專利名稱：治療惡性血液病的chk1抑制劑與b細(xì)胞耗盡抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開治療惡性血液病，包括B細(xì)胞淋巴瘤和白血病或B細(xì)胞 相關(guān)肺瘤的療法。
背景技術(shù)：
化療和放射暴露是當(dāng)今治療癌癥的主要選擇，但是這兩種手段的 治療效用由于其對于正常組織的嚴(yán)重的副作用和頻*(發(fā)生的腫瘤細(xì) 胞抗性而受到嚴(yán)格限制。因此，非常需要以不增加與它們相關(guān)的毒性 的方式改善癌癥治療的功效。在某些情況下，實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)的功效的一種 方法是在組合療法中采用抗癌藥，其中所述組合產(chǎn)生比單獨(dú)釆用各藥 物所見到的更好的治療效果。
聯(lián)合治療方案會(huì)增加對患有B細(xì)胞相關(guān)腫瘤或惡性血液病的患 者，包括淋巴瘤患者的有效治療，甚至可能潛在地減少復(fù)發(fā)率或克服 有時(shí)在這些患者中所見到的對特定抗癌藥的抗性。例如，在一個(gè)可能 的方案中， 一種藥物可能起到增加惡性細(xì)胞(例如，B淋巴瘤細(xì)胞)對聯(lián) 合治療中的其它藥物的萄文感性的作用。在其它方案中，抗癌藥物的組 合可能具有增加，或甚至是協(xié)同的治療作用。
用來治療惡性血液病的一種特定的治療藥物是RITUXIN⑧(利妥 昔單抗)(IDEC醫(yī)藥公司，Cambridge, MA; Genentecli, South San Francisco, CA),利妥昔單抗是為治療B細(xì)胞淋巴瘤，尤其是非霍奇金 淋巴瘤，而開發(fā)的新一代單克隆抗體之一。利妥昔單抗是帶鼠輕和重 鏈可變區(qū)和人yl重鏈和K輕鏈恒定區(qū)的遺傳工程改造的抗-CD20單克 隆抗體。利妥昔單抗通過結(jié)合到B細(xì)胞上的CD20抗原起作用，這樣通 過被認(rèn)為涉及補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)和抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)的機(jī)理導(dǎo)致B細(xì)胞的溶解。采用利妥昔單抗和DNA損傷 劑，氟達(dá)拉濱的聯(lián)合免疫化學(xué)療法已經(jīng)對患有慢性淋巴細(xì)胞白血病 (CLL)的患者顯示出某些希望(Sdmltz等，Blood, Nov. 1,2002 100(9):3115隱3120)。
已經(jīng)建議聯(lián)合使用DNA損傷劑，如氟達(dá)拉濱與檢查點(diǎn)激酶l (細(xì)胞 周期中的重要調(diào)節(jié)成分)抑制劑(CHK1抑制劑)(參見，例如， Prudhomme，有關(guān)抗癌藥物發(fā)現(xiàn)的最近專利(i ece"f Pate"fe v4"a-C朋c^Dn^iXycove^)， 2006, 1 :55)。個(gè)體細(xì)胞通過使其染色體精 確拷貝，然后將這些分離(segregating)至分開的各細(xì)胞中而復(fù)制。DNA 復(fù)制、染色體分離和分化的這種循環(huán)由維持各步驟有序和確保每一步 驟精確進(jìn)行的細(xì)胞內(nèi)機(jī)制調(diào)節(jié)。這些過程的關(guān)鍵是細(xì)胞周期檢查點(diǎn) (Hartwell等，5Wewce， Nov 3, 1989,246(4930): 629-34),在這些檢查點(diǎn) 中，在那里細(xì)胞可以停滯以保證DNA修復(fù)機(jī)制在持續(xù)通過循環(huán)進(jìn)入有 絲分裂之前有時(shí)間進(jìn)行。細(xì)胞周期中有兩個(gè)這樣的檢查點(diǎn)——由p53 調(diào)節(jié)的G1 /S檢查點(diǎn)和由Ser/Thr激酶檢查點(diǎn)激酶1 (CHK 1 )監(jiān)測的G2/ M 檢查點(diǎn)。因?yàn)橛蛇@些檢查點(diǎn)導(dǎo)致的細(xì)胞周期停滯是極其重要的機(jī)制， 通過該機(jī)制細(xì)胞可克服由放射治療或化療導(dǎo)致的損傷，所以它們被新 的藥物的消除將增加腫瘤細(xì)胞對DNA損傷性治療的敏感性。設(shè)計(jì)消除 G2/M檢查點(diǎn)的化合物的 一條途徑是，開發(fā)關(guān)鍵G2/M調(diào)節(jié)激酶CHK1 的抑制劑，并且此途徑已經(jīng)顯示在許多概念研究的試驗(yàn)中有效 (Koniaras等，Owcoge"e, 2001， 20: 7453; Luo等，A^op/aw'a, 2001, 3: 411; Busby等，Owc^7^y., 2000,60: 2108; Jackson等，C""ceri 饑，2000， 60: 566)。
已經(jīng)鑒別幾種CHK1抑制劑。這些化合物包括氨基吡唑、吲唑、 三環(huán)化合物、脲、氨基曱酸酯、二氮雜草酮、嘧啶、苯并咪唑、喹諾 酮和大環(huán)化合物(參見，例如，Prudhomme， Michelle,新檢查點(diǎn)l抑制 M,有關(guān)抗癌藥物發(fā)現(xiàn)的最近專利(i ece"f o"C""cw Z>wg
rfecove^) (2006), 1(1), 55-68; Tao, ZW-Fu; Lin, Nan-Horng,新的癌癥
6治療的Chkl抑制劑,醫(yī)藥化學(xué)中的抗癌藥G4油'-Q "cct"& 她&"W C72麵'勿)(2006)， 6(4), 377-388; Kawabe， Tak腿i,作為抗癌 藥的G2才企查點(diǎn)消除劑(abrogators).分子癌癥治療(必/ecw/w O "c" r/2erapew"c力(2004), 3(4)， 513-519; Prudhomme， Michelle,聯(lián)合的DNA 損傷劑和4企查點(diǎn)l抑制劑.當(dāng)今藥學(xué)化學(xué)抗癌藥物(Cwre^iWe^cz'"a/ C/zem&^y:爿Mrt-Ca"cw爿ge"^) (2004), 4(5), 435-438)。在W003029241 和W003028731中分別描述了作為CHK1抑制劑的2-脲基噻吩化合物 和3-脲基噻吩化合物。另外，在WO2004/081008中描述作為CHKl抑制 劑的稠合三唑酮。CHKl抑制劑還包括公開于WO2005/016909中的噻 吩羧酰胺；公開于WO2005/066163的噻吩羧酰胺；和描述于 WO2006/106326中的取代的雜環(huán)。
因此，本文預(yù)期，CHKl抑制劑和B細(xì)胞耗盡抗體(depleting antibodies)的組合將用來治療惡性血液病或其它B細(xì)胞相關(guān)腫瘤。本文 還預(yù)期，與B細(xì)胞耗盡抗體組合的CHK1抑制劑可用來治療患有血液病 或其它B細(xì)胞相關(guān)胂瘤的患者，其中所述疾病對癌癥治療，例如DNA 損傷劑，包括但不限于氟達(dá)拉濱有抗性。
本文還預(yù)期，CHK1抑制劑，可用來治療患有血液病或其它B細(xì)胞 相關(guān)腫瘤的患者，其中所述疾病對癌癥治療，例如DNA損傷劑，包括 但不限于氟達(dá)拉濱有抗性。
發(fā)明概述
在第一方面，本發(fā)明提供治療患有惡性血液病的患者的方法，該 方法包括與B細(xì)胞耗盡抗體同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述 患者治療有效量的CHK1抑制劑。在相關(guān)的方面，惡性血液病是慢性 淋巴細(xì)胞白血病(CLL)。在相關(guān)的其它方面，B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD20 抗體。在另一個(gè)相關(guān)的方面，抗-CD20抗體是利妥昔單抗。
在另一方面，本發(fā)明提供治療患有B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法， 該方法包括同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑與B細(xì)胞耗盡抗體。在相關(guān)的方面，B細(xì)胞耗盡抗體 是抗-CD20抗體。在另一個(gè)相關(guān)的方面，抗-CD20抗體是利妥昔單抗。
在又一方面，本發(fā)明提供治療患有對癌癥治療(包括用DNA損傷 劑治療)有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法，該方法 包括與B細(xì)胞耗盡抗體同時(shí)或順序(例如，之前或之后)地給予所述患者 治療有效量的CHK1抑制劑。在相關(guān)的方面，惡性血液病是慢性淋巴 細(xì)胞白血病(CLL)。在相關(guān)的其它方面，B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD20抗 體。在另一個(gè)相關(guān)的方面，抗-CD20抗體是利妥昔單抗。在另一個(gè)相 關(guān)的方面，DNA損傷劑是氟達(dá)拉濱。
在又一方面，本發(fā)明提供治療患有對癌癥治療(包括用DNA損傷 劑治療)有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法，該方法 包括給予所述患者治療有效量的作為單一藥物的CHK1抑制劑。在相 關(guān)的方面，惡性血液病是CLL或AML。在另一個(gè)相關(guān)的方面，DNA損 傷劑是氟達(dá)拉濱。
圖的簡述
圖l(a-q)表示用CHKl抑制劑(爾)、阿糖胞苷(o)或CHKl抑制劑和阿 糖胞苷的組合治療的AML患者樣本的結(jié)果的曲線圖。
發(fā)明詳述
如在本文所用的，"藥學(xué)上可接受的"用在本文指在可靠的醫(yī)學(xué)判 斷范圍之內(nèi)、適用于與人和動(dòng)物組織接觸而沒有過多毒性、刺激性、 過敏反應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥的、具有與合理的收益/風(fēng)險(xiǎn)比率相當(dāng)?shù)?那些化合物、原料、組合物和/或劑型。
如在本文所用的，"藥學(xué)上可接受的鹽，，指公開的化合物的衍生物' 其中母體化合物通過形成酸鹽或堿鹽而被修飾。藥學(xué)上可接受的鹽的
實(shí)例包括，但不限于堿性殘留物諸如胺的礦物鹽或有機(jī)酸鹽；酸性殘 留物諸如羧酸的堿性鹽或有機(jī)鹽等。藥學(xué)上可接受的鹽包括例如，由無毒無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的母體化合物的常規(guī)的無毒性鹽或季銨鹽。 例如，這樣的常規(guī)的無毒性鹽包括那些衍生自無機(jī)酸諸如鹽酸、氫溴
酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的鹽；和制備自有機(jī)酸諸如乙酸、
丙酸、丁二酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬 酸、抗壞血酸、棕櫚酸、順丁烯二酸、羥基順丁烯二酸、苯乙酸、谷
氨酸、苯甲酸、水楊酸、對氨基苯磺酸、2-乙氧基苯曱酸、反丁烯二 酸、曱苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸和羥乙磺酸等的鹽。可通 過常規(guī)化學(xué)方法，自含有堿性或酸性部分的母體化合物合成藥學(xué)上可 接受的鹽。
關(guān)于化合物、抗體或其它藥物的給藥，如在本文所用的術(shù)語"順序 地"指在給予另一種化合物、抗體或其它藥物之前或之后。
"B細(xì)胞表面標(biāo)記"或"B細(xì)胞靶"或"B細(xì)胞抗原"在此指表達(dá)在B細(xì) 胞表面上的抗原，其可為結(jié)合于其上的拮抗劑的靶。示例性B細(xì)胞表 面標(biāo)記包括CDIO、 CD19、 CD20、 CD21、 CD22、 CD23、 CD24、 CD37、 CD53、 CD72、 CD73、 CD74、 CDw75、 CDw76、 CD77、 CDw78、 CD79a、 CD79b、 CD80、 CD81、 CD82、 CD83、 CDw84、 CD85和CD86白細(xì)胞 表面標(biāo)記。與哺乳動(dòng)物的其它非B細(xì)胞組織相比，特別重要的B細(xì)胞表 面標(biāo)記優(yōu)先表達(dá)在B細(xì)胞上，并可表達(dá)在前體B細(xì)胞和成熟B細(xì)胞上。 在一個(gè)實(shí)施方案中，標(biāo)記為類似CD20或CD19的標(biāo)記，其在在B細(xì)胞的 從千細(xì)胞階段的細(xì)胞系直至僅在終末分化進(jìn)入血漿細(xì)胞前的點(diǎn)的整 個(gè)分化過程中均^皮發(fā)現(xiàn)。
"CD20"抗原是在來自外周血或淋巴器官的超過卯。/。的B細(xì)胞上發(fā) 現(xiàn)的35kDa、非糖基化磷蛋白。CD20在早期前B細(xì)胞發(fā)展期間被表達(dá)， 并保持到血漿細(xì)胞分化。CD20存在在正常B細(xì)胞以及惡性B細(xì)胞上。 文獻(xiàn)中CD20的其它名稱包括"B-淋巴細(xì)胞-限制抗原"和"Bp35"。 CD20 抗原描述于，例如，Clark等PNAS (USA) 82:1766 (1985)中。
"B細(xì)胞耗盡抗體"被定義為結(jié)合到血液惡性細(xì)胞，例如，致瘤B細(xì) 胞表面上的受體或其它靶的那些抗體，當(dāng)它們結(jié)合時(shí)，例如，通過誘導(dǎo)凋亡，誘導(dǎo)它們毀滅或消耗。這樣的抗體包括，但不限于，抗-CD20、
抗CD 19、抗CD22、抗CD21、抗CD23、抗CD28、抗CD37、抗CD40、 抗CD52抗體?？?CD20抗體的實(shí)例是RITUXIN⑧(利妥昔單抗)。B細(xì) 胞耗盡抗體還包括經(jīng)其它機(jī)制摧毀B細(xì)胞的抗體。例如，這些包括放 射性標(biāo)記的抗體，其通過結(jié)合到B細(xì)胞表面和傳遞致死輻射劑量有助 于摧毀胂瘤細(xì)胞。這些包括1311-Lym-l (抗HLA-D)、 131 I-托西莫單 抗(BEXXAR⑧)、替伊莫單抗(Y-90， In-l 11ZEVALIN⑧)和90 Y-依帕珠 單抗。這類抗體以及共軛至毒素的抗體，也可與本文公開的CHK1抑 制劑聯(lián)合使用，并為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉。
"CHKl抑制劑"指可抑制檢查點(diǎn)l激酶和/或檢查點(diǎn)2激酶的活性的 任何化合物或物質(zhì)。用于本發(fā)明的CHK1抑制劑可為本領(lǐng)域已知的任 何那些，例如，上述那些，例如，描述于Pmdhomme， Michelle,新的 4企查點(diǎn)l抑制劑，有關(guān)抗癌藥物發(fā)現(xiàn)的最近專利(i ece"f Pafe"fe o" v4油C朋cer Z>wgD/scove") (2006), 1(1)， 55-68; Tao, Zhi-Fu; Lin, Nan:Homg,新癌癥治療的Chkl豐「制劑；醫(yī)藥化學(xué)中的抗癌藥 (/W/-Qwce,'々e敏&她Ad""/ O 潔勿)(2006)， 6(4), 377-388; Kawabe， Takumi,作為抗癌藥物的G2^全查點(diǎn)消除劑，分子癌癥治療 (M /ecw/"r C朋cer T7 era戸ric力(2004), 3(4), 513-519; Prudhomme， Michelle,聯(lián)合的DNA損傷劑和檢查點(diǎn)1抑制劑，當(dāng)今藥學(xué)化學(xué)抗癌 藥物(CWrew,她血/"a/ C7 簡is/w J油Ca"cer々e"te) (2004), 4(5), 435-438的那些抑制劑；分別描述于W003029241和WO03028731的2-脲基p塞吩化合物和3-脲基噻吩化合物；作為CHK1抑制劑描述于 WO2004/081008的稠合三唑酮；公開于WO2005/016909的瘞吩羧酰胺； /^開于WO 2005/066163的噻吩羧酰胺；和描述于WO2006/106326的取 代的雜環(huán)。
CHK]抑制劑可以特定的幾何或立體異構(gòu)形式存在。本發(fā)明考慮 所有這類化合物，包括順式和反式異構(gòu)體、R-和S-對映異構(gòu)體、非對 映異構(gòu)體、(D)-異構(gòu)體、(L)-異構(gòu)體、它們的外消旋混合物和它們的其
10它混合物。同樣，本文討論的CHK1抑制劑可以游離或鹽形式，例如，
作為酸加成鹽存在。在本說明書中，除非另有說明，應(yīng)理解，本文公 開的化合物包括呈任何形式，例如，游離或酸加成鹽形式的化合物， 或者，當(dāng)化合物含有酸性取代基時(shí)，以堿加成鹽形式存在。因?yàn)楸疚?公開的化合物打算用作藥物，因此，優(yōu)選藥學(xué)上可接受的鹽。
"DNA損傷劑"指損傷DNA以便殺死細(xì)胞或阻止其生長的那些化 合物或物質(zhì)。DNA損傷劑包括，但不限于，苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、 美法侖、卡鉑、柔紅霉素、多柔比星、伊達(dá)比星和米托蒽醌以及氨曱 碟呤、氟達(dá)拉濱和阿糖胞苷。
"惡性血液病"包括與血流、骨髓和淋巴系統(tǒng)包括肝、脾和淋巴腺 中的細(xì)胞有關(guān)的任何惡性疾病。其實(shí)例包括B和T細(xì)胞淋巴瘤、白血病、 包括但不限于低級/濾泡型非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞(SL) NHL、 T或B幼淋巴細(xì)胞白血病、濾泡型NHL、彌漫型大B細(xì)胞NHL、 外周T細(xì)胞淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、邊緣區(qū)淋巴瘤、B或T細(xì)胞成淋巴 細(xì)胞性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥或淋巴漿 細(xì)胞性淋巴瘤、慢性血細(xì)胞白血病、急性髄性白血病(AML)、急性成 淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病、 成淋巴細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、淋巴細(xì)胞白血病、單核細(xì)胞白 血病、髓性白血病和早幼粒細(xì)胞白血病。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)明白，由 于分類系統(tǒng)的不同/變化，這些病理狀態(tài)通?？捎胁煌拿Q。
"B細(xì)胞相關(guān)肺瘤"在此指固體、非血液(非淋巴)腫瘤，即，涉及B 細(xì)胞的非惡性血液病，其中的B細(xì)胞涉及"前腫瘤"。向應(yīng)。例如，B細(xì)胞 通過某種方式促進(jìn)或維持致瘤狀態(tài)，以某種方式涉及阻礙身體免疫防 御系統(tǒng)對抗這類惡性疾病。如此，B細(xì)胞受累，但并非本身是癌細(xì)胞。 關(guān)于WO 020864 Al,其通過引用結(jié)合于本文中，描述了采用以B細(xì)胞 為耙標(biāo)的抗體，包括利妥昔單抗，治療固體、非淋巴腫瘤。據(jù)其中報(bào) 道，這種治療甚至對患晚期結(jié)腸直腸癌、肺癌和肝癌的患者也產(chǎn)生顯 著的抗肺瘤響應(yīng)。涉及B細(xì)胞的實(shí)體瘤可為可觸知的腫瘤，典型地至少0.5mm直徑，更典型地至少1.0mm直徑。其實(shí)例包括結(jié)腸直腸癌、 肝癌、乳癌、肺癌、頭和頸癌、胃癌、睪丸癌、前列腺癌、卵巢癌、 子宮癌和其它癌。這些癌可處于早期(前期癌)、中期(I和II期)或晚期， 包括已經(jīng)轉(zhuǎn)移的實(shí)體瘤。這些實(shí)體瘤優(yōu)選為其中的B細(xì)胞引發(fā)前腫瘤 響應(yīng)的癌，即，B細(xì)胞的出現(xiàn)涉及腫瘤生長、維持或轉(zhuǎn)移。
如在本文所用的，對癌癥治療"有抗性"的血液病或其它B細(xì)胞相 關(guān)腫瘤指難治或?qū)τ闷渌拱┧幹委熜?，包括但不限于用DNA損傷 劑，例如，氟達(dá)4i濱治療有抗性的疾病。該病可能一度對其它癌藥， 例如，DNA損傷劑響應(yīng)，^"旦現(xiàn)在對這類治療有抗性。
"B細(xì)胞拮抗劑"是一結(jié)合到B細(xì)胞表面標(biāo)記的分子，其例如，通過 減少或阻止B細(xì)胞引發(fā)的體液響應(yīng)，摧毀或耗盡哺乳動(dòng)物的B細(xì)胞和/ 或干擾一種或多種B細(xì)胞功能。拮抗劑優(yōu)選能消耗其治療的哺乳動(dòng)物 中的B細(xì)胞(即，減少循環(huán)B細(xì)胞水平)?？赏ㄟ^各種機(jī)制，例如，抗體 依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)和/或補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC),抑 制B細(xì)胞增殖和/或?qū)е翨細(xì)胞死亡(例如，經(jīng)由細(xì)胞凋亡)，實(shí)現(xiàn)這樣的 耗盡。包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)的拮抗劑包括結(jié)合至B細(xì)胞標(biāo)記的抗體、 合成或自然序列肽和小分子拮抗劑，任選與細(xì)胞毒藥物共軛或稠合。 優(yōu)選的拮抗劑包括抗體，更優(yōu)選B細(xì)胞4毛盡抗體。
"抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性"和"ADCC"指細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，其 中表達(dá)Fc受體(FcRs)的非特定細(xì)胞毒細(xì)胞(例如，自然殺傷(NK)細(xì)胞， 中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)識別輩巴細(xì)胞上的結(jié)合抗體，隨后導(dǎo)致靶細(xì)胞的 溶解。為評估感興趣的分子的ADCC活性，可進(jìn)行體外ADCC試驗(yàn)， 如美國專利號5,500,362或美國專利號5,821,337中所描述的那些。這類 試驗(yàn)的有用的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血單核細(xì)胞(PBMC)和自然殺傷(NK) 細(xì)胞。作為選擇，或附加地，可例如，用諸如公開于Clynes等PNAS (USA) 95:652-656 (1998)的動(dòng)物模型，體內(nèi)評估感興趣的分子的ADCC活性。
"補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性"或"CDC"指在補(bǔ)體存在下分子溶解靶的能 力。通過補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組分(Clq)結(jié)合至與同源抗原綴合的分子(例
12如，抗體)，激發(fā)補(bǔ)體激活途徑。為評價(jià)補(bǔ)體激發(fā)，可進(jìn)行，例如，如
Gazzano-Santoro等，J. Immunol. Methods 202:163 (1996)中所描述的 CDC試驗(yàn)。
術(shù)語"抗體"本文以最廣泛的意義采用，并特別覆蓋全單克隆抗體, 多克隆抗體、自至少兩個(gè)全抗體形成的多特異性抗體(例如，雙特異性 抗體)和抗體片斷，只要它們表現(xiàn)出想要的生物學(xué)活性。本領(lǐng)域技術(shù)人 員可采用常規(guī)方法制備抗體。
如在本文所用的，術(shù)語"單克隆抗體"指得自基本同類的抗體種群 的抗體，即，包含種群的獨(dú)特抗體是同一的，除可能天然發(fā)生可能以
較少量存在的突變外。單克隆抗體是高度特異性的，定向針對單一抗 原位點(diǎn)。而且，與典型地包括定向針對不同決定簇(表位)的不同抗體 的常規(guī)(多克隆)抗體制劑相比，各單克隆抗體定向針對抗原上的單一 決定簇。除它們的特異性之外，單克隆抗體的有利性還在于，它們通 過雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)合成、未被其它免疫球蛋白污染。修飾語"單克隆" 指出作為得自抗體的基本同源種群的抗體的特征，并不解釋為需要通 過任何特定的方法制備抗體。例如，可通過首先由Kohler等，M7fwre, 256:495 (1975)描述的雜交瘤細(xì)胞方法制備，或者可通過重組DNA方法 (參見,例如，美國專利號4,816,567),制備要根據(jù)本發(fā)明采用的單克 隆抗體。例如，也可采用Clackson等，淑臟，352:624-628 (1991)和 Marks等，J. vWo/歷o/., 222:581-597 (1991)中描述的技術(shù)，自噬菌體抗 體庫分離"單克隆抗體"。本文的單克隆抗體特別包括但不限于"嵌合" 或"人源化"形式。
結(jié)合CD20抗原的抗體的實(shí)例包括為"利妥昔單抗" ("RITUXAN⑧")的"C2B8"(美國專利號5,736,137,特通過引用結(jié)合于 本文)；稱為"Y2B8"(美國專利號5,736,137的釔-[90]-標(biāo)記的2138鼠抗 體，特通過引用結(jié)合于本文)；任選用1311標(biāo)記的鼠IgG2a"131",生成 "1311-B1"抗體(BEXXARTM⑧)(美國專利號5， 595， 721 ，特通過引用結(jié) 合于本文)；鼠單克隆抗體"lF5"(Press等S/ood69(2): 584-591 (1987));"嵌合2H7"抗體(美國專利號5，677,180,特通過引用結(jié)合于本文)；和可得自國際白細(xì)胞分型學(xué)部(International Leukocyte Typing Workshop)的單克隆抗體L27、 G28-2、 93-1133、 B-C1或NU-B2 (Valentine等,在^細(xì)/敘J7歪《McMichael，編輯，440頁，牛津大學(xué)出版社(1987))。
本文的術(shù)語"利妥昔單抗"或"RITUXAN㊣"指定向針對CD20抗原和美國專利號5,736,137 (特通過引用結(jié)合于本文)指定的"C2B8"的基因工程嵌合鼠/人單克隆抗體?？贵w是含有鼠輕和重鏈可變區(qū)序列和人恒定區(qū)序列的IgG、 k免疫球蛋白。利妥昔單抗對CD20抗原的結(jié)合親和力約為8.0nM。例如，它可通過商業(yè)途徑得自Genentech (South SanFrancisco, CA)。
詞"治療"、"處理"和"醫(yī)治"應(yīng)被理解為包括預(yù)防和治療或改善疾病癥狀以及治療疾病病因。需要治療的那些患者包括已經(jīng)患有要治療的疾病或障礙那些患者以及要預(yù)防疾病或障礙的那些患者、對治療顯示
抗性的患者或易于復(fù)發(fā)的那些患者。因此，患者可能已被診斷患有疾病或障礙，或者可能易患上或易感染疾病或復(fù)發(fā)或者對治療有抗性。
措辭"治療冇效量"指有效治療或預(yù)防或改善惡性血液病或本文所討論的其它B細(xì)胞相關(guān)胂瘤的癥狀的藥物(例如，本文公開的抑制劑化告-物和/或B細(xì)胞耗盡抗體)的量。
如上所述，本文預(yù)期，根據(jù)下文詳細(xì)描述的本發(fā)明的方法，在與B細(xì)胞耗盡抗體，特別是B細(xì)胞耗盡抗-CD20抗體，特別是利妥昔單抗一起的聯(lián)合治療中，CHK1抑制劑，包括詳細(xì)公開于本文的那些化合物，對治療惡性血液病和其它B細(xì)胞相關(guān)腫瘤，包括可能對DNA損傷劑或其它形式的癌癥治療有抗性的那些疾病有效。
本文公開的方法可在給予至少一種其它化療藥物(例如，本文期望三重和甚至多重組合的藥物)之前、同時(shí)或之后給予患者，并可用于避免、減少或克服往往由惡性細(xì)胞表現(xiàn)出的對化療藥物的耐藥性。患者包括化療或其它癌癥治療后復(fù)發(fā)或其惡性腫瘤或腫瘤抗化療或其它癌癥治療有抗性的那些患者。事實(shí)上，因?yàn)锽細(xì)胞的耐藥性往往僅在用治療藥物首次治療后患者復(fù)發(fā)或耐藥后才顯而易見，本發(fā)明方法往往包括治療患有惡性血液病，諸如B細(xì)胞淋巴瘤或白血病的患者，他們在化療或其它癌癥治療后復(fù)發(fā)或已經(jīng)表現(xiàn)出耐藥性。例如，對氟達(dá)
拉濱的耐藥性常常見于患有CLL的患者，本文預(yù)期，本發(fā)明的方法將用于治療這類個(gè)體。另外，也可對新近診斷為惡性血液病的患者，與其它治療結(jié)合或在其它治療之前或之后，采用本文公開的聯(lián)合治療，以減少復(fù)發(fā)的機(jī)會(huì)和增加對治療響應(yīng)的長度和持續(xù)時(shí)間。
本發(fā)明方法適于治療多種惡性血液病，尤其是B細(xì)胞淋巴瘤和白血病，包括但不限于，低度/濾泡型非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴細(xì)胞(SL)NHL、中度/濾泡型NHL、中度彌漫性NHL、高度免疫母細(xì)胞NHL、高度成淋巴細(xì)胞性NHL、高度小無裂細(xì)胞NHL、巨大腫塊性疾病(bulky disease) NHL和瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、慢性血細(xì)胞白血病、急性髓性白血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓性白血病、成淋巴細(xì)胞性白血病、淋巴細(xì)胞白血病、單核細(xì)月包白血病、哥逸'f生白血病和早幼if立細(xì)刀包白血病。-如上戶斤述，才、4頁i或才支術(shù)人員意識到，例如，倘若存在不同的分類系統(tǒng)(例如；基于細(xì)胞學(xué)或特定惡性腫瘤的'侵襲性"水平)，可知道這些淋巴瘤可有不同的名稱。如本文先前所討論的，作為目標(biāo)的特定疾病是慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)。
本發(fā)明方法包括治療B細(xì)胞相關(guān)腫瘤，諸如固體、非淋巴腫瘤的方法。在該方法中，CHK1抑制劑和B細(xì)胞耗盡抗體，例如，利妥昔單抗可同時(shí)或連續(xù)(例如，之前或之后)纟合藥至實(shí)體瘤部位，例如，通過接近或直接在腫瘤部位的注射，例如，通過在接近腫瘤的靜脈中的靜月永注射。
明的藥劑盒包含至少一種CHK1抑制劑和至少一種B細(xì)胞耗盡抗體，它可易于用藥學(xué)上可接受的載體混合或再懸浮，并便利地被注入患者?？梢圆煌姆绞浇o予本文7>開的化合物，這些方式全部為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉，例如，舌下、肌內(nèi)、皮下、局部、鼻內(nèi)、腹膜內(nèi)、
胸內(nèi)、靜脈內(nèi)、硬膜夕卜(epidurally)、鞘內(nèi)、側(cè)腦室內(nèi)(intracerebroventricularly)、注入關(guān)節(jié)或適當(dāng)?shù)那闆r下經(jīng)口 (通常地不適合給予抗體)。
當(dāng)將個(gè)體治療方案和劑量水平確定為最適于特定患者時(shí)，劑量將:取決于給藥途徑、疾病嚴(yán)重性、患者的年齡和體重和主治醫(yī)生通?？紤]的其它因素。另外，藥用組合物可呈單位劑型。在這樣的劑型中，組合物被分成含有適量活性組份的單位劑量。單位劑型可為包裝制劑，包裝含有離散量的制劑，例如，包裝在小瓶或安瓿中的片劑、膠嚢劑和粉末劑。單位劑型本身也可為膠嚢劑、扁嚢劑或片劑，或者，它可為適當(dāng)量的任何這些包裝形式。
一般說來，關(guān)于CHK1抑制劑，包括本文專門公開的那些，例如，對于如上文提出的疾病的治療，表明在從約0.01至2.0 mg/kg數(shù)量級的劑量下得到的滿意結(jié)果。對于大型哺乳動(dòng)物，例如人，標(biāo)示的日劑量可相應(yīng)地處于/人約0.75至1000 mg的范圍。
根椐患者和疾病程度，可以介于0,0i至約100mg/kg，更優(yōu)選從約0.1至50 mg/kg和最優(yōu)選從約0.4至20 mg/kg體重的劑量，給予抗B細(xì)胞靶結(jié)合抗體(例如，B細(xì)胞耗盡抗體)，例如，利妥昔單抗。與CHK1抑制劑的聯(lián)合治療方案中的有效劑量可能更低，因?yàn)锽淋巴瘤細(xì)胞的增殖潛力可能被降低。根據(jù)在聯(lián)合治療中使用的CHK1抑制劑及其量，B細(xì)胞耗盡抗體的有效劑量對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。
為從本文公開的化合物和抗體制備藥用組合物，惰性的、藥學(xué)上可接受的載體可為固體或液體。固體形式制劑包括散劑、片劑、可分散顆粒劑、膠嚢劑、扁嚢劑和栓劑。術(shù)語"組合物"打算包括含有帶作為載體提供膠嚢的膠嚢化材料的活性組分的制劑，膠嚢中的活性組分(帶或不帶其它載體)被這樣與其在一起的載體所包圍。同樣，包括扁嚢劑。片劑、散劑、扁嚢劑和膠嚢劑可用作適于口服的固體劑型。
固體載體可為一種或多種物質(zhì)，它也可起稀釋劑、辦^未劑、增溶劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑或片劑崩解劑的作用；它也可為膠嚢化材料。
在散劑中，載體可為與細(xì)分散的活性組分混合的細(xì)^的固體。在片劑中，活性組分可與具有必要粘合性質(zhì)的載體按適用比例混合，并壓制成想要的形狀和規(guī)格。
為制備栓劑組合物，低熔點(diǎn)蠟，諸如脂肪酸甘油酯和可可脂的混合物首先被熔化，并通過例如，攪拌，使活性成分*于其中。再將熔融的均勻混合物倒入合適型號的模子中，冷卻并固化。
適用的載體包括碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、乳糖、糖、果膠、糊精、淀粉、黃芪膠、曱基纖維素、羧曱基纖維素鈉低熔點(diǎn)蠟、可可脂等。
液體形式組合物包括溶液劑、混懸劑和乳化劑。含有活性組分的無菌水或水-丙二醇溶液劑可作為適于胃腸外給藥的液體制劑的實(shí)例
4是及。也可在聚乙二醇水:容液中配制呈溶液劑的液體組合物?？赏ㄟ^使活性組分溶解于水中和在需要時(shí)加入適用著色劑、矯味劑、穩(wěn)定劑和增稠劑，制備口服含水溶液劑。可通過使細(xì)分過的活性組分分散于與粘性材料，諸如天然合成樹膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和藥物配制領(lǐng)域已知的其它助懸劑在一起的水中，制備口服含水懸液。
應(yīng)理解，用于本發(fā)明方法的CHK1抑制劑包括呈游離形式或呈所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽形式或所述化合物或鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形式的化合物。任何CHK1抑制劑可用于本發(fā)明，這些包括，例如，任何前述CHK1抑制劑。尤其是，CHK1抑制劑包括公開于WO2005/066163的噻吩羧酰胺?？捎糜袡C(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的多種方法，包括但不限于在WO 2005/066163 (通過引用全文結(jié)合于本文)中詳述的合成方法，制備這些CHK1抑制劑。作為CHK1抑制劑的感興趣的噻吩羧酰胺包括如式(I)中所示的上述WO 2005/066163的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
17R2
(I)
其中
x選自nh、 s和o;y選自ch或n;
Ri選自氰基、異氰基、CL6烷基、NR"'R12、 Cw烷氧基、(:2-6鏈烯基、C2—6炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基和雜環(huán)基，前提是W不是噻吩基；和其中W可任選在一個(gè)或多個(gè)碳原子上被一個(gè)或多個(gè)I^取代；和其中如果所述R^含有-NH-部分，則所述部分的氮可任選被選自R"的基團(tuán)取代；
r2和r3各獨(dú)立逸自-c(-o)nr6r7、 -so2nr16r17、 -nhc(=o)nhr4
和-NHC(:NR8)NH2;
R4選自h、 oh、 -NRuR12、芐基、c'4烷氧基、钚烷基、環(huán)烯基、芳基、雜環(huán)基、巰基、CHO、 -CO芳基、-CO(d-6烷基)、-CONR化R35、-C02(CL6烷基)、-C02芳基、-C02NR3。R31、 -S烷基、-SO(d-6烷基)、-S02(C,-6烷基)、-S芳基、-SO芳基、七02芳基、-S02NR3GR"和-(d-6烷基)S02NR^R31，其中W可任選在一個(gè)或多個(gè)碳原子上被一個(gè)或多個(gè)R"取代；和其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，那么氮可任選被選自R"的基團(tuán)取代；
R6和R7各獨(dú)立選自H、 OH、 OCH3、 Cw烷氧基、-NH2、 -NHCH3、-N(CH3)2、 (Cw烷基)NR"R12、 -CH2CH2OH、環(huán)烷基和含有至少一個(gè)氮原子的5、 6或7-元雜環(huán)基環(huán)，前提是rS和W不都是H;或者，r，口R 與它們連接的N—起形成雜環(huán)；其中W和R4目互獨(dú)立，可任選在一個(gè)或多個(gè)碳原子上被一個(gè)或多個(gè)R"取代；和其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則所述部分的氮可任選被選自R。的基團(tuán)取代；
R8選自氰基、異氰基、-S02(d-6烷基)、-S02-芳基；-S02環(huán)烷基、
18-S02環(huán)烯基、-802雜環(huán)基和0 3;其中RS可任選在一個(gè)或多個(gè)碳原子上被一個(gè)或多個(gè)1123取代；
R9、 R15、 Ris、 R23、 1124和1133各獨(dú)立選自卣素、硝基、-NR30R31、氰基、異氰基、Cw烷基、(22.6鏈烯基、02.6炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、羥基、酮基(O)、 -0(d-6烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-NHCHO、-N(CL6烷基)CHO、 -NHCONR3QR31、 -N(d.6烷基)CONR3。R31、 -NHCO烷基、-順<302((^-6烷基)；-NHC02H、-風(fēng)<21.6烷基)(:0((31_6烷基)、-NHS02(C小6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、 -CONR3GR31、 -CO(Cw烷基)、-CO雜環(huán)基、-CO環(huán)烷基、-C02H、《02((:1-6烷基)、七02(芳基)、-C02(NR3GR31)、巰基、-S(C!-6烷基)、-SO(Cw烷基)、-802((:1-6烷基)、-SO2NR30R31;其中R9、 R15, R18、 R23、 R"和R"相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和在含有NH或NH2的任何部分的氮上被R"取代；
R10、 R14、 R19、 1125和1^34各獨(dú)立選自卣素、硝基、-NR30R3i、氰基、
異氰基、C^烷基、02.6鏈烯基、C2-6炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、
幾基、酮基(二O)、 -0(C!-6烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-NHCHO、 -N(Ci—6烷基)CHO、 -NHCONR3°R31、 -N(d.6烷基)CONR3。R31、 -NHCO烷基、-NKC02(Ci—6烷基)；-NHC02H、 -N(d-6烷基)CO(Q—6烷基)、-NHS02(C"6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、 -CONR3GR31、 -CO(Cw烷基)、-CO雜環(huán)基、-CO環(huán)烷基、-C02H、 -C02(d—6烷基)、-002(芳基)、-C02(NR3°R31)、巰基、-S(Cw烷基)、-SO(d-6烷基)、-S02(d—6烷基)、-S02NR3°R31;其中的R， R14、 R19、 R"和R"相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和在含有NH或NH2的任何部分的氮上被R"取代；
R"和R^蟲立選自H、 C,—6烷基、環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基；或者，R"和R^與它們連接的N—起形成雜環(huán)；其中R"和R^相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則所述部分的氮可任選被選自1134的基團(tuán)取代；
R"和R'7各獨(dú)立選自H、 OH、 OCH3、 d—6烷氧基、NH2、 -NHCH3、-N(CHs)2、 (d-3烷基)NR111112、 -CH2CH2OH、環(huán)烷基、芳基或含有至少一個(gè)氮原子的5、 6或7-元雜環(huán)基環(huán)，前提是R"和R"不都是H;或者，R"和R"與它們連接的N—起形成任選取代的雜環(huán)；其中R"和R"相互獨(dú)立，可任選在一個(gè)或多個(gè)碳原子上被一個(gè)或多個(gè)1124取代；和其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則所述部分的氮可任選被選自R"的基團(tuán)取代；
R2Q、 R"和R"各獨(dú)立選自卣素、硝基、-NR3GR31、氰基、異氰基、C,-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、羥基、酮
基(二O)、 -O(Cw烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-NHCHO、 -N(C卜6烷基)CHO、-NHCONR3°R31、 -N(C1.6烷基)CONR3QR31、 -NHCO烷基、-NHCO^Cw烷基)；-NHC02H、 ^((31-6烷基)(:0((:1_6烷基)、-麗802((31-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、 -CONR30R31、 -CO(d-6烷基)、-CO雜環(huán)基、-CO環(huán)烷基、-C02H、 -C02(C^烷基)、《02(芳基)、-C02(NR3。R31)、巰基、-S(d—6烷基)、-SO(C,-6烷基)、-SC^d-^^l^ -S02NR3QR31;其中R20、R"和R"相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和在含有NH或照2的任何部分的氮上被R^取代；
R21、 R"和R"各獨(dú)立選自卣素、硝基、-NR3DR31、氰基、異氰基、C卜6烷基、C2—6鏈烯基、C2-6炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、羥基、酮
基(=0)、 -0((:1-6烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-NHCHO、 -N(d—6烷基)CHO、-NHCONR3QR31、 -N(d-6烷基)CONR3。！131、 -NHCO烷基、-NHCOXC"烷基)；-NHC.02H、 -NCdJ^iOCCXC!—6烷基)、-順802((^-6烷基)、羧基、-脒基、扁CHO、 -CONR30R31、 -CO(d.6烷基)、-CO雜環(huán)基、-CO環(huán)烷基、-C02H、 -C02(C,—6烷基)、-(302(芳基)、-CO2(NR30R31)、巰基、-S(C,-6烷基)、-80((^-6烷基)、-8〇2((31.6烷基)、-SO2NR30R31;其中R21、R"和R"相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和在含有NH的任何部分的氮上被R"取代；
1126和尺28各獨(dú)立選自卣素、硝基、-NR30R31、氰基、異氰基、C卜6烷基、C2—6鏈烯基、C2—6炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、羥基、酮基(=〇)、-0(d-6烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-NHCHO、 -N(d.6烷基)CHO、 -NHCONR3GR3i、 -N(C1.6烷基)CONR3aR31、 -NHCO烷基、-NHCO^Cw 烷基)；-NHC02H、-風(fēng)(31-6烷基)(:0((31.6烷基)、-朋802(<:1.6烷基)、羧 基、-脒基、-CHO、 -CONR3QR31、 -CO(d.6烷基)、-CO雜環(huán)基、-CO環(huán) 烷基、-C02H、 -C02(C!-6烷基)、-0)2(芳基)、-C02(NR3°R31)、巰基、 -8((31.6烷基)、-SO(d'6烷基)、-S02(C!—6烷基)、-S02NR3QR31;
R"和R"各獨(dú)立選自卣素、硝基、-NR3QR31、氰基、異氰基、d-6 烷基、02.6鏈烯基、C2-6炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、羥基、酮基(=0)、 -O(Cw烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-NHCHO、 ^((31-6烷基)010、 -NHCONR3°R31、 -N(C1.3￡|)CONR3°R31、 -NHCO烷基、-NHCCMC^ 烷基)；-NHC02H、 ->^((31.6烷基)(:0((:1.6烷基)、-順802((^6烷基)、羧 基、-脒基、-CHO、 -CONR30R31、 -CO(d—6烷基)、-CO雜環(huán)基、隱CO環(huán) 烷基、-C02H、 -C02(d-6烷基)、-C02(芳基)、-C02(NR3。R3i)、巰基、 -S(d—6烷基)、-SO(d-6烷基)、-S02(C"6烷基)、-SO2NR30R31;
R犯和R"各獨(dú)立選自卣素、硝基、-NH2、氰基、異氰基、Cw烷基、 C^鏈烯基、(32_6炔基、芳基、環(huán)垸基、雜環(huán)基、羥基、酮基(=〇)、-0(Ci-6 烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-NHCHO、 -N(C卜6烷基)CHO、 網(wǎng)NHCONR"R12、 -KCl^^SOCONRUR12, -NHCO烷基、-NHC02(C+6 烷基)；-NHC02H、 -N(d—6烷基)CO(CV6烷基)、-NHS02(d.6烷基)、羧 基、-脒基、-CHO、 -CONR3QR31、 -(30((31-6烷基)、-CO雜環(huán)基、-CO環(huán) 烷基、-C02H、 -C02(C小6烷基)、-C02(芳基)、-C02(NR3QR31)、巰基、 -S(Cw烷基)、-SO(C,—6烷基)、-S02(d—6烷基)、-S02NRUr'2;其中R30 和R"相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)113，又代；和其中如果所 述雜環(huán)基含有-NH-或NH2部分，則所述部分的氮可任選被選自R"的基 團(tuán)取代；
前提是，當(dāng)X是S時(shí)；Y是CH; 112是0(=〇)艦6117;和113是 NHC(=0)NHR4;則R'不能是其中RS選自H、任選取代的碳環(huán)基或任選取代的CL6烷基；進(jìn)一步的前 提是，所述化合物不是
5-曱基-2-脲基-噻吩-3 -羧酸(1 -乙基-哌啶-3 -基)-酰胺； [3-((S)-3-氨基-氮雜環(huán)庚烷-l-羰基)-5-乙基-噻吩-2-基]-脲； 2-嗎啉-4-基-4-脲基-p塞唑-5-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺； 2-曱基-5-脲基-唑-4-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺； 5-(4-氯-苯基)-3-{3-[(11)-1-(2,2,2-三氟-乙?；?-哌咬-3-基]-脲基}-p塞吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；或
N-(3-([(3S)-3-氨基氮雜環(huán)庚烷-l-基]羰基卜5-吡啶-2-基J-噻吩基)脲。
具有特別重要性的式(I)化合物包括以下
1.1: 5-(3-氟-苯基)-3-脲基-噻吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；
1,2: 5-苯基-2-脲基-噻吩-3-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；
1,3: 5-(3，5-二氟-笨基)-2-脲基-噻吩-3-羧酸(S)-派啶-3-基酰胺；
1.4: 5-(4-氟-苯基)-2-脲基-噻吩-3-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；
1.5: 5-(4-氯-笨基)-2-脲基-p塞吩-3-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；
1.6: 5-(3-氯-苯基)-2-脲基-噻吩-3-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；
1.7: 5-[4-(哌咬-l-羰基)-苯基]-2-脲基-噻吩-3-羧酸(S)-哌啶-3-基酰
胺；
1.8: 5-(4-氰基-苯基)-3-脲基-噻吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；
1.9: 5-[4-(哌啶-l-羰基)-苯基]-3-脲基-噻吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰
胺；
1.10: 5-(3,4-二氟-苯基)-3-脲基-噻吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺； 1.11: 5-(3-氯-苯基)-3-脲基-噻吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺； 1.12: 5-(2,3-二氟-苯基)-3-脲基-噻吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺； 1.13: 5-(2，4-二氟-苯基)-3-脲基-噻吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；
221.14: 5-(3,5-二氟-苯基)-3-脲基-噻吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；
1.15: 5-苯基-3-脲基-噻吩-2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺；
1.16: 5-(4-氯-苯基)-3-脲基』塞吩=2-羧酸(S)-哌啶-3-基酰胺。
另外的CHK1抑制劑包括公開于WO2006A06326的式(II)取代的雜 環(huán)或其藥學(xué)上可接受的鹽
^一R2
其中
A和D各獨(dú)立選自N、 CH、 S、 0和NR4; L選自NR5、 O和S; X和Y各獨(dú)立選自N和CH;
R]選自氰基、卣代基；C,'-6烷基、-NR"R12、 C！—6烷氧基、(:2-6鏈烯 基、C2—6炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜環(huán)基、OR6; -CO碳環(huán)基、 -CO雜環(huán)基、-00((^6烷基)、-CONR28R29、 -8(0)5^1—6烷基)、-S(O)x碳 環(huán)基、-S(O)x雜環(huán)基、S(0)yNR28R29和-(d-6烷基)S(0)yNR281129,其中x 獨(dú)立為0-2和y獨(dú)立為l或2;和其中R^可任選在一個(gè)或多個(gè)碳原子上4皮 一個(gè)或多個(gè)R、又代；和其中如果雜環(huán)基含有-NH-部分，則所述部分的 氮可任選被選自R"的基團(tuán)取代；
W選自(d-3烷基)NR7118、含有至少一個(gè)氮原子的4-7元雜環(huán)基環(huán)、 -CO碳環(huán)基、-CO雜環(huán)基、-COCd—6烷基)、-CONR28R29、 -(302((31.6烷基)、 -C02碳環(huán)基、-C02雜環(huán)基、-C02NR28R29、 -S(0)x(C l6烷基)、-S(O)x環(huán) 烷基、-S(O)x環(huán)烯基、-S(O)x雜環(huán)基、S(0)yNR28R29和-(C,-6烷
23基)S(0)yNR281129，其中x獨(dú)立為0-2和y獨(dú)立為1或2且其中W可任選在一 個(gè)或多個(gè)^^原子上^f皮一個(gè)或多個(gè)R'^又代；且進(jìn)一步地，其中如果雜環(huán) 基含有-NH-部分，則所述部分的氮可任選被選自R"的基團(tuán)取代；
R 選自H、節(jié)基、Cw烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜環(huán)基、OR6、 CHO、 -CO碳環(huán)基、-(30((:1-6烷基)、-CONR2SR29、 -8(0)"(:1.6烷基)、-s(o)x 碳環(huán)基、-S(O)x雜環(huán)基、S(0)yNR28R29和-(C！—6烷基)S(0)yNR281129,其中 x獨(dú)立為0-2, y獨(dú)立為1或2和其中113可4壬選在一個(gè)或多個(gè)石友原子上^皮一 個(gè)或多個(gè)R"取代；和其中如果雜環(huán)基含有-NH-部分，那么氮可任選被
選自R"的基團(tuán)取代；
R4選自H、 d.3烷基、環(huán)丙基和CF3;
RS選自H、 Cw烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基和OR、其中RS可 任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則所述部分的氮可任選被選自R"的基團(tuán)取代；
RS選自H、 Cw烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基和雜環(huán)基；其中的R6 可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則所述部分的氮可任選被選自R^的基團(tuán)取代；
KJ和RS獨(dú)立選自H、 d-6烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基和雜環(huán)基； 其中的R"和RS相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)P，取代，和其中 如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，那么所述部分的氮可任選被選自R21 的基團(tuán)取代；
P、"和P 獨(dú)立選自H、 d—6烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜環(huán)基， 其中rU和R"相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和其中 如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，那么所述部分的氮可任選被選自R33
的基團(tuán)取代；
R9、 R13、 R15、 R17、 R19、 R20、 R32和R34各獨(dú)立選自鹵代基、硝基、
-NR28RM、氰基、異氰基、d-6烷基、C2—6鏈烯基、C2-6炔基、芳基、環(huán)
烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、羥基、酮基(=0)、 -0((^-6烷基)、-O碳環(huán)、-O 雜環(huán)基、-O芳基、-OC(O)C M烷基、-NHCHO、 -N(Cw烷基)CHO、-NHCONR28R29、 ->1((:1.6烷基)(:0服281129、誦NHCO(CL6烷基)、-NHCO 碳環(huán)基、-NHCO(雜環(huán)基)、-1^(302((:1.6烷基)；-NHC02H、 -N(d.6烷 基)CO(d—6烷基)、-NHS02(d.6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、 -CONR28P、29、 -CO(d.6烷基)、-CO雜環(huán)基、-CO環(huán)烷基、-CO環(huán)烯基、-CO芳基、-C02H、 -C02(CL6烷基)、《02碳環(huán)基、-C02雜環(huán)基、-OC(0)(NR28R29)、巰基、 -S(0)x(d.6烷基)、-S(O)x碳環(huán)、-S(0)x雜環(huán)基和-S(0)xNR28R29;其中x 獨(dú)立為0-2,其中R9、 R13、 R15、 R17、 R19、 R20、 1132和1134相互獨(dú)立， 可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和其中如果雜環(huán)基含有-NH-部 分，則所述部分的氮可任選被選自R"的基團(tuán)取代；
R10、 R14、 R16、 R18、 R21、 R24、 R33和R35各獨(dú)立選自氰基、C"烷
基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、羥基、
-0(CL6烷基)、-O碳環(huán)基、-脒基、-CHO、 -CONR28R29、七0((31.6烷基)、 -CO雜環(huán)基、-CO碳環(huán)基-CO芳基、-(302((^-6烷基)、-C02碳環(huán)基、-co2 雜環(huán)基、-S(0)x(d—6烷基)、-S(O)x碳環(huán)基、-S(0)x雜環(huán)基和-S(0)yNR28R29; 其中x獨(dú)立為0-2，和y獨(dú)立為l或2;其中R， R14、 R16、 R18、 R21、 P、24、 R"和R"相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R^取代，和其中如果 所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則所述部分的氮可任選被選自R"的基團(tuán)取 代；
R"和R"各獨(dú)立選自卣代基、硝基、-NR28R29、氰基、異氰基、 烷基、C2—6鏈烯基、C2—6炔基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、羥基、 酮基(=0)、 -0(Ci—6烷基)、-O碳環(huán)基、-O雜環(huán)基、-O芳基、-OC(0)d-6 烷基、-NHCHO、 -N(d-6烷基)CHO、 -NHCONR28R29、 -N(C"烷 基)CONR281129、 -NHCO(d.6烷基)、-NHCO碳環(huán)基、-NHCO(雜環(huán)基)、 -NHC02(CL6烷基)；-NHC02H、 -N(d.6烷基)CO(d—6烷基)、-NHS02(C]—6 烷基)、羧基、-脒基、-CHO、 -CONR28R29、 -CO(C"烷基)、-CO雜環(huán) 基、-CO環(huán)烷基、-CO環(huán)烯基、-C02H、 -C02(C,—6烷基)、-C02碳環(huán)基、 -OC(0)(NR28R29)、疏基、-8(0)"(^-6烷基)、-S(O)x碳環(huán)基、-S(O)x雜環(huán) 基和-S(0)xNR2811^其中x獨(dú)立為0-2，其中R"和R"可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代和其中如果所述雜環(huán)基含有-NH-部分，則所述部分的
氮可任選被選自R"的基團(tuán)取代；
R23和R26各獨(dú)立選自氰基、d—6烷基、02.6鏈烯基、€2.6炔基、芳基、
環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、羥基、-0((31_6烷基)、-O碳環(huán)基、-脒基、-CHO、 -CONR28R29、 -CO(d.6烷基)、-CO雜環(huán)基、-CO環(huán)烷基、-CO環(huán)烯基、 -C02(d-6烷基)、-(:02碳環(huán)基、-8(0)"(31.6烷基)、-S(O)x碳環(huán)基、-S(0)x 雜環(huán)基和-S(0)yNR"R";其中x獨(dú)立為0-2，和y獨(dú)立為l或2;其中R23 和1126相互獨(dú)立，可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代，和其中如果所 述雜環(huán)基含有-NH-部分，則所述部分的氮可任選被選自R"的基團(tuán)取 代；
R28和R29各獨(dú)立選自H、氨基、氰基、Cw烷基、Cw鏈烯基、C2-6
炔基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、羥基、-o(c"烷基)、-o芳基、
-OCO烷基、-脒基、-CHO、 -CO(d-6烷基)、-co雜環(huán)基、-co環(huán)烷基、
-co環(huán)烯基、-so(d-6烷基)、-802(0:1-6烷基)，其中r2s和r29相互獨(dú)立'
可任選在碳上被一個(gè)或多個(gè)R"取代；和其中如果所述雜環(huán)基含有 -NH-,則所述部分的氮可任選^皮選自1135的基團(tuán)耳又代；
R鄧和R，各-獨(dú)立選自卣代基、硝基、-NR2SR29、氰基、異氰基、C" 烷基、C2—6鏈烯基、02-6炔基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、羥基、 酮基(=0)、 -0(d-6烷基)、-O碳環(huán)基、-OC(O)C"烷基、-NHCHO、 -N(C" 烷基)CHO、 -NHCONR28R29、 -N(d—6烷基)CONR281129、 -NHCO(C"烷 基)、-NHCO碳環(huán)基，-NHCO(雜環(huán)基)、-順(202((]!.6烷基)；-NHC02H、 -N(d—6烷基)CO(CL6烷基)、-麗802((^-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、 -CONR28R29、 -CO(CL6烷基)、-CO雜環(huán)基、-CO環(huán)烷基、-CO環(huán)烯基、 -C02H、 -C02(d—6烷基)、-C02碳環(huán)基、-OC(0)(NR28R29)、巰基、 -S(0)x(d-6烷基)、-S(0)/炭環(huán)基、-8(0、雜環(huán)基和-8(0\服281129;其中x 獨(dú)立為0-2;
R"和R"各獨(dú)立選自氰基、C,—6烷基、02-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基、
環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、羥基、-0(d—6烷基)、-O碳環(huán)基、-(Cw烷
26基)-O-(Cw烷基)、-脒基、-CHO、 -CONR2SR29、 -CO(d.6烷基)、-CO 雜環(huán)基、-CO環(huán)烷基、-CO環(huán)烯基、-C02(d.6烷基)、-(302碳環(huán)基、 -S(0)x(d—6烷基)、-S(O)x碳環(huán)基、-8(0》雜環(huán)基和_8(0),汲28&29;其中x 獨(dú)立為0-2,和y獨(dú)立為l或2。
具有特別重要性的式(II)化合物包括以下
1.17: 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺； U8: 4-[(38)-哌啶-3-基氨基]-2-(3-噻吩基)噻吩并[3,2-0]吡啶-7-甲
酰胺；
1.19: 2-(3-氟代苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3,2-c]吡啶-7-
甲酰胺；
1.20: 4-[(38)-哌啶-3-基氨基]-2-(2-噻吩基)噻吩并[3，2^]吡啶-7-曱
酰胺；
1.21: 2-(4-氟代苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-
甲酰胺；
1.22: 2-(3,4-二氟笨基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3,2-c]吡啶
, j w, ，z、 ^
1.23: 2-(l-,基-lH-吡唑-4-基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并 [3,2-c]葉匕咬-7-曱酰胺；
1.24: 4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3,2-c|吡啶-7-曱酰胺；
1.25: 2-(3-氟代苯基)-4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基》噻吩并[3,2-c] p比口定-7-曱酰胺；
1.26: 2-(4-氟代苯基)-4-{曱基[(38)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-0| p比咬-7-甲酰胺；
1.27: 4-{曱基[(3S)-哌啶-3-基]氨基卜2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c〗吡 吱-7-甲酰胺；
1.28: 4- {[反式-2-曱基哌啶-3-基]氨基} -2-苯基噻吩并[3 ，2-c]吡啶 -7-曱酰胺；1.29: 2-(3-氟代苯基)-4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}噻吩并 [3，2-c]吡啶-7-曱酰胺；
1.30: 4-([反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基卜2-(3-噻吩基)噻吩并[3,2-c] 吡咬-7-曱酰胺；
1.31: 2-(4-氟代苯基)-4-{[反式-2-曱基哌啶-3-基]氨基}噻吩并 [3,2-c]吡啶-7-曱酰胺；
1.32: 4-([(2R,3S)-2-甲基哌啶-3-基]氨基)-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡 咬-7-曱酰胺；
1.33: 4-{[(2R,3S)-2-曱基哌啶-3-基]氨基}-2-(3-噻吩基)噻吩并 [3,2-c]吡啶-7-曱酰胺；
1.34: 4-{曱基[反式-2-曱基哌啶-3-基]氨基)-2-苯基噻吩并[3,2-c] p比口定-7-甲酰胺；
1.35: 4-[(2，6-二曱基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3,2-0]吡啶-7-
曱酰胺；
1.36: 4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基l-2-(3-氟代笨基)噻吩并[3，2-c]
吡啶-7-曱酰胺；
1.37: 4-[(2，6-二曱基哌啶-3-基)氨基]-2-(3-噻吩基)噻吩并[3,2-c]吡 啶-7-曱酰胺；
1.38:4-[(6-甲基哌啶-3-基)氨基]-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-曱酰胺；
1.39: 4-[(6-甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-曱酰
胺；
1.40: 2-(4-[(二曱基氨基)曱基]苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩 并[3,2-。]吡啶-7-甲酰胺；
1.4]: 4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-[4-(哌啶-l-基甲基)苯基]噻吩并 [3,2-C]吡啶-7-甲酰胺；
1.42: 2-[4-(嗎啉-4-基曱基)苯基]-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并 [3,2-C]吡啶-7-甲酰胺；1.43: 2-(4-氯苯基)-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲咪-7-甲酰胺； 1.44: 2-(4-氟代苯基)-4-(哌咬-3-基氨基)-lH-p引哚-7-曱酰胺； 1.45: 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-lH-吲哚-7-甲酰胺； 1.46: 2-(3-氟代苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-lH-吲哚-7-甲酰胺； 1.47: 2-(4-氯苯基)-4-[(3S)-哌咬-3-基氨基]-lH-P引咮-7-曱酰胺； 1.48: 2-(4-氟代苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-lH-吲哚-7-曱酰胺； 1.49: 4-{乙基[(3S)-哌啶-3-基]氨基)-2-苯基噻吩并[3,2-c]吡啶-7-曱酰胺；
1.50: 4-(乙基[(3S)-哌啶-3-基]氨基》-2-(3-噻吩基)噻吩并[3 ，2-c]吡 啶-7-曱酰胺；
1.51: 4-[(反式-2-乙基哌咬-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-0]吡啶-7-
曱酰胺；
1.52: 4-[(順式-2-乙基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3,2《]吡啶-7-
曱酰胺。
可用有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的多種方法，包括但不限于 如在WO2006/106326中描述的和下文提供的方法，制備式1.17-1.52化合物。
可如下述制備式U7，2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3,2-c] p比。定-7-甲酰胺 步驟l:
(2Z)-3-氰基-3-Q-噻吩基)丙烯酸.向經(jīng)攪拌的2-噻吩基乙腈(24.8g, 0.20 mol)的MeOH (300 mL)溶液中加入二羥乙酸單水合物(18.5 g, 0.20 mol)和碳酸鉀(25.5 g, 0.20mol)。將反應(yīng)漿狀物置于氮?dú)夥諊?，并?熱至回流。反應(yīng)2小時(shí)后，冷卻混合物至室溫，經(jīng)過濾得到產(chǎn)物。用 大量MeOH洗滌濾餅，然后于真空爐中徹夜干燥，得到43.1 g(99。/o)呈 白色晶狀鉀鹽的標(biāo)題化合物。 步驟2:
(2ZV3-氰基-3-0-噻吩基)丙烯酰氯.向經(jīng)攪拌的草酰氯(2.6mL，30
29mmol)的10 mLCH2Cl2溶液中加入溶解于20 mLCH2Cl2的(2Z)-3-氰基 _3_(2-噻吩基)丙烯酸鉀鹽(2.2 g, l2.3 mmol)。加入額外量的CH2Cl2,直 到可容易地?cái)嚢枵承圆痪鶆虻姆磻?yīng)混合物。室溫下攪拌^^應(yīng)約1小時(shí)。
過濾除去固體，并用大量的CH2Cl2洗滌。合并濾液和洗滌液，真空濃
縮，得到2.0g標(biāo)題化合物，用于下一步驟。 步驟3:
(2ZV3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰疊氮化物.0。C下，'向經(jīng)快速攪拌的、 在二氧雜環(huán)己烷/水(20 mL)的50:50混合物中的疊氮化鈉(2.0 g， 30 mmol)懸液中加入溶解于10mL二氧雜環(huán)己烷的(2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩 基)丙烯酰氯(2.0g, 12.3mmol)溶液。0。C下，攪拌反應(yīng)30min,然后在
1- 2h的進(jìn)一步攪拌后達(dá)到室溫。將反應(yīng)加至約100mL水中。形成的沉 淀經(jīng)過濾、經(jīng)水洗滌并在真空爐中干燥過夜，得到為白色固體的標(biāo)題 疊氮化物(2.0g),其無須進(jìn)一步純化而用于下一步驟。
步驟4:
4一氧代-4，5-二氬p塞吩并「3，2-cl吡啶-7-腈.在氮?dú)饬飨?，加熱二苯?260 mL)和Bii3N (53 mL)的混合物至210 。C。經(jīng)2 h (劇烈》文出>12氣)逐滴加 入(2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰疊氮化物(15.0 g, 73.5 mmol)在 CH2a2(30mL)中的漿狀物。完成加入后，于210。C進(jìn)一步攪拌反應(yīng)iO min，再冷卻反應(yīng)物至室溫，再置于冰浴。加入己烷(500 mL)，濾出沉 淀，經(jīng)大量己烷洗滌。在真空爐(未加熱)中將所得到的固體干燥過夜， 得到淺棕色固體的標(biāo)題化合物(9.89 g, 76%)。 步驟5:
2- 溴-4-氧代-4,5-二氫噻吩并「3,2-cl吡啶-7-腈.向DMF/乙酸(20 mL)的 50:50混合物中的4-氧代-4,5-二氫p塞吩并[3,2-c]吡啶-7-腈(0.8 g， 4.5 mmol)溶液中加入N-溴代琥珀酰亞胺(l.6 g， 9 mmol)。加熱黑色反應(yīng)混 合物12h至80。C。冷卻至室溫后，邊攪拌邊將反應(yīng)物加入到約100mL 水中。用飽和NaHC03調(diào)節(jié)不透明的溶液的pH至9-10。經(jīng)過濾得到產(chǎn) 物，經(jīng)水洗滌，在真空爐中干燥(l.l g， 100%)。
30，Vl THTtf z
2-溴-4-氯噻吩并「3,2-cl吡啶-7-腈.將溶解于POCl3(10mL)的2-溴-4-氧 代-4，5-二氪蓬吩并[3，2-c]吡咬-7-腈(1,1 g5 4,5 mmol)溶液加熱至回流過 夜。冷卻至室溫后，真空濃縮反應(yīng)物至干。緩慢和小心地使固體懸浮 于約50-100mL水中。經(jīng)過濾得到產(chǎn)物，隨后經(jīng)水、飽和NaHC03、水 洗滌，并在真空爐中干燥(1.0g，830/。)。 步驟7:
(3SV3-「(7-氰基-2-溴虔吩并「3,2-cl吡啶-4-基)氨基l哌啶-l-羧酸叔丁基 瞾.向經(jīng)攪拌的2-溴-4-氯噻吩并[3,2-c]吡啶-7-腈(0.48 g, 1.76mmol)和 (3S)-3-氨基哌啶-l-羧酸叔丁基酯(0.40 g, 2.0 mmol)的NMP (5 mL)溶液 加中入碳酸鉀(0.5g, 3.52mmo1)。加熱不均勻混合物2h至80。C,冷卻 至室溫再加入約50mL水。產(chǎn)物(880mg)經(jīng)過濾分離并干燥。采用 MPLC(Si02; 30-50% EtOAc/己烷梯度)進(jìn)一步純化標(biāo)題化合物，得到 0.54 g, 70%淺黃色晶狀固體。 步驟8:
(3 S V3- {!7-氰基-2-(苯基)噻吩并[3 ，2-cj吡啶-4-基l氨基i哌啶-1 -羧g吏叔 丁基酯.使(3S)-3-[(7-氰基-2-溴噻吩并[3,2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-l-羧酸叔丁基酯(0.18 g. 0.41 mmol)、苯基硼酸(0.076 g, 0.62 mmol)、四(三 苯膦)釔(O) (Pd(PPh3)4) (0.10 g, 0.062 mmol)和碳酸銫(0.41 g， 1.25 mmol)的混合物溶解于水(l mL)和二氧雜環(huán)己烷(3 mL)。在氮?dú)夥諊?中，于80。C下攪拌該反應(yīng)混合物lh，再冷卻至室溫。用移液管移去水， 真空下除去二氧雜環(huán)己烷。殘余物經(jīng)MPLC (Si02; 30-60% EtOAc/己 烷)純化，得到標(biāo)題化合物(140 mg, 78%)。 步驟9:
2-苯基-4-「(3SV哌啶-3-基氨基l噻吩并「3,2-cl吡啶-7-曱酰胺.將 (3S)-3-([7-氰基-2-(苯基)噻吩并[3,2-c]吡啶-4-基]氨基》哌啶-1-羧酸叔 丁基酯(80 mg, 0.18 mmol)和12NHCl (濃，4 mL)溶液攪拌24小時(shí)。加入 水(10-20mL),用飽和NaHC03調(diào)節(jié)溶液的pH至10-11。原料經(jīng)過濾分離并經(jīng)少量冷水洗滌。原料經(jīng)干燥，然后經(jīng)MPLC(Si02; NH4OH/MeOH/CH2C12; 2:10:88)純化，得到標(biāo)題化合物(24 m.g, 380/0)。
可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的適當(dāng)原料，用類似于式1,17的方法， 制備式l.18-1.23。
除采用(3 S)-3-(曱基氨基)哌啶-1 -羧Sl叔丁基酯(下述的合成)作為 步驟7的原料外，用類似于式1.17的方法，可制備式1.24化合物，4-{曱 基[(3 S)-哌啶-3 -基]氨基} -2-苯基噻吩并[3 ，2-c]吡啶-7-曱酰胺 (3SV3-(甲基氨基)哌啶-l-羧酸叔丁基酯.向曱醛(37%,含水；0.37 ml， 4.7 mmol)在含有3 A分子篩的20 ml無水MeOH溶液中加入(3S)-3-氨基 哌啶-l-羧酸叔丁基酯(1.0g，5mmo1)。于室溫、N2下攪拌反應(yīng)約30h， 再加入作為固體的NaBH4 (304 mg, 8 mmol)。室溫下將反應(yīng)物攪拌過 夜，再用lNNaOH(約10ml)猝滅。分離各相，用乙醚萃取殘余的含水 層(3x)。經(jīng)合并的各有機(jī)層經(jīng)水和鹽水洗滌、干燥并蒸發(fā)，得到無色 油(1.04 g, 100%)。
可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的適當(dāng)原料，用類似式1.24的方式，
在化A 1 W-1 7
除采用反式-3-氨基-2-曱基哌啶-l-羧酸芐基酯(下述的合成)作為 步驟7中的原.料外，可用類似于式1.17的方法制備式1,28， 4-{[反式-2-曱基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3 ，2-c]吡啶-7-曱酰胺 (YlSVl-乙?；?44「(芐氣基)羰基l氨基l丁基)氨基曱酸^又丁基酯.向含 有#5-[(爺氧基)羰基]-^2-(叔丁氧基羰基)七-鳥氨酸(36.6 g， 100 mmol)、 配有J茲性攪拌棒和加料漏斗的3-頸燒瓶中加入無水THF (100 mL)。將 MeLi(1.6M，在乙醚中；275 mL; 440 mmol)裝入加料漏斗，隨后緩 慢(經(jīng)20分鐘)加至冷卻至0。C的反應(yīng)混合物中。再加熱該溶液至室溫。 攪拌另外5h后，通過倒在經(jīng)攪拌的水/水混合物上，猝滅反應(yīng)。含水混 合物經(jīng)EtOAc萃取(3 x 100mL)。再用鹽水洗滌經(jīng)合并的各有機(jī)層，經(jīng) Na2S04干燥，過濾并真空濃縮，得到黃色油(6.0g,98。/。)。采用MPLC (Si02; 25-60% EtOAc/己烷)純化后，分離呈透明油的產(chǎn)物(5.2 g, 14%)?！阜词?2-曱基哌啶-3-基1氨基曱酸叔丁基酯.向經(jīng)攪拌的((lS)-l-乙酰
基-4_{[(芐氧基)羰基]氨基}丁基)氨基曱酸叔丁基酯(3.9 g， 10.7 mmol) 的MeOH (200 mL)溶液中加入10。/。 Pd/C (0.1 mmol)。在大氣壓下將不 均勻混合物氳化3天(或40psi下過夜)。經(jīng)硅藻土過濾后，分離呈透明 油的產(chǎn)物，蒸發(fā)濾液，得到標(biāo)題化合物(2.3g; 100%)，其無須純化而 用于下一步驟。
反式-3-「(叔丁氧基羰基)氨基1-2-甲基哌啶-1-羧酸芐基酯.向經(jīng)攪拌 的、冷卻至O 。C的[反式-2-曱基哌啶-3-基]氨基曱酸叔丁基酯(2.3 g, 10.7 mmol)和二異丙基乙胺(2.1 mL, 12 mmol)溶于CH2Cl2 (40mL)的溶液中 加入氯曱酸千基酯(1.7mL, 12mmo1)。再加熱反應(yīng)混合物至室溫并攪 拌另外lh。再用CH2Cl2稀釋混合物，用1NHC1和鹽水洗滌，經(jīng)Na2S04 干燥，過濾并真空濃縮，得到黃色油。在采用MPLC(Si02; 10-40% EtOAc/己烷)純化后，分離呈晶狀固體(L8 g)的標(biāo)題化合物(反式非對映 異構(gòu)體)。順式非對映異構(gòu)體，順式-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-曱基哌 啶-l-羧酸,基酯也是分離純的(U g)。
反式.-3-氨基-2-甲基哌啶-1 -羧酸芐基酯,向溶解于MeOH(10ffiL)的反 式-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-曱基哌啶-1-羧酸芐基酯(1.8 g, 5.2 mmol) 溶液中加入HC1(4N，在二氧雜環(huán)己烷中；20mL)。室溫下攪拌lh后， 真空濃縮反應(yīng)物，再溶解于MeOH，再真空濃縮，得到呈透明晶狀固 體的標(biāo)題化合物的鹽酸鹽(1.46 g, 100%)。
除采用順式-3 -氨基-2-曱基哌啶-1 -羧酸節(jié)基酯(下述)作為步驟7中 的原料外，可用類似于式1.17的方法，制備式1.29-1.31化合物 順式-3-氨基-2-曱基哌啶-1 -羧酸芐基酯.向溶解于MeOH(10mL)的順 式-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-曱基哌啶-1-羧酸芐基酯(1.2 g， 3.4 mmol) 溶液中加入HC1(4N，在二氧雜環(huán)己烷中；20mL)。室溫下攪拌lh后， 真空濃縮反應(yīng)物，再溶解于MeOH，再真空濃縮，得到呈透明晶狀固 體的標(biāo)題化合物的鹽酸鹽(0.97 g, 100%)。
可經(jīng)手性制備型HPLC分離式1.28化合物，制備式1.32?？山?jīng)手性制備型HPLC分離式1.30化合物，制備式1.33。 除采用反式-2-曱基-3-(曱基氨基)哌啶-l-羧酸千基酉旨(下述合成)作 為步驟7的原料外，可用類似于式1.17的方式制備式1.34， 4-(甲基[反 式-2-曱基哌啶-3-基]氨基卜2-苯基噻吩并[3,2-c]吡啶-7-曱酰胺 反式-3-「(叔丁氧基羰基)(曱基〗氨基1-2-曱基哌啶-1 -羧酸芐基酯.于N2 氣氛下，向反式-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-曱基哌啶-l-羧酸千基酯 (0:10 g; 0.29 mmol)的10 mL無水THF溶液中加入氫化鈉(60 %礦物油 中；8 mg， 0.32 mmol)。攪拌該溶液30分鐘，然后加入碘甲烷(0.017mL, 0.287 mmol)。攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)，緩慢加入IO mL MeOH猝滅反應(yīng)。 內(nèi)容物被CIV，使殘余物溶解于30mLCH2Cl2并用水洗滌(2x)。 有機(jī) 層被CIV,得到0.16g標(biāo)題產(chǎn)物。
反式-2-曱基-3-(曱基氨基)哌咬-1 -羧酸芐基酯.向溶解于MeOH(4mL) 的反式-3-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-甲基哌啶-l-羧酸芐基酯 (0.16g0.45mmol)溶液加入HCl (4N，在二氧雜環(huán)己烷中；4mL)。室溫 下攪拌2h后，真空濃縮反應(yīng)物，再溶解于MeOH,然后真空濃縮，得 到油狀晶狀固體的標(biāo)題化合物的鹽酸鹽(0.12 g)。
可如下般制備式1.35, 4-[(2,6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩 并[3 ，2-c]吡咬-7-曱酰胺
2,6-二曱基哌啶-3-胺.在氮?dú)庀拢蚝?，6-二甲基吡啶-3-胺(2.08g, 17.0mmol)的高壓容器中先后加入水和UNHCl(各10mL)、氧化鉑 (IV) (500 mg, 2.20 mmol)。在減壓下抽空高壓容器，并于50 psi置于Parr 氫化裝置上48小時(shí)。在氮?dú)庀?，抽出混合物，?jīng)硅藻土床過濾，用大 量MeOH漂洗。真空濃縮所收集的濾液，得到標(biāo)題化合物，它作為異 構(gòu)體混合物直接用于下一反應(yīng)。
2-溴-4-「a6-二曱基哌啶-3-基)氨基l噻吩并「3,2-cl吡啶-7-腈.向溶解于 NMP (10 mL)的2,6-二曱基哌啶-3-胺(1.23 g, 4.50 mmol)加入碳酸鉀 (1.87 g, 13.5 mmol)和2-溴-4-氯噻吩并[3,2-c]吡啶-7-腈(1.23 g, 4.50 mmol)。加熱所生成的混合物至80。C并攪拌12小時(shí)，直到LCMS表示完全轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。再用水(100mL)稀釋混合物，所生成的固體經(jīng)過濾， 經(jīng)水(20mL)洗滌，在減壓下干燥不超過8小時(shí)。
4-[Y2，6-二甲基哌啶-3-基〗氨基l-2-苯基噻吩并「3,2-cl吡啶-7-腈.向含有 2-溴-4-[(2，6-二曱基哌啶-3-基)氨基]噻吩并[3,2-c]吡啶-7-腈(400 mg, 1.09mmo1)、苯基硼酸(200 mg, 1.64 mmol)、碳酸銫(1.06 g, 3.27 mmol) 和二氧雜環(huán)己烷/水(2 mL/1 mL)的溶液加入Pd(PPh3)4 (126 mg, 0.109 mmol)。加熱反應(yīng)物1小時(shí)至80 。C,然后冷卻反應(yīng)物至室溫，過濾并 用硅膠層析法(100% CH2Cl2-20% MeOH/CH2Cl2/3% NH40H)純化，得 到標(biāo)題化合物。
4-「(2,6-二曱基哌啶-3-基)氨基1-2-苯基逸吩并「3,2-0|吡啶-7-曱酰胺.向 含有4-[(2,6-二曱基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-C]吡啶-7-腈的 燒瓶中加入5.00mL 12NHC1。室溫下攪拌反應(yīng)混合物，用LCMS監(jiān)觀'j。 每12小時(shí)加入另外12NHC1，完全轉(zhuǎn)化為想要的產(chǎn)物。 一完成，就用 MeOH稀釋反應(yīng)混合物，并在減壓下濃縮，得到產(chǎn)物，經(jīng)制備型HPLC (5%-95。/。 H2OMeCN/'0.1% TFA)純化，得到作為異構(gòu)體混合物的標(biāo)題 4匕合物。
可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的適當(dāng)原料，用類似于對式1.3 5的方 法，制備式1.36-1.39化合物。
可如下制備化合物2-{3-[(二曱基氨基)甲基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺
(3 S)-3 " 「7-氰基-2-(3-曱?；交鵙 1 -苯并^塞吩-4-基1氨基}哌啶-1 -羧酸 叔丁基酯.加熱在二氧雜環(huán)己烷(8.2 mL)和H20 (2.7 mL)中的 (3S)-3-[(7-氰基-2-溴噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-l-羧酸叔丁基 酯(500 mg, 1.1 mmol)、 3-甲?；交鹚?257 mg, 1.7 mmol)、碳酸銫 (1.12 g, 3.4 mmol)和Pd(PPh3)4 (198 mg, 0.17 mmol)混合物至80 。C。 30 min后，冷卻溶液至室溫，經(jīng)移液管移去水層，真空濃縮溶液。殘佘 物經(jīng)MPLC (Si02; 20-50% EtOAc/己烷)純化，得到標(biāo)題化合物(185 mg, 35%)。(3SV3-「r7-氰基-244-「r二甲基氨基W基l苯基ll-苯并噱吩-4-基)氨基l 哌啶-l-羧酸叔丁基酯.室溫下，攪拌(3S)-3-([7-氰基-2-(3-曱?；?基)-l-苯并噻吩-4-基]氨基》哌啶-l-羧酸叔丁基酯(50mg， 0.11 mmol)和 二甲胺(0.54mL2M在THF溶液中，1.1 mmol)的乙二醇二甲醚(0.54 mL) 溶液。先后加入乙酸(2滴)、NaBH(OAc)3(92mg, 0.43mmo1)。加熱溶 液至80 。C 30min。然后冷卻;容液至室溫。先后加入水(2滴)、1 MNaOH (lmL)。用EtOAc萃取產(chǎn)物。有機(jī)萃取物經(jīng)鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥 并真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，直接用于下一步驟。 243-「(二曱基氨基)甲基l苯基V4-R3SV哌啶-3-基氨基l噻吩并「3,2-d吡 口定-7-甲酰胺.使(3S)-3-[(7-氰基-2-(4-[(二曱基氨基)曱基]苯基卜l-苯并 噻吩-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁基酯溶解于12 M HC1 (4 mL)并保持 在室溫17h。真空濃縮溶液，與MeOH共沸，得到作為鹽酸鹽的標(biāo)題 化合物(48 mg， 98%)。
可用類似于對2-0-[(二曱基氨基)曱基]苯基)4-[(3S)-哌啶-3-基氨 基]噻吩并[3,2-c]吡啶-7-甲酰胺的方法，自本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的適 當(dāng)原料制名、式1.40-1.42化告-物。
可如下制備化合物2-(3-氟代苯基)-7-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并 [2,3-c]吡咬-4-曱酰胺
(2ZV3-氰基-3-f3-噻吩基)丙烯酸.向3-噻吩乙腈(166 mmol)加入二羥乙 酸(174mmo1)、 MeOH (332 mL)和碳酸鉀(174 mmol)。將生成的混合物 加熱至回流3小時(shí)，隨后冷卻至室溫。過濾所生成的固體，經(jīng)MeOH漂 洗，在真空爐中干燥，得到標(biāo)題化合物(26.6 g， 90%得率)。 (2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰氯.向草酰氯(27.3 mL, 313 mmol)的 CH2C12 (57 mL)溶液分批加入(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酸(26.6 g， 149mmo1)。室溫下攪拌所生成的溶液直到LCMS表明反應(yīng)完成。然后 過濾反應(yīng)混合物，經(jīng)CH2Cl2漂洗。收集濾液，在減壓下濃縮，真空干 燥，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物，其直接用于下一反應(yīng)(18.5g, 63% 得率)。
36(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰疊氮化物.0 。C下,向疊氮化鈉(12.2g, 187 mmol)在二氧雜環(huán)己烷/水(23 mL) l:l混合物中的溶液加入33 mL 二氧雜環(huán)己烷中的(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰氯(18.5 g， 93.5 mmol)。 0。C下，攪4半反應(yīng)物15分鐘，隨后加熱反應(yīng)物至室溫。約1.5 小時(shí)后，向反應(yīng)物中加入水(100mL),所生成的固體經(jīng)過濾，在真空 爐中干燥，得到標(biāo)題化合物(15.1g, 82%得率)。
7-氧代-6,7-二氬噻吩并「2，3-cl吡啶-4-腈.230 。C下，向苯醚(224mL)和 三丁胺(53.0 mL)的溶液逐滴加入在約10 mL CH2Cl2t的(2Z)-3-氰基 -3-(3』塞吩基)丙烯酰疊氮化物。230 。C下攪拌混合物30分鐘，冷卻至 室溫，隨后加入500mL己烷，得到微黃色固體。所生成的固體經(jīng)己烷 洗滌并真空千燥，得到標(biāo)題化合物(4.61 g,44。/。得率)。 2-溴—7-氧代-6,7-二氫p塞吩并「2,3-cl吡啶-4-腈.向7-氧代-6，7-二氫噻吩 并[2，3-c]吡啶-4-腈(2.30 g, 13.1 mmol)的l/1乙酸/DMF (10 mL)溶液力口 入N-溴代琥珀酰亞胺(11.6 g, 65.3 mmol)。加熱反應(yīng)混合物l小時(shí)至80 。C。冷卻溶液至室溫，并用100mL水稀釋。再用飽和碳酸氫鈉中和v義 應(yīng)，隨后過濾所生成的固體，將其在真空爐中千燥，得到標(biāo)題化合物 (3.20 g, 96%得率)。
2_溴_7—氯遙吩并「2，3-cj吡啶-4-腈.向2-溴-7-氧代-6,7-二氫噻吩并[2,3-c] 吡啶-4-腈(3.20 g, 12.5 mmol)加入45,0 mL磷酰氯。將反應(yīng)物加熱至回 流過夜，此后LCMS表明反應(yīng)完成。再冷卻反應(yīng)物至室溫，在減壓下 除去揮發(fā)物質(zhì)。向所生成的殘佘物中加入約200mL水。黑色固體經(jīng)過 濾，用大量水漂洗，真空干燥，得到標(biāo)題化合物(2.80g，82。/。得率)。 (3S)-3-「(2-溴-4-氰基噻吩并「2,3-cl吡啶-7-基)氨基l哌啶-l-羧酸叔丁基 fl.向2-溴-7-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-4-腈(2.80g， 10.2 mmol)的NMP (10.0 mL)溶液加入碳酸鉀(4,23 g, 30.6 mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-l-羧 酸叔丁基酯(4.92 g, 24.6 mmol)。加熱反應(yīng)混合物至130 。C，直到LCMS 表明反應(yīng)完成。再冷卻反應(yīng)混合物至室溫，加入約100mL水。所生成 的固體經(jīng)過濾，并真空干燥，得到標(biāo)題化合物。(38)-3"「4-氰基-2-〖3-氟代苯基)噻吩并「2,3《1吡啶-7-基1氨基}哌啶-1-羧酸叔丁基酯.向(3S)-3-[(2-溴-4-氰基噻吩并[2，3-C]吡啶-7-基)氨基] 哌啶-1-羧酸叔丁基酯(428 mg， 0.979 mmol)加入碳酸銫(957 mg， 2.94 mmol)、 3-氟代苯基硼酸(206 mg， 1.47 mmol)、 Pd(PPh3)4 (113 mg， 0.0979 mmol)和二氧雜環(huán)己烷/水(4mL/2mL)。加熱反應(yīng)1小時(shí)至80 。C，然后， 冷卻反應(yīng)物至室溫，過濾，采用硅膠層析法(100。/。己烷至100。/。EtOAc) 純化，得到標(biāo)題化合物(241 mg, 54%得率)。
2-(3-氟代苯基V7-「(3SV哌啶-3-基氨基l噻吩并「2,3-cl吡啶-4-曱酰胺. 向含有(3S)-3-([4-氰基-2-(3-氟代苯基)噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]氨基)哌 啶-1-羧酸叔丁基酯的燒瓶中加入約2.00 mL PPA。 110 。C下攪拌反應(yīng)混 合物12小時(shí)。反應(yīng)混合物經(jīng)10.0mL水稀釋，并用6NNaOH調(diào)節(jié)至堿 性pH?；旌衔镌傧群蠼?jīng)EtOAc (4 x 100 mL)、 CH2Cl2/MeOH (1/1, 4 x 100 mL)萃取，經(jīng)MgS04干燥并在減壓下濃縮，得到產(chǎn)物，經(jīng)硅膠層析法 純化(100% CH2C12-20% MeOH7CH2Cl2/3% NH4OH),得到標(biāo)題化合物。
可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的適當(dāng)原料，用類似于對2-(3-氟苯 基)-7-[(3S)-哌啶-3-基氨基j噻吩并[2,3-c]吡啶-4-曱酰胺的方式，制備式 1.43和1.44化合物。
可如下般制備化合物2-苯基-4-(哌啶-3-基氨基)-lH-吲哚-7-曱酰
胺
2-氨基—4-硝基笨甲酸甲基酯.向2-氨基-4-硝基苯曱酸(24 g, 0.132 mol) 的MeOH (500 mL)溶液緩慢加入亞硫酰氯(96 mL)。將所生成的溶液回 流過夜。 一經(jīng)冷卻，就過濾分離晶狀產(chǎn)物，并在高真空下干燥(22.9g， 88%)。
4—竭基—2-苯基_1&吲哚_7—羧酸.向冷卻至-15。C的2-氨基-4-硝基苯曱 酸曱基酯(2.2 g， 11.2 mmol)和苯乙酮(2.8 g, 23.3 mmol)的DMSO (30 mL)溶液加入固體KOtBu (2.7 g， 24 mmol)。攪拌20 min后，再室溫下》文 置另外2h,反應(yīng)經(jīng)飽和NH4CI(200mL)猝滅，再于室溫下攪拌另夕卜1 h。 過濾紅色沉淀，經(jīng)水洗滌，高真空下干燥，得到標(biāo)題化合物(2.85 g,90%)。
4-硝基-2-苯基-lH-P引哚-7-曱酰胺.-15 。C下，向4-硝基-2-苯基-lH-P引哚-7-羧酸(0.60 g, 2.1 mmol)和N-曱基嗎啉(2.3 mmol^々CH2Cl2 (20 mL)溶液加入氯曱酸異丁基酯(0.5mL，3.8mmo1)。攪拌lh后，使麗3 (g)起泡通過反應(yīng)混合物10-15min。再于室溫下攪拌另外lh。除去溶劑后，殘余物經(jīng)MPLC (Si02; 50-100% EtOAc/己烷)純化，得到呈深黃色固體的產(chǎn)物(0.50g, 85°/。)。
4-氨基-2-苯基-1H-吲哚-7-曱酰胺.向氮吹洗過的、經(jīng)攪拌的、溶解于MeOH(30 mL)的4-硝基-2-苯基-lH-吲哚-7-甲酰胺(0.50 g, 17.8 mmoi)溶液加入10。/。Pd/C(30mg)。所生成的不均勻混合物充入H2(g)氣球。室溫下徹夜攪拌后，過濾反應(yīng)物(0.45u,Teflon)。真空濃縮濾液，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(0.35 g， 80%)。
3-([7-(氨基羰基)-2-苯基-lH-吲哚-4_基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁基酯.
向溶解于AcOH(15 mL)的4-氨基-2-苯基-lH-吲哚-7-甲酰胺(0.60g, 2.4 mmor)禾口3-氧^口底p定-l-狻酉臾4又丁基酉旨(0.6 g， 2.8 mmol》容液力口入Na2S04。室溫下攪拌混合物lh,再緩慢加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.5 g,7.2mmo1)。室溫下攪拌反應(yīng)lh?；旌衔锝?jīng)EtOAc和水稀釋，經(jīng)飽和NaHC03、 IN HCl和飽和NaCl洗滌。有機(jī)層經(jīng)^2804千燥,過濾和CIV。殘余物經(jīng)MPLC (Si02; 50-80% EtOAc/己烷)純化，得到呈褐色固體的標(biāo)題產(chǎn)物(0.3 g， 30%)。 LCMS (ES，M+H=435; M-H=433)。
2—苯基4<旅咬=3-基氨基VlH-P引哚-7-甲酰胺.向經(jīng)攪拌的3-([7-(氨基羰基)-2-苯基-lH-吲哚-4-基]氨基)哌啶-l-羧酸叔丁基酯(0.15 g， 0.35 mmol)的MeOH (10 mL)溶液加入二氧雜環(huán)己烷(IO mL)中的4.0NHC1。室溫下，攪拌反應(yīng)2h,再真空濃縮，得到鹽酸鹽。殘余物經(jīng)MeOH (10 mL)中的2,0 NNH3稀釋并CIV。殘余物經(jīng)MPLC (Si02;10% MeOH/ CH2C12/1.5% NH4OH-20% MeOH/ CH2Cl2/3% NH40H)純化，得到呈淺白色固體的標(biāo)題化合物(90 mg, 78%)。
可通過手性制備型HPLC分離化合物2-苯基-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-。引咮-7-甲酰胺制備式1.45化合物。
可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的適當(dāng)原料，用類似于對式1.43和1.44化合物的方式，制備化合物2-(3-氟代苯基)-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-口虧卜朱_7-曱酰胺。
可通過手性制備型HPLC分離2-(3-氟代苯基)-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲哚-7-曱酰胺制備式1.46化合物。
可通過手性制備型HPLC分離式1.43制備式1.47化合物。
可通過手性制備型HPLC分離式1.44制備式1.48化合物。
可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的適當(dāng)原料，用類似于對式1.24的方法，制備式1.49和1.50化合物。
可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的適當(dāng)原料，用類似于對式128-1.31的方法，制備式1.5 1和1.52化合物。
除本文所述的全部化合物的藥學(xué)上可接受的鹽之外，該化合物或鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本文預(yù)期，本文公開的化合物包括其中的 一個(gè)或多個(gè)原子是相同元素的放射性標(biāo)記的化合物。這可能包括，但不限于，本文討論的放射性示蹤的B細(xì)胞耗盡抗體。
如本文明確預(yù)期的，本發(fā)明包括以下方法
一種治療患有惡性血液病的患者的方法，該方法包括與B細(xì)胞耗盡抗體同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1 #卩制齊寸(方法1);
一種治療患有慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)的患者的方法，該方法包括與抗-CD20抗體同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法2);
一種治療患有慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)的患者的方法，該方法包括與利妥昔單抗同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法3);
一種治療患有B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法，該方法包括與B細(xì)胞
40耗盡抗體同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量
的CHK1抑制劑(方法4);
一種治療患有B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法，該方法包括與抗-CD20抗體同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1氺卩制劑(方法5);
一種治療患有B細(xì)胞相關(guān)胂瘤的患者的方法，該方法包括與利妥昔單抗同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法6);
一種治療患有對癌癥治療有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法，該方法包括給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法7);
一種治療患有對癌癥治療有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法，該方法包括與B細(xì)胞耗盡抗體同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法8);
一種治療患有對用DNA損傷劑治療有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)胂瘤的患者的方法，該方法包括給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法9);
一種治療患有對用DNA損傷劑治療有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法，該方法包括與B細(xì)胞耗盡抗體同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法10);
一種治療患有對用氟達(dá)拉濱治療有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)胂瘤的患者的方法，該方法包括給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法ll);
一種治療患有對用氟達(dá)拉濱治療有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法，該方法包括與抗-CD20抗體同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法12);
一種治療患有對用氟達(dá)拉濱治療有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)肺瘤的患者的方法，該方法包括與利妥昔單抗同時(shí)或順序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑(方法13)。
因此，本文預(yù)期，本發(fā)明的方法包括這樣的方法，其包括，與B 細(xì)胞耗盡抗體(例如，抗-CD20抗體，例如，利妥昔單抗)同時(shí)或順序 地(例如，之前或之后)給予患有惡性血液病(包括CLL)或B細(xì)胞相關(guān)腫 瘤(包括那些對癌癥治療有抗性，例如對用DNA損傷劑，例如氟達(dá)^立 濱治療有抗性的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤)的患者治療有效量的 CHK1抑制劑，包括但不限于，如本文所定義的呈游離形式或呈藥學(xué) 上可接受的鹽形式或呈所述化合物或鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物 形式的式1.1-1.52化合物。
另外，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括呈游離形式或呈藥學(xué)上 可接受的鹽形式或呈所述化合物或鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形 式的CHK1抑制劑在制備用于與B細(xì)胞耗盡抗體一起治療惡性血液病 或B細(xì)胞相關(guān)肝瘤的聯(lián)合治療的藥物中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中， 惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤對癌癥治療有抗性，例如，對用DNA損 傷劑治療有抗性。在一個(gè)實(shí)施方案中，DNA損傷劑是氟達(dá)拉濱。在一 個(gè)實(shí)施方案中，惡性血液病是CLL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，B細(xì)胞耗 盡抗體是抗-CD20抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗-CD20抗體是利妥昔 單抗。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CHK1抑制劑選自呈游離形式或呈藥學(xué) 上可接受的鹽形式或呈所述化合物或鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物 形式的如本文定義的式l.1-1.52。
在另 一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括呈游離形式或呈藥學(xué)上可接受
的鹽形式或呈所述化合物或鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形式的 CHK1抑制劑在用于與B細(xì)胞耗盡抗體一起治療惡性血液病或B細(xì)胞相 關(guān)腫瘤的耳關(guān)合治療中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，惡性血液病或B細(xì) 胞相關(guān)腫瘤對癌癥治療有抗性，例如，對用DNA損傷劑治療有抗性。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，DNA損傷劑是氟達(dá)拉濱。在一個(gè)實(shí)施方案中， 惡性血液病是CLL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD20 抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗-CD20抗體是利妥昔單抗。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化合物選自呈游離形式或呈藥學(xué)上可接受的鹽形式或呈 所述化合物或鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形式的式l.1-1.52。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種治療患有惡性血液病或B 細(xì)胞相關(guān)肺瘤的患者的方法，該方法包括與B細(xì)胞耗盡抗體同時(shí)或順 序地(例如，之前或之后)給予所述患者治療有效量的呈游離形式或呈 藥學(xué)上可接受的鹽形式或呈所述化合物或鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑
合物形式的CHK1抑制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，惡性血液病或B細(xì)胞相 關(guān)腫瘤對癌癥治療有抗性，例如，對用DNA損傷劑治療有抗性。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，DNA損傷劑是氟達(dá)拉濱。在一個(gè)實(shí)施方案中，惡性 血液病是CLL。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD^抗體。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗-CD20抗體是利妥昔單抗。在另一個(gè)實(shí)施方 案中，化合物選自呈游離形式或呈藥學(xué)上可接受的鹽形式或呈所述化 合物或鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形式的式l.1-1.52。
另外，如本文進(jìn)一步構(gòu)思的，本發(fā)明包括以下方法
方法l，其中的化合物具有式l.l-i.52;
方法2，其中的化合物具有式l,1-1.52;
方法3，其中的化合物具有式l.1-1.52;
畫二 、丄 <( *f山.厶厶入iH曰Tt" -V 11 1 C，.
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方法5，其中的化合物具有式l.1-1.52; 方法6,其中的化合物具有式U-1.52; 方法7 ，其中的化合物具有式1.1-1.52; 方法8，其中的化合物具有式U-1.52; 方法9,其中的化合物具有式l.1-1.52; 方法IO,其中的化合物具有式l.1-1.52; 方法ll,其中的化合物具有式l.1-1.52; 方法12,其中的化合物具有式l.1-1.52。
還充分考慮用于本文所述方法或用途的、與藥學(xué)上可接受的載體 或稀釋劑組合或混合的、包含CHK1抑制劑(包括本文特別公開的那些)和B細(xì)胞耗盡抗體(例如，抗-CD20抗體，例如，利妥昔單抗)的藥用組 合物。
預(yù)期本文描述的本發(fā)明不限于所述的具體方法、方案和試劑，因 為它們可以變化。還應(yīng)明白，本文所用的術(shù)語仿J又為了描述具體實(shí)施 方案，并不打算以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
除非另有限定，本文所用的所有4支術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有與本發(fā)明 所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同意義。盡管可將類似或相當(dāng) 于本文所述的那些的任何方法和原料用于本發(fā)明的實(shí)踐或測試，但本 文描述的是優(yōu)選的方法、裝置和原料。為了描述和公開報(bào)道于可結(jié)合 本發(fā)明而采用的出版物中的原料和方法，本文提及的所有出版物都通 過全文引用而結(jié)合于本文。
實(shí)施例
實(shí)施例l:當(dāng)暴露于檢查點(diǎn)激酶l抑制劑時(shí)，CLL腫瘤生存力下降的證 實(shí)
A, ，7i研凡
在96孔培養(yǎng)皿中接種慢性B細(xì)胞白血病細(xì)胞系(JVM2和Mec 1)(美 國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)， Manassas,VA), 24小時(shí)后，用濃度遞 增的CHK1抑制劑(式1.1)處理。處理48小時(shí)后，采用細(xì)胞Titer-Gl0⑧熒 光細(xì)月包生存力"i式-驗(yàn)(Promega, Madison, Wisconsin),測量細(xì)月包生存力。 從算出的Mecl和JVM2的Gl5o分別為0.079 ^M和0.013 ^M，觀察到有效 的抑制劑活性。
B. 離體研究
自CLL患者收集血樣(10mls)，并置于水上。全血再經(jīng)磷酸鹽緩沖 鹽水(PBS)稀釋(稀釋2-3倍)并小心地在50 ml錐形管中的12 mls Ficoll-paque (GE Healthcare, Westborough, MA)上分層。然后于室溫下， 以3500 rpm不停歇地對試樣離心35分鐘。除去血漿和收集含有單核細(xì) 胞的不透明中間相，并》支入純凈錐形離心管中。再用含1%胎牛血清 (FBS)的PBS洗滌細(xì)胞兩次。最后洗滌后，使細(xì)胞再懸浮于5-10mlsRPMI 1640 (Invitrogen, Gr和Island， NY)加10。/。胎牛血清(FCS)培養(yǎng)基 中。再經(jīng)臺盼藍(lán)色排除法對細(xì)胞計(jì)數(shù)，評估生存力和純度。
再將細(xì)胞接種96孔培養(yǎng)皿(1 X 105細(xì)胞/孔)并在無藥物培養(yǎng)基中 培養(yǎng)過^復(fù)。次日早晨用氟達(dá)拉濱(l、 3和10iaM)、吉西他濱(0.1和1 )、 式l.l的CHKl抑制劑(O.Ol、 0.1和0.5 ^M)或氟達(dá)拉濱和CHK1抑制劑或 吉西他濱和CHK1抑制劑的組合處理細(xì)胞。另外，用單一藥劑的8點(diǎn)滴 定處理細(xì)胞，以確定IC5。s(CHKl抑制劑從0.1 nM至500nM;氟達(dá)拉濱 0.1 ^M至30 pM和吉西他濱O.Ol ^M至10 (aM)。 48小時(shí)處理后，用細(xì)胞 Titer-Glo⑧熒光細(xì)J包生存力試-瞼(Promega, Madison, Wisconsin)測量細(xì) 胞生存力。數(shù)據(jù)表明，先前未接受治療的新診斷的患者響應(yīng)氟達(dá)拉濱 (IC5Q = 0.56)，但不響應(yīng)吉西他濱或CHK1抑制劑。在氟達(dá)拉濱和CHK1 抑制劑組合中未發(fā)現(xiàn)拮抗作用。相比之下，分離自一周前接受過利妥 昔單抗治療的復(fù)發(fā)患者的腫瘤細(xì)胞響應(yīng)CHK1抑制劑(式1.i) (IC5。 = 11 nM),但不響應(yīng)氟達(dá)拉濱(ICso-5.1 (iM)或吉西他濱。在該組合組中未 發(fā)現(xiàn)拮抗作用。
實(shí)施例2:響應(yīng)CHK1抑制作用的CLL患者的試樣中的磷酸-CHKl增加 的證實(shí)
自CLL患者收集血樣(IO mls)并置于冰上。全血再經(jīng)PBS稀釋(稀釋 2-3倍)并小心地在50mH,形管中的12mlsFicoll上分層。然后于室溫 下，以3500 rpm不停歇地對試樣離心35分鐘。除去血漿和收集含有單 核細(xì)胞的不透明中間相，并放入純凈錐形離心管。再用含1。/。FBS的 PBS洗滌細(xì)胞兩次。最后洗滌后，使細(xì)胞再懸浮于5-10mlsRPMI 1640 加10% FCS培養(yǎng)基中。再經(jīng)臺盼藍(lán)色排除法對細(xì)胞計(jì)數(shù)，評估生存力 和純度。
再將細(xì)胞接種到12孔培養(yǎng)i中并在無藥物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。 然后用々某介物、O.ljaM吉西他濱、3和10i^M氟達(dá)拉濱、0.1、 0.25和0.5 (iM CHK1抑制劑(式1.l)和所述劑量下的吉西他濱或氟達(dá)拉濱與CHK1 抑制劑的組合處理經(jīng)分離的細(xì)胞。處理5小時(shí)后，將用Phosphosafe抽提試劑(Novagen, San Diego, CA)收獲細(xì)胞。然后制備溶胞產(chǎn)物，并用 BCA蛋白試驗(yàn)試劑盒(Pierce， Rockford， IL)確定蛋白濃度。再如下進(jìn)行 ELISA試驗(yàn)，確定磷酸-CHKl水平。簡單說來，將全部CHK1抗體 (Abeam, Cambridge, MA)加至ELISA培養(yǎng)皿中，于4。C下培養(yǎng)過夜。然 后用PBST (含0.2。/。吐溫20的磷酸鹽緩沖鹽水)洗涂培養(yǎng)i3次，并用含 有3。/。BSA的PBST封閉3小時(shí)。然后加入實(shí)驗(yàn)CLL細(xì)胞溶解產(chǎn)物(4 ug) 或?qū)φ瘴锖蜆?biāo)準(zhǔn)溶胞產(chǎn)物(標(biāo)準(zhǔn)曲線)的系列稀釋液，并孵化2小時(shí)。再 如上所述，洗滌培養(yǎng)皿3次，并于室溫下孵化抗磷酸-CHKl抗體3小時(shí)。 再如上4殳洗滌培養(yǎng)皿并用Lance—Eu抗兔抗體(Perkin Elmer Life Science, Boston, MA)于室溫下孵化1小時(shí)。再如上4殳洗滌培養(yǎng)亞，室溫 下，用DELPFIA強(qiáng)化溶液((Perkin Elmer Life Science, Boston, MA)邊震 搖邊孵化5分鐘，并用伴有時(shí)間分辨分光光度法的銪程序(帶400ps延遲 的340nm激發(fā)和615nm發(fā)射、400(is窗和1000 jis循環(huán))，在Victor2 (Perkin Elmer Life和Analytical Science, Shelton, CT)上讀數(shù)。然后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn) 曲線，將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為相對量。來自不響應(yīng)CHKl抑制劑的患者的試樣 有無法檢測的磷酸-CHK1水平，而發(fā)現(xiàn)來自響應(yīng)的患者的試樣的磷酸 -CHK1水平明顯高于本底(pX).02)。
實(shí)施例3: AML患者試樣對CHK1抑制劑的單一試劑敏感性的證實(shí)
通過根據(jù)Ficoll-Hypaque密度梯度的沉降(English等，紅細(xì)胞的單 一步驟分離.根據(jù)Ficoll-Hypaque的不連續(xù)密度梯度的粒細(xì)胞和單核 白細(xì)月包.Journal of Immunological Methods, 5: 249-252, 1974),分離來 自患急性髓性白血病的9位患者的髓單核細(xì)胞。在除去為確定胚胞百 分比而染色的等分試樣后，用稀釋劑(0.2。/。二甲亞砜)、濃度遞增的單 獨(dú)的阿糖胞苷(25-300 nM)、濃度遞增的CHK-1抑制劑(式1.1) (30-300 nM)或在100 nM CHK-1抑制劑(式1.1 )存在下的濃度遞增的阿糖胞苷， 處理在含有20%熱失活胎牛血清、50單位/ml青霉素G、 50)ig/ml鏈霉 素和2mM谷氨酰胺的l ml改良Dulbecco's培養(yǎng)基(培養(yǎng)基A)中含有l(wèi) x 106個(gè)細(xì)胞的復(fù)制等份試樣。于37。(2,含有5。/。(v/v)C02的潮濕氣氛下
46孵化48小時(shí)后，以100xg沉積細(xì)胞5 min，洗滌并再懸浮于無藥物培養(yǎng) 基A中。再使含有3 x 105個(gè)細(xì)胞的復(fù)制等分試樣與含有干細(xì)胞因子、 粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞集落刺激因子、紅細(xì)胞生成素、 白細(xì)胞介素-3和白細(xì)胞介素-6的1.5 ml曱基纖維素培養(yǎng)基混合，并接種 到劃格35-mm培養(yǎng)皿中。37。C培養(yǎng)14天后，采用已定標(biāo)準(zhǔn)(Eaves, C. 和Lambie， K.人造血細(xì)胞集落圖.Vancouver:干細(xì)胞技術(shù)公司，1995) 在反向顯孩i鏡上對含有^50個(gè)細(xì)胞的集落劃痕(scored)。
結(jié)果表示于圖l(a-q)。帶(園)的線圖是用CHK1抑制劑治療的AML 患者試樣的結(jié)果；帶(.)的線圖是用CHK1抑制劑和阿糖胞苷治療的 AML患者試樣的結(jié)果；和帶(o)的線圖是用阿糖胞苷治療的AML患者 試樣的結(jié)果。患者試樣l的結(jié)果表示于圖la和lb;患者試樣2的結(jié)果表 示于圖lc和ld;患者試樣3的結(jié)果表示于圖le和lf;患者試樣4的結(jié)果 表示于圖lg和lh;患者試祥5的結(jié)果表示于圖li和lj;患者試樣6的結(jié) 果表示于圖lk和ll;患者試樣7的結(jié)果表示于圖lm和ln (極低的集落 數(shù))；患者試樣8的結(jié)果表示于圖lo和lp(對照物的細(xì)胞數(shù)量低)；和患
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CHK1單 一試劑的敏感性。
4權(quán)利要求
1.一種治療患有惡性血液病的患者的方法，該方法包括同時(shí)或順序地給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑與B細(xì)胞耗盡抗體。
2. 權(quán)利要求l的方法，其中的惡性血液病是慢性淋巴細(xì)胞白血病。
3. 權(quán)利要求1或2的方法，其中的B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD20抗體。
4. 權(quán)利要求l-3中任一項(xiàng)的方法，其中所述抗-CD20抗體是利妥昔 單抗。 、
5. —種治療患有B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的患者的方法，該方法包括同時(shí) 或順序地給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑與B細(xì)胞耗盡抗體。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中的B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD20抗體。
7. 權(quán)利要求5或6的方法，其中所述抗-CD20抗體是利妥昔單抗。
8. —種治療患有對用DNA損傷劑治療有抗性的惡性血液病的患 者的方法，該方法包括同時(shí)或順序地給予所述患者治療有效量的 CHK1抑制劑與B細(xì)胞耗盡抗體。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中的惡性血液病是慢性淋巴細(xì)胞白血病。
10. 權(quán)利要求8或9的方法，其中的B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD20抗體。
11. 權(quán)利要求8-10中任一項(xiàng)的方法，其中所述抗-CD20抗體是利妥 昔單抗。
12. 權(quán)利要求8-ll中任一項(xiàng)的方法，其中所述DNA損傷劑是氟達(dá) 拉濱。
13. —種治療患有對用DNA損傷劑治療有抗性的B細(xì)胞相關(guān)腫瘤 的患者的方法，該方法包括同時(shí)或順序地給予所述患者治療有效量的 CHK1抑制劑與B細(xì)胞耗盡抗體。
14. 一種治療患有對用DNA損傷劑治療有抗性的B細(xì)胞相關(guān)肺瘤 的患者的方法，該方法包括給予所述患者治療有效量的CHK1抑制劑。
15. 權(quán)利要求13的方法，其中的B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD20抗體。
16. 權(quán)利要求13和15中任一項(xiàng)的方法，其中所述抗-CD20抗體是 利妥昔單抗。
17. 權(quán)利要求13-16中任一項(xiàng)的方法，其中所述DNA損傷劑是氟達(dá) 拉濱。
18. 權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，其中的CHK1抑制劑是選自呈 游離形式或呈藥學(xué)上可接受的鹽形式或呈所述化合物或其鹽的藥學(xué) 上可接受的溶劑合物形式的式1.1-1.52的化合物。
19. 權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，其中的CHK1抑制劑是呈游離 形式或呈藥學(xué)上可接受的鹽形式或呈所述化合物或其鹽的藥學(xué)上可 接受的溶劑合物形式的式1.1或式1.2化合物。
20. CHK1抑制劑在制備藥物中的用途，所述藥物用于與B細(xì)胞耗 盡抗體一起治療惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的聯(lián)合療法中。
21. 如權(quán)利要求20中所述的CHK1抑制劑的用途，其中的惡性血液 病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤對用氟達(dá)拉濱治療有抗性。
22. 如權(quán)利要求20或21中所述的CHK1抑制劑的用途，其中的惡性 血液病是慢性淋巴細(xì)胞白血病。
23. 如權(quán)利要求20-22中任一項(xiàng)所述的CHK1抑制劑的用途，其中 的B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD20抗體。
24. 如權(quán)利要求23中所述的CHK1抑制劑的用途，其中的抗-CD20 抗體是利妥昔單抗。
25. 如權(quán)利要求20-24中任一項(xiàng)所述的CHKl抑制劑的用途，其中 的CHK1抑制劑選自呈游離形式或呈藥學(xué)上可接受的鹽形式或呈所述 化合物或其鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形式的式l.l-i.52化合物。
26. 如權(quán)利要求20-24中任一項(xiàng)所述的CHKl抑制劑的用途，其中 的CHK1抑制劑是呈游離形式或呈藥學(xué)上可接受的鹽形式或呈所述化 合物或其鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形式的式1.1或式1.2化合物。
27. CHK1抑制劑在制備用于治療惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤 的藥物中的用途，其中的惡性血液病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤對用DNA損傷劑治療有抗性。
28. 如權(quán)利要求27中所述的CHK1抑制劑的用途，其中的惡性血液 病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤對用氟達(dá)拉濱治療有抗性。
29. 如權(quán)利要求27-28中所述的CHKl抑制劑的用途，其中的惡性 血液病是慢性淋巴細(xì)胞白血病。
30. 如權(quán)利要求27-29中任一項(xiàng)所述的CHKl抑制劑的用途，其中 的B細(xì)胞耗盡抗體是抗-CD20抗體。
31. 如權(quán)利要求30中所述的CHK1抑制劑的用途，其中的抗-CD20 抗體是利妥昔單抗。
32. 如權(quán)利要求27-31中任一項(xiàng)所述的CHKl抑制劑的用途，其中 的CHK1抑制劑選自呈游離形式或呈藥學(xué)上可接受的鹽形式或呈所述 化合物或其鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形式的式U-1.52化合物。
33. 如權(quán)利要求27-31中任一項(xiàng)所述的CHKl抑制劑的用途，其中 的CHK1抑制劑是呈游離形式或呈藥學(xué)上可接受的鹽形式或呈所述化 合物或其鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形式的式1.1或式1.2化合物。
全文摘要
本發(fā)明部分公開治療惡性血液病，包括B細(xì)胞淋巴瘤和白血病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤的療法，包括給予與B細(xì)胞耗盡抗體組合的CHK1抑制劑。本發(fā)明進(jìn)一步包括治療惡性血液病，包括B細(xì)胞淋巴瘤和白血病或B細(xì)胞相關(guān)腫瘤，這些疾病是對癌癥治療，包括給予CHK1抑制劑有抗性的。
文檔編號A61P35/02GK101687036SQ200880021602
公開日2010年3月31日 申請日期2008年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月27日
發(fā)明者J·布朗, S·扎布盧多夫 申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司