*3ml)洗滌，得到配合物3的晶體。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有抗乳腺癌活性的鎘希夫堿金屬配合物的合成方法。本發(fā)明合成線路簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)條件不苛刻，產(chǎn)品產(chǎn)率高并且可以得到大量純度高晶體，重復(fù)率百分百，實(shí)驗(yàn)的化合物易于提純，副產(chǎn)物量少并易去除。合成的晶體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存，配置成溶液（DMSO等）經(jīng)檢測(cè)化合物性質(zhì)穩(wěn)定不變，亦可長(zhǎng)期保存。和已有的技術(shù)相比，對(duì)癌細(xì)胞的抑制活性值更好，抑制乳腺癌細(xì)胞IC50可達(dá)2.優(yōu)于同等化合物。
【IPC分類】C07F3/08, A61P35/00
【公開號(hào)】CN105524093
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510929073
【發(fā)明人】蔡躍鵬, 魏沁
【申請(qǐng)人】華南師范大學(xué)
【公開日】2016年4月27日
【申請(qǐng)日】2015年12月15日