專利名稱：制造氮雜環(huán)烷基烷?；偎碾牡姆椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及會(huì)聚制備氮雜環(huán)烷酰基假四肽的方法，包括二肽與假二肽偶聯(lián)。本發(fā)明也涉及中間體和制備用于制備假四肽的中間體的方法。
背景技術(shù)：
氮雜環(huán)烷基烷?；偎碾模鏝-[N-[N-(4-哌啶-4基)丁?；?-N-乙基甘氨?；鵠-(L)-天冬氨?；鵠-(L)-β-環(huán)己基-丙氨酸酰胺，具有抗血栓形成活性，包括在哺乳動(dòng)物體內(nèi)抑制血小板聚集和血栓形成，并可用于預(yù)防和治療與諸如心肌梗塞，中風(fēng)，外周動(dòng)脈疾病和彌散性血管內(nèi)血凝固的病癥有關(guān)的血栓形成。參見(jiàn)PCT專利申請(qǐng)公開(kāi)WO95／10295。
這些假四肽迄今已經(jīng)通過(guò)順序合成從C-端氨基酸用標(biāo)準(zhǔn)的固相或溶液相肽合成工藝制備。但是，氨基酸的順序偶聯(lián)對(duì)于批量藥物的生產(chǎn)不太理想，因?yàn)槠鋸?qiáng)制生產(chǎn)為線性程序。
因此，需要其它制備假四肽的途徑。這類途徑應(yīng)大大增加生產(chǎn)多面性和效率。會(huì)聚的途徑通過(guò)在一個(gè)合成子上而不是整個(gè)假四肽上實(shí)施特定的化學(xué)提供假四肽的專門修飾，并將提供同時(shí)制備許多假四肽類似物。
發(fā)明提要本發(fā)明涉及制備式Ⅰ的假四肽或其鹽或前藥的方法
其中
是任選地N-保護(hù)的氮雜雜環(huán)基；…是單鍵或雙鍵；q是1-5；B是烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；Q2是H或羧酸保護(hù)基；J是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，取代的芳基，芳烷基或取代的芳烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；和p是1或2，該方法包括(a)下式的氮雜雜環(huán)基假二肽
或其鹽，其中K是OH或酰基活化基團(tuán)，與下式的羧酸取代的二肽或其鹽偶聯(lián)，
(b)任選地地除去氮保護(hù)基或羧酸保護(hù)基，制備假四肽，和(c)任選地將假四肽轉(zhuǎn)化為鹽或前藥。
發(fā)明詳述術(shù)語(yǔ)定義除非另外說(shuō)明，如上面所用的并貫穿整個(gè)說(shuō)明書(shū)的下列術(shù)語(yǔ)將被理解具有如下意義“氮雜雜環(huán)基”指4-8員飽和，不飽和，或芳香碳環(huán)系，其中一個(gè)不是
部分的碳原子被氮原子代替。當(dāng)?shù)油ㄟ^(guò)兩個(gè)單鍵被摻入環(huán)系時(shí)，它任選地地被氮保護(hù)基P1取代。代表性的氮雜雜環(huán)基包括哌啶基，N-叔丁氧羰基哌啶基，N-芐氧羰基哌啶基，吡咯烷基，N-叔丁氧羰基吡咯烷基，N-芐氧羰基吡咯烷基，吡咯基，吡啶基(pyridinyl)等等。優(yōu)選的氮雜雜環(huán)基有吡啶基(pyridyl)，N-叔丁氧羰基哌啶-4-基和N-芐氧羰基哌啶-4-基。
“烷基”指飽和脂肪烴基，可以是直鏈或支鏈的，在鏈中具有約1至約20個(gè)碳原子。支鏈指低級(jí)烷基如甲基，乙基或丙基連接在直鏈烷基上。優(yōu)選的直鏈或支鏈烷基有“低級(jí)烷基”基團(tuán)，它們是具有1至約10個(gè)碳原子的烷基。更優(yōu)選的低級(jí)烷基具有1至約6個(gè)碳原子。
“環(huán)烷基”指具有一個(gè)或多個(gè)環(huán)并具有約3至約10個(gè)碳原子的飽和碳環(huán)基團(tuán)。優(yōu)選的環(huán)烷基包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，和十氫萘基。
“環(huán)烷基烷基”指被環(huán)烷基取代的烷基。優(yōu)選的環(huán)烷基烷基包括環(huán)戊基甲基，環(huán)己基甲基，環(huán)己基乙基，十氫萘-1-基甲基和十氫萘-2-基甲基。
“烷基環(huán)烷基”指被烷基取代的環(huán)烷基。烷基環(huán)烷基的例子包括1-，2-，3-，或4-甲基或乙基環(huán)己基。
“烷基環(huán)烷基烷基”指被烷基環(huán)烷基取代的烷基。烷基環(huán)烷基的例子包括1-，2-，3-，或4-甲基或乙基環(huán)己基甲基或1-，2-，3-，或4-甲基或乙基環(huán)己基乙基。
“芳基”指苯基或萘基。
“取代的芳基”指被一個(gè)或多個(gè)芳基取代基取代的苯基或萘基，這些取代基可以相同或不同，其中“芳基取代基”包括烷基，鏈烯基，炔基，芳基，芳烷基，羥基，烷氧基，芳氧基，芳烷氧基，羥基烷基，?；?，甲?；?，羧基，鏈烯?；减；?，鹵素，硝基，三鹵甲基，氰基，烷氧羰基，芳氧羰基，芳烷氧羰基，酰基氨基，芳酰氨基，氨基甲?；榛被柞；榛被柞；?，芳基氨基甲酰基，芳烷基氨基甲?；?，烷基磺?；?，烷基亞磺?；?，芳基磺酰基，芳基亞磺?；?，芳烷基磺?；?，芳烷基亞磺酰基，或-NRaRb其中Ra和Rb獨(dú)立地是氫，烷基，芳基，或芳烷基。優(yōu)選的芳基取代基是烷基，羥基，烷氧基，鹵素和三鹵甲基。
“芳烷基”指被芳基取代的烷基。優(yōu)選的芳烷基包括芐基，萘-1-基甲基，萘-2-基甲基，和苯乙基。
“取代的芳烷基”指在芳基部分被一個(gè)或多個(gè)芳基取代基取代的芳烷基。
“醇”指被一個(gè)或多個(gè)羥基取代的1至約10個(gè)碳原子的如本文定義的烷基。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)醇”指被單個(gè)羥基取代的1至約4個(gè)碳原子的醇。代表性的低級(jí)醇包括甲醇，乙醇，2-丙醇，1-丁醇，等等?！案蚀肌敝副粌蓚€(gè)或多個(gè)羥基取代的烷基。代表性的甘醇包括乙二醇，丙二醇，等等。
術(shù)語(yǔ)“醚”指式R-O-R’的化合物，其中R和R’是低級(jí)烷基。R和R’可以通過(guò)一個(gè)或多個(gè)亞甲基基團(tuán)原子或通過(guò)另外的氧原子連接。代表性的醚包括二乙醚，甲基叔丁基醚，四氫呋喃，二噁烷，等等。
“極性非質(zhì)子性”指不含有羥基但具有相當(dāng)高偶極矩的溶劑。代表性的極性非質(zhì)子性溶劑包括乙腈，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，二甲亞砜(DMSO)，1，1-二甲氧基乙烷(DME)，六甲基磷酰三胺(HMPA)，等等。
“醇鹽”指式M-OH的堿，其中M是選自鈉，鈣，鋰和鉀的堿金屬。
“碳酸鹽”指式M2CO3的堿，其中M選自鎂，鈉，鈣，鋰和鉀。
“碳酸氫鹽”指式MHCO3的堿，其中M選自鈉，鈣，鋰和鉀。
“天然氨基酸”指在羧基的α-位具有氨基的羧酸，即式H2N-CHR-CO2H的化合物，其中R是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，取代的芳基，芳烷基，取代的芳烷基，或其中Q如本文定義的-CH2CO2Q。優(yōu)選的天然氨基酸是其中R是環(huán)己基甲基的氨基酸。優(yōu)選的氨基酸在α-碳位具有L立體化學(xué)。
“肽”和“多肽”指其中單體是通過(guò)酰胺鍵連接在一起的天然或非天然氨基酸殘基的聚合物?！半墓羌堋敝高B接氨基殘基的系列酰胺鍵。
“氨基酸殘基”指摻入本發(fā)明肽中的單個(gè)氨基酸單位。
“假肽”指一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸單體被摻入肽骨架中的肽。代表性的非氨基酸單體包括1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸和4-吡啶丁酸。
“非天然氨基酸”指在非羧基的α-位具有氨基的羧酸。本文優(yōu)選的非天然氨基酸包括下式化合物
其中
是氮雜雜環(huán)基。代表性的優(yōu)選非天然氨基酸包括4-哌啶丁酸，3-(4-哌啶基亞甲基)丙酸和4-吡啶丁酸。
“N-保護(hù)基”和“氮保護(hù)基”指本專業(yè)已知用于保護(hù)氨基防止在合成工藝中發(fā)生不需要的反應(yīng)并被選擇性脫除的易脫除基團(tuán)。N-保護(hù)基用于在合成工藝中保護(hù)基團(tuán)使其不發(fā)生不需要的反應(yīng)在本專業(yè)是已知的，許多這類保護(hù)基是已知的，參見(jiàn)，例如，T．H．Greene and P．G．M．Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，2nd Edition，JohnWiley&Sons，New York(1991)，引作本文參考。優(yōu)選的N-保護(hù)基有?；?，包括甲?；阴；却阴；?，三氯乙?；琽-硝基苯基乙?；琽-硝基苯氧基乙?；阴；?，乙酰乙?；?，4-氯丁?；?，異丁酰基，o-硝基肉桂?；拎ぜ柞；；惲蚯杷狨?，氨基己酰基，苯甲酰基等等，酰氧基包括甲氧羰基，9-芴基甲氧羰基，2，2，2-三氟乙氧羰基，2-三甲基甲硅烷基乙氧羰基，乙烯氧羰基，烯丙氧羰基，叔丁氧羰基(BOC)，1，1-二甲基丙炔氧羰基，芐氧羰基(CBZ)，對(duì)硝基芐氧羰基，2，4-二氯芐氧羰基，烯丙氧羰基(Alloc)，等等。
“酸不穩(wěn)定的N-保護(hù)基”和“酸不穩(wěn)定的氮保護(hù)基”指容易通過(guò)用酸處理脫除而對(duì)其它試劑保持相對(duì)穩(wěn)定的如上定義的N-保護(hù)基。優(yōu)選的酸不穩(wěn)定N-保護(hù)基是叔丁氧羰基(BOC)。
“氫化不穩(wěn)定N-保護(hù)基”和“氫不穩(wěn)定氮保護(hù)基”指容易通過(guò)氫化脫除，而對(duì)其它試劑保持相對(duì)穩(wěn)定的如上定義的N-保護(hù)基。優(yōu)選的氫化不穩(wěn)定N-保護(hù)基是芐氧羰基(CBZ)。
“金屬不穩(wěn)定氮保護(hù)基”指容易通過(guò)金屬脫除的如上定義的氮保護(hù)基。優(yōu)選的金屬不穩(wěn)定氮保護(hù)基是烯丙基，它通過(guò)用鈀(O)處理脫除。
“N-保護(hù)試劑”指用于將N-保護(hù)基引入分子實(shí)體的試劑。這類保護(hù)基一般通過(guò)將要被保護(hù)的親核氮原子從N-保護(hù)試劑置換離去基而引入。代表性的N-保護(hù)試劑包括酰基和芳基鹵化物包括乙酰氯和苯甲酰氯，等等；?；头蓟ㄒ宜狒?，三氟乙酸酐和苯甲酸酐，等等；甲酸酯包括氯甲酸芐基酯；和碳酸酯如重碳酸二叔丁基酯和碳酸芐基-N-丁二酰亞胺基酯。
“羧酸保護(hù)基”和“酸保護(hù)基”指本專業(yè)已知用于保護(hù)羧酸基(-CO2H)防止在合成工藝中發(fā)生不需要的反應(yīng)并被選擇性脫除的易脫除基團(tuán)。羧酸保護(hù)基的用途在本專業(yè)是已知的，許多這類保護(hù)基是已知的，參見(jiàn)，例如，T．H．Greene and P．G．M．Wuts，Protective Groupsin Organic Synthesis，2nd Edition，John Wiley&Sons，New York(1991)，引作本文參考。羧酸保護(hù)基的例子包括酯如甲氧基甲基，甲硫基甲基，四氫吡喃基，芐氧基甲基，取代和未取代的苯甲酰甲基，2，2，2-三氯乙基，叔丁基，肉桂基，取代或未取代的芐基，三甲基甲硅烷基，烯丙基，等等，和酰胺和酰肼包括N，N-二甲基，7-硝基吲哚基，酰肼，N-苯基酰肼，等等。特別優(yōu)選的羧酸保護(hù)基是叔丁基和芐基。
“氫化不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基”和“氫化不穩(wěn)定的酸保護(hù)基”指容易通過(guò)氫化脫除而對(duì)其它試劑保持相對(duì)穩(wěn)定的如上定義的酸保護(hù)基。優(yōu)選的氫化不穩(wěn)定酸保護(hù)基是芐基。
“酸不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基”和“酸不穩(wěn)定的酸保護(hù)基”指容易通過(guò)用酸處理脫除而對(duì)其它試劑保持相對(duì)穩(wěn)定的如上定義的酸保護(hù)基。優(yōu)選的酸不穩(wěn)定保護(hù)基是叔丁基。
“金屬不穩(wěn)定羧酸保護(hù)基”指容易通過(guò)用金屬處理脫除的如上定義的羧酸保護(hù)基。優(yōu)選的金屬不穩(wěn)定羧酸保護(hù)基是苯甲酰甲基和烯丙基，它通過(guò)用Zn或Pd(O)處理脫除。
“酰基活化基”指當(dāng)該基團(tuán)取代羧酸的羥基時(shí)，使羰基更容易被親核進(jìn)攻，從而促進(jìn)羥基被親核試劑置換的基團(tuán)。代表性的?；罨鶊F(tuán)包括鹵素(即酰鹵)；羧酸與羥基苯并三唑，N-羥基丁二酰亞胺，五氟苯酚，對(duì)硝基苯酚等等的酯；不對(duì)稱酸酐；例如通過(guò)羧酸與氯甲酸異丙基酯，氯甲酸乙酯，氯甲酸異丁基酯等等反應(yīng)制備的不對(duì)稱酸酐；N-羧酸酐；由羧酸與碳二亞胺如二環(huán)己基-，二異丙基，和N，N-二甲基丙基乙基碳二亞胺反應(yīng)產(chǎn)生的產(chǎn)物；和由羧酸與(苯并三唑-1-基氧基)三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽，(苯并三唑-1-基氧基)三-(吡咯烷基)鏻六氟磷酸鹽，2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(tetramethyluronium)四氟硼酸鹽，2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(tetramethyluronium)六氟磷酸鹽和diphenylphosphorazidate反應(yīng)產(chǎn)生的衍生物。
本文用于與假四肽，假二肽和二肽關(guān)聯(lián)的“鹽”包括酸和堿加成鹽。
當(dāng)假四肽，假二肽和二肽用堿性部分取代時(shí)，任選地地形成酸加成鹽，并可以是更適用的形式?？梢杂糜谥苽渌峒映甥}的酸優(yōu)選地包括當(dāng)與游離堿結(jié)合時(shí)產(chǎn)生藥用鹽的酸，即，其陰離子在鹽的藥物劑型中對(duì)患者無(wú)毒，游離堿固有的有利作用不被陰離子的副作用破壞。雖然所說(shuō)的堿性化合物的藥用鹽是優(yōu)選的，但所有的酸加成鹽都可以用作游離堿形式的來(lái)源，即使特定的鹽本身僅被需要用作中間體產(chǎn)物，例如，當(dāng)該鹽形成僅用于純化，和鑒定，或當(dāng)其用作通過(guò)例子交換工藝制備藥用鹽的中間體時(shí)。本發(fā)明范圍的藥用鹽是從下列酸衍生的無(wú)機(jī)酸如鹽酸，硫酸，磷酸和氨基磺酸；和有機(jī)酸如乙酸，檸檬酸，乳酸，酒石酸，丙二酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，對(duì)甲苯磺酸，環(huán)己基氨基磺酸，奎尼酸，等等。相應(yīng)的酸加成鹽包括下列氫鹵化物，例如鹽酸鹽和氫溴酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽，硝酸鹽，氨基磺酸鹽，乙酸鹽，三氟乙酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽，酒石酸鹽，丙二酸鹽，草酸鹽，水楊酸鹽，丙酸鹽，丁二酸鹽，富馬酸鹽，馬來(lái)酸鹽，亞甲基-雙-β-羥基萘甲酸鹽，2，5-二羥基苯甲酸鹽，甲磺酸鹽，羥基乙磺酸鹽和二-甲苯?；剖猁}甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，環(huán)己基氨基磺酸鹽和奎尼酸鹽。
根據(jù)本發(fā)明另一特征，假四肽，假二肽或二肽的酸加成鹽通過(guò)應(yīng)用或適應(yīng)已知方法，使游離堿與適當(dāng)?shù)乃岱磻?yīng)而制備。例如，本發(fā)明肽的酸加成鹽既可以通過(guò)將游離堿溶于含有適當(dāng)?shù)乃岬乃芤夯蛩?醇溶液，或其它合適的含水溶劑混合物，并通過(guò)蒸發(fā)溶液而分離鹽來(lái)制備，又可以通過(guò)使游離堿和酸在有機(jī)溶劑中反應(yīng)，在該情況下，鹽被直接分離出來(lái)，或者可以通過(guò)濃縮溶液而獲得。
假四肽，假二肽或二肽可以通過(guò)應(yīng)用或適應(yīng)已知方法，從鹽再生。例如假四肽，假二肽或二肽可以通過(guò)用堿，例如碳酸氫鈉水溶液或氨水溶液處理從其酸加成鹽再生。
當(dāng)假四肽，假二肽或二肽被酸性部分取代時(shí)，可以形成堿加成鹽，并可以是更便于使用的形式?？梢杂糜谥苽鋲A加成鹽的堿優(yōu)選地包括當(dāng)與游離酸結(jié)合時(shí)產(chǎn)生藥用鹽的堿，即，其陽(yáng)離子在鹽的藥物劑型中對(duì)患者無(wú)毒，游離酸固有的有利作用不被陽(yáng)離子的副作用破壞。藥用鹽，包括例如堿金屬和堿土金屬鹽或胺鹽，在本發(fā)明范圍內(nèi)是從下列堿衍生的氫化鈉，氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鈣，氫氧化鋁，氫氧化鋰，氫氧化鎂，氫氧化鋅，氨，三甲胺，三乙胺，乙二胺，n-甲基-葡糖胺，賴氨酸，精氨酸，鳥(niǎo)氨酸，膽堿，N，N’-二芐基乙二胺，氯代普魯卡因，二乙醇胺，普魯卡因，n-芐基苯乙基胺，二乙胺，二環(huán)己基胺，哌嗪，三(羥甲基)氨基甲烷，氫氧化四甲基銨，等等。
假四肽，假二肽或二肽的金屬鹽可以通過(guò)使所選定金屬的氫化物，氫氧化物，碳酸鹽或類似的反應(yīng)活性化合物在含水溶劑或有機(jī)溶劑中與假四肽，假二肽或二肽的游離酸形式接觸而獲得。所用的含水溶劑可以是水或者是水與有機(jī)溶劑，優(yōu)選醇如甲醇或乙醇，酮如丙酮，脂族醚如四氫呋喃，或酯如乙酸乙酯的混合物。這類反應(yīng)一般在室溫進(jìn)行，但是，如果需要，也可以在加熱或冷卻下進(jìn)行。
胺鹽可以通過(guò)使胺在含水溶劑或有機(jī)溶劑中與假四肽，假二肽或二肽的游離酸形式接觸而獲得。合適的含水溶劑包括水或水與醇如甲醇或乙醇，醚如四氫呋喃，腈類如乙腈，或酮如丙酮。氨基酸鹽也可以類似地制備。
假四肽，假二肽或二肽可以通過(guò)應(yīng)用或適應(yīng)已知方法，例如通過(guò)用酸，例如鹽酸處理從其堿加成鹽再生。
假四肽，假二肽或二肽的鹽也可以用于純化假四肽，假二肽或二肽，例如通過(guò)本專業(yè)已知的技術(shù)利用鹽與母體肽，副產(chǎn)物和／或原料之間的溶解度不同而實(shí)現(xiàn)。
“藥用酯”指在體內(nèi)水解的酯，并包括在人體內(nèi)易于裂解而產(chǎn)生母體氮雜環(huán)烷基烷?；偎碾幕蚱潲}的酯。合適的酯基包括，例如，從藥用脂肪羧酸，尤其是烷酸，鏈烯酸，環(huán)烷酸和烷二酸衍生的酯，其中各個(gè)烷基或鏈烯基部分最好具有不多于6個(gè)碳原子。具體的酯包括甲酸酯，乙酸酯，丙酸酯，丁酸酯，丙烯酸酯和乙基丁二酸酯。
“藥用前藥”指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適合在患者體內(nèi)醫(yī)用，并且沒(méi)有毒性，刺激性，過(guò)敏反應(yīng)，等等的肽，并且對(duì)于其用途有效，包括本發(fā)明肽的藥用酯，以及可能的話，兩性離子形式。術(shù)語(yǔ)“前藥”指在體內(nèi)例如通過(guò)在血液中水解迅速轉(zhuǎn)化產(chǎn)生母體肽的肽。根據(jù)本發(fā)明的藥用前藥在T．Higuchi and V．Stella，Prodrug as NovelDelivery Systems，Vol．14 of the A．C．S．Symposium Series，andin Edward B．Roche，ed．，Bioreversible Carriers in Drugs Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中描述，兩篇文獻(xiàn)都引作本文參考。
假四肽，假二肽或二肽除了在肽骨架中的手性中心之外，可以含有不對(duì)稱中心。這些不對(duì)稱中心可以獨(dú)立地為R或S構(gòu)型。對(duì)本專業(yè)技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是，某些式Ⅰ的肽可以存在幾何異構(gòu)。幾何異構(gòu)體包括具有鏈烯基部分的順式和反式型的本發(fā)明的肽。本發(fā)明包括單個(gè)幾何異構(gòu)體和立體異構(gòu)體和其混合物的制備。
這類異構(gòu)體可以通過(guò)應(yīng)用或適應(yīng)已知方法，例如層析技術(shù)和重結(jié)晶技術(shù)，從其混合物分離出來(lái)，或者例如通過(guò)應(yīng)用或適應(yīng)本文所述的方法，從其中間體的適當(dāng)異構(gòu)體分開(kāi)制備。優(yōu)選的方案用本發(fā)明方法制備的優(yōu)選的假四肽是式Ⅱ化合物
其中P1是氮保護(hù)基；B是烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基；Q2是H或羧酸保護(hù)基P2；J是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，或烷基環(huán)烷基烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；m是3；而n是3或4。
更優(yōu)選的用本發(fā)明方法制備的假四肽是這樣的式Ⅱ化合物其中B是烷基；J是烷基，環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，或烷基環(huán)烷基烷基；m是3；n是3或4；而p是1。
還更優(yōu)選的用本發(fā)明方法制備的假四肽是式Ⅲ化合物
其中P1是氮保護(hù)基；B是烷基；Q2是H或羧酸保護(hù)基P2；J是烷基，環(huán)烷基，或環(huán)烷基烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，或烷基環(huán)烷基烷基。
最優(yōu)選的根據(jù)本發(fā)明制備的化合物是這樣的式Ⅲ化合物其中B是烷基；J是環(huán)烷基烷基；L是NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是H或烷基。
另一方面，本發(fā)明涉及其中Q2是羧酸保護(hù)基的方法。
另一方面，本發(fā)明涉及其中P1是芐氧羰基而Q2是芐基的方法。
另一方面，本發(fā)明涉及其中P1是芐氧羰基而Q2是H的方法。
另一方面，本發(fā)明涉及其中P1是芐氧羰基，Q2是芐基，而L是NR1R2的方法。
另一方面，本發(fā)明涉及其中P1是芐氧羰基，Q2是H，而L是NR1R2的方法。
另一方面，本發(fā)明涉及其中氮雜雜環(huán)基假二肽的鹽與羧酸取代的二肽的鹽偶聯(lián)的方法。
另一方面，本發(fā)明涉及其中氮雜雜環(huán)基假二肽的堿加成鹽與羧酸二肽的酸加成鹽偶聯(lián)的方法。
另一方面，本發(fā)明涉及其中氮雜雜環(huán)基假二肽的二環(huán)己基胺鹽與羧酸二肽的三氟乙酸鹽偶聯(lián)的方法。
另一方面，本發(fā)明涉及如下方法，該方法包括(a)下式的氮雜雜環(huán)基假二肽
或其堿加成鹽，其中P1是氮保護(hù)基而B(niǎo)是烷基，與下式的羧酸取代的二肽或其酸加成鹽偶聯(lián)，
其中Q2是H或羧酸保護(hù)基；J是烷基，環(huán)烷基，或環(huán)烷基烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基或芳烷基，制備下式的假四肽
(b)任選地地除去氮保護(hù)基或羧酸保護(hù)基，和(c)任選地將假四肽轉(zhuǎn)化為其鹽或前藥。
上述方法的另一方面，P1是芐氧羰基而Q2是芐基。
上述方法的另一方面，P1是芐氧羰基而Q2是H。
上述方法的另一方面，P1是芐氧羰基，Q2是芐基；B是乙基；J是環(huán)己基甲基；而L是NH2。
上述方法的另一方面，P1是芐氧羰基，Q2是H；B是乙基；J是環(huán)己基甲基；而L是NH2。
另一方面，本發(fā)明涉及制備下式的環(huán)己基甲基取代的二肽的方法
其中Q2是H或羧酸保護(hù)基，Q3是H或氮保護(hù)基，該方法包括(a)還原下式的苯甲基取代的肽
和(b)任選地地脫除氮保護(hù)基或羧酸保護(hù)基。
上述方法的另一方面，還原是通過(guò)催化氫化進(jìn)行的。
上述方法的另一方面，催化氫化用鉑催化劑進(jìn)行。
上述方法的另一方面，鉑催化劑是載于氧化鋁上的氧化鉑或鉑。
另一方面，本發(fā)明涉及制備下式酰氨二肽的方法
其中Q2是H或堿加成鹽，或羧酸保護(hù)基，Q3是H或氮保護(hù)基，該方法包括使下式的肽酯酰胺化
其中R3是低級(jí)烷基。
上述方法的另一方面，酰胺化用醇中的氨進(jìn)行。
上述方法的另一方面，醇是低級(jí)醇。
上述方法的另一方面，酰胺化用在低級(jí)醇-甘醇溶劑混合物中的氨進(jìn)行。
上述方法的另一方面，低級(jí)醇-甘醇溶劑混合物包括甲醇和乙二醇。
另一方面，本發(fā)明涉及制備下式保護(hù)的天冬甜素化合物的方法
其中Q2是H或羧酸保護(hù)基；Q3是氮保護(hù)基，R3是低級(jí)烷基；該方法包括將N-保護(hù)基引入下式的天冬甜素化合物
上述方法的另一方面，Q3是芐氧羰基或叔丁氧羰基。上述方法的另一方面，Q2是H。另一方面，本發(fā)明涉及制備下式酰氨基二肽的方法
其中Q3是氮保護(hù)基而Q2是H，該方法包括(a)將堿和N-保護(hù)試劑加入天冬甜素在溶劑中的溶液中，形成下式化合物的溶液
其中Q2是H或堿加成鹽，和(b)將氨加入步驟(a)產(chǎn)生的溶液中。
上述方法的另一方面，Q3是叔丁氧羰基或芐氧羰基。
上述方法的另一方面，Q3是叔丁氧羰基。
上述方法的另一方面，溶劑是醇。
上述方法的另一方面，醇是低級(jí)醇或低級(jí)醇-甘醇混合物。
上述方法的另一方面，醇是甲醇或甲醇-乙二醇混合物。
另一方面，本發(fā)明涉及制備下式環(huán)己基甲基取代的二肽或其酸加成鹽的方法
該方法包括(a)制備催化劑和下式苯甲基取代的二肽在溶劑中的混合物，
其中Q3是叔丁氧羰基，(b)用氫處理混合物，(c)從混合物中除去催化劑，和(d)將氣體HCl通入混合物中。
上述方法的另一方面，溶劑是乙酸。
另一方面，本發(fā)明涉及制備下式氮雜雜環(huán)基取代的酸化合物的方法
其中R4是H或低級(jí)烷基，而P1是氮保護(hù)基，該方法包括(a)使下式的2-吡啶基乙基-二-(低級(jí)烷基)丙二酸酯脫羧基
其中R5是低級(jí)烷基，制備下式的吡啶基酸
(b)用氫在催化劑存在下氫化吡啶基酸，制備下式的哌啶酸
(c)任選地地除去催化劑；(d)使哌啶酸N-保護(hù)，制備下式N-保護(hù)的哌啶酸
(e)使氮保護(hù)的哌啶酸與下式N-乙基甘氨酸化合物偶聯(lián)，
制備氮雜雜環(huán)基取代的酸化合物；并(f)任選地使其中R4是低級(jí)烷基的氮雜雜環(huán)基取代的化合物脫酯化。
上述方法的另一方面，P1是芐氧羰基，R4是H。
上述方法的另一方面，脫羧基通過(guò)將2-吡啶乙基-二-(低級(jí)烷基)丙二酸酯在酸水溶液中加熱而進(jìn)行。
上述方法的另一方面，酸水溶液是鹽酸水溶液。
上述方法的另一方面，氫化在酸水溶液中進(jìn)行。
上述方法的另一方面，酸水溶液是鹽酸水溶液。
上述方法的另一方面，N-保護(hù)在堿水溶液中進(jìn)行。
上述方法的另一方面，P1是芐氧羰基。
上述方法的另一方面(a)2-吡啶乙基-二-(低級(jí)烷基)丙二酸酯在酸水溶液中的溶液被加熱，制備吡啶基酸在酸水溶液中的溶液；(b)將催化劑加入吡啶基酸的溶液中，混合物用氫處理，形成催化劑和哌啶酸的混合物；(c)從混合物中分出催化劑，制備哌啶酸的水溶液；和(d)將堿和N-保護(hù)試劑加入水溶液中制備N-保護(hù)的哌啶酸。
上述方法的另一方面，酸水溶液是鹽酸水溶液。
上述方法的另一方面，R4是H。
上述方法的另一方面，P1是芐氧羰基。
另一方面，本發(fā)明涉及制備下式假四肽或其鹽或前藥的方法
其中m是3；n是2-6；B是烷基；p是1或2；J是環(huán)己基甲基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，該方法包括(a)還原下式化合物
其中
是吡啶基或
其中m是3，P1是H或氮保護(hù)基；Q2是H或羧酸保護(hù)基；J是苯甲基；(b)任選地地脫除氮保護(hù)基或羧酸保護(hù)基；和(c)任選地地將假四肽轉(zhuǎn)化為鹽或前藥。
上述方法的另一方面，還原通過(guò)催化氫化進(jìn)行。
上述方法的另一方面，
是
其中m是3，P1是氮保護(hù)基；n是3；p是1；Q2是羧酸保護(hù)基。
上述方法的另一方面，P1是氫化不穩(wěn)定的氮保護(hù)基；Q2是氫化不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基。
上述方法的另一方面，催化還原同時(shí)還原并脫除P1和Q2。上述方法的另一方面，
是吡啶基，Q2是羧酸保護(hù)基。
上述方法的另一方面，Q2是氫化不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基。
上述方法的另一方面，催化還原同時(shí)還原并脫除Q2。
另一方面，本發(fā)明涉及下式的假四肽或其鹽或前藥
其中
是吡啶基或
其中m是3；P1是H或氮保護(hù)基；n是2-6；B是烷基；p是1或2；Q2是H或羧酸保護(hù)基；J是苯甲基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基。
另一方面，本發(fā)明涉及如上定義的假四肽，其中
是
其中m是3，P1是氮保護(hù)基；n是3；p是1；Q2是羧酸保護(hù)基。
另一方面，本發(fā)明涉及如上定義的假四肽，其中P1是氫化不穩(wěn)定的氮保護(hù)基，Q2是氫化不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基。
另一方面，本發(fā)明涉及如上定義的假四肽，或其鹽，
其中P1是H或氮保護(hù)基；B是烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基或烷基芳烷基；R4是H或低級(jí)烷基。
另一方面，本發(fā)明涉及如上定義的假四肽，其中P1是氮保護(hù)基；B是烷基且R4是H。
另一方面，本發(fā)明涉及如上定義的假四肽，P1是芐氧羰基而B(niǎo)是乙基。
本發(fā)明通過(guò)下列圖解和證明性實(shí)施例舉例說(shuō)明，這些圖解和實(shí)施例僅用于舉例說(shuō)明，而不限制本發(fā)明的范圍。
下面所用的如下縮寫將被理解為具有如下意義BOC(叔丁氧羰基)，CBZ或Z(芐氧羰基)，Gly(甘氨酸)，Asp(天冬氨酸)，Obzl(芐氧基)，TFA(三氟乙酸)，Cha(β-環(huán)己基丙氨酸)，EtOAc(乙酸乙酯)，DMF(二甲基甲酰胺)，DCC(二環(huán)己基碳二亞胺)，HOBT(羥基苯并三唑)，TBTU((2-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽)，DI(去離子水)，PNP(對(duì)硝基苯酚)，PFP(五氟苯酚)，DCU(二環(huán)己基脲)，NMM(N-甲基嗎啉)和MTBE(甲基叔丁基醚)。
如圖解1所示，本發(fā)明包括式Ⅳ的氮雜雜環(huán)基假四肽與式Ⅴ的羧酸取代的二肽偶聯(lián)形成式Ⅰ的假四肽。在圖解1中理解B，J，K，L，m，p，q和Q2如上定義。
在制備式Ⅰ的氮雜雜環(huán)基假四肽或其中間體時(shí)，需要或必需防止在天然或假氨基酸或肽中存在的化學(xué)活性取代基之間的交叉反應(yīng)。這些取代基可以用標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基保護(hù)，隨后根據(jù)需要通過(guò)已知方法脫除或保留，給出所需的產(chǎn)物或中間體(參見(jiàn)，例如，Green，“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”，Wiley，New York，1981)。選擇性保護(hù)或脫保護(hù)也可以是必需或需要的，使存在的取代基轉(zhuǎn)化或脫除，或使隨后的反應(yīng)給出最終產(chǎn)物。圖解1
如上所述式Ⅳ的氮雜雜環(huán)基假四肽與式Ⅴ的羧酸取代的二肽偶聯(lián)在諸如N-甲基嗎啉，二異丙基乙胺或三乙胺的有機(jī)堿存在下完成。用于偶聯(lián)反應(yīng)的合適溶劑包括二氯甲烷，甲苯，N，N-二甲基甲酰胺，乙酸乙酯，乙腈，二甲基乙酰胺，N-甲基吡咯烷酮和水，和其混合物。偶聯(lián)時(shí)間范圍為約30分鐘至約24小時(shí)，取決于被偶聯(lián)的二肽和假二肽，活化劑，溶劑和溫度。偶聯(lián)在約-10℃至約50℃，優(yōu)選地在大約室溫完成。式Ⅳ的羧酸部分優(yōu)選地用適當(dāng)?shù)幕罨瘎┗罨?。代表性的活化劑包括在N-甲基哌啶存在下的氯甲酸異丙基酯，在1-羥基苯并三唑(HOBT)存在下的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，在三乙胺存在下的雙(2-氧代-3-噁唑烷基)-膦酰氯(BOP-C1)，在二異丙基乙基胺存在下的(2-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)，在N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)存在下的N-羥基丁二酰亞胺，等等。該活化優(yōu)選地在約0℃至約10℃的溫度下，以約5分鐘至約5小時(shí)完成。
在其中?；?活化的部分穩(wěn)定的情況下，它可以在用于偶聯(lián)反應(yīng)之前被制備和分離。適于制備其中K是?；罨鶊F(tuán)的式Ⅳ的可分離的假二肽的?；罨鶊F(tuán)包括與羥基苯并三唑，N-羥基丁二酰亞胺，五氟苯酚，對(duì)硝基苯酚，不對(duì)稱酸酐，酰鹵等等的酯。
在上述其中K是OH的偶聯(lián)反應(yīng)中，式Ⅳ的氮雜雜環(huán)基假四肽可被用作游離羧酸或用作羧酸的堿加成鹽。優(yōu)選的堿加成鹽包括與諸如二環(huán)己基胺和三乙胺的胺的鹽，和與諸如鈉和鉀的金屬的鹽。與二環(huán)己基胺的堿加成鹽是特別優(yōu)選的。當(dāng)堿加成鹽被應(yīng)用時(shí)，游離酸通過(guò)在偶聯(lián)之前與合適的酸反應(yīng)而就地釋放。
同樣地，二肽Ⅴ可以用作游離堿，酸加成鹽，或堿加成鹽。酸加成鹽是優(yōu)選的。合適的酸加成鹽包括鹽酸鹽，氫溴酸鹽，三氟乙酸鹽，乙酸鹽和甲苯磺酸鹽。特別優(yōu)選的酸加成鹽包括鹽酸鹽和三氟乙酸鹽。
使用酸和堿加成鹽是特別有利的，因?yàn)檫@使得可以通過(guò)酸-堿萃取技術(shù)以及鹽的重結(jié)晶純化結(jié)構(gòu)單元氮雜雜環(huán)基假二肽和羧酸取代的二肽Ⅳ和Ⅴ，從而不需要通過(guò)，例如，層析純化，并使中間體可以以水溶液使用，從而使得分立的中間體不需要分離。
在偶聯(lián)反應(yīng)特別優(yōu)選的方面，Q2是H。出人意料地發(fā)現(xiàn)，完全不保護(hù)側(cè)鏈羧酸部分的偶聯(lián)過(guò)程對(duì)于工藝具有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)。步驟總數(shù)減少了，因?yàn)橄吮Ｗo(hù)和脫保護(hù)反應(yīng)，而且，未保護(hù)的酸使二肽Ⅴ和偶聯(lián)產(chǎn)物Ⅰ可以通過(guò)如上所述的酸-堿萃取技術(shù)或堿加成鹽的重結(jié)晶而分離和純化。
其中環(huán)A不飽和的式Ⅰ的假四肽可以通過(guò)環(huán)雙鍵的選擇性還原，例如通過(guò)應(yīng)氧化鉑催化氫化而轉(zhuǎn)化為飽和的衍生物。在假四肽Ⅰ中存在的任何氮保護(hù)基P1和羧酸保護(hù)基P2也可以如下所述除去。
式Ⅱ化合物優(yōu)選地如圖解2所示制備。在圖解2中，m，n，B，K，J和L具有如上定義的值；P1是酸不穩(wěn)定的N-保護(hù)基如叔丁氧羰基或氫化不穩(wěn)定的N-保護(hù)基如芐氧羰基；而Q2是H，酸不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基如叔丁基，堿不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基如甲基或乙基，氫化不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基如芐基或容易被金屬如Zn或Pd(O)裂解的羧酸保護(hù)基，例如苯甲酰甲基。圖解2
根據(jù)上述圖解2，假二肽Ⅵ與二肽Ⅴ如圖解1所述偶聯(lián)。偶聯(lián)產(chǎn)物Ⅱ通過(guò)在有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑的混合物，優(yōu)選乙酸乙酯-庚烷中重結(jié)晶，或通過(guò)沉淀堿加成鹽而純化。優(yōu)選的堿加成鹽是二環(huán)己基胺鹽。鹽形成典型地在約室溫至約75℃的溫度進(jìn)行。對(duì)于鹽形成合適的溶劑包括醇類，醚類，酯類和極性非質(zhì)子性溶劑，與或不與水混合。對(duì)于鹽形成優(yōu)選的溶劑體系是乙腈-水。
Ⅵ和Ⅴ偶聯(lián)制備Ⅱ之后，氮保護(hù)基P1，和如果存在，羧酸保護(hù)基P2隨后被脫除，或單步操作生產(chǎn)四肽或假肽Ⅶ。酸不穩(wěn)定的保護(hù)基優(yōu)選地應(yīng)三氟乙酸脫除。氫化不穩(wěn)定的保護(hù)基優(yōu)選地通過(guò)在Pd／C上氫化而脫除。金屬不穩(wěn)定的保護(hù)基通過(guò)用Zn或Pd(O)處理而脫除。用于氫化反應(yīng)的溶劑優(yōu)選地是低級(jí)醇如甲醇，乙醇或丙醇，或醇-水混合物如乙醇-水或丙醇-水。假四肽Ⅶ通過(guò)用低級(jí)醇或低級(jí)醇-水混合物，優(yōu)選甲醇或乙醇或甲醇和水或乙醇和水的混合物重結(jié)晶而純化。
式Ⅲ的假四肽根據(jù)本發(fā)明方法的制備概括在圖解3中。在圖解3中，P1是氫化不穩(wěn)定的N-保護(hù)基；Q2是H或氫化不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基；B是烷基；J是烷基，環(huán)烷基，或環(huán)烷基烷基；而L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，或烷基環(huán)烷基烷基。圖解3
根據(jù)上面的圖解3，假二肽Ⅷ被活化并如上述圖解1中與二肽Ⅸ偶聯(lián)。優(yōu)選的活化劑包括在二異丙基乙基胺存在下的(2-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)和在N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)存在下的N-羥基丁二酰亞胺?；罨瘍?yōu)選地在約0℃至約10℃進(jìn)行約5分鐘至約5小時(shí)完成。
在上面圖解3中所述的偶聯(lián)反應(yīng)中，假二肽Ⅷ優(yōu)選地用作堿加成鹽。優(yōu)選的堿加成鹽包括與胺如二環(huán)己基胺和三乙胺的鹽，和與金屬如鈉和鉀的鹽。與二環(huán)己基胺的堿加成鹽是特別優(yōu)選的。
二肽Ⅸ優(yōu)選地用作酸加成鹽。合適的酸加成鹽包括鹽酸鹽，氫溴酸鹽，三氟乙酸鹽，乙酸鹽和甲苯磺酸鹽。特別優(yōu)選的酸加成鹽是鹽酸鹽和三氟乙酸鹽。
偶聯(lián)產(chǎn)物Ⅲ通過(guò)在有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑的混合物，優(yōu)選乙酸乙酯-庚烷中重結(jié)晶，或通過(guò)沉淀堿加成鹽而純化。優(yōu)選的堿加成鹽是二環(huán)己基胺鹽。鹽形成典型地在約室溫至約75℃的溫度下進(jìn)行。對(duì)于鹽形成合適的溶劑包括與水混合或不與水混合的醇類，醚類，酯類和極性非質(zhì)子性溶劑。對(duì)于鹽形成優(yōu)選的溶劑體系是乙腈-水。
在圖解3的偶聯(lián)反應(yīng)特別優(yōu)選的方面，Q2是H。
假二肽Ⅷ和二肽Ⅸ偶聯(lián)制備Ⅲ之后，氫化不穩(wěn)定的保護(hù)基P1和Q2通過(guò)在Pd／C上氫化單步操作被脫除。用于氫化反應(yīng)的溶劑優(yōu)選地是醇如甲醇或乙醇，或醇-水混合物如乙醇-水。四肽或假肽Ⅹ通過(guò)用低級(jí)醇或低級(jí)醇-水混合物，優(yōu)選甲醇或乙醇或甲醇和水或乙醇和水的混合物重結(jié)晶而純化。
其中P1是芐氧羰基而B(niǎo)是乙基的代表性的假二肽的制備概括在圖解4中。應(yīng)理解，在圖解4中所述的合成方法容易延伸到其中P1和B分別不是芐氧羰基和乙基的式Ⅷ假二肽。圖解4
根據(jù)上述圖解4，2-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯(Ⅺ，例如，通過(guò)丙二酸二乙酯與4-乙烯基吡啶縮合而制備)通過(guò)在酸水溶液中加熱而脫羧基，給出4-(4-吡啶基)丁酸Ⅻ。然后，催化加氫還原該吡啶環(huán)給出4-(哌啶-4-基)丁酸Ⅷ。鉑催化劑如Pt／C，氧化鉑和Pt／氧化鋁是優(yōu)選的。Pt／氧化鋁是特別優(yōu)選的，因?yàn)樵摯呋瘎┛梢匀菀椎卦偕?。氫化在醇，醇水溶液或水中，在約大氣壓至約5bar的氫氣壓下，在室溫至約70℃的溫度下進(jìn)行。如果氫氣壓力增加，可以使用更低的溫度。然后，哌啶基N原子例如通過(guò)ⅩⅢ與堿水溶液和氯甲酸芐基酯或芐基-N-丁二酰亞胺基碳酸酯反應(yīng)形成ⅩⅣ而保護(hù)。ⅩⅣ與N-乙基甘氨酸或N-乙基甘氨酸乙酯偶聯(lián)，接著用醇鹽水溶液皂化該酯產(chǎn)生Ⅷ。偶聯(lián)優(yōu)選地通過(guò)轉(zhuǎn)化為酰氯而將ⅩⅣ的羧酸部分活化，接著在堿存在下加入N-乙基甘氨酸或N-乙基甘氨酸乙酯而完成。酸加成鹽，優(yōu)選N-乙基甘氨酸或N-乙基甘氨酸乙酯的三氟乙酸鹽也可以被使用。合適的堿包括胺如二異丙基乙基胺或醇鹽水溶液。
在Ⅷ特別優(yōu)選的制備中，2-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯被溶于酸水溶液，優(yōu)選鹽酸水溶液，并通過(guò)回流加熱而脫羧基。然后將如上所述的催化劑加入產(chǎn)生的4-(4-吡啶基)丁酸ⅩⅢ溶液，混合物被催化氫化給出4-(4-哌啶基)丁酸ⅩⅣ水溶液。然后濾出催化劑，ⅩⅣ的酸性溶液用醇鹽水溶液調(diào)成堿性，并如上所述引入芐氧羰基保護(hù)基。然后將1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸萃取到有機(jī)溶劑中，并與N-乙基甘氨酸如上所述縮合，給出Ⅷ。
上述方法是特別有用的，因?yàn)樗苊饬酥虚g體的分離，僅包括單步純化步驟。各個(gè)中間體以水溶液或有機(jī)溶液推進(jìn)，從而降低了成本并增加了生產(chǎn)效率。
其中Q2是H，J是環(huán)己基甲基，L是NH2的式Ⅸ二肽的制備概括在圖解5中。圖解5中所述的方法的關(guān)鍵特征包括此前未披露的天冬甜素用酸不穩(wěn)定或氫化不穩(wěn)定保護(hù)基Q3保護(hù)，接著用氨溫和地酰胺化，該過(guò)程保留立體化學(xué)。當(dāng)反應(yīng)在甲醇-乙二醇溶劑混合物中進(jìn)行時(shí)，酰胺化反應(yīng)出人意料地被加速。圖解5
根據(jù)上述圖解5，天冬甜素用酸不穩(wěn)定N-保護(hù)基，優(yōu)選叔丁氧羰基，或氫化不穩(wěn)定保護(hù)基，優(yōu)選芐氧羰基保護(hù)。叔丁氧羰基保護(hù)基通過(guò)天冬甜素在胺，優(yōu)選三乙胺，醇鹽，優(yōu)選氫氧化鋰，或碳酸鹽存在下與二叔丁基重碳酸酯反應(yīng)而引入。保護(hù)優(yōu)選地在約室溫至約50℃的溫度下，在低級(jí)醇溶劑如甲醇或低級(jí)醇-甘醇溶劑混合物如甲醇-乙二醇中進(jìn)行。
被保護(hù)的天冬甜素通過(guò)用在醇中的氨氣處理被保護(hù)的天冬甜素溶液而酰胺化，給出ⅩⅥ。適合于酰胺化的醇包括低級(jí)醇，甘醇，或其混合物。優(yōu)選的醇是甲醇，乙二醇和甲醇-乙二醇混合物。酰胺化優(yōu)選地在室溫至約65℃的溫度下進(jìn)行約6小時(shí)至約2天。被保護(hù)的天冬甜素可以在酰胺化之前分離和純化，或優(yōu)選地通過(guò)將氨氣通入保護(hù)步驟的反應(yīng)混合物而酰胺化。
然后通過(guò)將ⅩⅥ的苯環(huán)催化氫化給出ⅩⅦ。鉑催化劑如氧化鉑(Ⅳ)和Pt／氧化鋁是優(yōu)選的。Pt／氧化鋁是特別優(yōu)選的，因?yàn)樵摯呋瘎┛梢匀菀椎卦偕?。氫化在低?jí)醇，優(yōu)選丁醇，或C1-C10飽和有機(jī)酸，優(yōu)選乙酸中進(jìn)行。氫化在約2至約5bar的氫氣壓下，在約40℃至約80℃的溫度下完成。如果氫氣壓力增加，可以使用更低的溫度。
當(dāng)Q3是氫化不穩(wěn)定保護(hù)基時(shí)，脫保護(hù)給出Ⅸ同時(shí)還原上述苯環(huán)。當(dāng)Q3是酸不穩(wěn)定保護(hù)基如叔丁氧羰基時(shí)，脫保護(hù)優(yōu)選地通過(guò)用氣體氯化氫處理ⅩⅦ的溶液而完成。在特別優(yōu)選的方面，酸不穩(wěn)定保護(hù)基通過(guò)將氣體氯化氫引入氫化步驟的反應(yīng)混合物而脫除。
本專業(yè)技術(shù)人員很容易理解，本發(fā)明與本發(fā)明的目的非常適應(yīng)，并達(dá)到了所述的以及本文固有的目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)。本文所述的化合物，組合物和方法以代表性的優(yōu)選實(shí)施方案描述，或者是例舉性的，不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1制備N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺方法A步驟1N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯在機(jī)械攪拌下，0-5℃，往25．9g(66．4mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸在70ml二甲基甲酰胺的溶液中加入20．9g(65mmol)2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽，接著滴加17．6g(130mmol)二異丙基乙基胺。攪拌下，在0-5℃，將產(chǎn)生的均勻溶液倒入31．8g(65mmol)(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯三氟乙酸鹽在30ml二甲基甲酰胺中的混合物中。加入二異丙基乙基胺得到中性至微堿性pH。將產(chǎn)生的混合物從冷浴上移走，并在23℃攪拌過(guò)夜?；旌衔镉盟♂尣⒂?批乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用0．5N檸檬酸水溶液(3X)，鹽水，飽和碳酸氫鈉水溶液(3X)和鹽水(2X)洗滌，硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮給出油狀物，放置固化為淺褐色固體(50．97g，純度90．9％)。將36g固體用乙酸乙酯／庚烷重結(jié)晶，給出標(biāo)題化合物(24g，分析純度95％)。MS(FAB)m／z 748，(M+Na)+，771。步驟2N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺將步驟1制備的N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯溶于甲醇，加入10％Pd／C?；旌衔镌跉錃夥罩杏?0psi振動(dòng)18小時(shí)。將混合物濾過(guò)硅藻土墊，濾液真空蒸發(fā)給出N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺。Ms(FAB)m／z 524(M+H)+．NMR(300 MHz，D2O)δ8．4(1H，d)．8．1(1H，d)，4．2(2H，q)，4．1(1H，s)，3．9(4H，q)，3．4(2H，q)．3．3(4H，d)，2．8-3．0(6H，m)，2．4．(2H，t)，2．2(1H，m)．1．8(4H，d)，1．4-1．7(7H，m)．0．7-1．3(10H，m)．方法B步驟1N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺在約30℃，在2300升氣體連續(xù)反應(yīng)器中，往N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸二環(huán)己基胺(112．5kg)在甲苯(550kg)和水(570kg)的懸浮液中加入硫酸水溶液(210kg)。傾析后，將甲苯溶液用硫酸水溶液(210kg)和水(390kg)洗滌。將混合物傾析，有機(jī)相用水(390kg)洗并通過(guò)蒸餾干燥，直至水含量低于0．5％。將乙腈(220kg)和N-羥基丁二酰亞胺(27kg)加入甲苯溶液中。產(chǎn)生的懸浮液在氮?dú)庵欣鋮s至約5℃，在1小時(shí)內(nèi)加入二環(huán)己基碳二亞胺(45kg)的甲苯(35kg)溶液，反應(yīng)混合物被再攪拌5-6小時(shí)。將(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺鹽酸鹽(75kg)和三乙胺(80kg)加入混合物中，繼續(xù)攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物用水(370kg)稀釋。將產(chǎn)生的漿狀物過(guò)濾，濾餅用水(30kg)洗滌，合并的濾液被轉(zhuǎn)移到2300升不銹鋼反應(yīng)器中。將乙酸乙酯(347kg)加入溶液中。傾析有機(jī)相后，水相用鹽酸(515kg)酸化，并用乙酸乙酯(347kg)萃取。有機(jī)相用20％氯化銨(109kg)洗滌兩次并真空濃縮。加入乙腈(1560kg)和水(45kg)，溶液被加熱至約75℃，并在1小時(shí)內(nèi)加入二環(huán)己基胺(35kg)。溶液用N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺作為晶種并在75℃保持1小時(shí)。然后將懸浮液在6小時(shí)內(nèi)冷卻至20℃，過(guò)濾。濾餅用乙腈(100kg)洗滌3次，減壓下約40℃干燥給出標(biāo)題化合物(125kg)二環(huán)己基胺鹽。步驟2N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺氫化器氮?dú)獬浞智逑春?，將N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺二環(huán)己基胺(124kg)和濕Pd／C(2kg，50％，濕度5％)在絕對(duì)乙醇(440kg)和純化水(42kg)混合物中的懸浮液在約25℃，在2bar的氫氣壓下氫化1小時(shí)。氮?dú)馇逑春?，濾出催化劑，并用絕對(duì)乙醇(65kg)和純化水(5kg)的混合物洗滌。濾液被加熱至約60℃，加入丙酮(425kg)，混合物用N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺(1．1kg)作為晶種。將懸浮液冷卻至20℃，并在攪拌的過(guò)濾干燥器上過(guò)濾。濾餅用絕對(duì)乙醇(100kg)洗滌并在約40℃真空干燥，給出標(biāo)題化合物(61kg)白色晶狀固體。方法C步驟1N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯在1L燒瓶中，氮?dú)庵兄苽?5．1g(0．06mol)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸在200ml二氯甲烷中的溶液并冷卻至1℃。制備6．95ml(0．055mol)氯甲酸叔丁基酯在25ml二氯甲烷中的溶液，冷卻至1℃，并在45分鐘內(nèi)滴加，保持反應(yīng)混合物溫度為1℃。將混合物在1℃攪拌3小時(shí)。在分開(kāi)的800容器中，將20g(0．0498mol)L-α-天冬氨?；?(L)-苯丙氨酰胺苯甲基酯一(鹽酸鹽)溶于200ml二氯甲烷，混合物通過(guò)滴加15．8ml(0．11mol)三乙胺處理，給出溶液，該溶液在1℃，1小時(shí)內(nèi)被加入上述制備的酸酐中。將混合物在-2℃攪拌1小時(shí)，然后用250ml水，250ml飽和碳酸氫鈉水溶液，250ml 0．14M鹽酸水溶液洗滌，然后用250ml水洗滌。有機(jī)相用HPLC檢測(cè)未反應(yīng)原料的存在，重復(fù)洗滌循環(huán)，直至在相應(yīng)的HPLC峰上沒(méi)有進(jìn)一步還原被觀察到。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮，殘余的油狀物在真空放置以盡可能除去溶劑，給出23．5g(79．3％產(chǎn)率；96．8％分析純度)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯。步驟2N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺往76mg N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯(0．126mmol)在1ml 9∶1異丙醇／水的溶液中加入6mg Pt2O-H2O(79-84％Pt)，然后加入1．6μl 1N鹽酸水溶液。將混合物攪拌并在4bar和23℃暴露于氫氣中5小時(shí)40分分鐘，然后在60℃暴露1小時(shí)45分鐘。將混合物過(guò)濾，濾液用HPLC分析，顯示原料已100％消耗，給出N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺，和痕量N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺環(huán)己基甲基酯。方法D步驟1N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯往11．1g(28．4mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸在44ml乙酸乙酯的溶液中加入6．13g(28．7mmol)固體二環(huán)己基碳二亞胺，保持溫度在25℃至33℃之間，在此期間形成沉淀(二環(huán)己基脲)。
在分開(kāi)的容器中，將10．97g(27mmol)L-α-天冬氨?；?(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯一(鹽酸鹽)在88ml乙酸乙酯中的懸浮液用4．2ml(29．7mmol)三乙胺處理。將混合物攪拌15分鐘，同時(shí)溶解二肽和沉淀三乙胺鹽酸鹽。將該懸浮液加入上述制備的活化的N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸的懸浮液中，保持溫度在27℃至29℃之間。將混合物攪拌1小時(shí)，在此期間懸浮液變稠。再加入100ml乙酸乙酯，混合物再攪拌1小時(shí)。分批加入60ml水，給出兩個(gè)易攪拌的液相和懸浮的固體二環(huán)己基脲，將其過(guò)濾。濾液用60ml飽和碳酸氫鈉水溶液，60ml 1N鹽酸水溶液，和60ml飽和氯化鈉水溶液洗滌，然后將有機(jī)相用硫酸鈉干燥。將混合物過(guò)濾并真空濃縮，殘余物在1mm Hg加熱至50℃，給出17．6g N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯。將400mg樣品裝載在預(yù)洗過(guò)的(2N鹽酸水溶液，水，然后1∶1水／乙醇)Dowex 50WX2(10g)，并通過(guò)用50ml 70／30乙醇／水洗脫而收集，然后裝載在預(yù)洗過(guò)的(2N氫氧化鈉，水，然后1∶1乙醇／水)Amberlyst A26(10g)上，用50ml 70∶30乙醇／水洗脫。將含產(chǎn)物的洗脫液真空濃縮，接著于50℃真空(5mmHg)進(jìn)一步除去溶劑，給出350mg N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯。步驟2N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺在2ml干燥的藍(lán)寶石NMR管中放入25mg(0．03mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯，12mg PtO2-H2O(79-84％Pt)和1ml 85／12 v／v乙酸／2N鹽酸水溶液?；旌衔镌?bar的氫氣中于室溫?cái)噭?dòng)5小時(shí)。然后將混合物用微孔Milex過(guò)濾器過(guò)濾。濾液的HPLC分析顯示得到100％N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺。方法E在100ml裝有磁力攪拌器的燒瓶中放入1．12g(1．51mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯，107mg 5％Pd／C，和10ml 9∶1 2-丙醇／水。將容器在40℃用氬氣清洗，然后將混合物在劇烈攪拌下加熱至50℃，將容器用氫氣清洗幾次?；旌衔镌?bar氫氣壓力下于50℃攪拌5小時(shí)，然后冷卻至室溫，過(guò)濾，將濾液真空濃縮，給出713mg(90％產(chǎn)率)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺。將50mg的一份與50mgRh／Al2O3(Engelhard)和1ml乙酸一起放入玻璃安瓿中，混合物在4bar的氫氣壓力下于80℃攪拌17小時(shí)。HPLC分析顯示100％面積的N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺。方法F
用上面方法A制備N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺，只是用N-乙基-N-[1-氧代-3-[1-(苯基甲氧羰基)-4-哌啶基亞甲基]丙基]甘氨酸代替N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸。實(shí)施例2制備N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸步驟1N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯攪拌下，于5℃往N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸(0．858g，1．5mmol)在4g二甲基甲酰胺中的懸浮液一次加入2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(0．482g，1．5mmol)，然后將混合物在5℃攪拌3分鐘。加入二異丙基乙基胺(0．482g，1．5mmol)，將產(chǎn)生的不均勻混合物經(jīng)Pasteur移液管加入0．775g(1．5mmol)(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯一(鹽酸鹽)在4g二甲基甲酰胺中的溶液。再加入1g二甲基甲酰胺用于沖洗，再加入0．16g(0．5mmol)二異丙基乙基胺使混合物成微堿性。撤去冷浴并在室溫下攪拌該懸浮液20小時(shí)。將產(chǎn)生的橙色，不均勻混合物分配在甲基叔丁基醚和水之間。水相用甲基叔丁基醚萃取。合并的有機(jī)相依次用1N鹽酸，水，飽和碳酸氫鈉水溶液，和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，真空濃縮給出N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯(1．21g)琥珀色樹(shù)脂。MS(離子噴霧)m／z839(M+H)+。步驟2N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸將10．23g(12．2mmol)N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯在200ml 90％v／v 2-丙醇／水中的溶液倒入在500ml Parr Shaker瓶中的2g 5％Pd／C(Degussa型E101 NO／W，50％重量的水)上。將混合物在40-50 psi氫氣中搖動(dòng)過(guò)夜，然后過(guò)濾。將濾液濃縮給出N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸(6．47g)玻璃狀固體。MS(離子噴霧)m／z 525(M+H)+。實(shí)施例3制備N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸步驟1N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸聯(lián)苯甲基酯磁力攪拌下，于0-5℃往26．38g(44．4mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸在70ml二甲基甲酰胺中的溶液中加入15．7g(48．8mmol)2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽，接著滴加12．9g(99．6mmol)二異丙基乙基胺。將產(chǎn)生溶液在0-5℃倒入19g(48．4mmol)(L)-α-天冬氨?；?4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸聯(lián)苯甲基酯一(鹽酸鹽)在20ml二甲基甲酰胺中的溶液。將產(chǎn)生的混合物從冷浴上移走，并在23℃放置過(guò)夜，給出一均勻的溶液。將混合物用水稀釋，分出橙色油狀物。加入甲基叔丁基醚和水，分出有機(jī)層，水層用甲基叔丁基醚萃取兩次。合并的有機(jī)相用1N鹽酸洗滌兩次，1N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次，和鹽水洗滌兩次，硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮給出油狀物，將其在高真空放置兩天。油狀物(33．4g)通過(guò)硅膠(80％乙酸乙酯-庚烷)純化，給出N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸聯(lián)苯甲基酯(27．8g，73％)。
步驟2N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨酰基-4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸將1．2g(1．4mmol)步驟1制備的N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨?；?(L)-α-天冬氨?；?4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸聯(lián)苯甲基酯在12ml二噁烷中的溶液倒入在5ml水和3ml二噁烷中含有83mg 10％Pd／C的500ml Parr Shaker瓶中。反應(yīng)混合物在45psi氫氣壓力下于室溫(約23℃)攪拌過(guò)夜。將混合物在中等燒結(jié)的玻璃漏斗上濾過(guò)硅藻土墊，濾餅用二噁烷和水的混合物洗滌。將溶液凍干，產(chǎn)生的松散的白色固體溶于最少量的水，再次凍干給出標(biāo)題化合物松散的白色固體(710mg，93％)。MS(FAB)m／z539，561(M+Na)+。實(shí)施例4制備N-乙基甘氨酸乙酯三氟乙酸鹽步驟1N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-乙基甘氨酸乙酯在3℃，往86g(423mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-乙基甘氨酸，21．4g(465mmol)乙醇和5．17g(42．3mmol)4-二甲基氨基吡啶在600ml二氯甲烷的溶液中加入47g(46．2mmol)三乙胺，接著分批加入89．1g(46．5mmol)3-N，N-二甲基氨基丙基乙基碳二亞胺鹽酸鹽。將攪拌的混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)混合物用水，飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮給出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-乙基甘氨酸乙酯(88g)油狀物。MS(FAB)232(M+H)+。步驟2N-乙基甘氨酸乙酯三氟乙酸鹽攪拌下，于3℃將30．8g(113mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-乙基甘氨酸乙酯在50ml二氯甲烷中的溶液用200ml 1∶1(體積／體積)三氟乙酸∶二氯甲烷處理。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，同時(shí)溫?zé)嶂潦覝?。將反?yīng)混合物真空濃縮，并將高流動(dòng)性的油狀物置于高真空，給出所需的化合物(55．2g)，不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。實(shí)施例5制備N-乙基甘氨酸在5℃，氮?dú)庵校?50升玻璃連續(xù)反應(yīng)器中的乙胺(25kg)和異丙醇(100kg)的混合物中于2-3小時(shí)內(nèi)加入二羥乙酸(25kg)的丙醇(25kg)溶液，并將溶液在50mbar的氫氣中用Pd／C(50％，濕度5％，2．5kg)氫化3小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物過(guò)濾，將濾液濃縮。將異丙醇(80kg)加入漿狀物中，濾出固體，用異丙醇(7kg)洗滌兩次，在約40℃真空干燥，給出N-乙基甘氨酸(21kg)白色晶狀固體。實(shí)施例6制備N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸方法A步驟11-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸在25℃，20分鐘內(nèi)往100g(622mmol)丙二酸二乙酯中加入88g(272mmol)21％(W／W)乙醇鈉的乙醇溶液，同時(shí)保持溫度在23-25℃。將混合物攪拌10分鐘，加入26．18g(248mmol)4-乙烯基吡啶。將混合物加熱至85℃并攪拌3小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢?5小時(shí)。將混合物在44℃濃縮除去乙醇，產(chǎn)生的黃色油狀物被置于高真空除去殘余的溶劑。將油狀物分配在甲基叔丁基醚和2．2N鹽酸之間。水相用2N氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)至pH6。分開(kāi)各層，有機(jī)相用鹽水洗滌兩次。然后將有機(jī)相用2．2N鹽酸(3X)萃取。合并的含水萃取液被加熱回流過(guò)夜。將產(chǎn)生的溶液(225ml，推測(cè)為248mmol)倒入在500ml Parr Shaker瓶中的2．5g氧化鉑水合物上，在47-55psi的氫氣中搖動(dòng)過(guò)夜。將混合物過(guò)濾，濾液冷卻至10℃，并用417ml氫氧化鈉水溶液處理，同時(shí)保持反應(yīng)溫度低于10℃，使ph達(dá)到14(大約需要40分鐘)。攪拌下往混合物中加入100ml四氫呋喃，接著在30分鐘內(nèi)加入在150ml四氫呋喃中的68g(273mmol)芐基-N-丁二酰亞胺基碳酸酯，碳酸保持溫度為8℃。將混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜?；旌衔镉眉谆宥』?3X)，乙酸乙酯，甲基叔丁基醚，乙酸乙酯，和甲基叔丁基醚萃取。將水相冷卻至5℃，通過(guò)慢慢加入27ml濃鹽酸酸化至pH1．9，并用甲基叔丁基醚(3X)萃取。從萃取液得到的合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并真空濃縮給出1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸(42g，以乙烯基吡啶計(jì)算產(chǎn)率為55％)。MS(FAB)m／z 306。步驟2N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸乙酯在3℃，攪拌下，往40．7g(133．3mmol)1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸于667ml二氯甲烷中的溶液加入0．5ml二甲基甲酰胺，并滴加66．8ml 2M草酰氯的二氯甲烷溶液。在加入時(shí)，使反應(yīng)混合物的溫度保持在3-4℃，然后在該溫度攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物真空濃縮。產(chǎn)生的蜂蜜色油狀物和133．3mmol N-乙基甘氨酸乙酯三氟乙酸鹽在3℃被溶于250ml二氯甲烷。往攪拌下的混合物中加入52．84g(408mmol)二異丙基乙基胺。攪拌2小時(shí)使混合物溫?zé)嶂潦覝?，此時(shí)HPLC顯示完全反應(yīng)。將反應(yīng)混合物真空濃縮，產(chǎn)生的油狀物溶于甲基叔丁基醚。將甲基叔丁基醚溶液用水(2X)洗滌，合并的水層用甲基叔丁基醚萃取。合并的有機(jī)溶液用1N氫氧化鈉水溶液(3X)，鹽水(2X)洗滌，硫酸鎂干燥并真空濃縮，給出N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸乙酯(46．69g)，不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。MS(FAB)m／z 419(M+H)+。步驟3N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸在室溫下往46．7g(112mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸乙酯的四氫呋喃溶液中加入200ml 1N氫氧化鈉水溶液，將該不均勻的混合物劇烈攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空濃縮，殘余的含水混合物用水稀釋，并用甲基叔丁基醚(3X)萃取。水層用硫酸氫鈉酸化至pH 3，產(chǎn)生油狀物?；旌衔镉眉谆宥』?3X)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水(2X)洗滌，硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并真空濃縮。產(chǎn)生的油狀物置于高真空，給出N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸(35．5g)。MS(FAB)m／z 391(M+H)+。方法B在0℃，往2．1g(6．88mmol)1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸在36ml二氯甲烷的溶液加入3．6ml 2M草酰氯的二氯甲烷溶液和0．25ml二甲基甲酰胺。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌2．5小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空濃縮，殘余物與甲苯共沸兩次。
將2．06g(19．9mmol)N-乙基甘氨酸在18．7ml水中的水溶液冷卻至5℃，并分批加入3．78g(35mmol)固體碳酸鈉，接著加入6．88mmol(粗，假定)1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酰氯在8ml四氫呋喃中的溶液。將混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。將反應(yīng)混合物用水稀釋，并用乙酸乙酯(3X)萃取。水相用硫酸氫鉀酸化至pH 2，并用甲基叔丁基醚萃取。將有機(jī)層真空濃縮給出2．21g油狀物(MS與所需的產(chǎn)物相符)。將油狀物用制備性逆相HPLC(C-18．2’X250cm，15μ顆粒大小，300埃孔徑)，用摻有0．1％v／v三氟乙酸的含水乙腈純化，梯度為36-45％乙腈。將含有產(chǎn)物的部分合并，將溶液冷凍并凍干。產(chǎn)生的油狀物溶于乙酸乙酯，將溶液真空濃縮，產(chǎn)生的油狀物置于高真空，給出N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸(1．01g，36％產(chǎn)率)。MS(FAB)m／z 391(M+H)+。方法C步驟12-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯鹽酸鹽在氮?dú)庵校瑢?0％乙醇鈉的乙醇溶液(263．2kg)和丙二酸二乙酯(703kg)的混合物在1600升玻璃連續(xù)反應(yīng)器中于大氣壓下蒸餾至108℃。在3小時(shí)內(nèi)加入4-乙烯基吡啶(80．5kg)，將反應(yīng)混合物攪拌4小時(shí)。然后使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，在1小時(shí)內(nèi)加入水(358kg)。用33％鹽酸水溶液調(diào)節(jié)pH至4．5，水層用甲基叔丁基醚(216kg)萃取。然后加入水(357．5kg)，兩相混合物用16．5％鹽酸水溶液(29．6kg)酸化至pH1。分開(kāi)各層，2-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯鹽酸鹽的水溶液就此使用。步驟24-(4-吡啶基)丁酸鹽酸鹽將步驟1制備的2-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯鹽酸鹽的水溶液大氣壓下蒸餾至105℃，除去甲基叔丁基醚和乙醇，在50分鐘內(nèi)加入33％鹽酸水溶液(67kg)。反應(yīng)混合物在約105℃攪拌約6小時(shí)，然后濃縮得到約530kg餾出物。將混合物冷卻至60℃，并加入乙酸(591kg)。在減壓下(10mmHg)繼續(xù)蒸餾，得到在反應(yīng)混合物中6．6％的水。往漿狀物中加入丙酮(374kg)，使懸浮液在3小時(shí)內(nèi)冷卻至15℃。漿狀物在15℃攪拌1小時(shí)，濾出沉淀，用丙酮(94kg)洗滌兩次，在40℃真空干燥，給出4-(4-吡啶基)丁酸鹽酸鹽(126kg)。然后將固體溶于水(300kg)，給出30％w／w水溶液，將其用于步驟3。步驟34-(4-哌啶基)丁酸鹽酸鹽往步驟2制備的30％4-(4-吡啶基)丁酸鹽酸鹽水溶液(208．9kg)和水(145kg)中加入Pt／C(50％濕度，5％，2．52kg)。使混合物在大氣壓下氫化15小時(shí)，然后冷卻至室溫。濾出催化劑，并用水(20kg)洗滌。產(chǎn)生的4-哌啶丁酸鹽酸鹽的16％水溶液被用于步驟4。步驟41-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸或者將固體4-(4-哌啶基)丁酸鹽酸鹽(124kg)溶于水(600kg)，或者是在步驟3制備的4-(4-哌啶基)丁酸鹽酸鹽的16％水溶液(777kg)用氫氧化鈉水溶液(289kg)在冷卻至5℃的1600升玻璃連續(xù)反應(yīng)器中稀釋。在2-3小時(shí)內(nèi)加入氯甲酸芐基酯，將溶液加熱至約25℃。反應(yīng)混合物用甲基叔丁基醚(476kg)萃取。然后將水層用鹽酸(187kg)酸化，并用甲苯(450kg)萃取。有機(jī)層用水(240kg)洗滌，并通過(guò)在大氣壓下在氮?dú)庵泄卜姓麴s而干燥。產(chǎn)生的1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸的甲苯溶液用于步驟5。在溶液中產(chǎn)物的重量179kg。質(zhì)量在甲苯中約35％。步驟5N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸二環(huán)己基胺在氮?dú)庵?，往步驟4制備的1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸的甲苯溶液(253kg)中加入亞硫酰氯(42kg)。反應(yīng)混合物用甲基叔丁基醚(85kg)稀釋，并在約15℃，于630升玻璃連續(xù)反應(yīng)器中攪拌約24小時(shí)。將此溶液在4-5小時(shí)加入水(177kg)，30％氫氧化鈉水溶液(227kg)，N-乙基甘氨酸(36kg)和甲基叔丁基醚(65kg)在1600升玻璃連續(xù)反應(yīng)器中的兩相混合物中，將混合物攪拌約30分鐘。然后將兩相混合物用水(100kg)稀釋并用鹽酸酸化至ph 6．5。水相用甲基叔丁基醚(65kg)洗滌，并將乙酸乙酯(157kg)加入水相。兩相混合物用鹽酸(84kg)酸化至pH 4。分開(kāi)各層，將乙酸乙酯(385kg)加入有機(jī)相。有機(jī)相被加熱至約60℃，并加入二環(huán)己基胺(63kg)的乙酸乙酯(230kg)溶液?；旌衔镏屑尤刖ХN并冷卻至約10℃。濾出固體，用乙酸乙酯(150kg)洗滌兩次，在約40℃真空干燥，給出標(biāo)題化合物(139kg)白色晶狀固體。實(shí)施例7制備N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸步驟1N-乙基甘氨酸苯甲基酯一(鹽酸鹽)在0．5小時(shí)內(nèi)，往250ml 2M乙基胺的四氫呋喃溶液中加入在50ml四氫呋喃中的47．2g(0．2mol)溴乙酸芐基酯，同時(shí)保持溫度為22℃至26℃。然后將反應(yīng)混合物冷卻至2℃，此時(shí)乙基胺氫溴酸鹽結(jié)晶，通過(guò)過(guò)濾收集。將濾液在30℃真空濃縮，給出39．4g黃色殘余物。將殘余物在攪拌下用350ml 2-丙醇處理，給出白色固體，過(guò)濾收集。在強(qiáng)攪拌下往濾液中加入59ml 3．6N鹽酸的2-丙醇溶液，將混合物攪拌，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的白色固體。殘余物被干燥給出32．5g固體。此物質(zhì)用100ml四氫呋喃研制，然后用100ml 2-丙醇研制，干燥給出30g(0．13mol，65％產(chǎn)率，87％分析純度)N-乙基甘氨酸苯甲基酯一(鹽酸鹽)。步驟2N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸苯甲基酯在氮?dú)庵?，?2．5g(0．16mol)4-吡啶丁酸和17．53ml(0．174mol)N-甲基嗎啉在300ml二氯甲烷中的溶液冷卻至0℃，在0．5小時(shí)內(nèi)加入預(yù)冷的(0℃)18．75ml(0．152mol)新戊酰氯在100ml二氯甲烷中的溶液，同時(shí)保持反應(yīng)溫度在0℃。在分開(kāi)的500ml燒瓶中，將33．5g(0．145mol)N-乙基甘氨酸苯甲基酯一(鹽酸鹽)溶于400ml二氯甲烷，并加入35ml(0．48mol)N-甲基嗎啉。在-0．5℃，2小時(shí)內(nèi)將此混合物加入活化的吡啶丁酸溶液中。1小時(shí)后，混合物用水稀釋，攪拌，分開(kāi)各層。有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液，0．1M鹽酸水溶液和水洗滌，硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮，給出46．2g(0．135mol，93％產(chǎn)率)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸苯甲基酯黃色油狀物。步驟3N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸將46g(0．135mol)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸苯甲基酯在300ml甲醇中的溶液加入1L高壓釜中的4g 10％Pd／C(50％重量的水)中。將容器朝氮?dú)忾_(kāi)口真空抽空三次，然后朝大氣壓的氫氣開(kāi)口再抽空三次。將容器密封，并在攪拌下于25℃加熱2小時(shí)?；旌衔镌诘?dú)庵羞^(guò)濾，給出淺黃色濾液，將其在40℃真空濃縮直至開(kāi)始出現(xiàn)白色固體。加入150ml 2-丙醇，引起產(chǎn)物的迅速結(jié)晶。將混合物攪拌0．5小時(shí)，然后過(guò)濾收集產(chǎn)物。固體用240ml 2-異丙醇洗滌，然后干燥給出19g產(chǎn)物。將母液濃縮，殘余物用2-丙醇處理，形成白色固體。將混合物攪拌0．5小時(shí)，然后過(guò)濾，固體用2-丙醇洗滌，然后干燥給出5g產(chǎn)物，總產(chǎn)量24g(0．095mol；70％產(chǎn)率；99A％純度)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸。實(shí)施例8制備(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯三氟乙酸鹽步驟1N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯在18℃，磁力攪拌下，往37．5g(116mmol)BOC-β-芐基-天冬氨酸在270ml乙酸乙酯中的溶液中加入17．75g(116mmol)羥基苯并三唑水合物在25ml二甲基甲酰胺中的溶液。然后在30分鐘內(nèi)加入24．5g(119mmol)二環(huán)己基碳二亞胺在50ml乙酸乙酯中的溶液，用水浴保持反應(yīng)溫度低于25℃。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后在23℃加入33g(116mmol)3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺酯一(三氟乙酸鹽)在25ml二甲基甲酰胺中的漿狀物，接著在2分鐘內(nèi)滴加凈N-甲基嗎啉。在加入N-甲基嗎啉時(shí)使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾反應(yīng)混合物以除去環(huán)己基脲，濾液用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌兩次，鹽水洗滌1次，飽和碳酸氫鈉洗滌兩次，1∶1 0．5N檸檬酸／鹽水洗滌1次。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并用庚烷稀釋。將混合物放置過(guò)夜，過(guò)濾收集產(chǎn)生的晶體，用庚烷洗滌兩次，真空干燥給出第一茬37．5g和第二茬9．5g。兩茬都顯示可接受的HPLC純度，將其物理合并給出47g N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯(85產(chǎn)率)。MS(FAB)m／7 476(M+H)+。步驟2(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯三氟乙酸鹽在20℃，機(jī)械攪拌下，15分鐘內(nèi)，往45．4g(95．5mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯在350ml二氯甲烷的溶液中加入67g(590mmol)三氟乙酸。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物真空濃縮給出橙黃色油狀物，將其與二氯甲烷共沸，然后置于高真空進(jìn)一步使殘余溶劑變?yōu)樽钌佟⒂蜖顫饪s物用1∶1甲基叔丁基醚／庚烷研制給出白色固體?；旌衔镌诩谆宥』阎袛嚢?小時(shí)，然后放置2天。過(guò)濾收集晶體，真空干燥給出(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯一(三氟乙酸鹽)(43g，92％產(chǎn)率)。MS(FAB)m／z 376(M+H)+。實(shí)施例9制備(L)-α-天冬氨?；?4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸聯(lián)苯甲基酯三氟乙酸鹽步驟1N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯將30g(107．5mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-高苯基丙氨酸和2ml乙酸在100ml甲醇中的溶液倒入在500ml Parr shaker瓶中的3g 5％銠／氧化鋁上。在46-47 psi的氫氣中搖動(dòng)過(guò)夜，然后在氮?dú)庋谏w下在燒結(jié)的玻璃漏斗上濾過(guò)硅藻土545。將硅藻土墊用甲醇洗滌。濾液在30℃真空濃縮。產(chǎn)生的油狀物溶于甲基叔丁基醚，用水洗滌兩次，鹽水洗滌一次，硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮。將殘余物(估計(jì)107．5mmol)溶于250ml二氯甲烷，該溶液用12g(118．5mmol)三乙胺處理，接著用18．4g(107．5mmol)氯甲酸芐基酯處理，此時(shí)形成白色沉淀。在加入氯甲酸芐基酯后，一次加入1．3g(10．75mmol)4-二甲基氨基吡啶。將混合物在0℃攪拌2小時(shí)。然后將混合物真空濃縮，殘余物溶于乙酸乙酯，溶液用水洗滌兩次，1N鹽酸洗滌兩次，1N氫氧化鈉洗滌兩次，鹽水洗滌一次，硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮給出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯(33．8g)油狀物。MS(FAB)m／z 748(M+H)+。步驟24-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯一(三氟乙酸鹽)30分鐘內(nèi)，往33g(88mmol) N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯在136ml二氯甲烷的溶液中加入136ml三氟乙酸。使反應(yīng)溫度保持低于23℃。將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后真空濃縮。殘余物再溶于二氯甲烷并再濃縮。產(chǎn)生的流動(dòng)性油狀物溶于50ml甲基叔丁基醚和350ml庚烷，在溶液中加入晶種，然后在-10℃冷卻24小時(shí)。過(guò)濾收集第一批，庚烷洗滌，真空干燥(20．1g)。將母液真空濃縮，然后再溶于12ml甲基叔丁基醚和84ml庚烷。加入晶種并冷卻至-10℃，給出第二批5．2g。兩批具有相似的HPLC純度，將其物理混合給出4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯一(三氟乙酸鹽)(25．7g，75％產(chǎn)率)。MS(FAB)276(M+H)+。步驟3N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸雙苯甲基酯在18℃，機(jī)械攪拌下，將20．4g(63mmol)BOC-β-芐基-(L)-天冬氨酸在154ml乙酸乙酯中的溶液加入9．65g(63mmol)羥基苯并三唑水合物在12ml二甲基甲酰胺中的溶液中。在15分鐘內(nèi)加入13．3g(64．5mmol)二環(huán)己基碳二亞胺在25ml乙酸乙酯中的溶液，同時(shí)保持反應(yīng)混合物的溫度低于25℃。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后在18℃加入24．5g(63mmol)4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯三氟乙酸鹽在15ml二甲基甲酰胺中的糖漿，接著在5分鐘內(nèi)滴加N-甲基嗎啉。反應(yīng)混合物在加入N-甲基嗎啉時(shí)被溫?zé)嶂?5℃。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物過(guò)濾除去二環(huán)己基脲，濾液用水洗滌兩次，飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，0．5N檸檬酸水溶液洗滌兩次，鹽水洗滌一次，硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮。產(chǎn)生的蠟狀固體在50℃溶于甲基叔丁基醚，將溶液熱過(guò)濾除去少量細(xì)白不溶物，然后在50℃用庚烷稀釋。使溶液冷卻至室溫，并放入冰箱在10℃過(guò)夜。過(guò)濾收集產(chǎn)生的固體，庚烷洗滌，真空干燥給出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸雙苯甲基酯(29．8g，81％產(chǎn)率)。MS(FAB)m／z 581。步驟4(L)-α-天冬氨?；?4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸聯(lián)苯甲基酯一(三氟乙酸鹽)在20℃，機(jī)械攪拌下，30分鐘內(nèi)往28．8g(49．5mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸聯(lián)苯甲基酯在300ml二氯甲烷的溶液中加入222g(1．94mol)三氟乙酸，并將反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)。反應(yīng)混合物真空濃縮給出油狀物，將其再溶于二氯甲烷并再濃縮。殘余物用1∶1甲基叔丁基醚／庚烷研制，給出白色固體。過(guò)濾收集固體并真空干燥給出(L)-α-天冬氨?；?4-環(huán)己基-2-(L)-氨基丁酸聯(lián)苯甲基酯三氟乙酸鹽(27．4g，46mmol，92．9％產(chǎn)率)。mp 143-144℃。實(shí)施例10制備(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯鹽酸鹽步驟1N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯攪拌下，將25．6g(94．6mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸，11．2g(104mmol)芐基醇，和1．15g(9．45mmol)4-二甲基氨基吡啶在2l0ml二甲基甲酰胺和150ml二氯甲烷混合物中的乳狀溶液冷卻至5℃，并在5分鐘內(nèi)加入19．2g 3-N，N-二甲基氨基丙基乙基碳二亞胺鹽酸鹽。然后將混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。將反應(yīng)混合物過(guò)濾除去細(xì)沉淀，并將濾液真空濃縮。殘余物溶于水并用乙酸乙酯(3X)萃取。合并的有機(jī)溶液用0．5N檸檬酸水溶液洗滌，并用水洗滌兩次，硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并真空濃縮。產(chǎn)生的油狀物置于高真空使揮發(fā)物變?yōu)樽钌?，給出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯(35．3g)。MS(離子噴霧)m／z 362(M+H)+。步驟23-環(huán)己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯一(三氟乙酸鹽)在17℃，攪拌下，15分鐘內(nèi)，往35．3g(94．5mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯在100ml二氯甲烷中的溶液加入100ml三氟乙酸，同時(shí)使反應(yīng)混合物的溫度升至21℃。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，然后真空濃縮。殘余物與二氯甲烷，甲苯和甲基叔丁基醚共沸。產(chǎn)生的油狀物置于高真空給出3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯三氟乙酸鹽(32．6g)。MS(離子噴霧)m／z 262(M+H)+。步驟3N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯在機(jī)械攪拌下，往27．6g(85．5mmol)BOC-β-芐基(L)-天冬氨酸在110ml乙酸乙酯的溶液中加入13．1g(85．5mmol)羥基苯并三唑水合物在21．4ml二甲基甲酰胺中的溶液。在15分鐘內(nèi)加入18．15g(88mmol)二環(huán)己基碳二亞胺在80ml乙酸乙酯中的溶液，同時(shí)保持反應(yīng)混合物的溫度低于25℃。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，在20℃加入32g(85．5mmol)3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯三氟乙酸鹽在120ml乙酸乙酯中的溶液，接著在5分鐘內(nèi)滴加14．6g N-甲基嗎啉(最終pH 4-5)。在加入N-甲基嗎啉時(shí)使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?5℃。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾反應(yīng)混合物除去二環(huán)己基脲，濾液用水洗滌兩次，用0．5N檸檬酸水溶液洗滌一次，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，硫酸鎂干燥，過(guò)濾并真空濃縮。產(chǎn)生的油狀物溶于甲基叔丁基醚，將溶液過(guò)濾除去少量細(xì)白色不溶物。濾液真空濃縮，產(chǎn)生的油狀物置于高真空，給出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯(32．9g)。MS(離子噴霧)m／z566(M+H)-，584(M+Na)+。步驟4(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯一(鹽酸鹽)在0℃，磁力攪拌下，將鹽酸通入17g(30mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯在60g乙酸乙酯中的溶液大約5分鐘。在此期間溶液溫度從5℃升至20℃，然后開(kāi)始冷卻回去。移走冰浴，溶液在室溫下攪拌90分鐘。通過(guò)將氮?dú)馔ㄈ胝麄€(gè)溶液驅(qū)除過(guò)量的HCl，混合物固化。加入乙酸乙酯(100g)促進(jìn)攪拌(觸變)，再將氮?dú)馔ㄈ牖旌衔?分鐘。在布氏漏斗上過(guò)濾分離固體物質(zhì)。濾餅用乙酸乙酯清洗，真空(20mbar)干燥過(guò)夜除去N2，給出(L)-α-天冬氨酰基-3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸聯(lián)苯甲基酯一鹽酸鹽(10．7g)白色固體。MS(離子噴霧)m／z 467(M+H)+。實(shí)施例11制備N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-苯基-(L)-丙氨酸酰胺方法A在38℃，機(jī)械攪拌下，往乙二醇(140g)和甲醇(35g)的混合物中加入重碳酸二叔丁基酯(45g)和天冬甜素(5g)。然后通過(guò)注射器以0．2ml／min的速度加入三乙胺(17．5g)。然后在12分鐘的間隔內(nèi)分9批加入天冬甜素(5g)。反應(yīng)溫度保持在約38℃30分鐘。反應(yīng)混合物在真空脫氣，直至沒(méi)有氣體選出被觀察到(大約20分鐘)。然后在混合物的表面下經(jīng)浸入管在45分鐘內(nèi)加入氨(19g)，反應(yīng)混合物在約60℃加熱過(guò)夜。反應(yīng)混合物用水(280g)稀釋，并將反應(yīng)溫度調(diào)節(jié)至約45℃。加入乙酸(55g)將pH調(diào)節(jié)至約5．9。混合物被冷卻至40℃，此時(shí)開(kāi)始形成固體。將混合物在2小時(shí)冷卻至20℃，并加入乙酸(250g)將pH調(diào)節(jié)至約為5，并將混合物攪拌0．5小時(shí)。將固體過(guò)濾，用水(3X)洗滌，在50℃真空干燥，給出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?3-苯基-(L)-丙氨酸酰胺(53g)白色晶狀固體。方法B將天冬甜素(25kg)和重碳酸二叔丁基酯在甲醇(250kg)中的混合物在400升玻璃連續(xù)反應(yīng)器中加熱至約30℃，并在30分鐘內(nèi)加入氫氧化鋰(3．6kg)。將懸浮液攪拌約4小時(shí)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入氨氣(39kg)。漿狀物攪拌2天，然后真空濃縮消除氨和甲醇。將水(170kg)和乙酸(8kg)加入產(chǎn)生的懸浮液中，濾出沉淀，濾餅用水(25kg)洗滌兩次，在約40℃真空干燥，給出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?3-苯基-(L)-丙氨酸酰胺(29kg)白色晶狀固體。實(shí)施例12制備(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺一(鹽酸鹽)將N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-苯基-(L)-丙氨酸酰胺(129kg)和氧化鉑(Ⅳ)(5kg)或Pt／氧化鋁(濕50％，5％，12kg)在混合物在1600升玻璃連續(xù)反應(yīng)器中，于乙酸(700kg)中在約60℃和4bar的氫氣中氫化3-5小時(shí)。濾出催化劑并用乙酸(20kg)洗滌。在氮?dú)庵校?-2小時(shí)內(nèi)，將氯化氫氣體(7．8kg)加入400升玻璃連續(xù)反應(yīng)器內(nèi)的215kg乙酸溶液中。將懸浮液攪拌1小時(shí)并過(guò)濾。濾餅用乙酸(20kg)洗滌兩次，丙酮(20kg)洗滌兩次，并在約40℃真空干燥給出(L)-α-天冬氨?；?3-環(huán)己基-(L)-丙氨酸酰胺一(鹽酸鹽)(30kg)白色晶狀固體。實(shí)施例13制備(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯一(鹽酸鹽)步驟1N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯基丙氨酸酰胺甲基酯一鈉鹽在6L燒瓶?jī)?nèi)裝入294．4g(0．68mol)天冬甜素，2000ml乙醇，2000ml水，和192．96g(0．88mol)重碳酸二叔丁基酯，混合物被冷卻至0℃。在15分鐘內(nèi)加入氫氧化鈉水溶液(10N，68．6ml)，同時(shí)保持溫度在0℃和4℃之間。停止冷卻，使混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?天。將該清亮的溶液真空濃縮給出油狀物，將其溶于500ml乙酸乙酯并再濃縮，給出297g油狀物。在48℃將其溶于1L乙酸乙酯，給出清亮的溶液。將溶液冷卻至室溫過(guò)夜。過(guò)濾收集結(jié)晶的產(chǎn)物，用400ml乙酸乙酯洗滌，在真空爐中干燥，給出165g(0．42mol，62％產(chǎn)率)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯基丙氨酸酰胺甲基酯一鈉鹽。將母液體積減少，又得到95．4g(0．24mol)固體產(chǎn)物。(總產(chǎn)率97％)步驟2N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺一鈉鹽將氨(255g，15mol)在4L燒瓶中冷凝。在另一容器中制備260g(0．659mol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯基丙氨酸酰胺甲基酯一鈉鹽在1300ml甲醇中的溶液，將其在-32℃至-5℃之間，0．5小時(shí)內(nèi)加入氨中?；旌衔镌?小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?，然后再攪?小時(shí)。在40℃真空除去甲醇，給出501g糊狀物。將其用1L乙酸乙酯處理，產(chǎn)物結(jié)晶?；旌衔镉?L乙酸乙酯稀釋并過(guò)濾。將固體在室溫下真空干燥過(guò)夜，然后在50℃真空干燥1．5小時(shí)，給出243．5g(0．645mol，98％產(chǎn)率)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺一鈉鹽。步驟3N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯在氮?dú)庵校?L圓底燒瓶中加入241g(0．635mol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯基丙氨酸酰胺一鈉鹽h2500ml二甲基甲酰胺，將混合物攪拌直至得到溶液。在23-26℃，5分鐘內(nèi)加入凈溴化芐，75．4g(0．635mol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?1．5小時(shí)，然后慢慢用2500ml水稀釋，使溫度上升至32℃。將混合物攪拌1小時(shí)，同時(shí)冷卻至室溫，此時(shí)固體結(jié)晶。過(guò)濾收集固體，用3批1L水洗滌，并在50℃干燥2天，給出232g(0．495mmol，78％產(chǎn)率)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯。步驟4(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯一(鹽酸鹽)將N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯在4N氯化氫／乙酸乙酯中的溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。然后將混合物濃縮，殘余物溶于1．1L乙酸乙酯并攪拌過(guò)夜。過(guò)濾收集產(chǎn)生的固體并溶于3L水。溶液用3500ml二氯甲烷洗滌。在55℃將水溶液部分地通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。將溶液冷卻。固體結(jié)晶出來(lái)，通過(guò)過(guò)濾收集兩批(113．6g和34．1g)，給出最終產(chǎn)量147．7g(0．364mol，79％產(chǎn)率)的(L)-α-天冬氨?；?(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯一(鹽酸鹽)。實(shí)施例14制備N-乙基-N-[1-氧代-3-[1-(苯基甲氧羰基)-4-哌啶基亞甲基]丙基]甘氨酸步驟11-苯基甲氧羰基-4-哌啶酮將40kg N-芐氧羰基丁二酰亞胺和26kg(175mol)4-哌啶酮鹽酸鹽水合物在38．8kg水和88kg四氫呋喃中的混合物在約15℃攪拌，直至完全溶解(～15分鐘)。攪拌下往混合物中加入N-甲基嗎啉(22．8kg)(放熱)，同時(shí)保持溫度在或低于20℃。將反應(yīng)混合物在約20℃攪拌約2．5小時(shí)，此時(shí)HPLC指示反應(yīng)完全。將混合物用115．2kg甲基叔丁基醚和38．8kg水稀釋，并在約20℃攪拌5分鐘。停止攪拌，使其分層，將水層(下層)分出并丟棄。有機(jī)層用129．6kg水洗滌兩次(攪拌5分鐘，分相，除去／丟棄水(下層)相)。有機(jī)層用在46．8kg水中的5．2kg氯化鈉洗滌(攪拌5分鐘，分相，除去／丟棄水(下層)層)。有機(jī)層用11．5kg硫酸鎂處理，攪拌1小時(shí)然后將混合物過(guò)濾。反應(yīng)器用8kg甲基叔丁基醚清洗(過(guò)濾，與主濾液合并總的濾液水含量0．52％)。在30℃減壓使濾液體積減少一半。真空對(duì)氮?dú)忾_(kāi)口，殘余物被冷卻至20℃(釜內(nèi)殘余的水含量0．43％)。殘余物用57．6kg甲基叔丁基醚稀釋，然后再在30℃真空蒸餾使濾液體積減少一半。將真空對(duì)氮?dú)忾_(kāi)放，混合物冷卻至20℃(釜內(nèi)殘余的水含量0．25％)。將此操作再重復(fù)5次。最終的釜內(nèi)殘余物用28．8kg甲基叔丁基醚稀釋并混合5分鐘，然后分析水含量和1-苯基甲氧羰基-4-哌啶酮的含量(水0．05％；wt／wt分析1-苯基甲氧羰基-4-哌啶酮22．66wt％，35．36kg，155mol，88．6％產(chǎn)率)。步驟23-(1-苯基甲氧羰基-4-哌啶基亞甲基)丙酸在14℃，25分鐘內(nèi)，往82g 3-羧丙基三苯基溴化鏻在407ml 1，2-二乙氧基乙烷中的懸浮液加入220g 20wt％叔丁醇鉀的四氫呋喃溶液，同時(shí)保持反應(yīng)混合物的溫度為24-28℃。將混合物攪拌1小時(shí)，冷卻至10℃，在30分鐘內(nèi)加入52．5g 1-苯基甲氧羰基-4-哌啶酮在246ml甲基叔丁基醚中的溶液，同時(shí)保持冷卻。加完后，將混合物在12℃攪拌10分鐘，然后溫?zé)嶂?0℃，并再攪拌30分鐘。反應(yīng)混合物用410ml 1N鹽酸水溶液處理10分鐘，用328ml甲基叔丁基醚稀釋，然后分開(kāi)各相。有機(jī)相用205ml水洗滌，然后用210ml 1N氫氧化鈉水溶液洗滌。分離收集含有產(chǎn)物的氫氧化鈉層，用三批189g乙酸乙酯洗滌，用濃鹽酸酸化至pH 3．48，然后用189ml乙酸乙酯萃取。分出乙酸乙酯層，用211ml水洗滌，然后用10g硫酸鎂干燥30分鐘，過(guò)濾，真空濃縮。油狀殘余物(50．7g)在甲苯／庚烷中結(jié)晶，給出總共29．46g(51％產(chǎn)率)3-(1-苯基甲氧羰基-4-哌啶基亞甲基)丙酸。質(zhì)譜Mcolc．303，M+1obsvd304．1H NMR(δvs TMS，CDCl3)2．2，t(2H)2．25，t(2H)；2．35，m(4H)3．45．m(4H)，5．15．s(2H)5．2，m(1H)；7．33，2(5H)．13C NMR(δvs TMS．CDCl3)22．43，28．2，34．26．35．66，44．88，45．74，67．20，122．02，127．83，127．95，128．45．128．69，128．90，136．17，136．72，155．34，178．39步驟3N-乙基-N-[1-氧代-3-[1-(苯基甲氧羰基)-4-哌啶基亞甲基]丙基]甘氨酸用實(shí)施例6的方法制備N-乙基-N-[1-氧代-3-[1-(苯基甲氧羰基)-4-哌啶基亞甲基]丙基]甘氨酸，只是用3-(1-苯基甲氧羰基-4-哌啶基亞甲基)丙酸代替4-(1-苯基甲氧羰基-4-哌啶基)丁酸。
權(quán)利要求
1．制備下式假四肽化合物或其鹽或前藥的方法
其中
是任選地氮保護(hù)的氮雜雜環(huán)基；
是單鍵或雙鍵；q是1-5；B是烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；Q2是H或羧酸保護(hù)基；J是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，取代的芳基，芳烷基或取代的芳烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；和p是1或2，該方法包括(a)下式的氮雜雜環(huán)基假四肽
或其鹽，其中K是OH或?；罨鶊F(tuán)，與下式的羧酸取代的二肽或其鹽偶聯(lián)，
(b)任選地地除去氮保護(hù)基或羧酸保護(hù)基，和(c)任選地將假四肽轉(zhuǎn)化為鹽或前藥。
2．權(quán)利要求1的方法，其中
其中m是1至5；n是2-6；和P1是但保護(hù)基。
3．權(quán)利要求2的方法，其中Q2是羧酸保護(hù)基。
4．權(quán)利要求2的方法，其中B是烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，或烷基環(huán)烷基烷基，J是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，或烷基環(huán)烷基烷基，m是3，而n是3或4。
5．權(quán)利要求2的方法，其中B是烷基；J是烷基，環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基；R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基或芳烷基，m是3；n是3或4；而p是1。
6．權(quán)利要求3的方法，其中P1是芐氧羰基而Q2是芐基。
7．權(quán)利要求2的方法，其中P1是芐氧羰基而Q2是H。
8．權(quán)利要求6的方法，其中L是NR1R2。
9．權(quán)利要求7的方法，其中L是NR1R2。
10．權(quán)利要求1的方法，其中氮雜雜環(huán)基假二肽與羧酸取代的二肽的鹽偶聯(lián)。
11．權(quán)利要求10的方法，其中氮雜雜環(huán)基假二肽的堿加成鹽與羧酸的二肽的酸加成鹽偶聯(lián)。
12．權(quán)利要求11的方法，其中氮雜雜環(huán)基假二肽的二環(huán)己基胺鹽與羧酸的二肽的三氟乙酸鹽偶聯(lián)。
13．權(quán)利要求1的方法，該方法包括(a)下式的氮雜雜環(huán)基假二肽
或其堿加成鹽，其中P1是氮保護(hù)基；而B(niǎo)是烷基，與下式的羧酸取代的二肽或其酸加成鹽偶聯(lián)，
其中Q2是H或羧酸保護(hù)基；J是烷基，環(huán)烷基，或環(huán)烷基烷基；和L是OR1或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基或芳烷基，制備下式的假四肽
(b)任選地地除去氮保護(hù)基或羧酸保護(hù)基，和(c)任選地將假四肽轉(zhuǎn)化為其鹽或前藥。
14．權(quán)利要求13的方法，其中P1是芐氧羰基而Q2是芐基。
15．權(quán)利要求13的方法，其中P1是芐氧羰基而Q2是H。
16．權(quán)利要求14的方法，其中B是乙基；J是環(huán)己基甲基；而L是NH2。
17．權(quán)利要求15的方法，其中B是乙基；J是環(huán)己基甲基；而L是NH2。
18．制備下式的環(huán)己基甲基取代的肽的方法
其中Q2是H或羧酸保護(hù)基；和Q3是H或氮保護(hù)；該方法包括
(b)任選地地脫除氮保護(hù)基或羧酸保護(hù)基。
19．權(quán)利要求18的方法，其中還原是通過(guò)催化氫化進(jìn)行的。
20．權(quán)利要求19的方法，其中催化氫化用鉑催化劑進(jìn)行。
21．權(quán)利要求20的方法，其中鉑催化劑是氧化鉑或鉑／氧化鋁。
其中Q2是H或堿加成鹽，或羧酸保護(hù)基；Q3是H或氮保護(hù)基；該方法包括使下式的肽酯酰胺化
其中R3是低級(jí)烷基。
23．權(quán)利要求22的方法，其中酰胺化用醇中的氨進(jìn)行。
24．權(quán)利要求23的方法，其中醇是低級(jí)醇。
25．權(quán)利要求23的方法，其中酰胺化用在低級(jí)醇-甘醇溶劑混合物中的氨進(jìn)行。
26．權(quán)利要求25的方法，其中低級(jí)醇-甘醇溶劑混合物包括甲醇和乙二醇。
27．制備下式保護(hù)的天冬甜素化合物的方法
其中Q2是羧酸保護(hù)基；Q3是H或氮保護(hù)基；和R3是低級(jí)烷基；該方法包括將N-保護(hù)基引入下式的天冬甜素
28．權(quán)利要求27的方法，其中Q3是芐氧羰基或叔丁氧羰基。
29．權(quán)利要求28的方法，其中Q2是H。
30．制備下式酰氨基二肽的方法
其中Q3是氮保護(hù)基；而Q2是H，該方法包括(a)將堿和N-保護(hù)試劑加入天冬甜素在溶劑中的溶液中，形成下式化合物的溶液
其中Q2是H或堿加成鹽，和(b)將氨加入步驟(a)產(chǎn)生的溶液中。
31．權(quán)利要求30的方法，其中Q3是叔丁氧羰基或芐氧羰基。
32．權(quán)利要求31的方法，其中Q3是叔丁氧羰基。
33．權(quán)利要求32的方法，其中溶劑是醇。
34．權(quán)利要求33的方法，其中醇是低級(jí)醇或低級(jí)醇-甘醇混合物。
35．權(quán)利要求34的方法，其中醇是甲醇或甲醇-乙二醇混合物。
36．制備下式環(huán)己基甲基取代的二肽或其酸加成鹽的方法
該方法包括(a)制備催化劑和下式苯甲基取代的肽在溶劑中的混合物，
其中Q3是叔丁氧羰基，(b)用氫處理混合物，(c)從混合物中除去催化劑，和(d)將氣體HCl通入混合物中。
37．權(quán)利要求36的方法，其中溶劑是乙酸。
38．制備下式氮雜雜環(huán)基取代的酸化合物的方法
其中R4是H或低級(jí)烷基，而P1是氮保護(hù)基，該方法包括(a)使下式的2-吡啶基乙基-二-(低級(jí)烷基)丙二酸酯脫羧基
其中R5是低級(jí)烷基，制備下式的吡啶基酸
(b)用氫在催化劑存在下氫化吡啶基酸，制備下式的哌啶酸
(c)任選地地除去催化劑；(d)使哌啶酸N-保護(hù)，制備下式N-保護(hù)的哌啶酸
(e)使氮保護(hù)的哌啶酸與下式的N-乙基甘氨酸化合物偶聯(lián)，
制備氮雜雜環(huán)基取代的酸化合物；并(f)任選地使其中R4是低級(jí)烷基的氮雜雜環(huán)基取代的化合物脫酯化。
39．權(quán)利要求38的方法，其中P1是芐氧羰基，R4是H。
40．權(quán)利要求39的方法，其中脫羧基通過(guò)將2-吡啶基乙基-二-(低級(jí)烷基)丙二酸酯在酸水溶液中加熱而進(jìn)行。
41．權(quán)利要求40的方法，其中酸水溶液是鹽酸。
42．權(quán)利要求39的方法，其中氫化在酸水溶液中進(jìn)行。
43．權(quán)利要求42的方法，其中酸水溶液是鹽酸。
44．權(quán)利要求39的方法，其中N-保護(hù)在堿水溶液中進(jìn)行。
45．權(quán)利要求44的方法，其中P1是芐氧羰基。
46．權(quán)利要求39的方法，其中(a)2-吡啶乙基-二-(低級(jí)烷基)丙二酸酯在酸水溶液中的溶液被加熱，制備吡啶基酸在酸水溶液中的溶液；(b)將催化劑加入吡啶基酸的溶液中，混合物用氫處理，形成催化劑和哌啶酸的混合物；(c)從混合物中分出催化劑，制備哌啶酸的水溶液；和(d)將堿和N-保護(hù)試劑加入水溶液中制備N-保護(hù)的哌啶酸。
47．權(quán)利要求46的方法，其中酸水溶液是鹽酸。
48．權(quán)利要求47的方法，其中R4是H。
49．權(quán)利要求48的方法，其中P1是芐氧羰基。
50．制備下式假四肽或其鹽或前藥的方法
其中m是3；n是2-6；B是烷基；p是1或2；J是環(huán)己基甲基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，該方法包括(a)還原下式假四肽化合物
其中
是吡啶基或
其中m是3，P1是H或氮保護(hù)基；Q2是H或羧酸保護(hù)基；J是苯甲基；(b)任選地地脫除氮保護(hù)基或羧酸保護(hù)基；和(c)任選地地將假四肽轉(zhuǎn)化為鹽或前藥。
51．權(quán)利要求50的方法，其中還原通過(guò)催化氫化進(jìn)行。
52．權(quán)利要求51的方法，其中
是
其中m是3，P1是氮保護(hù)基；n是3；p是1；Q2是羧酸保護(hù)基。
53．權(quán)利要求52的方法，其中P1是氫化不穩(wěn)定的氮保護(hù)基；Q2是氫化不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基。
54．權(quán)利要求53的方法，其中催化還原同時(shí)還原并脫除P1和Q2。
55．權(quán)利要求51的方法，其中
是吡啶基；Q2是羧酸保護(hù)基。
56．權(quán)利要求55的方法，其中Q2是氫化不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基。
57．權(quán)利要求56的方法，其中催化還原同時(shí)還原并脫除Q2。
58．下式的假四肽或其鹽或前藥
其中
是吡啶基或
m是3，P1是H或氮保護(hù)基；n是2-6；B是烷基；P是1或2；Q2是H或羧酸保護(hù)基；J是苯甲基；而L是OR1或NR1R2獨(dú)立地是-H，烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基。
59．權(quán)利要求58的假四肽化合物，其中
其中m是3，P1是氮保護(hù)基；n是3；P是1；而Q2是羧酸保護(hù)基。
60．權(quán)利要求59的假四肽，其中P1是氫化不穩(wěn)定的氮保護(hù)基，而Q2是氫化不穩(wěn)定的羧酸保護(hù)基。
61．下式的假二肽或其鹽
其中P1是H或氮保護(hù)基；B是烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷基環(huán)烷基，烷基環(huán)烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基或烷基芳烷基；和R4是H或低級(jí)烷基。
62．權(quán)利要求61的假二肽，其中P1是氮保護(hù)基，B是烷基，而R4是H。
63．權(quán)利要求62的假二肽，其中P1是芐氧羰基，而B(niǎo)是乙基。
全文摘要
本發(fā)明涉及制備式Ⅰ的假四肽或其鹽或前藥的方法,其中(Ⅱ)是任選地氮保護(hù)的氮雜雜環(huán)基;(a)是單鍵或雙鍵;q是1－5;B是烷基,環(huán)烷基,環(huán)烷基烷基,烷基環(huán)烷基,烷基環(huán)烷基烷基,芳基,芳烷基,烷基芳基,或烷基芳烷基;Q
文檔編號(hào)C07K5/072GK1278791SQ98810983
公開(kāi)日2001年1月3日 申請(qǐng)日期1998年10月9日 優(yōu)先權(quán)日1997年10月10日
發(fā)明者J·J·門瑟爾, R·斯塔姆勒, C·多比, M·拉威尼, B·J·瓦納斯, 劉·羅伯特·承桓, P·萊昂, G·A·德尼托 申請(qǐng)人:阿溫蒂斯藥物制品公司