2-(1-(4-氯苯甲?；?-5-甲氧基-2-甲基-1氫-吲哚-3-基)-n-羥基乙酰胺作為組蛋白去 ...的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及2-(1-(4-氯苯甲?；?-5-甲氧基-2-甲 基-1氫-D引噪-3-基)-N-羥基乙酰胺作為組蛋白去乙?；敢种苿┘捌渲苽浞椒ê蛻?yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 組蛋白去乙?；?HDACs)是一類功能復(fù)雜的水解酶。在細(xì)胞核中，由DNA鏈纏繞 著的組蛋白八聚體構(gòu)成的核小體是構(gòu)成染色體的結(jié)構(gòu)單元，組蛋白去乙?；?HDACs)能 將組蛋白中的賴氨酸殘基末端氨基上的乙酰基水解掉(如反應(yīng)式I)，從而導(dǎo)致組蛋白的正 電荷密度增高，繼而引起組蛋白與負(fù)電性的DNA的親和力增強(qiáng)，基因轉(zhuǎn)錄被抑制，（參見 Christian,A.Η.,etal.Curr.Opin.Chem.Biol., 1997, 1, 300;Kouzarides, T.,Curr.Opin.Genet.Dev., 1999, 9, 40);ffolffe,A.P.Sci.Washington, 1996，272，371。此外，核小體組蛋白的去乙?；€與染色質(zhì)組裝，DNA修復(fù)與重組密切相 關(guān)，（參見Polo,S.E·，etal.CancerLett·, 2005，220，1;Vidanes,G.M·，et al.Cell, 2005，121，973)。近來，越來越多的非組蛋白被證實(shí)為HDACs的底物，如轉(zhuǎn)錄因 子，細(xì)胞骨架蛋白，分子伴侶等，（參見Glozak，Μ.A.，etal.Gene, 2005，363，15)。正 是由于HDACs具有如此復(fù)雜的功能，它的表達(dá)和活性失調(diào)與許多疾病密切相關(guān)，包括:癌癥， 神經(jīng)變性疾病，病毒感染，炎癥，白血病，瘧疾和糖尿病等，其中，癌癥無疑是對(duì)人類生命健 康威脅最為嚴(yán)重的疾病。研究表明，HDACs與腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如:抑制腫瘤細(xì)胞 分化和凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，迀移和血管生成，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的抵抗力等， (參見Witt, 0·，etal·CancerLetter·, 2009，277，8)〇
[0003] 目前在人體中發(fā)現(xiàn)了HDACs家族有18個(gè)成員，根據(jù)其結(jié)構(gòu)，功能和分布的不同可分 為四類。其中，1類（^厶(：1，2,3和8)，11類（11&:!10厶〇4,5,7和9;1113:!10厶〇6，10)，1￥類 (HDAC11)屬于鋅離子依賴性水解酶，而III類HDACs(SIRT1-7)是NAD+依賴性的。研究表明， 與腫瘤密切相關(guān)的主要是鋅離子依賴性HDACs，HDAC抑制劑(HDACsInhibitors，HDACi)能 有效抑制癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。而且，HDACi具有抗瘤譜廣，毒副作用低的優(yōu)點(diǎn)，它們 對(duì)實(shí)體瘤，白血病，淋巴瘤都具有很好的抑制活性。因此，針對(duì)HDACs為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)抑制劑已成 為抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)。
[0004] 目前報(bào)道的HDACi藥效團(tuán)大都包括如下三個(gè)部分:鋅離子螯合基團(tuán)（ZBG)，疏水性 的長鏈(Linker)和蛋白表面識(shí)別區(qū)（SurfaceRecognitionDomain)。鋅離子螯合基團(tuán)可以 螯合HDACs活性中心的鋅離子，從而抑制酶的活性。目前已知的活性最強(qiáng)，應(yīng)用最廣的鋅離 子螯合基團(tuán)是異羥肟酸基團(tuán)。然而，現(xiàn)在很多處于臨床研究的化合物沒有很好的藥效，雖然 它們?cè)谂R床前的研究中表現(xiàn)出了很優(yōu)異的活性。但是，上市的HDAC抑制劑(SAHA和FK228 )在 治療實(shí)體瘤方面藥效很差，它們還存在著半衰期短，難吸收和藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)較差的 缺點(diǎn)。
[0005] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種組蛋白去乙酰酶抑制劑2-(1-(4-氯苯甲酰 基)-5-甲氧基-2-甲基-1氫-吲哚-3-基)-N-羥基乙酰胺（I)及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明采 用異羥肟酸基團(tuán)為鋅離子螯合基團(tuán)，吲哚美辛是一種上市抗炎藥，已經(jīng)表現(xiàn)出了較好的抗 炎、抗腫瘤、抗氧化等作用，將其引入到HDACi結(jié)構(gòu)中可以改善其脂水分配系數(shù)，促進(jìn)藥物的 吸收。因此，化合物I作為HDAC抑制劑，具有很高的成藥性和很大的藥用開發(fā)價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 具有結(jié)構(gòu)式I的組蛋白去乙?；敢种苿?-(1-(4-氯苯甲?；?-5-甲氧基-2-甲 基-1氫-吲哚-3-基)-N-羥基乙酰胺，其藥學(xué)上可接受的鹽，溶劑合物或前藥，
本發(fā)明還提供了這些化合物在預(yù)防或治療與組蛋白去乙酰化酶活性異常表達(dá)相關(guān)的 哺乳動(dòng)物疾病的藥物中的應(yīng)用。所述的與組蛋白去乙?；富钚援惓１磉_(dá)的相關(guān)哺乳動(dòng)物 疾病包括:癌癥，神經(jīng)變性疾病，病毒感染，炎癥，動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病等。
[0007] 因此，本發(fā)明還涉及含有結(jié)構(gòu)式I化合物的藥物組合物。
[0008] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 發(fā)明詳述 所用的定義和術(shù)語 本文中所用的術(shù)語和定義含義如下： "藥學(xué)上可接受的鹽"是指化合物具有療效且無毒的鹽形式。其可由任一酸性基團(tuán)（如 羧基）形成陰離子鹽，或由任一堿性基團(tuán)（如氨基）形成陽離子鹽。本領(lǐng)域已知許多這樣的 鹽。在任何酸性基團(tuán)（如羧基）上形成的陽離子鹽，或是在任何堿性基團(tuán)（如氨基）上形成的 陰離子鹽。這些鹽有許多是本領(lǐng)域已知的，如陽離子鹽包括堿金屬（如鈉和鉀）和堿土金屬 (如鎂和鈣）的鹽以及有機(jī)鹽（如銨鹽）。還可通過使用相應(yīng)的酸處理堿性形式的（I)方便地 獲得陰離子鹽，這樣的酸包括無機(jī)酸如硫酸、硝酸、磷酸等;或有機(jī)酸如乙酸、丙酸、羥基乙 酸、2-羥基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、2-羥 基-1，2，3-丙三酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲磺酸、4-甲基苯磺酸、環(huán)己基亞磺酸、2-羥基苯甲 酸、4-氨基-2-羥基苯甲酸等。這些鹽是熟練技術(shù)人員熟知的，熟練的技術(shù)人員可制備本領(lǐng) 域知識(shí)所提供的任何鹽。此外，熟練技術(shù)人員可根據(jù)溶解度、穩(wěn)定性、容易制劑等因素取某 種鹽而舍另一種鹽。這些鹽的測定和最優(yōu)化在熟練技術(shù)人員的經(jīng)驗(yàn)范圍內(nèi)。
[0009] "前藥"是指藥物經(jīng)過化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾后得到的在體外無活性或活性較小、在體內(nèi)經(jīng) 酶或非酶的轉(zhuǎn)化釋放出活性藥物而發(fā)揮藥效的化合物。
[0010] 結(jié)構(gòu)式（I)化合物還可以其它被保護(hù)的形式或衍生物的形式存在，這些形式對(duì)本 領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，均應(yīng)該包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0011] 所述化合物的制備方法，反應(yīng)步驟及反應(yīng)式如下： 制備方法包括如下步驟： 合成路線1:以吲哚美辛為原料，通過縮合直接得到終產(chǎn)物，反應(yīng)式如下： 合成路線1:
上述合成路線1反應(yīng)式中的試劑:氯甲酸異丁酯，三乙胺，四氫呋喃，鹽酸羥胺； 合成路線2:以吲哚美辛為原料，先進(jìn)行羧基保護(hù)，再與羥胺鉀親核反應(yīng)，最后制得終產(chǎn) 物;反應(yīng)式如下： 合成路線2:
上述合成路線2反應(yīng)式中的試劑：（1)乙酰氯，甲醇；（2)羥胺鉀，無水甲醇； 制備所述組蛋白去乙酰酶抑制劑的中間體，該中間體是：甲基2-(1-(4-氯苯甲?；?-5-甲氧基-2-甲基-1氫-B引噪-3-基）乙酸酯。
[0012] 本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)上述步驟進(jìn)行變動(dòng)以提高收率，他們可據(jù)本領(lǐng)域的基本知 識(shí)確定合成的路線，如選擇反應(yīng)物，溶劑和溫度，可以通過使用各種常規(guī)保護(hù)基以避免副反 應(yīng)的發(fā)生從而提高收率。這些常規(guī)的保護(hù)方法可參見例如T.Greene,ProtectingGroups inOrganicSynthesis.〇
[0013] 由于鋅離子依賴性組蛋白去乙?；?HDACs)各亞型催化中心的高度同源性，我 們選擇含有組蛋白去乙?；傅腍ela細(xì)胞提取物(包含HDAC1，HDAC2,HDAC3和HDAC8)來 進(jìn)行酶活性測試。HDACs活性熒光分析方法(兩步法），能快速、方便檢測HDACs活性，操作簡 單，靈敏度高。第一步，含一個(gè)乙?；瘋?cè)鏈的賴氨酸HDACs熒光底物（B〇C-LyS(aCetyl)-AMC)，用含有組蛋白去乙酰