專利名稱：硫代鎢酸鹽類似物及其用途的制作方法
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明通常涉及四硫代鎢酸鹽衍生物，新型四硫代鎢酸鹽衍生物的制備方法，新型四硫代鎢酸鹽衍生物的藥物組合物，以及使用新型四硫代鎢酸鹽衍生物和四硫代鎢酸鹽衍生物的藥物組合物治療或預(yù)防與異常血管生成有關(guān)的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病和肥胖癥的方法。
2.發(fā)明背景大多數(shù)形式的癌癥源自于實體瘤(Shockley et al.，Ann.N.YAcad.Sci.1991，617367-382)，該實體瘤已證明其在臨床上對治療例如使用單克隆抗體和免疫毒素的治療具有抗性。用于癌癥治療的抗血管生成療法是根據(jù)實體瘤的持續(xù)生長需要血管生成(即，新的血管生成)這一認識發(fā)展起來的(Folkman，Ann.Surg.1972，175409-416；Folkman，Mol.Med.1995，1(2)120-122；Folkman，Breast Cancer Res.Treat.1995，36(2)109-118；Hanahan et al.，Cell 1996，86(3)353-364)?？寡苌莎煼ǖ男Яυ趧游锬Ｐ椭幸呀?jīng)得到證明(Millauer et al.，Cancer Res.1996，561615-1620；Borgstrom et al.，Prostrate 1998，351-10；Benjamin et al.，J..Clin.Invest.1999，103159-165；Merajver et al.，Proceedings Of Special AACR Conference OnAngiogenesis and Cancer 1998，Abstract#B-11，January22-24)。在沒有血管生成的情況下，實體瘤的內(nèi)細胞層沒有充分被滋養(yǎng)。此外，血管生成(即，異常血管生成)還與許多其它疾病有關(guān)(例如，眼新血管疾病、黃斑變性、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等)。最近，在動物模型中，抑制血管生成與脂肪組織損失和體重減輕有著直接的關(guān)系，這表明抗血管生成療法可以用于預(yù)防肥胖癥(Rupnicket al.，Proc.Natl.Acad，Sci.2002，9910730-10735)。
與此相反的是，除特殊情況外(例如，傷口修復(fù)，月經(jīng)期間的子宮內(nèi)壁增殖)，正常組織不需要生成血管。因此，需要生成血管是腫瘤細胞與正常組織之間一種顯著的差異。重要地是，腫瘤細胞與正常細胞相比在血管生成方面依賴性的差異，遠遠大于正常組織與腫瘤之間在細胞復(fù)制和細胞死亡方面的差異，這常常被利用在癌癥治療中。
血管生成需要銅，這一點已經(jīng)被大量研究所證實(Parke et al.，Am.J.Pathol.1988，137173-178；Raju et al.，Natl.Cancer lnst.1982，691183-1188；Ziche et al.，Natl.Cancer lnst.1982，69475-482；Gullino，Anticancer Res.1986，6(2)153-158)。在本領(lǐng)域中，已經(jīng)報道了通過降低體內(nèi)銅的量，從而預(yù)防動物模型中的血管生成并因此減少腫瘤生長(Brem etal.，Neurosurgery 1990，26391-396；Brem et al.，Am.J.Pathol.1990，137(5)1121-1142；Yoshida et al.，Neurosurgery 1995 37(2)287-295)。這些方法包括結(jié)合采用銅螯合劑和低銅飲食。最近，Brewer等人，在國際申請?zhí)朠CT/US99/20374已經(jīng)表明銅螯合劑(例如，四硫代鉬酸鹽)可以有效地治療需要血管生成的疾病(例如，實體瘤生長)。
除誘導(dǎo)血管生成之外，銅在腫瘤細胞生長和存活方面也具有直接的作用。在患有許多不同實體癌的患者的血漿和腫瘤組織中，存在高含量的銅(Chakravarty et al，J.Cancer Res.Clin.Oncol.1984，108312-315)。最近，已經(jīng)表明四硫代鉬酸鹽下調(diào)了NF-κB的表達并抑制了其移位至炎性乳腺癌細胞系SUM 149中的細胞核(Pan et al.，Cancer Res.2002，624854-4859)。NF-κB體系可能涉及在調(diào)節(jié)腫瘤細胞存活率過程中，并因此通過四硫代鉬酸鹽下調(diào)的其在腫瘤細胞中的表達，表示了銅的螯合在腫瘤存活方面的直接作用。
因此，在治療和/或預(yù)防血管生成以及在減少腫瘤細胞成活率中，需要全面探索新型化合物四硫代鎢酸鹽化合物即銅螯合劑的潛在作用。這樣的新型四硫代鎢酸鹽化合物可有效地治療各種與血管生成有關(guān)的疾病比如癌癥、伴隨銅代謝紊亂的肥胖癥、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥以及治療NF-κB途徑調(diào)節(jié)障礙疾病比如炎癥。
3.發(fā)明概述通過提供新型四硫代鎢酸鹽衍生物，新型四硫代鎢酸鹽衍生物的制備方法，新型四硫代鎢酸鹽衍生物的藥物組合物，使用新型四硫代鎢酸鹽衍生物治療或預(yù)防與異常血管生成有關(guān)的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病和肥胖癥，以及使用四硫代鎢酸鹽衍生物的藥物組合物治療或預(yù)防與異常血管生成有關(guān)的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙的方法，本發(fā)明滿足這些以及其它要求。
第一方面，本發(fā)明提供結(jié)構(gòu)式(I)的化合物或其溶劑化物、水合物或N-氧化物 其中R1、R2、R3、R5、R6和R7獨立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基；R4和R8獨立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基、或者當(dāng)N是芳環(huán)的一部分時則不存在；任選地，R1和R2一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起，R6和R7一起以及R6和R8一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R3和R7一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；以及Y-2是(WS4)-2、(W2S12)-2、(W2S9)-2、(W2S7)-2、(W2S8)-2、(W2S11)-2、(W2S6)-2或(W2S13)-2。
第二方面，本發(fā)明提供本發(fā)明化合物的藥物組合物。該藥物組合物通常包含一種或多種本發(fā)明化合物、其水合物或溶劑化物以及可藥用稀釋劑、載體、賦形劑和助劑。稀釋劑、載體、賦形劑和助劑的選擇將取決于所需的給藥方式以及其它因素。
第三方面，本發(fā)明提供治療或預(yù)防以異常血管生成為特征的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙的方法。所述的方法通常包括向需要這種治療或預(yù)防的患者給予治療有效量的本發(fā)明化合物和/或藥物組合物。
第四方面，本發(fā)明為需要治療或預(yù)防的患者提供治療或預(yù)防以異常血管生成、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙為特征的疾病或病癥的藥物組合物。
4.附圖簡介附

圖1說明四硫代鎢酸銨在Matrigel栓塞測定中抑制了血管生成。
5.發(fā)明的詳細說明5.1定義“化合物”是指包括在此公開的結(jié)構(gòu)式(I)的化合物以及任何在此公開的包括在該通式類之內(nèi)的具體化合物。化合物可以通過它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)和/或化學(xué)名稱進行確定。當(dāng)化學(xué)結(jié)構(gòu)和化學(xué)名稱矛盾時，用化學(xué)結(jié)構(gòu)來確定化合物?；衔锟梢院幸粋€或多個手性中心和/或雙鍵，并因此可以存在立體異構(gòu)體，例如雙鍵異構(gòu)體(即，幾何異構(gòu)體)、對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體。因此，在此所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖包括所示化合物的所有可能的對映異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，其包括立體異構(gòu)純形式(例如，幾何純的，對映異構(gòu)體純的或非對映純的)以及對映異構(gòu)體和立體異構(gòu)體的混合物。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的分離技術(shù)或手性合成技術(shù)，可將對映異構(gòu)體和立體異構(gòu)體混合物拆分成組成它們的各對映異構(gòu)體或立體異構(gòu)體?；衔镞€可以以若干互變異構(gòu)比如烯醇形式、酮形式或其混合物存在。因此，在此描述的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖包括所示化合物的所有可能的互變異構(gòu)形式。化合物還包括同位素標(biāo)記的化合物，其中一個或多個原子具有不同于通常在自然界中發(fā)現(xiàn)的原子量?？梢园ㄔ诒景l(fā)明化合物中的同位素的例子包括，但不局限于，2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O和35S?；衔锟梢砸晕慈軇┗男问胶腿軇┗男问酱嬖?，包括水合物形式和N-氧化物。通常，水合物、溶劑化物和N-氧化物形式包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。某些化合物可以以多晶或無定形的形式存在。通常，對本發(fā)明的用途來說，所有物理形式是等效的。此外，應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)舉例說明化合物的部分結(jié)構(gòu)時，括號表示該分子的部分結(jié)構(gòu)與其余部分的連結(jié)點。
“烷基”本身或作為另一取代基的一部分，是指飽和的或不飽和的、支鏈的、直鏈或環(huán)狀一價烷基，是由母體烷烴、烯烴或炔烴的單個碳原子除去一個氫原子所衍生的。典型的烷基包括，但不局限于，甲基、乙基例如乙烷基、乙烯基、乙炔基；丙基例如丙烷-1-基、丙烷-2-基、環(huán)丙烷-1-基，丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、環(huán)丙-1-烯-1-基；環(huán)丙-2-烯-1-基、丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁基例如丁烷-1-基、丁烷-2-基、2-甲基-丙烷-1-基、2-甲基-丙烷-2-基、環(huán)丁烷-1-基、丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1，3-二烯-1-基、丁-1，3-二烯-2-基、環(huán)丁-1-烯-1-基、環(huán)丁-1-烯-3-基、環(huán)丁-1，3-二烯-1-基、丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；諸如此類。
術(shù)語“烷基”具體的是指包括具有任何飽和度或飽和水平的基團，即僅具有碳-碳單鍵的基團，具有一個或多個碳-碳雙鍵的基團，具有一個或多個碳-碳三鍵的基團，以及具有碳-碳單鍵、碳-碳雙鍵和碳-碳三鍵混合的基團。當(dāng)說明具體的飽和水平時，使用“烷基(alkanyl)”、“烯基(alkenyl)”和“炔基”這樣表示。優(yōu)選地，烷基包含1-20個碳原子，更優(yōu)選包含1-10個碳原子，最優(yōu)選包含1-6個碳原子。
“烷基”本身或作為另一取代基的一部分，是指飽和的、支鏈的、直鏈或環(huán)烷基基團，是由母體烷烴的單個碳原子除去一個氫原子所衍生的。典型的烷基基團包括，但不局限于，甲烷基；乙烷基；丙烷基例如丙烷-1-基、丙烷-2-基(異丙基)、環(huán)丙烷-1-基等；丁烷基例如丁烷-1-基、丁烷-2-基(仲丁基)、2-甲基-丙烷-1-基(異丁基)、2-甲基-丙烷-2-基(叔丁基)、環(huán)丁烷-1-基等；諸如此類。
“烯基”本身或作為另一取代基的一部分，是指具有至少一個碳-碳雙鍵的不飽和的、支鏈的、直鏈或環(huán)烷基基團，是由母體烯烴的單個碳原子除去一個氫原子所衍生的。該基團可以以雙鍵的順式或反式構(gòu)型存在。典型的烯基基團包括，但不局限于，乙烯基；丙烯基例如丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、丙-2-烯-2-基、環(huán)丙-1-烯-1-基、環(huán)丙-2-烯-1-基；丁烯基例如丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1，3-二烯-1-基、丁-1，3-二烯-2-基、環(huán)丁-1-烯-1-基、環(huán)丁-1-烯-3-基、環(huán)丁-1，3-二烯-1-基等；諸如此類。
“炔基”本身或作為另一取代基的一部分，是指具有至少一個碳-碳三鍵的不飽和的、支鏈的、直鏈或環(huán)烷基基團，是由母體炔烴的單個碳原子除去一個氫原子所衍生的。典型的炔基基團包括，但不局限于，乙炔基；丙炔基例如丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁炔基例如丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；諸如此類。
“烷二基”本身或作為另一取代基團的一部分，是指飽和的或不飽和的、支鏈的、直鏈的或環(huán)狀的二價烷基團，是由母體烷烴、烯烴或炔烴的兩個不同碳原子各自除去一個氫原子或由母體烷烴、烯烴或炔烴的單個碳原子除去兩個氫原子所衍生的。兩個單價基團中心或二價基團中心的每個化合價可以與相同或不同的原子形成鍵。典型的烷二基基團包括，但不局限于甲烷二基；乙二基類例如乙烷-1，1-二基、乙烷-1，2-二基、乙烯-1，1-二基、乙烯-1，2-二基；丙二基類例如丙烷-1，1-二基、丙烷-1，2-二基、丙烷-2，2-二基、丙烷-1，3-二基、環(huán)丙烷-1，1-二基、環(huán)丙烷-1，2-二基、丙-1-烯-1，1-二基、丙-1-烯-1，2-二基、丙-2-烯-1，2-二基、丙-1-烯-1，3-二基、環(huán)丙-1-烯-1，2-二基、環(huán)丙-2-烯-1，2-二基、環(huán)丙-2-烯-1，1-二基、丙-1-炔-1，3-二基等；丁二基類例如丁烷-1，1-二基、丁烷-1，2-二基、丁烷-1，3-二基、丁烷-1，4-二基、丁烷-2，2-二基、2-甲基-丙烷-1，1-二基、2-甲基-丙烷-1，2-二基、環(huán)丁烷-1，1-二基；環(huán)丁烷-1，2-二基、環(huán)丁烷-1，3-二基、丁-1-烯-1，1-二基、丁-1-烯-1，2-二基、丁-1-烯-1，3-二基、丁-1-烯-1，4-二基、2-甲基-丙-1-烯-1，1-二基、2-亞甲烷基(methanylidene)-丙烷-1，1-二基、丁-1，3-二烯-1，1-二基、丁-1，3-二烯-1，2-二基、丁-1，3-二烯-1，3-二基、丁-1，3-二烯-1，4-二基、環(huán)丁-1-烯-1，2-二基、環(huán)丁-1-烯-1，3-二基、環(huán)丁-2-烯-1，2-二基、環(huán)丁-1，3-二烯-1，2-二基、環(huán)丁-1，3-二烯-1，3-二基、丁-1-炔-1，3-二基、丁-1-炔-1，4-二基、丁-1，3-二炔-1，4-二基等；諸如此類。當(dāng)說明具體的飽和水平時，使用術(shù)語“烷基二基”、“烯基二基”和“炔基二基”。優(yōu)選地，烷二基基團是(C1-C20)烷二基，更優(yōu)選(C1-C10)烷二基，最優(yōu)選(C1-C6)烷二基。優(yōu)選的是飽和的非環(huán)狀烷基二基基團，其中基團中心在未端碳原子上，例如，甲烷二基(亞甲基)；乙烷-1，2-二基(亞乙基)；丙烷-1，3-二基(亞丙基)；丁烴-1，4-二基(亞丁基)；諸如此類(也稱為亞烷基，在下文進行定義)。
“亞烷基(alkyleno)”本身或作為另一取代基的一個部分，是指具有兩個末端單價基團中心的直鏈烷二基基團，其由直鏈的母體烷烴、烯烴或炔烴的兩個末端碳原子各自除去一個氫原子所衍生的。典型的亞烷基基團包括，但不局限于，亞甲基；亞乙基類例如亞乙烷基、亞乙烯基、亞乙炔基；亞丙基類例如亞丙烷基、亞丙[1]烯基、亞丙[1，2]二烯基、亞丙[1]炔基等；亞丁基類例如亞丁烷基、亞丁[1]烯基、亞丁[2]烯基、亞丁[1，3]二烯基、亞丁[1]炔基、亞丁[2]炔基、亞丁[1，3]二炔基等；諸如此類。當(dāng)說明具體的飽和水平時，使用術(shù)語亞烷基、亞烯基和/或亞炔基。優(yōu)選地，亞烷基基團是(C1-C20)亞烷基，更優(yōu)選是(C1-C10)亞烷基，最優(yōu)選是(C1-C6)亞烷基。優(yōu)選的是直鏈飽和的亞烷基基團，例如亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基，諸如此類。
“?；北旧砘蜃鳛榱硪蝗〈囊粋€部分，是指基團-C(O)R30，其中R30是如在此所定義的氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、芳烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基。代表性的例子包括，但不局限于，甲?；⒁阴；?、環(huán)己基羰基、環(huán)己基甲基羰基、苯甲?；?、芐基羰基諸如此類。
“酰胺基”本身或作為另一取代基的一個部分，是指基團-NR31C(O)R32，其中R31和R32各自獨立地是如在此所定義的氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、芳烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基。代表性的例子包括，但不局限于，甲酰氨基、乙酰氨基、環(huán)己基羰基氨基、環(huán)己基甲基-羰基氨基、苯甲?；被⑵S基羰基氨基諸如此類。
“烷氧基”本身或作為另一取代基的一個部分，是指基團-OR33，其中R33表示如在此定義的烷基或環(huán)烷基基團。代表性的例子包括，但不局限于，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環(huán)己氧基等。
“烴氧羰基”本身或作為另一取代基的一個部分，是指基團-C(O)OR33其中R33如上述定義。
“芳基”本身或作為另一取代基的一部分，是指單價的芳香族烷基團，是由母體芳環(huán)體系的單個碳原子除去一個氫原子所衍生的。典型的芳基基團包括，但不局限于，來源于醋蒽烯、苊烯、acephenanthrylene、蒽、薁、苯、chrysene、六苯并苯、熒蒽、芴、并六苯、己芬、hexalene、as-indacene、s-indacene、茚滿、茚、萘、octacene、octaphene、octalene、卵苯(ovalene)、戊-2，4-二烯、并五苯、并環(huán)戊二烯、戊芬、二萘嵌苯、phenalene、菲、苉(picene)、pleiadene、芘、皮蒽、玉紅省、三亞苯、三亞萘等的基團。優(yōu)選地，芳基包含6-20個碳原子，更優(yōu)選包含6-12個碳原子。
“芳烷基”本身或作為另一取代基的一個部分，是指非環(huán)狀的烷基基團，其中氫原子中的一個被芳基基團所代替，該氫原子中的一個是與一個碳原子(典型地是末端的或sp3碳原子)相連的。典型的芳烷基基團包括，但不局限于，芐基、2-苯基乙烷-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘甲基、2-萘乙烷-1-基、2-萘乙烯-1-基、萘并芐基、2-萘并苯基乙烷-1-基諸如此類。當(dāng)舉例說明具體的烷基部分時，可以使用術(shù)語芳基烷基、芳基烯基和/或芳基炔基。優(yōu)選地，芳烷基基團是(C6-C30)芳烷基，例如芳烷基基團的烷基、烯基或炔基部分是(C1-C10)以及芳基部分是(C6-C20)，更優(yōu)選地，芳烷基基團是(C6-C20)芳烷基，例如，芳烷基基團的烷基、烯基或炔基部分是(C1-C8)以及芳基部分是(C6-C12)。
“環(huán)烷基”本身或作為另一取代基的一個部分，是指飽和的或不飽和的環(huán)烷基基團。當(dāng)說明具體的飽和水平時，可以使用術(shù)語“環(huán)烷基”或“環(huán)烯基”。典型的環(huán)烷基基團包括，但不局限于，由環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷等衍生的基團。優(yōu)選地，環(huán)烷基基團是(C3-C10)環(huán)烷基，更優(yōu)選是(C3-C7)環(huán)烷基。
“環(huán)雜烷基”本身或作為另一取代基的一個部分，是指飽和的或不飽和的環(huán)烷基基團，其中一個或多個碳原子(以及任何有關(guān)的氫原子)獨立地被相同的或不同的雜原子所代替。代替碳原子的典型雜原子包括，但不局限于，N、P、O、S、Si等。當(dāng)舉例說明具體的飽和度時，可以使用術(shù)語“環(huán)雜烷基”或“環(huán)雜烯基”。典型的環(huán)雜烷基基團包括，但不局限于，由環(huán)氧化物、azirines、硫雜丙環(huán)(thiirane)、四氫咪唑、嗎啉、哌嗪、哌啶、吡唑烷、吡咯烷、奎核堿諸如此類的基團。
“雜烷基、雜烷基、雜烯基、雜烷基、雜烷二基和雜亞烷基”本身或作為另一取代基的一個部分，分別是指烷基、烷基、烯基、炔基、烷二基和亞烷基基團，其中一個或多個碳原子(以及任何有關(guān)的氫原子)每個獨立地被相同的或不同的雜原子基團所代替?？梢园ㄔ谶@些基團中的典型雜原子基團包括，但不局限于，-O-、-S-、-O-O-、-S-S-、-O-S-、-NR35R36-、＝N-N＝、-N＝N-、-N＝N-NR37R38、-PR39、-P(O)2、-POR39、-O-P(O)2-、-SO-、-SO2-、-SnR41R42-等，其中R35、R36、R37、R38、R39、R40、R41和R42獨立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜烷基、取代雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基或取代雜芳基烷基。
“雜芳基”本身或作為另一取代基的一個部分，是指單價雜芳香族基團，其是通過從母體雜芳香族環(huán)體系的一個原子上除去一個氫所衍生的。典型的雜芳基基團包括，但不局限于，由吖啶、砷雜茚、咔唑、β-咔啉、色滿、色烯、噌啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、二氫吲哚、吲嗪、異苯并呋喃、異色烯、異吲哚、異二氫吲哚、異喹啉、異噻唑、異噁唑、萘啶、噁二唑、噁唑、萘嵌間二氮苯、菲啶、菲咯啉、吩嗪、酞嗪、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、吡唑、噠嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、吡咯嗪(pyrrolizine)、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹噁啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三唑、呫噸等衍生的基團。優(yōu)選地，所述的雜芳基基團為5-20員雜芳基，更優(yōu)選為5-10員雜芳基。優(yōu)選的雜芳基基團是由噻吩、吡咯、苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、吡啶、喹啉、咪唑、噁唑和吡嗪衍生的。
“雜芳基烷基”本身或作為另一取代基的一個部分，是指一種非環(huán)狀的烷基基團，其中與一個碳原子(典型地是末端碳原子或sp3碳原子)連接的氫原子中的一個被雜芳基基團代替。當(dāng)舉例說明具體的烷基部分時，可以使用術(shù)語雜芳基烷基、雜芳基烯基和/或雜芳基炔基。在優(yōu)選實施方案中，雜芳基烷基基團是6-30員的雜芳基烷基，例如，雜芳基烷基的烷基、烯基或炔基部分是1-10員的以及雜芳基部分是5-20員的雜芳基，更優(yōu)選是6-20員的雜芳基烷基，例如雜芳基烷基的烷基、烯基或炔基部分是1-8員的以及雜芳基部分是5-12員的雜芳基。
“母體芳環(huán)體系”本身或作為另一取代基的一個部分，是指不飽和的環(huán)狀或多環(huán)的環(huán)系，所述的環(huán)系具有一個共軛π電子體系。包括在“母體芳環(huán)體系”定義中的具體例子是稠環(huán)系，其中一個或多個環(huán)是芳香族的以及一個或多個環(huán)是飽和的或不飽和的，例如芴、茚滿、茚、phenalene等。典型的母體芳環(huán)體系包括，但不局限于，醋蒽烯、苊烯、acephenanthrylene、蒽、薁、苯、chrysene、六苯并苯、熒蒽、芴、并六苯、己芬、hexalene、as-indacene、s-indacene、茚滿、茚、萘、octacene、octaphene、octalene、卵苯、戊-2，4-二烯、并五苯、并環(huán)戊二烯、戊芬、二萘嵌苯、phenalene、菲、苉、pleiadene、芘、皮蒽、玉紅省、三亞苯、三亞萘等。
“母體雜芳環(huán)體系”本身或作為另一取代基的一個部分，是指一種母體芳環(huán)體系，其中一個或多個碳原子(以及任何有關(guān)的氫原子)獨立地被相同的或不同的雜原子代替。代替碳原子的典型的雜原子包括，但不局限于，N、P、O、S、Si等。包括在”母體雜芳環(huán)體系”定義中的具體例子是稠環(huán)系，其中一個或多個環(huán)是芳香族的以及一個或多個環(huán)是飽和的或不飽和的，例如砷雜茚、苯并二噁烷、苯并呋喃、色滿、色烯、吲哚、二氫吲哚、呫噸等。典型的母體雜芳環(huán)體系包括，但不局限于，砷雜茚、咔唑、β-咔啉、色滿、色烯、噌啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、二氫吲哚、吲嗪、異苯并呋喃、異色烯、異吲哚、異二氫吲哚、異喹啉、異噻唑、異噁唑、萘啶、噁二唑、噁唑、萘嵌間二氮苯、菲啶、菲咯啉、吩嗪、酞嗪、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、吡唑、噠嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、吡咯嗪、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹噁啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三唑、呫噸等。
“藥物組合物”是指至少一種本發(fā)明化合物以及與所述化合物一起向患者給予的可藥用媒介物。
“可藥用鹽”是指本發(fā)明化合物的一種鹽，其具有母體化合物所需的藥理學(xué)活性。這些鹽包括(1)酸加成鹽，與無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的；或與有機酸例如乙酸、丙酸、己酸、環(huán)戊烷丙酸(cyclopentanepropionic acid)、羥基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲?；?苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環(huán)[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羥萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、黏康酸等形成的；或者(2)當(dāng)母體化合物中存在酸質(zhì)子時，酸質(zhì)子被金屬離子例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子代替后形成的鹽；或者是與有機堿例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等配位的鹽。
“可藥用媒介物”是指與本發(fā)明化合物一起服用的稀釋劑、助劑、賦形劑或載體。
“患者”包括人。術(shù)語”人”和”患者”在此可互換使用。
“預(yù)防”是指減少患疾病或病癥的危險(即，在易受疾病感染的、但還沒有遭受或出現(xiàn)該疾病癥狀的患者中，將導(dǎo)致該疾病的至少一種臨床癥狀無法發(fā)展)。
“前藥”是指藥物分子的一種衍生物，其需要在體內(nèi)轉(zhuǎn)化以釋放出活性藥物。在轉(zhuǎn)化為母體藥物之前，前藥通常但不必需是藥理學(xué)惰性的。例如，含羥基的藥物可以轉(zhuǎn)化成磺酸酯、酯或碳酸酯前藥，其在體內(nèi)可以水解形成羥基化合物。例如，含氨基的藥物可以轉(zhuǎn)化成氨基甲酸酯、酰胺、烯胺、亞胺、N-膦酰基、N-磷酰基或N-亞磺酰基前藥，其在體內(nèi)可以水解形成氨基化合物。羧酸藥物可以轉(zhuǎn)化成酯(包括甲硅烷基酯和硫代酸酯)、酰胺或酰肼前藥，其在體內(nèi)水解形成羧酸化合物。官能團不同于上面所列那些的藥物的前藥是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的。
“前部分(promoiety)”是指一種保護基形式，當(dāng)將其用于掩蔽藥物分子內(nèi)的官能團時可以將藥物轉(zhuǎn)化為前藥。典型地，前部分通過鍵連接在藥物上，通過體內(nèi)酶催化方法或非酶催化方法裂解該鍵。
“保護基”是指由一些原子形成的基團，當(dāng)所述原子附著于分子中的活性官能團時，能掩蔽、降低或防止官能團的活性。保護基的例子可以在Green等人“Protective Groups in Organic Chemistry”，(Wiley，第二版1991)和Harrison等人”Compendium Of Synthetic Organic Methods”，Vols.1-8(JohnWiley and Sons，1971-1996)中找到。代表性的氨基保護基包括，但不局限于，甲?；?、乙?；?、三氟乙酰基、芐基、芐氧羰基(“CBZ”)、叔丁氧羰基(“Boc”)、三甲基甲硅烷基(“TMS”)、2-三甲基甲硅烷基-乙磺?；?“SES”)、三苯甲基和取代三苯甲基、烯丙氧羰基、9-芴甲氧羰基(“FMOC”)、硝基-藜蘆氧羰基(“NVOC”)等。代表性的羥基保護基包括，但不局限于，其中羥基被酰化或烷基化的那些例如；芐基、三苯甲基醚和烷基醚、四氫吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚和烯丙基醚。
“取代”是指一個基團中一個或多個氫原子獨立地被相同的或不同的取代基所代替。典型的取代基包括，但不局限于-M、-R60、-O-、＝O、-OR60、-SR60、-S-、＝S、-NR60R61、＝NR60、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)2O-、-S(O)2OH、-S(O)2R60、-OS(O2)O-、-OS(O)2R60、-P(O)(O-)2、-P(O)(OR60)(O-)、-OP(O)(OR60)(OR61)、-C(O)R60、-C(S)R60、-C(O)OR60、-C(O)NR60R61、-C(O)O-、-C(S)OR60、-NR62C(O)NR60R61、-NR62C(S)NR60R61、-NR62C(NR63)NR60R61和-C(NR62)NR60R61，其中M獨立地是鹵素；R60、R61、R62和R63獨立地是氫、烷基、取代烷基、烷氧基、取代烷氧基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、芳基、取代芳基、雜芳基或取代雜芳基，或任選R60和R61與其相連的氮原子一起形成環(huán)雜烷基環(huán)或取代環(huán)雜烷基環(huán)；以及R64和R65獨立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、芳基、取代芳基、雜芳基或取代雜芳基，或者任選地R64和R65與其相連的氮原子一起形成環(huán)雜烷基環(huán)或取代環(huán)雜烷基環(huán)。優(yōu)選地，取代基包括-M、-R60、＝O、-OR60、-SR60、-S-、＝S、-NR60R61、＝NR60、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)2R60、-OS(O2)O-、-OS(O)2R60、-P(O)(O-)2、-P(O)(OR60)(O-)、-OP(O)(OR60)(OR61)、-C(O)R60、-C(S)R60、-C(O)OR60、-C(O)NR60R61、-C(O)O-、-NR62C(O)NR60R61，更優(yōu)選-M、-R60、＝O、-OR60、-SR60、-NR60R61、-CF3、-CN、-NO2、-S(O)2R60、-P(O)(OR60)(O-)、-OP(O)(OR60)(OR61)、-C(O)R60、-C(O)OR60、-C(O)NR60R61、-C(O)O-，最優(yōu)選-M、-R60、＝O、-OR60、-SR60、-NR60R61、-CF3、-CN、-NO2、-S(O)2R60、-OP(O)(OR60)(OR61)、-C(O)R60、-C(O)OR60、-C(O)O-，其中R60、R61和R62如上所定義。
在一種實施方案中，任何疾病或病癥的“治療”是指改善疾病或病癥(即，阻止或降低疾病的發(fā)展或其至少一種臨床癥狀的發(fā)展)。在另一種實施方案，“治療”是指改善至少一種可能無法被患者識別的身體參數(shù)。在另一種實施方案中，“治療”是指在身體上地(例如穩(wěn)定一種可識別的癥狀)或在生理上地(例如穩(wěn)定一種身體參數(shù))、或同時地抑制疾病或病癥。在另一種實施方案中，“治療”是指推遲疾病或病癥的發(fā)作。
“治療有效量”是指一種化合物的數(shù)量，當(dāng)向患者給予以治療一種疾病時，該量足以對治療的這種疾病產(chǎn)生作用?！爸委熡行Я俊睂㈦S化合物、疾病以及其嚴(yán)重程度、以及所治療患者的年齡、體重等而改變。
現(xiàn)在，將詳細地說明本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。雖然本發(fā)明通過優(yōu)選的實施方案進行說明，但是本發(fā)明并不意在限于那些優(yōu)選實施方案。相反，它意在覆蓋可以包括在所附權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的構(gòu)思和范圍內(nèi)的各種替換、修飾和同等物。
5.2結(jié)構(gòu)式(I)的化合物在第一實施方案中，本發(fā)明的化合物包括結(jié)構(gòu)式(I)的化合物或其溶劑化物或水合物或N-氧化物，
其中R1、R2、R3、R5、R6和R7獨立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基；R4和R8獨立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基、或者當(dāng)N是芳環(huán)的一個部分時為不存在；任選地，R1和R2一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起，R6和R7一起以及R6和R8一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R3和R7一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烴二基；以及Y-2是(WS4)-2、(W2S12)-2、(W2S9)-2、(W2S7)-2、(W2S8)-2、(W2S11)-2、(W2S6)-2或(W2S13)-2；在一些實施方案中，Y是(WS4)-2且所有的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8不是氫。在其它的實施方案中，Y是(WS4)-2且所有的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8不是烷基。
在另一種實施方案中，
優(yōu)選地，Y是(WS4)-2。
在一些實施方案中，R1、R2、R3和R4中至少一種不是烷基。在其它的實施方案中，R1、R2和R4是氫、烷基或取代烷基。優(yōu)選地，R1、R2和R4是氫、甲基或乙基。
在另一種實施方案中，R1和R2是烷基。優(yōu)選地，R1和R2是甲基或乙基。
在另一種實施方案中，R1烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基或取代環(huán)烷基。優(yōu)選地，R1和R2一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。更優(yōu)選地，R1和R2一起是亞烷基或雜亞烷基。
在另一種實施方案中，R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。優(yōu)選地，R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是亞烷基。優(yōu)選地，R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 在另一種實施方案中，R3和R7一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。優(yōu)選地，R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。
在另一種實施方案中，R1、R2和R4是氫、烷基或取代烷基，以及R3是烷基、取代烷基、烯基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基，或者R3和R7一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。優(yōu)選地，R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3是烷基、取代烷基、烯基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基，或者R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。優(yōu)選地，R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3是烷基、取代烷基、烯基、芳基、芳烷基或環(huán)烷基。
在另一種實施方案中，R1(R2)(R3)(R4)N是
或 在另一種實施方案中，R1(R2)(R3)(R4)N是 在另一種實施方案中，R1(R2)(R3)(R4)N是 在另一種實施方案中，R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。優(yōu)選地，R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu)
或 在另一種實施方案中，R1、R2和R4是氫以及R3是取代烷基、環(huán)烷基或取代雜芳基，或者R3和R7一起是亞烷基。在另一種實施方案中，R1和R2是烷基以及R3和R4是烷基、取代烷基、芳基、芳烷基或亞烷基。優(yōu)選地，R1和R2是甲基或乙基，以及R3和R4是烷基、取代烷基、芳基、芳烷基或亞烷基。
在另一種實施方案中，R1(R2)(R3)(R4)N是
或 其中R9是具有至少8個碳原子并且不超過18個碳原子的直鏈烷基基團的混合基團。
在另一種實施方案中，R1、R2和R4是氫，以及R3是取代烷基、取代雜芳基、環(huán)烷基或亞烷基。優(yōu)選地，R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或 在另一種實施方案中，R1和R2一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基，R3是烷基或取代烷基，以及R4是氫或不存在。優(yōu)選地，R1(R2)(R3)N或R1(R2)(R3)(R4)N具有結(jié)構(gòu) 或 5.3化合物的合成本發(fā)明的化合物可以通過方案1和2中所示的常規(guī)合成方法獲得。用于制備本發(fā)明化合物的原料及其中間體是市場上可買到的，或者它們可以通過眾所周知的合成方法進行制備。取代銨鹽(例如，氫氧化銨和鹵化銨)可以從市場上購買得到，或者可以使用眾所周知的合成方法很容易地進行合成(Harrison et al.，″Compendium of Synthetic Organic Methods″，Vols.1-8(John Wiley and Sons，1971-1996)；″Beilstein Handbook of Organic Chemistry，″Beilstein Institute of Organic Chemistry，F(xiàn)rankfurt，Germany；Feiser etal.，″Reagents for Organic Synthesis，″Volumes 1-17，Wiley Interscience；Trost etal.，″Comprehensive Organic Synthesis，″Pergamon Press，1991；″Theilheimer′sSynthetic Methods of Organic Chemistry，″Volumes 1-45，Karger，1991；March，″Advanced Organic Chemistry，″Wiley Interscience，1991；Larock″Comprehensive Organic Transformations，″VCH Publishers，1989；Paquette，″Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis，″John Wiley &Sons，1995)。在此描述的化合物和/或原料的其它合成方法或者已經(jīng)在本領(lǐng)域中進行了描述，或者對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，此處方案1和2中所示的方法僅是舉例說明而非全面綜述。
方案1 如上所述，在方案1中，在水的存在下將氫氧化季銨加入到硫代鎢酸鹽中，引起陽離子交換(通過除去揮發(fā)性氨推動向產(chǎn)物的平衡)，以獲得所需的硫代鎢酸鹽衍生物。
方案2 如上所述，在方案2中，在乙腈的存在下，將鹵化季銨加入到硫代鎢酸鹽中，引起陽離子交換(通過除去揮發(fā)性氨推動向產(chǎn)物的平衡)，以獲得所需的硫代鎢酸鹽衍生物。
應(yīng)注意，當(dāng)銨抗衡離子不同時，可通過使用一當(dāng)量不同的銨抗衡離子處理化合物3制備鎢酸鹽衍生物。這樣的反應(yīng)預(yù)期將生成令人滿意的混合產(chǎn)物。
此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解到，包括使用銨鹽和硫化氫處理鎢酸鹽的常規(guī)方法可用于合成本文所述的許多化合物。
5.4測定法本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解，在此所述的用于測定本發(fā)明化合物活性的體外和體內(nèi)測定是舉例而不是全面綜述。
5.4.1內(nèi)皮細胞遷移的測定對于內(nèi)皮細胞遷移，通過向每個跨孔(transwell)加入200μL的膠原蛋白溶液，用I型膠原蛋白(50μg/mL)涂鋪跨孔，然后在37℃下培養(yǎng)過夜。將跨孔裝配在一個24孔板中，將化學(xué)引誘物(例如，F(xiàn)GF-2)以總體積0.8mL培養(yǎng)基加入到下室(bottom chamber)中。用無血清培養(yǎng)基將內(nèi)皮細胞例如人臍靜脈內(nèi)皮細胞(“HUVEC”)，其已經(jīng)用胰蛋白酶從單層培養(yǎng)中脫離，稀釋至約106細胞/mL的最終濃度，然后將0.2mL這種細胞懸液加入到每個跨孔的上室(upper chamber)中。向上室和下室中均加入抑制劑，并在潮濕空氣中在37℃下遷移5小時。從用DiffQuik染色的板中移去跨孔。通過用藥棉拭子刮除，從所述的上室中除去沒有遷移的細胞，然后將膜分離，安放在載玻片上，在高倍視野(400x)下計數(shù)，以測定細胞遷移的數(shù)目。
5.4.2抗侵襲活性的生物測定對本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物進行抗侵襲能力測試。在一種測定中，即Matrgel侵襲測定中，測定細胞例如內(nèi)皮細胞或腫瘤細胞(例如，PC-3人前列腺癌)細胞通過重組基膜(Matrgel)侵襲的能力(Kleinman et al，Biochemistry 1986，25312-318；Parish et al.，Int.J.Cancer 1992，52378-383)。Matrgel是一種含IV型膠原蛋白、層粘連蛋白、硫酸類肝素蛋白多糖例如基膜蛋白多糖的重組基膜，其與bFGP、玻璃粘連蛋白和轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGFβ，尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑(uPA)、組織纖維蛋白溶酶原激活劑(tPA)和絲氨酸蛋白酶抑制劑即纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑1型(PAL-l))結(jié)合，并定位(Chambers et al.，Canc.Res.1995，551578-1585)。對于將細胞外受體或酶作為靶向的化合物，在本測定中獲得的結(jié)果通?？梢灶A(yù)測這些化合物在體內(nèi)的效力(Rabbani et al，1995，Int.J.Cancer 63840-845)。
這些測定使用跨孔組織培養(yǎng)插入物。侵襲細胞定義為能夠通過Matrgel和聚碳酸酯膜的上部并與膜的底部粘連的細胞。含聚碳酸酯膜(8.0μm孔徑)的跨孔(Costar)用Matrgel涂鋪(Collaborative Reserach)，其中Matrgel已經(jīng)在無菌PBS中稀釋至75μg/mL的最終濃度(每個插入物60μL的稀釋Matrgel)，然后將其放在24孔板的孔中。所述的膜在生物學(xué)安全工作櫥中干燥過夜，然后通過加入100μL含抗生素的DMEM，在振動臺上再水合1小時。通過抽吸從每個插入物中除去DMEM，將0.8mL DMEM/10％FBS/抗生素加入到24孔板的每個孔中，這樣使它圍繞在跨孔的外圍(“下室”)。將新鮮的DMEM/抗生素(100μL)、人谷氨酸-纖維蛋白溶酶原(5μg/mL)以及任何測試抑制劑加入到上部，跨孔的內(nèi)部(“上室”)。對測試細胞進行胰蛋白酶化，接著再懸浮在DMEM/抗生素中，然后以800,000細胞/mL的最終濃度將其加入到跨孔的上室中。將上室的最終體積調(diào)節(jié)至200μL。然后，將裝配板在潮濕的5％CO2空氣中培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)后，固定細胞，用DiffQuik(吉姆沙染色劑)進行染色，然后使用藥棉拭子刮擦上室以除去Matrigelt和任何沒有侵襲通過膜的細胞。使用X-acto刀片將膜從跨孔中分離，將其安裝在使用Permount和蓋片的載玻片上，然后在高倍視野(400x)下進行計數(shù)。由5-10倍視野計數(shù)確定被侵襲細胞的平均值，并作為抑制劑濃度的函數(shù)進行繪圖。
5.4.3抗血管生成活性的管形成測定在兩種不同的體外測定體系中，可以對本發(fā)明化合物進行抗血管生成活性的測試。
將可以制備得到或者從商業(yè)上購買得到的內(nèi)皮細胞，如人臍靜脈內(nèi)皮細胞(“HMVEC”)或人微血管內(nèi)皮細胞(“HMVEC”)，以2×105細胞/mL的濃度與纖維蛋白原(5mg/mL在磷酸鹽緩沖鹽水(“PBS”)中)以1∶1(v/V)的比例混合。加入凝血酶(5單位/mL最終濃度)，然后將混合物立即轉(zhuǎn)入到24孔板中(每孔0.5mL)。使其生成血纖維蛋白凝膠，然后將VEGF和bFGF與測試化合物一起加入到所述的孔(每個孔的最終濃度為5ng/mL)。細胞在37℃下在5％CO2中培養(yǎng)4天，在此期間，對每個孔中的細胞進行計數(shù)，并將其分類為圓的、不帶支鏈的長的、帶支鏈的長的、或者帶有兩個或更多個支鏈的長的。結(jié)果用化合物每一濃度的5個不同孔的平均值來表示。典型地，在血管生成抑制劑存在下，細胞保持圓形的或形成未分化的管(例如，0或1個分枝)。這種測定法在本領(lǐng)域中被認為可以用于預(yù)測體內(nèi)血管生成(或抗血管生成)的效力(Min et al.，Cancer Res.1996562428-2433)。
在一種可供選擇的測定法中，當(dāng)內(nèi)皮細胞在Matrigel中進行培養(yǎng)時，可以觀察到內(nèi)皮細胞管的形成(Schnaper et al.，J.Cell.Physiol.1995，165107-118)。將內(nèi)皮細胞(1×104細胞/孔)轉(zhuǎn)移到涂敷有Matrigel的24孔板中，48小時后，確定管形成的數(shù)量。通過與內(nèi)皮細胞同時加入或在其后的不同時間點上加入而測試抑制劑。也可以通過加入血管生成生長因子例如bFGF或VEGF、分化刺激劑(例如PMA)或其組合，來刺激管形成。
通過使特定類型的基膜出現(xiàn)在內(nèi)皮細胞中，即遷移和分化內(nèi)皮細胞的基質(zhì)層將被預(yù)見為首先出現(xiàn)，這種測定法模擬血管生成。另外，在Matrigel(以及在基膜原位中)中發(fā)現(xiàn)的基質(zhì)組分或其蛋白水解物也可能刺激內(nèi)皮細胞的管形成，這使得這種模型對前面所述的血纖維蛋白凝膠血管生成模型構(gòu)成互補(Blood et al.，Biochim.Biophys.Acta 1990，103289-118；Odedra et al.，Pharmac.Ther.1991，49111-124)。在兩種測定法中，本發(fā)明化合物抑制內(nèi)皮細胞管形成，其表明所述的化合物還具有抗血管生成活性。
5.4.4抑制增殖的測定本發(fā)明化合物抑制內(nèi)皮細胞增殖能力可以在96孔板中進行測定。用I型膠原(明膠)涂鋪所述板的孔(在PBS中0.1-1mg/mL，每孔0.1mL，在室溫下30分鐘)。將所述的板洗滌(3x w/PBS)后，每孔平鋪3-6,000細胞，讓其在內(nèi)皮生長培養(yǎng)基(EGM；Clonetics)或含0.1-2％ FBS的M199培養(yǎng)基中附著4小時(37℃/5％ CO2)。4小時后，除去培養(yǎng)基與任何未附著的細胞，向每個孔中加入含bPGF(1-10ng/mL)或VEGF(1-10ng/ml)的新鮮培養(yǎng)基。最后加入測試化合物，將板培養(yǎng)(37℃/5％ CO2)24-48小時。向每個孔中加入MTS(Promega)，然后培養(yǎng)1-4小時。然后，測定490nm處的吸光度，其與細胞數(shù)目成正比，以確定在對照組孔和那些含測試化合物孔之間增殖的差異。用培養(yǎng)的粘附腫瘤細胞，可以建立類似的測定體系。但是，在這種情形中可以省略膠原。平鋪腫瘤細胞(例如，3,000-10,000/孔)，然后使其粘附過夜。然后，向孔中加入無血清培養(yǎng)基，細胞同步24小時。然后，向每個孔中加入含10％FBS的培養(yǎng)基，以刺激增殖。在一些孔中加入測試化合物。24小時后，將MTS加入到板中進行測試，然后如上所述那樣進行讀數(shù)。除了不使用VEGF和bFGF來刺激細胞生長之外，還可以使用相似的方法以評價本發(fā)明化合物對其它細胞類型(包括腫瘤細胞)增殖的作用。如果有證據(jù)表明抗增殖活性，可以使用TumorTACS(Genzyme)測定細胞凋亡的誘導(dǎo)。
5.4.5細胞毒性的測定可以測定本發(fā)明化合物對各種細胞類型包括腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞和巨噬細胞的細胞毒性作用。
一種典型的測定法包括在96孔板中以5-10,000細胞每孔的密度平鋪細胞。以各種濃度加入測試化合物，并與細胞培養(yǎng)24小時。細胞用培養(yǎng)基洗滌3次。對于細胞毒性測定(測定細胞溶解作用)，使用Promega 96孔細胞毒性試劑盒。
5.4.6角膜的血管生成模型所使用的方案基本上與Volpen等人，J.Clin.Invest.1996，98671-679中所述的相同。簡要地說，將雌性費希爾老鼠(Fischer rat)(120-140gms)麻醉，然后將由Hydron、bPGF(150nM)和測試化合物組成的小球(5μl)植入到很小的切口中，該切口在距離角膜邊緣1.0-1.5mm處。移植后第5天和第7天，評價新血管生成。在第7天，將動物麻醉，灌輸一種染料例如膠體碳，以對血管進行染色。然后，使動物安樂死，角膜用福爾馬林固定，將角膜弄平，拍照，評價新血管生成的程度。通過對總的血管面積或長度進行成像，或者簡單地通過對血管進行計數(shù)，可以確定新血管的數(shù)量。
5.4.7Matrigel栓塞測定此測定法基本上如passaniti等人，Lab Invest.1992，67519-528所述那樣進行。將冰冷的Matrigel(例如，500μl)(Collaborative BiomedicalProducts，Inc.，Bedford，MA)與肝素(例如，50μg/ml)、FGF-2(例如，400ng/ml)和測試化合物混合。在某些測定中，bPGF可以被腫瘤細胞取代作為血管生成刺激物。將Matrigel混合物皮下注射到4-8周齡的無胸腺裸鼠，注射部位在腹部中線附近，優(yōu)選每只老鼠進行三次注射。注入的Matrigel形成明顯的固體凝膠。如此選擇注射部位以致每只動物接受陽性對照栓塞(例如FGF-2+肝素)、陰性對照栓塞(例如，緩沖液+肝素)以及包括對血管生成起作用的測試化合物的栓塞(例如，F(xiàn)GF-2+肝素+化合物)。所有處理優(yōu)選一式三份。在注射后約第7天或者在觀察血管生成最佳的其它時間，通過頸部脫位處死動物。沿腹部中線剝離鼠皮，回收Matrigel栓塞，并立即在高分辨率下進行掃描。然后，將栓塞分散在水中并在37℃下培養(yǎng)過夜。根據(jù)廠商的指示使用德臘布金溶液(例如，從Sigma處獲得)，測定血紅蛋白(Hb)含量。由于栓塞中Hb的數(shù)量反映樣品中血液的數(shù)量，因此栓塞中Hb的數(shù)量是測定血管生成的一種間接方法。此外，另一種方法，在將動物處死前，向其注射0.1ml含與一個熒光基團共軛的高分子量右旋糖酐的緩沖液(優(yōu)選PBS)。能通過熒光測定的在分散的栓塞中熒光的數(shù)量，也可以作為一種栓塞中血管生成的測定方法。使用mAb抗-CD31(CD31是血小板-內(nèi)皮細胞粘附分子或“PECAM”)的染色也可以用來證實栓塞中新血管生成和微血管密度。
5.4.8雞絨毛膜尿囊膜(CAM)血管生成測定此測定法基本上如Nguyen等人，Microvascular Res.1994，4731-40所述那樣進行。將含血管生成因子(bFGF)或腫瘤細胞以及抑制劑的網(wǎng)眼放到8-天的雞胚CAM上，在植入樣品后第3-9天觀察CAM。通過測定含血管的網(wǎng)眼中正方形的百分比，來確定血管生成的數(shù)量。
5.4.9使用采用腫瘤細胞的Matrigel栓塞測定法，進行抑制血管生成和抗腫瘤作用的體內(nèi)評價在此測定中，腫瘤細胞，例如將1-5×106個3LL路易士肺癌或老鼠前列腺細胞系MatLyLu的細胞與Matrigel混合，然后根據(jù)在上面4.4.7節(jié)中所述方案，將其注射到老鼠的側(cè)腹中。約5-7天后，在栓塞中可以觀察到大量的腫瘤細胞和大量的血管生成反應(yīng)。在真實的腫瘤環(huán)境中，化合物的抗腫瘤和抗血管生成作用可以通過將所述的化合物包含在栓塞中進行評價。然后，測定形成的腫瘤重量、Hb水平或熒光水平(在處死前，注入右旋糖酐-熒光基團共軛物)。為了測定Hb或熒光，首先將所述的栓塞用組織勻漿器勻漿。
5.4.10皮下腫瘤生長的異種移植模型在裸鼠的右側(cè)腹皮下接種MDA-MB-231細胞(人乳癌)和Matrigel(1×106細胞，在0.2mL中)。腫瘤成長至200mm3，然后開始用測試化合物進行處理。每隔一天測量腫瘤的體積，處理2周后處死所述的動物。切除腫瘤，稱重并埋入石蠟中。通過H和E、抗-CD31、Ki-67、TUNEL和CD68染色，分析腫瘤的組織切片。
其它人腫瘤細胞系，包括但不局限于PC-3、CWR22R、SK-OV-3、A2780、A549、HCT116、HT29也可以按類似方式用來測試本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性。
5.4.11轉(zhuǎn)移的異種移植模型使用實驗性轉(zhuǎn)移模型(Crowley et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993，905021-5025)，本發(fā)明的化合物還可以用來測試對晚期轉(zhuǎn)移的抑制。晚期轉(zhuǎn)移包括腫瘤細胞的附著和外滲、局部侵襲、接種、增殖和血管生成。將用報導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染，優(yōu)選用綠色熒光蛋白(GFP)基因轉(zhuǎn)染的人前列腺癌細胞(PC-3)，但是作為一種可供選擇的方法，用編碼酶氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)、熒光素酶或LacZ的基因進行轉(zhuǎn)染的人前列腺癌細胞(PC-3)接種到裸鼠中。這種方法允許利用這些標(biāo)記(GFP的熒光檢測或酶活性的組織化學(xué)比色檢測)中的任何一個以跟蹤這些細胞的命運。注射細胞，優(yōu)選靜脈注射，約14天后確定轉(zhuǎn)移，特別是在肺中，但也在局部淋巴結(jié)、股骨和大腦中。這模擬在人前列腺癌中天然存在的轉(zhuǎn)移的器官趨向性。例如，將GFP-表達的PC-3細胞(每只老鼠1×106細胞)靜脈內(nèi)注射到裸(nu/nu)鼠的尾部靜脈中。以100μg/動物/天的劑量每天通過IP給予動物測試組合物。觀察單一轉(zhuǎn)移性細胞和病灶，并且通過熒光顯微術(shù)或光學(xué)顯微鏡組織化學(xué)，或者通過研磨組織并定量比色測定可測的標(biāo)記，進行定量測定。
5.4.12通過HPRG和功能性衍生物抑制在體內(nèi)的自發(fā)轉(zhuǎn)移大鼠同源乳腺癌系(Xing et al.，Int.J.Cancer 199667423-429(1996)使用Mat BIII大鼠乳腺癌細胞。將腫瘤細胞，例如約106懸浮在0.1mL PBS中，接種到雌性費希爾大鼠乳房的脂肪墊中。在接種的時候，腹膜內(nèi)植入一種14天的Alza滲透微泵以分散測試化合物。將化合物溶于PBS中(例如，200mM的儲備液)，過濾除菌，并將其放在微型泵中以獲得約4mg/kg/天的釋放速度。對照組動物僅僅接受在微型泵中的媒介物(PBS)或空白對照肽。在大約第14天的時候處死動物。
實驗性轉(zhuǎn)移的其它模型也可以用來評價本發(fā)明的化合物。這些模型利用上文所述的人腫瘤細胞系，對裸鼠的尾部靜脈進行靜脈。典型地，在接種腫瘤細胞28天后處死這些大鼠，在它們的肺中評價是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。
5.4.133LL路易士肺癌原發(fā)腫瘤的生長在1951年，這種腫瘤系在C57BL/6小鼠中作為肺癌的自發(fā)形成(CancerRes.1955，1539.還可參見Malave et al.，J.Nat’l.Canc.Inst.1979，6283，88)。通過皮下接種，在C57BL/6小鼠中通過傳代進行繁殖，并且在半同種異源的C57BL/6×DBA/2F1小鼠中或在異源的C3H小鼠中進行測試。典型地，對于皮下植入每組使用六只動物，或者對于肌肉注射植入每組使用十只動物。腫瘤可以以2-4mm片段進行皮下接種，或者可以以約0.5-2×106細胞的懸浮細胞的接種物進行肌肉注射植入或皮下植入。植入24小時后開始進行治療，或者直到獲得具體大小的腫瘤(通常約400mg)后才開始進行治療。每天腹膜內(nèi)給予測試化合物，連續(xù)給藥11天。
接著對動物進行稱重、觸診并測定腫瘤大小。在未經(jīng)治療的對照組受試動物中，肌內(nèi)接種12天后，典型的腫瘤重量為500-2500mg。典型的平均存活時間為18-28天。在第1-11天，使用陽性對照化合物，例如環(huán)磷酰胺以每天20mg/kg/注射。計算的結(jié)果包括平均動物體重、腫瘤大小、腫瘤重量、存活時間。為了證實治療活性，應(yīng)該在兩種多劑量測定中對測試組合物進行測試。
5.4.143LL路易士肺癌原發(fā)生長和自發(fā)轉(zhuǎn)移模型此模型已經(jīng)被許多研究者使用(參見例如Gorelik et al.，1980，J..Nat’l.Canc.Inst.651257-1264；Gorelik et al.，Rec.Results Canc.Res.1980，7520-28；Isakov et al.，Invasion Metas.1982，212-32；Talmadge et al.，J.Nat′l.Canc.Inst.1982，69975-980；Hilgard et al.，Br.J.Cancer 1977，3578-86)。測試小鼠是雄性C57BL/6小鼠，2-3月齡。皮下注射、肌內(nèi)注射或足墊內(nèi)植入后，此腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，優(yōu)選在肺中。對于某些腫瘤系，原發(fā)性腫瘤起抗轉(zhuǎn)移作用，因此在進行轉(zhuǎn)移階段研究之前，首先必須切除原發(fā)性腫瘤(還參見O’Reilly et al.美國專利號5,639,725)。
通過用0.3％的胰蛋白酶溶液處理切碎的腫瘤組織，從實體瘤中制備得到單細胞懸浮液。細胞用PBS(pH7.4)洗滌3次，然后將其懸浮在PBS中。以這種方式制得的3LL細胞的成活力通常為約95-99％(由臺盼藍染料排除)。將懸浮在0.05ml PBS中的活腫瘤細胞(3×104-5×106)進行皮下注射，或者注射到C57BL/6小鼠的背部或后足的腳墊之一。背部皮下注射106細胞3-4天后，可以觀察到腫瘤的出現(xiàn)。出現(xiàn)腫瘤的那天以及每隔一天用卡尺測量已確立的腫瘤的直徑。
治療為每周給予一個或兩個劑量的化合物。在另一種實施方案中，所述的肽通過滲透微型泵給予。
在背部腫瘤切除的實驗中，當(dāng)腫瘤達到約1500mm3大小時，將小鼠隨機分為兩組(1)徹底切除原發(fā)性腫瘤；或(2)進行假手術(shù)并原封不動的保留腫瘤。雖然500-3000mm3的腫瘤抑制轉(zhuǎn)移的生長，但是1500mm3是最大尺寸的原發(fā)性腫瘤，其在高存活率和沒有局部再生長的情況下可以安全地被切除。21天后，處死所有小鼠，并進行尸體解剖。
除去肺并稱其重量。將肺固定在布安溶液中，記錄可見轉(zhuǎn)移的數(shù)目。還使用裝有含千分尺的目鏡的雙目立體鏡，在8X放大倍數(shù)下，測定轉(zhuǎn)移的直徑。在所記錄直徑的基礎(chǔ)上，能夠計算每個轉(zhuǎn)移的體積。為了測定每個肺中轉(zhuǎn)移的總體積，將可見轉(zhuǎn)移的平均數(shù)乘以轉(zhuǎn)移的平均體積。為了進一步測定轉(zhuǎn)移性生長，可以測定125IdUrd與肺細胞的結(jié)合(Thakur et al.，J..Lab.Clin.Med.1977，89217-228)。十天后切除腫瘤，將25μg氟脫氧尿嘧啶接種到帶腫瘤的腹膜中(和，如果使用，切除腫瘤的小鼠)。30分鐘后，向小鼠給予1μCi的125IdUrd(碘苷)。一天后，除去肺和脾并稱重，然后使用γ計數(shù)器測定125IdUrd的結(jié)合度。
在帶足墊腫瘤的小鼠中，當(dāng)腫瘤達到約8-10mm直徑時，將小鼠隨機分為兩組(1)膝關(guān)節(jié)以上結(jié)扎后，將帶腫瘤的腿截肢；或(2)小鼠保持原封不動，作為未截肢的帶腫瘤對照組。(在帶腫瘤的小鼠中，無腫瘤腿的截肢對隨后的轉(zhuǎn)移沒有已知的影響，排除了麻醉、應(yīng)激或手術(shù)的可能影響)。截肢后第10-14天殺死小鼠。如上所述那樣對轉(zhuǎn)移進行評價。
5.5治療用途向患有疾病的患者，優(yōu)選為人，給予結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物，其中疾病的特征在于異常血管生成。異常血管生成包括異常新血管生成例如形成新血管、血管變大、血管出現(xiàn)更多分枝以及任何其它機理，其導(dǎo)致有病組織或部位的血液承載能力增加。這些化合物及其藥物組合物可用于治療和/或預(yù)防異常血管生成。
優(yōu)選地，疾病特征為異常血管生成的疾病包括，但不局限于，癌癥(例如，任何血管化腫瘤，優(yōu)選是一種實體瘤，包括但不局限于，肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、胰腺癌、喉癌、食道癌、睪丸癌、肝癌、腮腺癌、膽道癌、結(jié)腸癌、直腸癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、膀胱癌、前列腺癌、甲狀腺癌、鱗狀細胞癌、腺癌、小細胞癌、黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、成神經(jīng)細胞瘤、肉瘤(例如血管肉瘤、軟骨肉瘤))、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、動脈硬化、動靜脈的畸形、角膜移植新血管生成、延遲傷口愈合、糖尿病性視網(wǎng)膜病、與年齡有關(guān)的黃斑變性、肉芽形成、燒傷、血友病性關(guān)節(jié)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肥厚性瘢痕、新生血管性青光眼、不結(jié)合性骨折、奧-韋二氏病(Osier Weber syndrome)、牛皮癬、肉芽腫、晶狀體后纖維組織形成、翼狀胬肉、硬皮病、沙眼、血管粘連、眼睛的新血管生成、寄生蟲病、術(shù)后肥大、頭發(fā)生長的抑制、黃斑變性(包括濕型和干型)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。特征在于異常血管生成的、優(yōu)選給予結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物的疾病是癌癥、黃斑變性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
此外，可以向患有與銅代謝紊亂有關(guān)的疾病(例如，威爾遜氏病)為特征的患者，優(yōu)選為人，給予結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物，以治療和/或預(yù)防這樣的疾病。
更進一步，可以向患者，優(yōu)選人，給予結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物以治療和/或預(yù)防肥胖癥。結(jié)構(gòu)式(I)的化合物還可以用于降低炎性細胞因子的水平(例如，TNF-α、TNF-β、IL-8等)，以及用作纖溶酶原激活物抑制劑，其可能與血管生成和肥胖癥有關(guān)(Loskutoff et al.，Ann.N.Y.Acad.Sci.，2000，902272-281；Pan et al.，Cancer Res.，2002，624854-4859；Hanadaet al.，Cytokine Growth Factor Rev.2002，13413-421；Chen et al.，Science2002，2961634-5；Miyake et al.，J.Neuropathol.Exp.Neurol.5918-28；Kochet al.，Science 1992，2581798-801；Osawa et al.，Infect.Immun.2002，706294-6301；Bajou et al.，Nat.Med.1998，4923-8)。
更進一步，可以向患有神經(jīng)變性疾病的患者(優(yōu)選人)給予結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物以治療和/或預(yù)防所述的神經(jīng)變性疾病。在本領(lǐng)域中已經(jīng)報道，銅含量的提高可以調(diào)節(jié)各種神經(jīng)變性疾病包括阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)和朊病毒病的病理學(xué)(Llanos et al.，DNA Cell Biol.2002，21259-270；Carri et al.，F(xiàn)unct.Neurol 2001，16181-188；Perry et al.，CNS Drugs 2002，16339-352；Kowalik-Jankowska et al.，Environ HealthPerspect，2002，5869-870；Maynard et al.，J.Biol.Chem.2002，277，44670-44676；Gnjec et al.，F(xiàn)ront Biosci.2002，16-23；Strausak et al.，Brain Res.Bull.2001，55175-185；Brown，Brain Res.Bull.2001，55165-173；Brown，Biochem.Soc.Trans 2002，30742-745)。
更進一步，根據(jù)本發(fā)明，可以向患者(優(yōu)選人)給予結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物以治療疾病，所述疾病的特征在于NF-κB異常調(diào)節(jié)活性或者炎性反應(yīng)的異常調(diào)節(jié)炎癥。
此外，在某些實施方案中，向患者(優(yōu)選人)給予結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物作為抵抗各種疾病或病癥的預(yù)防措施，這些疾病的特征在于異常血管生成、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性病癥、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙。因此，結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物可以用來預(yù)防一種疾病或病癥并且同時用來治療另一種疾病(例如，預(yù)防威爾遜氏病或阿爾茨海默氏病，同時治療癌癥)。
治療性/預(yù)防性給藥結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物可以有利地在人類醫(yī)學(xué)中使用。如上面第4.5節(jié)所述，結(jié)構(gòu)式(I)的化合物和/或其藥物組合物適用于治療或預(yù)防各種疾病或病癥，這些疾病或病癥的特征在于異常血管生成、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性病癥、肥胖癥或NF-κB調(diào)節(jié)障礙。
當(dāng)用于治療和/或預(yù)防上述疾病或病癥時，可以單獨服用或使用結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物，或者可以與其它藥物一起服用或使用。結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物可以單獨服用或使用，還可以與其它藥物活性劑(例如，其它抗癌藥，其它抗血管生成藥，其它螯合劑例如鋅、青霉胺等以及其它抗肥胖藥)一起服用或使用，其中所述的其它藥物活性劑包括結(jié)構(gòu)式(I)其它化合物。
本發(fā)明提供治療和預(yù)防方法，包括向需要這種治療的患者給予治療有效量的結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物。所述的患者可以是動物，更優(yōu)選是哺乳動物，最優(yōu)選是人。
本發(fā)明的結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物優(yōu)選為口服給藥。結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物還可以通過任何其它方便的途徑給藥，例如通過輸注或彈丸注射，通過上皮粘膜或皮膚粘膜(例如，口腔粘膜、直腸粘膜和腸粘膜)吸收。可以全身或局部給藥?？梢杂脕硎┯帽景l(fā)明化合物和/或藥物組合物的各種遞送體系是已知的(例如，包封在脂質(zhì)體、微粒、微膠囊、膠囊中等)。給藥方法包括，但不局限于，皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜外、口服、舌下、鼻內(nèi)、腦內(nèi)、陰道內(nèi)、經(jīng)皮、直腸、吸入，或者局部給藥，特別是局部用于耳、鼻、眼睛或皮膚。優(yōu)選的給藥方式將由醫(yī)師決定，并且部分取決于醫(yī)療病癥的部位。在多數(shù)情況下，給藥將使結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物釋放到血流中。
在具體實施方案中，可能希望將一種或多種結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物局部地用于需要治療的部位。例如，這可以通過手術(shù)期間的局部輸注、局部施用例如手術(shù)后與創(chuàng)傷敷料一起使用、通過注射、通過導(dǎo)管、通過栓劑、或通過植入物而實現(xiàn)，但是并不受這些方法的限制，其中所述植入物是包括膜如sialastic膜、或纖維的多孔的、無孔的或凝膠狀材料。在一種實施方案中，給藥可以通過在異常血管生成(例如癌癥或關(guān)節(jié)炎)的部位(或形成部位)進行直接注射。
在某些實施方案中，可能希望通過任何合適的途徑，包括心室內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外注射，將結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物引入到中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。例如通過心室內(nèi)導(dǎo)管與容器例如Ommaya容器相連，可以有助于進行心室內(nèi)注射。
結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物還可以直接吸入肺部。對于通過吸入法給藥，結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物可以方便地通過許多不同裝置被釋放到肺中。例如，可計量的“劑量吸入器”(“MDI”)，其使用含有合適的低沸點推進劑(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或任何其它合適的氣體)的罐，可以用來將結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物直接給藥到肺。
或者，可以使用干粉吸入(“DPI”)裝置，將結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物用于肺中。DPI裝置采用在容器內(nèi)由一股氣體生成大量的干粉的給藥機理，該干粉然后可以讓患者吸入。DPI裝置在本領(lǐng)域中也是公知的。有各種各樣多劑量DPI(“MDDPI”)系統(tǒng)，可以釋放一次以上的治療劑量。例如，對于這些系統(tǒng)，可以配制用在吸入器或吹藥器中的明膠的膠囊和藥筒，其中含有結(jié)構(gòu)式(I)化合物與用于這些系統(tǒng)的合適的粉末基質(zhì)例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
可以用來將結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物給藥至肺的另一種類型的裝置是液體噴霧裝置，例如由Aradigm公司，Hayward，CA提供。液體噴霧系統(tǒng)使用非常小的噴嘴孔使液體藥物制劑霧化，該霧化后的藥物制劑之后可以直接被肺吸入。
在一種實施方案中，使用噴霧器將結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物用于肺中。例如通過使用超聲波能量，噴霧器從液體藥物制劑中生成氣溶膠，以形成能夠容易被吸入的微粒(例如參見，Verschoyle et al.，British J.Cancer，1999，80，Suppl.2，96)。噴霧器的例子包括由SheffieldPharmaceuticals，Inc提供的裝置(參見，Armer et al.，美國專利號5,954，047；van der Linden et al.，美國專利號5,950,619；van der Linden et al.，美國專利號5,970,974)，以及Batelle Pulmonary Therapeutics，Columbus，OH提供。
在另一種實施方案中，可以使用電流體動力學(xué)(“EHD”)氣溶膠裝置，將結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物遞送到肺中。EHD氣溶膠裝置使用電能將液體藥物溶液或懸浮液霧化(例如參見，Noakes et al.，美國專利號4,765,539)。當(dāng)使用EHD氣溶膠裝置將結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物用于肺時，所述制劑的電化學(xué)性質(zhì)是重要的優(yōu)化參數(shù)，這樣的優(yōu)化通常由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員進行。EHD氣溶膠裝置可以比現(xiàn)有的肺給藥技術(shù)更有效。
在另一種實施方案中，結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物可以以小囊泡(vesicle)的形式遞送，特別是以脂質(zhì)體的形式給予。(參見，Langer，1990，Science 2491527-1533；Treat et al.，in“Liposomes in the Therapy of InfectiousDisease and Cancer，”Lopez-Berestein and Fidler(eds.)，Liss，New York，pp.353-365(1989)；通常參見“Liposomes in the Therapy of Infectious Disease andCancer”Lopez-Berestein and Fidler(eds.)，Liss，New York，pp.353-365(1989))。
另一種實施方案中，結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物可以通過持續(xù)釋放系統(tǒng)遞送，優(yōu)選通過口服持續(xù)釋放系統(tǒng)遞送。在一種實施方案中，可以使用泵(參見，Langer，supra，Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed Eng.14201；Saudek et al.，1989，N.Engl.J.Med.321574)。
在另一種實施方案中，可以使用聚合材料(參見″Medical Applications ofControlled Release，″Langer and Wise(eds.)，CRC Pres.，Boca Raton，F(xiàn)lorida(1974)；″Controlled Drug Bioavailability，″Drug Product Design andPerformance，Smolen and Ball(eds.)，Wiley，New York(1984)；Langer et al.，1983，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol Chem.2361；還可參見Levy et al.，1985，Science 228190；During et al.，1989，Ann.Neurol.25351；Howard etal.，1989，J.Neurosurg.71105)。在另一種實施方案中，聚合材料用于口服的持續(xù)釋放給藥。優(yōu)選的聚合物包括羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素和羥乙基纖維素(最優(yōu)選羥丙基甲基纖維素)。其它優(yōu)選的纖維素醚已經(jīng)被描述(Alderman，Int.J Pharm.Tech.& Prod.Mfr.，1984，5(3)1-9)。影響藥物釋放的因素是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的，并且已經(jīng)在本領(lǐng)域中進行了描述(Bamba et al.，Int.J Pharm.，1979，2，307)。
在另一種實施方案中，包有腸溶衣的制劑可以用于口服持續(xù)釋放給藥。優(yōu)選的包衣材料包括溶解度與pH有關(guān)的聚合物(即，pH-控制釋放的)，具有緩慢的或與pH有關(guān)的溶脹、溶解或侵蝕速率的聚合物(即，時間-控制釋放的)、酶降解的聚合物(即，酶-控制釋放的)，以及形成堅固層(該堅固層在壓力增加的情況下才破壞)的聚合物(即，壓力-控制釋放的)。
在另一種實施方案中，滲透性遞送體系可以用于口服持續(xù)釋放給藥(Verma et al.，Drug Dev.Ind.Pharm.，2000，26695-708)。在另一種實施方案中，OROSTM滲透裝置可以用于口服持續(xù)釋放裝置。(Theeuwes et al，美國專利號3,845,770；Theeuwes et al.，美國專利號3,916,899)。
在另一種實施方案中，可以將控釋系統(tǒng)放在本發(fā)明化合物和/或藥物組合物的靶點附近，因此僅需要一部分的全身性劑量(例如參見，Goodson，in″Medical Applications of Controlled Release，″supra，vol.2，pp.115-138(1984))。還可使用在Langer，1990，Science 2491527-1533中討論的其它控釋系統(tǒng)。
5.7藥物組合物本發(fā)明的藥物組合物包含治療有效量的一種或多種結(jié)構(gòu)式(I)化合物，優(yōu)選為純化的形式，與合適量的可藥用賦形劑一起，由此提供一種合適患者給藥的形式。當(dāng)給予患者時，結(jié)構(gòu)式(I)化合物和可藥用賦形劑優(yōu)選是無菌的。當(dāng)靜脈內(nèi)施用結(jié)構(gòu)式(I)化合物時，水是優(yōu)選的賦形劑。鹽溶液和葡萄糖水溶液以及丙三醇溶液也可以用作液體賦形劑，具體是對于可注射溶液。合適的藥物賦形劑還包括賦形劑例如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化鈉、干脫脂奶粉、丙三醇、丙二醇、乙二醇、水、乙醇等。本發(fā)明的藥物組合物，如果需要，還可以含有少量的潤濕劑或乳化劑或pH緩沖劑。此外，可以使用助劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、潤滑劑和著色劑。
包含結(jié)構(gòu)式(I)化合物的藥物組合物可以通過常規(guī)的混合、溶解、造粒、制糖錠、研磨、乳化、封裝、包埋或冷凍干燥方法進行制備。藥物組合物可以以常規(guī)的方式使用一種或多種生理上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或助劑進行制備，這些生理上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或助劑有助于將結(jié)構(gòu)式(I)化合物加工成藥學(xué)上可使用的制劑。合適的制劑取決于所選擇的給藥途徑。
本發(fā)明的藥物組合物可以采取溶液、懸浮液、乳劑、片劑、藥片、丸劑、膠囊、含液體的膠囊、粉末、持續(xù)釋放制劑、栓劑、乳劑、氣溶膠、噴霧劑、懸浮液或任何其它可使用形式。在一種實施方案中，可藥用賦形劑是膠囊(例如參見，Grosswald et al.，美國專利號5,698,155)。合適的藥物賦形劑的其它例子已經(jīng)描述在本領(lǐng)域中(例如RemlngtonThe Science andPractice of Pharmacy，Philadelphia College o Pharmacy and Science，20thEdition，2000)。
對于局部給藥，可以將結(jié)構(gòu)式(I)化合物配制成溶液、凝膠劑、膏劑、乳劑、懸浮液等這些在本領(lǐng)域中所公知的。
全身性制劑包括設(shè)計成通過注射給藥的那些，例如皮下注射、靜脈注射、肌內(nèi)注射、鞘內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射，以及設(shè)計成經(jīng)皮、轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)(transmucosal)、經(jīng)口或經(jīng)肺給藥的那些。全身性制劑可以與另一種活性劑一起制備，所述活性劑可以改善氣道粘液的粘液纖毛清除率或減少粘液粘度。這些活性劑包括，但不局限于，鈉通道阻滯劑、抗生素、N-乙酰半胱氨酸、高半胱氨酸和磷脂。
在一種實施方案中，根據(jù)常規(guī)方法，將結(jié)構(gòu)式(I)化合物配制成適合于人靜脈注射給藥的藥物組合物。典型地，靜脈注射給藥的本發(fā)明化合物是以無菌等滲含水緩沖液形式的溶液。對于注射，可以將結(jié)構(gòu)式(I)化合物配制在水溶液中，優(yōu)選配制在生理學(xué)相容的緩沖液中，例如漢克斯液、林格液或生理鹽水緩沖液。所述溶液可以含有配制試劑例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。必要時，所述藥物組合物還可以包括一種增溶劑。用于靜脈注射給藥的藥物組合物可以任選包括一種局部麻醉劑例如利多卡因以減輕注射部位的疼痛。通常，在單位劑型中，各組分或者單獨提供或者混合在一起提供，例如，在密閉容器例如標(biāo)明活性劑數(shù)量的安瓿或藥囊中作為冷凍干燥粉末或無水濃縮物。當(dāng)結(jié)構(gòu)式(I)化合物經(jīng)由輸液給藥時，例如，它可以用含無菌藥物級水或鹽水的輸液瓶進行配制。當(dāng)結(jié)構(gòu)式(I)化合物通過注射給藥時，提供安瓿的滅菌注射水或鹽水，這樣在給藥前可以將所述組分混合。
對于轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)給藥，在該制劑中使用適合滲透過屏障的滲透劑。這樣的滲透劑通常在本領(lǐng)域中是已知的。
用于口服給藥的藥物組合物例如可以以片劑、錠劑、水性或油性懸浮液、粒劑、粉末、乳劑、膠囊、糖漿劑或酏劑的形式存在?？诜o藥的藥物組合物可以含有一種或多種任選試劑，例如甜味劑如果糖、阿司帕坦或糖精，調(diào)味劑如薄荷、冬青油，或櫻桃著色劑以及防腐劑，以便獲得一種可口的制劑。此外，當(dāng)以片劑或丸劑形式存在時，所述的組合物可以進行包衣，以便延遲在胃腸道中的崩解和吸收，由此在延長期限內(nèi)獲得一種持續(xù)作用。包裹滲透性活性驅(qū)動化合物(driving compound)的選擇性滲透膜同樣適合于口服給藥的結(jié)構(gòu)式(I)化合物。在這些后者的平臺中，包圍膠囊的環(huán)境中的液體被驅(qū)動化合物吸收，該驅(qū)動化合物溶脹以通過孔隙替換出藥物或藥物組合物。與立即釋放制劑的尖鋒分布圖不同，這些釋放平臺可以提供一種基本上零級的釋放分布圖。還可以使用時間延遲物質(zhì)例如單硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯?？诜M合物可以包括標(biāo)準(zhǔn)賦形劑甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。這些賦形劑優(yōu)選是藥物級的。
對于口服液體藥劑例如，懸浮液、酏劑和溶液，合適的載體、賦形劑或稀釋劑包括水、鹽水、亞烷基二醇(例如，丙二醇)、聚(亞烷基)二醇(例如，聚乙二醇)油類、醇類、pH在4至6之間的略微酸性的緩沖液(例如，在約5.0mM至約50.0mM之間的乙酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸)等。此外，可以加入調(diào)味劑、防腐劑、著色劑、膽鹽、酰基肉堿等。
對于含服給藥，所述的藥物組合物可以采取片劑、糖錠等的形式，以常規(guī)方式進行配制。
適合與噴霧器、液體噴霧裝置和EHD氣溶膠裝置一起使用的液體藥物制劑通常包括結(jié)構(gòu)式(I)化合物和可藥用賦形劑。優(yōu)選地，所述的可藥用賦形劑是液體例如醇、水、聚乙二醇或全氟化碳。任選地，可以加入另外的物質(zhì)，以改變本發(fā)明化合物溶液或懸浮液的氣溶膠性質(zhì)。優(yōu)選地，這種物質(zhì)是液體例如醇、乙二醇、聚乙二醇或脂肪酸。適合在氣溶膠裝置中使用的配制液體藥物溶液或懸浮液的其它方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所已知的(例如，參見Biesalski，美國專利號5,112,598；Biesalski，美國專利號5,556,611)。
結(jié)構(gòu)式(I)化合物還可以配制成直腸或陰道的藥物組合物例如栓劑或保留灌腸劑，例如含常規(guī)栓劑基質(zhì)例如可可脂或其它甘油酯。
除前面所述的制劑外，結(jié)構(gòu)式(I)化合物還可以配制成儲存制劑。這些長效作用制劑可以通過植入給藥(例如，皮下注射或肌內(nèi))或通過肌內(nèi)注射給藥。因此，例如，結(jié)構(gòu)式(I)化合物可以與合適的聚合材料或疏水性材料(例如，以在可接受油中乳液的形式)或離子交換樹脂，或以微溶衍生物的形式例如以微溶鹽的形式，一起進行配制。
當(dāng)結(jié)構(gòu)式(I)化合物是酸性時，在上述任何制劑中包括游離酸、可藥用鹽、溶劑化物或水合物。基本上保持游離酸活性的可藥用鹽，可以通過與堿反應(yīng)進行制備，并且可藥用鹽比相應(yīng)的游離酸形式在含水和其它質(zhì)子溶劑中更易溶解。
5.8治療劑量結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物通常將以可有效地實現(xiàn)指定的目的的量使用。用于治療或預(yù)防特征在于異常血管生成的疾病或病癥、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病和肥胖癥時，結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或其藥物組合物將以治療有效量給予或施用。
在治療在此公開的具體疾病或病癥中，結(jié)構(gòu)式(I)化合物的量將取決于疾病或病癥的性質(zhì)，并且可以由之前所述的在本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)進行確定。此外，可以任選進行體外或體內(nèi)測定，以確定最佳的劑量范圍。當(dāng)然，結(jié)構(gòu)式(I)化合物的給藥量將取決于所治療的對象、所治療對象的體重、疾病的嚴(yán)重程度、給藥方式以及主治醫(yī)生的判斷等因素。
例如，在一種藥物組合物中，劑量可以由單一給藥、多次應(yīng)用或控制釋放遞送。在一種實施方案中，結(jié)構(gòu)式(I)化合物通過口服持續(xù)釋放給藥。優(yōu)選地，在此實施方案中，結(jié)構(gòu)式(I)化合物每天給藥兩次(更優(yōu)選每天給藥一次)?？梢灾芷谛缘刂貜?fù)劑量給藥，可以單獨提供或與其它藥物一起提供，并且如果需要有效治療疾病狀態(tài)或病癥，可以持續(xù)給藥。
口服給藥的合適劑量范圍取決于藥效，但是相對于每公斤體重，通常給予約0.001mg至約200mg的本發(fā)明化合物。劑量范圍可以很容易地由本領(lǐng)域普通普通技術(shù)人員根據(jù)已知方法進行確定。
靜脈注射(i.v.)給藥的合適劑量范圍在約0.01mg至約100mg每公斤體重之間。鼻內(nèi)給藥的合適劑量范圍在約0.01mg/kg體重至約1mg/kg體重之間。栓劑通常含有約0.01毫克至約50毫克的結(jié)構(gòu)式(I)化合物每公斤體重，并且包含約0.5％至約10％重量的活性成分。對于皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、硬膜外、舌下或腦內(nèi)給藥的情況，推薦的劑量為約0.001mg至約200mg每公斤體重。有效劑量可以從來源于體外或動物模型測試體系的劑量反應(yīng)曲線外推知。這些動物模型和體系在本領(lǐng)域中是公知的。
在人體中使用之前，優(yōu)選將結(jié)構(gòu)式(I)化合物進行體外和體內(nèi)測定，以獲得所需的治療活性或預(yù)防活性。例如，體外測定可以用于確定給予結(jié)構(gòu)式(I)的具體化合物或結(jié)構(gòu)式(I)化合物的組合是否優(yōu)選用于治療或預(yù)防特征在于異常血管形成、神經(jīng)變性疾病和肥胖癥的疾病或病癥。使用動物模型體系還可以證明本發(fā)明的化合物是有效的和安全的。
優(yōu)選地，在此所述的結(jié)構(gòu)式(I)化合物的治療活性劑量將提供治療益處，但是不會引起顯著的毒性。結(jié)構(gòu)式(I)化合物的毒性可以使用標(biāo)準(zhǔn)藥物方法進行確定，并且可以很容易地由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定。毒性作用和治療作用的劑量比是治療指數(shù)。在治療疾病和病癥中，結(jié)構(gòu)式(I)化合物優(yōu)選表現(xiàn)出特別高的治療指數(shù)。在此所述的結(jié)構(gòu)式(I)化合物的劑量將優(yōu)選在循環(huán)濃度的范圍內(nèi)，其包括很少或沒有毒性的活性劑量。
5.9聯(lián)合治療在本發(fā)明的某些實施方案中，結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或藥物組合物可以與至少一種其它治療劑進行聯(lián)合治療。結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或藥物組合物與該治療劑累加起作用，或更優(yōu)選起協(xié)同作用。在一些優(yōu)選實施方案中，結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或藥物組合物與其它藥物同時給藥，其中其它藥物可以是與結(jié)構(gòu)式(I)化合物部分相同的藥物組合物或者是不同的藥物組合物。在其它實施方案中，在給予其它藥物的之前或之后，給予結(jié)構(gòu)式(I)化合物的藥物組合物。
在一些實施方案中，結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或藥物組合物可以與其它化學(xué)治療劑進行聯(lián)合治療，例如烷基化試劑(例如，氮芥類(例如，環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、異磷酰胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、美法侖(melphalen)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、六甲三聚氰胺(hexamethylmelamine)、硫替派(thiotepa))，磺酸烷基酯(例如，白消安(busulfan))、亞硝基脲(三嗪)抗代謝物(例如，葉酸類似物、嘧啶類似物(例如，氟尿嘧啶(fluorouracil)、5-氟脲嘧啶脫氧核苷(floxuridine)、阿糖胞苷(cytosinearabinoside)等)，嘌呤類似物(例如，巰嘌呤(mercaptopurine)、thiogunaine、噴司他丁(pentostatin)等)，天然產(chǎn)物(例如，長春堿(vinblastine)、長春新堿(vincristine)、依托泊苷(etoposide)、terdiposide、更生霉素(dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、doxurubicin、博來霉素(bleomycin)、mithrmycin、絲裂霉素C(mitomycin C)、左天冬酰胺酶(L-asparaginase)、干擾素α(interferonalpha))，鉑配位絡(luò)合物(例如，順-鉑(cis-platinum)、卡鉑(carboplatin)等)，米托蒽醌(mitoxantrone)，羥基脲(hydroxyurea)，丙卡巴肼(procarbazine)，激素和拮抗劑(例如，潑尼松(prednisone)、己酸羥孕酮(hydroxyprogesteronecaproate)、醋酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、乙炔雌二醇(ethinylestradiol)、他莫昔芬(tamoxifen)、丙酸睪酮(testosterone propionate)、氟甲睪酮(fluoxymesterone)、氟他米特(flutamide)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide)等)，抗血管生成藥或抑制劑(例如，血管他丁(angiostatin)、維甲酸(retinoic acids)和紫杉醇(paclitaxel)、雌二醇衍生物、噻唑嘧啶衍生物等)，細胞凋亡誘導(dǎo)劑(例如，阻斷抑制細胞凋亡的致癌基因的反義核苷酸、腫瘤抑制劑、TRAIL、TRAIL多肽、與Fas有關(guān)的因子1、白細胞介素-1β-轉(zhuǎn)化酶、磷酸酪氨酸抑制劑、RXR類視色素受體激動劑、喹諾酮衍生物等)，螯合劑(青霉胺(penicillamine)、鋅、曲恩汀(trientine)等)以及其它減肥藥。
5.10治療試劑盒本發(fā)明提供治療試劑盒，其包含結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或藥物組合物。治療試劑盒還可以含有其它化合物(例如，化學(xué)治療劑、天然產(chǎn)物、激素或拮抗劑、抗血管生成藥或抑制劑、細胞凋亡誘導(dǎo)藥或螯合劑)和/或其藥物組合物。
治療試劑盒可以具有單個容器，其含有結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或藥物組合物，以及具有或者沒有其它組分(例如，其它化合物或其藥物組合物)；或者對于每個組分可以有不同的容器。優(yōu)選地，本發(fā)明的治療試劑盒包括結(jié)構(gòu)式(I)化合物和/或藥物組合物，以及與第二種化合物或其藥物組合物一起共同給藥(第二種藥物優(yōu)選是化學(xué)治療劑、天然產(chǎn)物、激素或拮抗劑、抗血管生成藥或抑制劑、細胞凋亡誘導(dǎo)藥或螯合劑)。試劑盒中的組分可以預(yù)先混合，或者在給予患者之前，將每種組分放在分開的容器中。
試劑盒中的組分可以以一種或多種液體溶液的形式提供，優(yōu)選以水溶液，更優(yōu)選以無菌水溶液的形式提供。試劑盒中的組分也可以以固體的形式提供，通過加入合適的溶劑(其優(yōu)選放在另外的不同容器中)以轉(zhuǎn)化為液體。
治療試劑盒的容器可以是管瓶、試管、燒瓶、瓶、注射器或用來包封固體或液體的任何其它容器。通常，當(dāng)存在多個組分時，所述的試劑盒含有第二個管瓶或其它容器，其可以將劑量分開。所述的試劑盒還可以含有用于可藥用液體的另一個容器。
優(yōu)選地，治療試劑盒將含有一些器件(例如，一個或多個針頭、注射器、滴眼管，吸管等)，其使試劑盒中的組分能夠施用。
6.實施例本發(fā)明通過下列實施例進一步進行說明，其詳細描述了本發(fā)明化合物的制備以及生物學(xué)活性測定的方法。顯然，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以在材料和方法方面進行不脫離本發(fā)明范圍的許多修飾。
6.1實施例1合成四硫代鎢酸鹽衍生物的一般方法將市場上可買到的氫氧化季銨的水溶液(2當(dāng)量)加入到四硫代鎢酸銨(1當(dāng)量)中，接著加入去離子水，直到所有固體物料溶解為止。將該溶液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，在真空(約5-10托)中20℃浴中維持一小時，需要時，補入水以保持恒定的體積。然后允許該反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干并從離子水和異丙醇中重結(jié)晶所得的黃色固體。經(jīng)過濾收集該固體，用異丙醇和乙醚洗滌，然后在真空干燥器中在P2O5存在下高真空干燥24小時。
6.2實施例2合成四硫代鎢酸鹽衍生物的一般方法將季銨鹵化物(2當(dāng)量)固體加入到四硫代鎢酸銨(1當(dāng)量)的干燥乙腈懸浮液(5mL每毫摩爾的四硫代鎢酸鹽)中并將所得混合物在室溫下于氮氣中攪拌18小時。如果該過程形成沉淀，經(jīng)過濾收集固體，使用異丙醇和乙醚洗滌并從去離子水和異丙醇中重結(jié)晶。經(jīng)過濾收集黃色結(jié)晶，用異丙醇和乙醚洗滌并在真空干燥器中在P2O5存在下高真空干燥24小時。如果溶液保持澄清，那么真空除去溶劑，將殘留物置于二氯甲烷中，用水洗滌三次、鹽水洗滌一次，干燥(Na2SO4)，濃縮溶液。在真空干燥器中在P2O5存在下高真空干燥所得的油或固體24小時。
6.3實施例3合成四硫代鎢酸鹽衍生物的一般方法將季銨鹵化物(2當(dāng)量)的去離子水溶液(10mL每毫摩爾四硫代鎢酸鹽)加入到四硫代鎢酸銨(1當(dāng)量)的干燥乙腈懸浮液(20mL每毫摩爾的四硫代鎢酸鹽)中并將所得混合物在室溫下于氮氣中攪拌18小時。如果該過程形成沉淀，經(jīng)過濾收集固體，使用水、異丙醇和乙醚洗滌，然后在真空干燥器中在P2O5存在下高真空干燥24小時。如果溶液保持澄清，那么首先過濾該反應(yīng)混合物，并真空濃縮濾液。所得固體從離子水和異丙醇中重結(jié)晶，經(jīng)過濾收集黃色結(jié)晶，用異丙醇和乙醚洗滌，然后在真空干燥器中在P2O5存在下高真空干燥24小時。
6.4實施例4四硫代鎢酸鹽，二(膽堿)根據(jù)實施例1的方法，由四硫代鎢酸銨(158mg，0.454mmol)和50％重量份的氫氧化膽堿(222mg，0.916mmol)水溶液制備該化合物，得到151mg(64％)標(biāo)題化合物，為亮黃色結(jié)晶IR(KBr，cm-1)3402，459；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.21(t，J＝4.8Hz，2H)，3.88-3.81(m，4H)，3.46-3.43(m，4H)，3.14(s，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ66.8(2C)，55.2(2C)，53.1(6C)；ES MS m/z(膽堿)+104.3；UV(H2O)393.5nm(ε＝16730).C10H28N2O2S4W的計算值C，23.08；H，5.42；N，5.38；S，24.65.測定值C，23.17；H，5.28；N，5.43；S，24.87.
6.5實施例5四硫代鎢酸鹽，二(三乙基甲基銨)根據(jù)實施例1的方法，由四硫代鎢酸銨(164mg，0.471mmol)和20％重量份的氫氧化三乙基甲基銨(627mg，0.941mmol)水溶液制備該化合物，得到147mg(61％)標(biāo)題化合物，為亮黃色結(jié)晶IR(KBr，cm-1)460；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.29(q，J＝6.9Hz，12H)，2.91(s，6H)，1.21(t，J＝6.9Hz，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ55.0(6C)，46.0(2C)，7.5(6C)；ES MS m/z(三乙基甲基銨)+116.4；UV(H2O)393.5nm(ε＝16730).C14H36N2S4W的計算值C，30.88；H，6.66；N，5.14；S，23.55.測定值C，30.87；H，6.33；N，5.18；S，23.77.
6.6實施例6四硫代鎢酸鹽，二(三乙基苯基銨)根據(jù)實施例1的方法，由四硫代鎢酸銨(155mg，0.444mmol)和10％重量份的氫氧化三乙基苯基銨(1.74g，0.889mmol)水溶液制備該化合物，得到198mg(69％)標(biāo)題化合物，為亮黃色結(jié)晶IR(KBr，cm-1)455；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.92(d，J＝8.4Hz，4H)，7.71-7.57(m，6H)，3.91(q，J＝7.1Hz，12H)，1.06(t，J＝7.1Hz，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ141.7(2C)，130.4(4C)，130.0(2C)，122.6(4C)，55.3(6C)，7.8(6C)；ES MS m/z(三乙基苯基銨)+178.4；UV(H2O)393.5nm(ε＝15600).C24H40N2S4W的計算值C，43.11；H，6.03；N，4.19；S，19.18.測定值C，42.99；H，5.73；N，4.25；S，19.31.
6.7實施例7四硫代鎢酸鹽，二(1，4-二甲基吡啶鎓)根據(jù)實施例2的方法，由四硫代鎢酸銨(163mg，0.467mmol)和碘化1，4-二甲基吡啶鎓(221mg，0.940mmol)制備該化合物，得到143mg(58％)標(biāo)題化合物，為亮黃色結(jié)晶IR(KBr，cm-1)458；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.88(d，J＝6.4Hz，4H)，7.96(d，J＝6.4Hz，4H)，4.32(s，6H)，2.60(s，6H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ158.1(2C)，144.8(4C)，128.0(4C)，47.1(2C)，21.4(2C)；ES MS m/z(1，4-二甲基吡啶鎓)+108.3；UV(H2O)393.5nm(ε＝16030).C14H20N2S4W的計算值C，31.82；H，3.81；N，5.30；S，24.27.測定值C，31.67；H，3.77；N，5.32；S，24.13.
6.8實施例8四硫代鎢酸鹽，二(1，4-二甲基吡咯鎓)根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨(300mg，0.861mmol)和碘化1，1-二甲基吡咯鎓(400mg，1.76mmol)制備該化合物，得到223mg(51％)標(biāo)題化合物，為亮黃色結(jié)晶IR(KBr，cm-1)455；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.53-3.47(m，8H)，3.13(s，12H)，2.14-2.08(m，8H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ64.8(4C)，51.0(4C)，21.5(4C)；ES MS m/z(1，1-二甲基吡咯鎓)+100.3；UV(H2O)393.5nm(ε＝16950).C12H28N2S4W的計算值C，28.12；H，5.51；N，5.47；S，25.03.測定值C，27.90；H，5.47；N，5.56；S，25.01.
6.9實施例9四硫代鎢酸鹽，二(三甲基苯基銨)根據(jù)實施例2的方法，由四硫代鎢酸銨(167mg，0.479mmol)和氯化苯基三甲基銨(166mg，0.968mmol)制備該化合物，得到139mg(50％)標(biāo)題化合物，為亮黃色結(jié)晶IR(KBr，cm-1)459；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.99(d，J＝8.2Hz，4H)，7.68-7.55(m，6H)，3.64(s，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ147.3(2C)，130.1(4C)，130.0(2C)，120.5(4C)，56.4(6C)；ES MS m/z(三甲基苯基銨)+136.2；UV(H2O)394.0nm(ε＝15630).C18H28N2S4W的計算值C，36.99；H，4.83；N，4.79；S，21.94.測定值C，36.88；H，4.72；N，4.90；S，21.92.
6.10實施例10四硫代鎢酸鹽，二(乙酰膽堿)根據(jù)實施例2的方法，由四硫代鎢酸銨(171mg，0.491mmol)和氯化乙酰膽堿(179mg，0.987mmol)制備該化合物，得到163mg(55％)標(biāo)題化合物，為亮黃色結(jié)晶IR(KBr，cm-1)1749，1729，473，456；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ4.47-4.41(m，4H)，3.72-3.69(m，4H)，3.16(s，18H)，2.07(s，6H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ169.9(2C)，63.8(2C)，57.9(2C)，53.0(6C)，20.7(2C)；ES MS m/z(乙酰膽堿)+146.4；UV(H2O)393.5nm(ε＝15400).C14H32N2O4S4W的計算值C，27.82；H，5.34；N，4.63；S，21.22.測定值C，27.62；H，5.12；N，4.68；S，20.71.
6.11實施例11四硫代鎢酸鹽，二[烷基二甲基(苯甲基)銨]根據(jù)實施例2的方法，由四硫代鎢酸銨(320mg，0.920mmol)和氯化苯甲烴銨(664mg，1.84mmol)制備該化合物，得到651mg(74％)標(biāo)題化合物，為稠的、紅色油狀物
IR(膜，cm-1)466；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.59-7.48(m，10H)，4.56(s，4H)，3.31-3.23(m，4H)，2.97(s，12H)，1.84-1.72(m，4H)，1.32-1.22(m，40H)，0.88-0.82(m，6H)；ES MS m/z[十二烷基二甲基(苯甲基)銨]+304.7，[十四烷基二甲基(苯甲基)銨]+332.7；UV(DMSO)399.0nm(ε＝10400).
6.12實施例12四硫代鎢酸鹽，環(huán)庚基二膽堿根據(jù)實施例2的方法，由四硫代鎢酸銨(299mg，0.860mmol)和二碘化環(huán)庚基二膽堿(516mg，0.860mmol)制備該化合物，得到115mg(20％)標(biāo)題化合物，為亮黃色結(jié)晶IR(KBr，cm-1)1733，1719，455；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ4.48-4.42(m，4H)，3.73-3.69(m，4H)，3.17(s，18H)，2.35(t，J＝7.4Hz，4H)，1.59-1.48(m，4H)，1.32-1.26(m，4H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ172.3(2C)，63.7(2C)，57.7(2C)，52.8(6C)，33.2(2C)，28.0(2C)，23.9(2C)；UV(H2O)394.0nm(ε＝15570)6.13實施例13四硫代鎢酸鹽，戊烷-1，5-二(三甲基銨)根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨(140mg，0.402mmol)和N，N-戊基亞甲基二(碘化三甲基銨)(195mg，0.442mmol)制備該化合物，得到109mg(54％)標(biāo)題化合物，為亮黃色粉末IR(KBr，cm-1)456；1H NMR(300MHz，D2O)δ3.34-3.26(m，4H)，3.07(s，18H)，1.89-1.77(m，4H)，1.45-1.34(m，2H)；UV(H2O)394.0nm(ε＝15950).C11H28N2S4W的計算值C，26.40；H，5.64；N，5.60；S，25.63.測定值C，26.60；H，5.26；N，5.75；S，24.64.
6.14實施例14四硫代鎢酸鹽，丁烷-1，4-二(三甲基銨)根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨(200mg，0.574mmol)和N，N-四亞甲基二(碘化三甲基銨)(271mg，0.632mmol)制備該化合物，得到185mg(66％)標(biāo)題化合物，為亮黃色粉末IR(KBr，cm-1)456；1H NMR(300MHz，D2O)δ3.45-3.35(m，4H)，3.11(s，18H)，1.92-1.82(m，4H)；UV(H2O)394.0nm(ε＝15990).C10H26N2S4W的計算值C，24.69；H，5.39；N，5.76；S，26.37.測定值C，24.77；H，5.35；N，5.85；S，25.80.
6.15實施例15四硫代鎢酸鹽，丙烷-1，3-二(三甲基銨)根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨(201mg，0.578mmol)和N，N-三亞甲基二(碘化三甲基銨)(263mg，0.635mmol)制備該化合物，得到192mg(70％)標(biāo)題化合物，為亮黃色粉末IR(KBr，cm-1)456；UV(H2O)393.5nm(ε＝16190).C9H24N2S4W的計算值C，22.88；H，5.12；N，5.93；S，27.15.測定值C，22.94；H，5.01；N，6.01；S，26.79.
6.16實施例16四硫代鎢酸鹽，亞乙基-二(三甲基銨)根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨(200mg，0.573mmol)和亞乙基二(碘化三甲基銨)(249mg，0.623mmol)制備該化合物，得到171mg(65％)標(biāo)題化合物，為亮黃色粉末IR(KBr，cm-1)459；UV(H2O)393.5nm(ε＝15720).C8H22N2S4W的計算值C，20.96；H，4.84；N，6.11；S，27.98.測定值C，20.88；H，4.71；N，6.21；S，27.39.
6.17實施例17四硫代鎢酸鹽，二(N-芐基-2-苯基乙基銨)根據(jù)實施例3的方法，再添加6ml的去離子水，由四硫代鎢酸銨(295mg，0.848mmol)和氯化N-芐基-2-苯基乙基銨(422mg，1.70mmol)制備該化合物，得到317mg(51％)標(biāo)題化合物，為橙色固體IR(KBr，cm-1)455；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.83(br s，4H)，7.57-7.52(m，4H)，7.48-7.40(m，6H)，7.36-7.23(m，10H)，4.22(s，4H)，3.21-3.15(m，4H)，3.03-2.95(m，4H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ137.4(2C)，132.5(2C)，130.0(4C)，128.9(2C)，128.72(8C)，128.68(4C)，126.8(2C)，50.6(2C)，48.1(2C)，31.8(2C)；ES MS m/z[N-芐基-2-苯基乙基銨]+212.4；UV(DMSO)399.5nm(ε＝16270).
6.18實施例18四硫代鎢酸鹽，二(1-乙基-3-甲基-1H-咪唑鎓)根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨、二(銨)(0.400g，1.15mmol)和氯化1-乙基-3-甲基-1H-咪唑鎓(0.354g，2.41mmol)制備該化合物，得到(0.217g，35％)標(biāo)題化合物，為亮黃色固體IR(KBr pellet，cm-1)3438，3068，1569，1560，1169，450；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.22(s，1H)，7.78(s，1H)，7.70(s，1H)，4.21(q，2H，J＝7.3Hz)，3.31(s，3H)，1.42(t，3H，J＝7.3Hz)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ136.4，123.4，121.8，44.0，35.6，15.1；MS m/z(C6H11N2)+111.3；UV(H2O)394nm(ε＝15,891)；C12H22N4WS4的計算值C，26.97；H，4.15；N，10.48；S，24.00.測定值C，26.91，H，3.92，N，10.55；S，23.67.
6.19實施例19四硫代鎢酸鹽，二(芐基三甲基銨)根據(jù)實施例1的方法，由四硫代鎢酸銨、二(銨)(0.200g，0.574mmol)和氫氧化芐基三甲基銨(0.48g的40％水溶液，1.15mmol)制備該化合物，得到(0.246g，70％)標(biāo)題化合物，為亮黃色固體IR(KBr pellet，cm-1)3446，2999，1456，458；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.53-7.55(m，10H)，4.56(s，4H)，3.05(s，18H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ132.7，130.2，128.8，128.3，67.7，51.7(t)；MS m/z(C10H16N)+150.3；UV(H2O)394nm(ε＝15,027)；C20H32N2WS4的計算值C，39.21；H，5.27；N，4.57；S，20.94.測定值C，39.28，H，4.88，N，4.65；S，20.89.
6.20實施例20四硫代鎢酸鹽，二(2-羥基亞胺甲基-1-甲基-吡啶鎓)根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨、二(銨)(0.200g，0.574mmol)和2-吡啶醛肟甲基氯化物(2-pyridinealdoxime methochloride)(0.198g，1.15mmol)制備該化合物，得到(0.198g，59％)標(biāo)題化合物，為亮黃色固體IR(KBr pellet，cm-1)3077，1508，1005，455；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.04(d，1H，J＝5.9Hz)，8.68(s，1H)，8.55(app t，1H)，8.37(d，1H，J＝8.0Hz)，8.07(app t，1H)，4.39(s，3H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ147.3，146.7，144.8，141.7，127.1，124.7，46.1；MS m/z(C7H9N2O)+137.2；UV(H2O)394nm(ε＝15380)；C14H18N4O2WS4的計算值C，28.67；H，3.09；N，9.55；S，21.87.測定值C，28.51，H，2.87，N，9.63；S，21.55.
6.21實施例21四硫代鎢酸鹽，二(乙?；?β-甲基膽堿)根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨、二(銨)(0.200g，0.574mmol)和氯化乙?；?β-甲基膽堿(0.235g，1.20mmol)制備該化合物，得到(0.115g，32％)標(biāo)題化合物，為亮黃色固體IR(KBr pellet，cm-1)3452，3008，1735，1252，454；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.27(m，1H)，3.58-3.74(m，2H)，3.13(s，9H)，2.06(s，3H)，1.24(d，3H，J＝6.3Hz)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ169.5，67.6，65.2，53.2，21.1，18.5；MS m/z(C8H18NO2)+160.3；UV(H2O)394nm(ε＝15831)；C16H36N2O4S4W的計算值C，30.38；H，5.74；N，4.43；S，20.28.測定值C，30.10，H，5.62，N，4.47；S，20.47.
6.22實施例22四硫代鎢酸鹽，琥珀酰膽堿根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨、二(銨)(0.400g，1.15mmol)和氯化琥珀酰膽堿二水合物(0.456g，1.15mmol)制備該化合物，得到(0.414g，60％)標(biāo)題化合物，為亮黃色固體
IR(KBr pellet，cm-1)3005，1732，1208，1150，455；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ4.47(m，4H)，3.68-3.72(m，4H)，3.30(d，18H，J＝4.2Hz)，2.66(m，4H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ171.3，58.0，52.9，28.4；UV(H2O)394nm(ε＝15513)；C14H30N2O4S4W的計算值C，27.91；H，5.02；N，4.65；S，21.29.測定值C，27.84，H，4.80，N，4.66；S，21.06.
6.23實施例23四硫代鎢酸鹽，(亞乙基-1，2-二銨)根據(jù)實施例3的方法，由四硫代鎢酸銨、二(銨)(0.300g，0.862mmol)、氯化銨(0.092g，1.72mmol)和乙二胺(57.61μl，0.862mmol)制備該化合物，得到(0.257g，80％)標(biāo)題化合物，為亮黃色固體IR(KBr pellet，cm-1)3002，1435，1025，451；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.89(bs，6H)，3.09(s，4H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ36.8；UV(H2O)394nm(ε＝13291)；C2H10N2S4W的計算值C，6.42；H，2.69；N，7.49；S，34.27.測定值C，6.58，H，2.43，N，7.49；S，32.98.
6.24實施例24四硫代鎢酸鹽的濕度穩(wěn)定性于室溫、95％相對濕度的條件下，將四硫代鎢酸鹽置于丙烯酸室中兩周。除了在493nm處監(jiān)測吸光度且摩爾吸光率為15710M-1cm-1之外，根據(jù)先前報道的方法進行純度分析(McDonald et.al.，Inorg.Chim.Acta 1983，72，205-210)。結(jié)果報道于下表1中。
表1
*部分可溶++2個數(shù)值點的平均6.25實施例25四硫代鎢酸鹽的銅結(jié)合能力根據(jù)四硫代鎢酸鹽抑制半胱氨酸自氧化的能力測定了四硫代鎢酸鹽的銅結(jié)合能力，如下表2所示。
表2半胱氨酸自氧化的抑制(100μM Cys，100μM香豆素-3-羧酸，100μMCuSO4)
6.25實施例25Matrigel栓塞測定法中四硫代鎢酸銨對于血管生成的抑制在如上5.4.7節(jié)描述的Matrigel栓塞測定法中測定四硫代鎢酸銨。使用兩種陽性對照，當(dāng)治療開始時植入五天后測量陽性對照1且在治療結(jié)束時植入五天后測量陰性對照2。使用兩種陰性對照，當(dāng)治療開始時植入五天后測量陰性對照1且在治療結(jié)束時植入五天后測量陰性對照2。如附圖1所示，使用四硫代鎢酸銨治療導(dǎo)致該測試約34％抑制。
最后，應(yīng)該注意到實施本發(fā)明有幾種可供選擇的途徑。因此，本發(fā)明的實施方案應(yīng)當(dāng)被認為是舉例說明而不是限制性的，本發(fā)明并不受在此給出的這些細節(jié)的限制，而是可以在所附權(quán)利要求的范圍和在同等物的范圍內(nèi)進行修飾。本文提到的所有公開的文獻和專利文獻均全部引入作為參考。
權(quán)利要求
1.結(jié)構(gòu)式(I)化合物或其溶劑化物、水合物或N-氧化物， 其中R1、R2、R3、R5、R6和R7獨立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基；R4和R8獨立地是氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、取代環(huán)雜烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜芳基烷基、取代雜芳基烷基、雜烷基或取代雜烷基、或者當(dāng)N是芳環(huán)的一部分時則不存在；任選地，R1和R2一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R5和R6一起，R6和R7一起以及R6和R8一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；任選地，R3和R7一起是烷二基、取代烷二基、雜烷二基或取代雜烷二基；以及Y-2是(WS4)-2、(W2S12)-2、(W2S9)-2、(W2S7)-2、(W2S8)-2、(W2S11)-2、(W2S6)-2或(W2S13)-2。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中Y是(WS4)-2。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中
4.權(quán)利要求3的化合物，其中Y是(WS4)-2。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2、R3和R4中至少一個不是烷基。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中至少一個不是烷基。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R4是氫、烷基或取代烷基。
8.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R4是氫、甲基或乙基。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2是烷基。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2是甲基或乙基。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、芳基、取代芳基、芳烷基、取代芳烷基、環(huán)烷基或取代環(huán)烷基。
12.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。
13.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2一起是亞烷基或雜亞烷基。
14.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。
15.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2一起，R2和R3一起以及R2和R4一起是亞烷基。
16.權(quán)利要求1的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N結(jié)構(gòu)為
17.權(quán)利要求1的化合物，其中R3和R7一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。
18.權(quán)利要求1的化合物，其中R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。
19.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R4是氫、烷基或取代烷基，以及R3是烷基、取代烷基、烯基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基，或者R3和R7一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基。
20.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3是烷基、取代烷基、烯基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基，或者R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。
21.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3是烷基、取代烷基、烯基、芳基、芳烷基或環(huán)烷基。
22.權(quán)利要求1的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N結(jié)構(gòu)為 或
23.權(quán)利要求1的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N結(jié)構(gòu)為
24.權(quán)利要求1的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N結(jié)構(gòu)為
25.權(quán)利要求1的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N結(jié)構(gòu)為
26.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R4是甲基或乙基，以及R3和R7一起是亞烷基或雜亞烷基。
27.權(quán)利要求1的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N結(jié)構(gòu)為 或
28.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R4是氫，以及R3是取代烷基、環(huán)烷基或取代雜芳基，或者R3和R7一起是亞烷基。
29.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2是烷基以及R3和R4是氫、烷基、取代烷基、芳基、芳烷基或亞烷基。
30.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2是甲基或乙基以及R3和R4是氫、烷基、取代烷基、芳基、芳烷基或亞烷基。
31.權(quán)利要求1的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N結(jié)構(gòu)為 或 其中R9是具有至少八個碳原子且不超過十八個碳原子的直鏈烷基的混合基團。
32.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R4是氫，以及R3是取代烷基、取代雜芳基、環(huán)烷基或亞烷基。
33.權(quán)利要求1的化合物，其中R1(R2)(R3)(R4)N結(jié)構(gòu)為 或
34.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2一起是亞烷基、取代亞烷基、雜亞烷基或取代雜亞烷基，R3是烷基或取代烷基以及R4是氫或不存在。
35.權(quán)利要求1的化合物，其中R1(R2)(R3)N或R1(R2)(R3)(R4)N結(jié)構(gòu)為 或
36.一種藥物組合物，包含權(quán)利要求1的化合物以及可藥用稀釋劑、賦形劑或輔料。
37.一種治療或預(yù)防患者癌癥的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
38.一種治療或預(yù)防患者癌癥的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求36藥物組合物。
39.權(quán)利要求36的方法，進一步包括向需要該治療的患者給予治療有效量的另一種抗癌藥或包含另一種抗癌藥和可藥用稀釋劑、賦形劑或輔料的藥物組合物。
40.權(quán)利要求37的方法，進一步包括向需要該治療的患者給予治療有效量的另一種抗癌藥或包含所述另一種抗癌藥和可藥用稀釋劑、賦形劑或輔料的藥物組合物。
41.權(quán)利要求36的方法，進一步包括向需要該治療的患者給予治療有效量的鋅或鋅的藥物組合物。
42.權(quán)利要求37的方法，進一步包括向需要該治療的患者給予治療有效量的鋅或包含鋅和可藥用稀釋劑、賦形劑或輔料的藥物組合物。
43.權(quán)利要求36的方法，其中癌癥是乳腺癌、腎癌、腦癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、軟骨肉瘤或血管肉瘤。
44.一種治療或預(yù)防患者濕型黃斑變性或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
45.一種治療或預(yù)防患者濕型黃斑變性或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求36藥物組合物。
46.一種治療或預(yù)防患者異常血管生成的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
47.一種治療或預(yù)防患者異常血管生成的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求36藥物組合物。
48.一種治療或預(yù)防患者銅水平過量的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
49.一種治療或預(yù)防患者銅水平過量的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求36藥物組合物。
50.一種治療或預(yù)防患者肥胖癥的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
51.一種治療或預(yù)防患者肥胖癥的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求36藥物組合物。
52.權(quán)利要求50的方法，進一步包括向需要該治療的患者給予治療有效量的另一種抗肥胖藥或包含另一種抗肥胖藥和可藥用稀釋劑、賦形劑或輔料的藥物組合物。
53.權(quán)利要求51的方法，進一步包括向需要該治療的患者給予治療有效量的另一種抗肥胖藥或包含另一種抗肥胖藥和可藥用稀釋劑、賦形劑或輔料的藥物組合物。
54.一種治療或預(yù)防患者神經(jīng)變性疾病的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
55.一種治療或預(yù)防患者神經(jīng)變性疾病的方法，包括向需要該治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求36藥物組合物。
56.權(quán)利要求55的方法，其中神經(jīng)變性疾病為阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥和朊病毒病。
57.權(quán)利要求56的方法，其中神經(jīng)變性疾病為阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥和朊病毒病。
全文摘要
本發(fā)明提供新型四硫代鎢酸鹽衍生物，新型四硫代鎢酸鹽衍生物的制備方法，新型四硫代鎢酸鹽衍生物的藥物組合物，使用新型四硫代鎢酸鹽衍生物治療或預(yù)防與異常血管生成有關(guān)的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病和肥胖癥，以及使用四硫代鎢酸鹽衍生物的藥物組合物治療或預(yù)防與異常血管生成有關(guān)的疾病、銅代謝紊亂、神經(jīng)變性疾病、肥胖癥或NF－κB調(diào)節(jié)障礙的方法。
文檔編號C07D207/32GK1832761SQ200480021514
公開日2006年9月13日 申請日期2004年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月27日
發(fā)明者羅伯特·J·特南斯基, 帕特里夏·L·格拉德斯通, 埃米·L·阿倫, 梅利莎·L·P·普賴斯, 安德魯·P·馬扎爾 申請人:阿特努奧恩公司