，加入1-叔下氧幾基贓嗦（135mg，1.Ommol)，室溫反應(yīng)12h。減壓 蒸除有機溶劑，殘留物進行柱層析純化（二氯甲燒/甲醇（V/V) = 10/1)，得到淡黃色油狀 物（1. 25g, 56. 60% )。
[030引 MS-ESI:巧SI,pos.ion) m/z:308. 4 [M+1]
[0306] 步驟。4- (2-((7-環(huán)戊基-6-(二甲基氨基甲酯基）-7H-化咯[2, 3-d]喀 晚-2-基）氨基）喀晚-5-幾基）贓嗦-1-甲酸叔下醋
[0307] 在氮氣保護下，將2-氯-7-環(huán)戊基-N，N-二甲基-7H-化咯[2, 3-d]喀晚-6-酷 胺（322mg, 1.0mmol)，4-(2-氨基喀晚-5-幾基）贓嗦-I-甲酸叔下醋（320mg,l.Ommol，碳 酸飽化52mg, 2.Ommol)，BINAP(58mg, 0.lmmol)和醋酸鈕巧2mg, 0.lmmol)溶于 1，4-二氧六 環(huán)（25血）攬拌加熱至Iior反應(yīng)。冷至室溫，加入二氯甲燒（100血）稀釋，娃藻±過濾，濾 液減壓濃縮蒸出溶劑，殘余物進行柱層析分離（二氯甲燒/甲醇（V/V) =10/1)得到淡黃 色固體（201mg, 33. 17% )
[030引 MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 564.8[M+1]
[0309] 步驟3)7-環(huán)戊基-N，N-二甲基-2-(巧-(贓嗦-I-幾基）喀晚-2-基）氨 基）-7H-化咯巧，3-d]喀晚-6-甲酯胺
[0310] 在100血單口燒瓶中，將4- (2- ((7-環(huán)戊基-6-(二甲基氨基甲酯基）-7H-化咯 垃3-d]喀晚-2-基）氨基）喀晚-5-幾基）贓嗦-1-甲酸叔下醋（230mg，0. 5mmol)溶 于二氯甲燒（10血）中，在冰浴條件下加入S氣乙酸巧血)，攬拌30min，然后緩慢升至室溫 攬拌化。減壓蒸除溶劑，殘留物用飽和碳酸氨鋼溶液調(diào)PH至6-7,二氯甲燒（100mLx3)萃 取，干燥，濃縮有機相，后經(jīng)柱層析分離（二氯甲燒/甲醇（V/V) =10/1)得到淡黃色固體 (135mg, 58. 19% )〇
[031UMS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 464.6[M+1]
[0引引 古匪R化OOMHz,DMSO-de) 5 10. 54(s, 1H),8.88(s, 1H),8. 63(s, 2H),6.66(s,IH)，4. 76 - 4. 65 (m,IH)，3. 85 (s,IH)，3. 64 (d,J= 4.細z, 2H)，3. 54 - 3. 47 (m, 2H)，3. 06 (d,J = 3.9Hz，6H)，2.86 - 2.79 (m，2H)，2.76 - 2.74(m，2H)，2.43 - 2.32 (m，2H)，2.06-1.90(m，4H)，1.69 - 1.58 (m，2H).
[031引實施例10 7-環(huán)戊基-N，N-二甲基-2-(巧-(贓嗦-I-幾基）化嗦-2-基）氨 基）-7H-化咯巧，3-d]喀晚-6-甲酯胺
[0314]
[031引步驟1)4-(5-氨基化嗦-2-幾基）贓嗦-1-甲酸叔下醋
[0316] 在100血單口燒瓶中，將2-氨基-5-化嗦甲酸（l.〇〇g，7. 19mmol)溶于DMF(45血）， 加入1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽化51g，8. 95mmol)和二異丙基乙胺乙 胺（2. 5血，14.Ommol)，攬拌15min后，加入1-叔下氧幾基贓嗦（1. 30g, 6. 98mmol)，室溫反 應(yīng)15h。反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸除有機溶劑，殘留物進行柱層析純化（二氯甲燒/甲醇（V/V)= 10/1)，得到淡黃色油狀物（1. 85g，83. 70% )。
[0317]MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 308. 4 [M+1]"；
[0引引步驟2)4-巧-((7-環(huán)戊基-6-(二甲基氨基甲酯基）-7H-化咯[2,3-d]喀 晚-2-基）氨基）化嗦-2-幾基）贓嗦-1-甲酸叔下醋
[0319] 在氮氣保護下，將2-氯-7-環(huán)戊基-N，N-二甲基-7H-化咯[2, 3-d]喀晚-6-酷 胺（125mg，0. 43mmol) ,4-(5-氨基化嗦-2-幾基）贓嗦-1-甲酸叔下醋（150mg，0.eOmmol， 碳酸飽（300mg, 0. 92mmol)，BINAP(70mg, 0.llmmol)，醋酸鈕（25mg, 0.llmmol)溶于I, 4-二 氧六環(huán)（35血）攬拌加熱至110°C，反應(yīng)13h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷至室溫，娃藻±過濾， 濾液減壓濃縮蒸出溶劑，殘余物進行柱層析分離（二氯甲燒/甲醇（V/V) =10/1)得到淡 黃色固體（140mg，64.86% )
[0320] MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 564.8[M+1]"；
[0321] 步驟:3)7-環(huán)戊基-N，N-二甲基-2-(巧-(贓嗦-I-幾基）化嗦-2-基）氨 基）-7H-化咯巧，3-d]喀晚-6-甲酯胺
[032引在100血單口燒瓶中，將4-巧-((7-環(huán)戊基-6-(二甲基氨基甲酯基）-7H-化咯 垃3-d]喀晚-2-基）氨基）化嗦-2-幾基）贓嗦-1-甲酸叔下醋（230mg，0. 5mmol)溶 于二氯甲燒（10血）中，在冰浴條件下加入S氣乙酸巧血)，攬拌30min，然后緩慢升至室 溫攬拌化。減壓蒸除溶劑，殘留物用飽和碳酸氨鋼調(diào)PH至6-7,二氯甲燒（100mLx3)萃 取，干燥，濃縮有機相，經(jīng)柱層析分離（二氯甲燒/甲醇（VA) =10/1)得到淡黃色固體 (135mg, 58. 19% ) 〇
[032引MS-ESI: (ESI,pos.ion)m/z: 464.6[M+1]
[0324] iHMlR(600MHz，DMS0-d6)5l0.53(s，lH)，9.53(s，lH)，8.89(s，lH)，8.56(s ，lH)，6.69(s，lH)，5.76(s，lH)，4.80 - 4.72(m，lH)，3.64(d，J= 4.6Hz，2H)，3.54-3. 47 (m, 2H), 3. 06 (d,J= 3. 9Hz,6H), 2.86- 2. 79 (m, 2H), 2. 76 - 2. 74 (m, 2H), 2. 43 -2. 32 (m, 2H)，2. 06 -I. 90 (m, 4H)，I. 69 -I. 58 (m, 2H).
[0325] 實施例 11-33
[0326] 通過用相應(yīng)的起始原料合成方案I所述的操作方法獲得下列化合物：
[032引
[0329] 實施例 34-62
[0330] 通過用相應(yīng)的起始原料合成方案4所述的操作方法獲得下列化合物：
[0331]
[0333]
[0334] 實施例63
[0335] 通過用相應(yīng)的起始原料合成方案5所述的操作方法獲得下列化合物：
[0337] 本發(fā)明化合物的體外抗腫瘤活性測定
[033引示例1本發(fā)明化合物的體外酶學(xué)抑制活性
[0339] 實驗方法：
[0340] 下述實驗中縮寫所代表的含義如下：
[0341] 肥陽S:?乙基贓嗦乙硫橫酸巧rij-35 :十二烷基聚乙二醇酸；DTT:二硫蘇糖醇； 邸TA:乙二胺四乙酸；CDK4/切cD3 :周期蛋白依賴性蛋白激酶4 ;CDK6/切cD3 :周期蛋白依 賴性蛋白激酶6;P巧tideFAM-P22 :巧光素標(biāo)記膚22;ATP憐酸酸腺巧；DMSO:二甲基亞 諷；Staurosporine:星抱菌素；CoatingReagent#3 :#3 被膜劑
[0342] 1. IX激酶緩沖液及終止實驗緩沖液配制：
[034引（1)Ix不含MnClz激酶緩沖液（50mM肥陽S,pH7. 5, 0. 0015 % 化ij-35,IOmM MgClz，2mMDTT);似終止實驗緩沖液（IOOmM肥陽S,抑 7. 5, 0. 015 % 化ij-35, 0. 2 %CoatingReagent#3, 50mM邸TA)。
[0344] 2.測試激酶的化合物連續(xù)稀釋準(zhǔn)備：
[034引 （1)采用100%DMSO將化合物稀釋到最高終濃度的50倍。將100yL該濃度的化 合物溶液轉(zhuǎn)移至96孔板的一孔。（2)按20yL原溶液用60yLDMSO稀釋的比例依次稀釋 化合物10個濃度。（3)將100yL100%DMSO溶液加入到兩個空孔中，作為無化合物對照 和無酶對照。（4)準(zhǔn)備一張中間板，分別將IOiiL各濃度化合物從原板中轉(zhuǎn)移到中間板，并 加入90yLIx激酶緩沖液，振蕩混勻10分鐘。（5)準(zhǔn)備實驗板：從96孔板的中間板中對 應(yīng)孔轉(zhuǎn)移5yL化合物溶液到對應(yīng)的384孔板中。
[0346] 3.激酶反應(yīng)
[0347] (1)準(zhǔn)備2. 5x酶溶液：將酶加入Ix激酶緩沖液中。似準(zhǔn)備2. 5x膚溶液：將巧光 素標(biāo)記膚和ATP加入Ix激酶緩沖液中。（3)將10yL2. 5x酶溶液加入到含有5yLDMSO 含量為10 %的化合物溶液的384孔實驗板中，室溫解育10分鐘。（4)將10yL2. 5x膚溶 液加入384孔實驗板中。（5)激酶反應(yīng)及終止：28°C解育相應(yīng)的時間，加入25yL終止緩沖 液終止反應(yīng)。
[034引4.數(shù)據(jù)測量：讀取數(shù)據(jù)并收集。
[034引 5.曲線擬合
[0350] (1)拷貝并轉(zhuǎn)換測量的數(shù)據(jù)；似轉(zhuǎn)換為抑制率：抑制率=(最大值-樣本值）/ (最大值-最小值）*100 最大值"為無化合物對照值；"最小值"為無激酶對照孔數(shù)值。（3) 將數(shù)據(jù)輸入相應(yīng)分析軟件Xlfit得出ICw值。
[0351] 實驗結(jié)果如下：表2本發(fā)明化合物的體外酶學(xué)抑制活性
[0353] 實驗結(jié)論：從表2可見，本發(fā)明化合物對CDK4、CDK6激酶均有較強的抑制作用，體 外酶學(xué)抑制活性均小于10Um。
【主權(quán)項】
1. 一種化合物，其為如式（I)所示的化合物，或式（I)所示的化合物的立體異構(gòu)體，幾 何異構(gòu)體，互變異構(gòu)體，氮氧化物，水合物，溶劑化物，代謝產(chǎn)物，藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，L為鍵； R1 為R4; R4為 _(C(RShh-R' -N(R2)-(C(R3)2)n-Rla，-0-(C(R3)2)n-Rla，-S-Rla，-N(R2)-C(=0)-Rla，-C( = 0)-Rlc，-0-(CH2)2-N(CH2CH3)2, -CH2-N(CH2CH3) (CH2CH20H)，1?13為c512螺雜雙環(huán)基，c512橋雜雙環(huán)基，c512桐合雜雙環(huán)基，c3 9環(huán)烷基，c3 9雜環(huán)基或C19雜芳基；其中，Rla不為環(huán)戊基； RlbSC5 12螺雜雙環(huán)基，C5 12稠合雜雙環(huán)基，-N(CH2CH3) (CH2CH20H)，Q9雜芳基，2)或者E環(huán)為當(dāng)=為:=1時，T2為Z6，當(dāng)為一時，T2為Z1，R1 為R5; R5為氫，C丨 4烷基，C丨 4鹵代烷基，-C(R3)2-C(=0)-C(R3) 2-H，-C(R3)2-C(=0) -(C(R3) 2)n-0R3,C5 12螺雜雙環(huán)基，C5 12橋雜雙環(huán)基，C5 12稠合雜雙環(huán)基，C3 9環(huán)烷基，C3 9雜環(huán)基或Ci9 雜芳基； L為鍵，-(C(R3) 2)n-，-N(R2)(C(R3) 2)n-，-S-或-C(=0)-;L為-(C(R3)2)m-，-N(R2)-，-〇-(C(R3)2)n-，-S-或-CbO)-;!?1 為R6;R6為C39環(huán)烷基，C3 9雜環(huán)基或其中，Z2,Z和Z1 各自獨立地為-C(R3)2_，-N(R2)-，-0-，-S-或-C(=0)-; Z3,Z4,Z5,Z6和Z7各自獨立地為CR3或N; m為1，2或3 ; n為0，1，2或3 ; 各R2獨立地為氫，Ci4烷基，Ci，代烷基，-C(R3)2-C(=0)-C(R3)2-HS-C(R3)2-C(=0)_ (C(R3)2)n-0R3； 各R3獨立地為氫，氟，氯，溴，Ci4烷基，羥基，羧基，氨基，Ci4烷氧基，醛基，氨基Ci4燒 基，氨基?；?，Q4鹵代烷基或Ci4燒氨基； 所述的E環(huán)代表的子結(jié)構(gòu)式可任選地被氫，Q4烷基，氟，氯，溴，氨基，羥基，羧基，Ci4 烷氧基，Q4鹵代烷基，氰基，硝基，-C(R3)2-C(=0)-C(R3)2-H或-C(R3)2-C(=0) -(C(R3) 2)n-0R3 單取代或相同或不同的多取代； 所述的C5 12螺雜雙環(huán)基，C5 12橋雜雙環(huán)基，C512桐合雜雙環(huán)基，c3 9環(huán)烷基，C3 9雜環(huán)基，C19雜芳基，R1，和1^所代表的子結(jié)構(gòu)式可任選地被氫，氧代（=0)，C14烷基，氟，氯，溴，氨 基，羥基，羧基，Q4烷氧基，ci4烷氨基，ci4鹵代烷基，醛基，氨基ci4烷基，氨基?；?，氰基， c3 9雜環(huán)基，C3 9環(huán)烷基，ci9雜芳基或硝基單取代或相同或不同的多取代。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中，其中，Rla不為環(huán)戊基；其中，Z2, Z和Z1各自獨立地為-C(R3)2_，-N(R2)-，-0-，-S-或-C(=0)-; Z3, Z4和Z5各自獨立地為CR3或N;h，k和t各自獨立地為0，1，2,3或4。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中， R4為如下子結(jié)構(gòu)式：-⑴?3)^-!^，，?2)-^!?3)^-!? 1^-^!?3)^-!^，、-Rla，-N(R2)-C(=0)-Rla，-C(=0)-Rlc，-0-(CH2)2-N(CH2CH 3)2, -CH2-N(CH2CH3) (CH2CH20H)，4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中，5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中， R5為氫，C丨 4烷基，C丨 4鹵代烷基，-C(R3)2-C(=0)-C(R3) 2-H，-C(R3)2-C(=0) -(C(R3) 2)其中，Z2,Z和Z1 各自獨立地為-c(R3)2-，-N(R2) -，-o-，-s-或-c(=0)-; Z3,Z4和Z5各自獨立地為CR3或N; 各h，k和t獨立地為0,1，2或3 ; 所述的R5所代表的子結(jié)構(gòu)式可任選地被氫，氧代（=〇)，Ci4烷基，氟，氯，溴，氨基，羥基， 羧基，Q4烷氧基，醛基，氨基Ci4烷基，Ci4鹵代烷基，Ci4燒氨基，氨基?；杌?，C3 9雜環(huán) 基，Q9雜芳基或硝基單取代或相同或不同的多取代。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物，其中， R5為氫，甲基，乙基，異丙基，正丙基，正丁基，叔丁基，3, 3, 3-三氟丙基，三氟甲基，2-氟乙7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中，8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其為如下之一的結(jié)構(gòu)：立體異構(gòu)體，幾何異構(gòu)體，互變異構(gòu)體，氮氧化物，水合物，溶劑化物，代謝產(chǎn)物，酯，藥學(xué)上 可接受的鹽或它的前藥。9. 藥物組合物，包含一種如權(quán)利要求1-8任一項所述的化合物，進一步包含藥學(xué)上可 接受的載體，賦形劑，稀釋劑，輔劑，媒介物中的至少一種。10. 權(quán)利要求1-8任一項所述的化合物或權(quán)利要求9所述的藥物組合物在制備用于預(yù) 防，處理，治療或減輕患者由異常細胞增殖，自身免疫，炎性或感染引起的障礙或病癥的藥 物中的用途； 和/或權(quán)利要求1-8任一項所述的化合物或權(quán)利要求9所述的藥物組合物在制備用于 預(yù)防，處理，治療或減輕患者由CDK4或CDK6蛋白激酶改變引起的疾病的藥物中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明涉及新的作為CDK類小分子抑制劑的化合物(如式(I)所示)及其用途，還涉及含有上述化合物的藥物組合物，以及這些化合物和組合物在治療過度增殖性紊亂的疾病的用途。本發(fā)明的新化合物是有力的細胞周期蛋白依賴性激酶4(cdk4)或細胞周期蛋白依賴性激酶6(cdk6)抑制劑。
【IPC分類】A61P29/00, A61P19/08, A61P3/10, A61P25/00, A61P35/02, A61P1/16, A61P17/06, A61P19/02, A61P31/12, A61P37/00, A61P17/00, A61P1/00, A61K31/5377, C07D519/00, A61P31/10, A61P35/00, A61P7/06, A61P11/06, A61P9/10, C07D487/04, A61P11/00, A61P13/12, A61P1/18, A61K31/519, A61P37/06
【公開號】CN105294737
【申請?zhí)枴緾N201510443169
【發(fā)明人】劉兵, 張英俊, 聶凜凜, 柏舜, 鄭常春, 聶飚, 李志勇, 譚玉梅
【申請人】廣東東陽光藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年7月24日