專利名稱：含p6a相關(guān)序列的咔啉羧酸,它們的合成及在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及P6A相關(guān)序列的保護(hù)中間體化合物以及脫保護(hù)產(chǎn)物的化合物，涉及將脫保護(hù)產(chǎn)物的化合物與咔啉羧酸的羧基偶聯(lián)并脫保護(hù)生成相應(yīng)的擬肽，以及將脫保護(hù)產(chǎn)物的化合物與咔啉羧酸的仲氨基偶聯(lián)并脫保護(hù)生成相應(yīng)的擬肽；涉及它們的制備方法，以及進(jìn)一步涉及它們在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用，例如作為溶血栓劑的應(yīng)用。
本發(fā)明按圖2所示的路線采用正交策略從Boc保護(hù)的L-氨基酸出發(fā)采用液相方法逐步接肽，制得通式(2)的保護(hù)寡肽中間體。其中Boc-AA3OH共同為OBzl或AA3為Ala殘基。
本發(fā)明按圖3所示的路線在HF的作用下將通式(1)的化合物脫保護(hù)得通式(3)的化合物；在HCl的作用下將通式(1)的化合物脫保護(hù)得通式(4)的化合物；在NaOH的作用下將通式(1)的化合物脫保護(hù)得通式(5)的化合物。其中AA1和AA2的定義同

圖1，AA1’和AA2’共同為H；或AA1’為A，G，Q，K，R，N，或AA2’為Arg殘基；或AA1’為H，AA2’為Arg殘基。
如圖4所示，將通式(4)的化合物與N-Boc-咔啉羧酸的羧基縮合，縮合產(chǎn)物經(jīng)HF脫保護(hù)得通式(6)的化合物。其中AA1和AA2的定義同圖1，AA1’和AA2’共同為H；或AA1’為A，G，Q，K，R，N，或AA2’為Arg殘基；或AA1’為H，AA2’為Arg殘基。
如圖5所示，將通式(5)的化合物與咔啉羧酸芐酯的氨基縮合，縮合產(chǎn)物經(jīng)HF脫保護(hù)得通式(7)的化合物。其中AA1和AA2的定義同圖1，AA1’和AA2’共同為H；或AA1’為A，G，Q，K，R，N，或AA2’為Arg殘基；或AA1’為H，AA2’為Arg殘基。
本發(fā)明按圖6所示的路線在HF的作用下將通式(2)的化合物脫保護(hù)得通式(8)的化合物；在HCl的作用下將通式(2)的化合物脫保護(hù)得通式(9)的化合物；在NaOH的作用下將通式(2)的化合物脫保護(hù)得通式(10)的化合物。其中AA3的定義同圖2，AA3為Ala殘基或AA3缺失。
如圖7所示，將通式(9)的化合物與N-Boc-咔啉羧酸的羧基縮合，縮合產(chǎn)物經(jīng)HF脫保護(hù)得通式(11)的化合物。其中AA3的定義同圖2，AA3為Ala殘基或AA3缺失。
如圖8所示，將通式(10)的化合物與咔啉羧酸芐酯的氨基縮合，縮合產(chǎn)物經(jīng)HF脫保護(hù)得通式(12)的化合物。其中AA3的定義同圖2，AA3為Ala殘基或AA3缺失。
圖2是P6A代謝產(chǎn)物的合成路線。
圖3是P6A相關(guān)系列的保護(hù)多肽脫Boc、皂化，以及脫保護(hù)。
圖4是通式(4)的保護(hù)多肽與N-Boc-咔啉羧酸偶聯(lián)、脫保護(hù)。
圖5是通式(5)的保護(hù)多肽與咔啉羧酸芐酯偶聯(lián)、脫保護(hù)。
圖6是P6A代謝產(chǎn)物的保護(hù)多肽脫Boc、皂化，以及脫保護(hù)。
圖7是通式(9)的保護(hù)多肽與N-Boc-咔啉羧酸偶聯(lián)、脫保護(hù)。
圖8是通式(10)的保護(hù)多肽與咔啉羧酸芐酯偶聯(lián)、脫保護(hù)。
本發(fā)明采用大鼠動靜脈旁路模型評價了通式(3)，(6)，(7)，(8)，(11)和(12)的化合物的溶血栓活性。結(jié)果表明，本發(fā)明提供的擬肽不僅具有優(yōu)秀的溶栓作用，而且這種溶栓作用有明確的結(jié)構(gòu)依賴性。
為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。
在化學(xué)實(shí)施例中，使用的保護(hù)氨基酸均為L構(gòu)型，中間體和產(chǎn)物的純度以TLC確認(rèn)，F(xiàn)AB-MS用英國VG公司生產(chǎn)的ZAB-MS型高分辨GC/MS/DS聯(lián)用儀測定。電噴霧質(zhì)譜由美國HP公司生產(chǎn)的ES-5989X型質(zhì)譜儀測定。旋光用Schmidt+Haensch公司生產(chǎn)的旋光儀(Polartronic D型)測定。熔點(diǎn)用顯微熔點(diǎn)儀測定，溫度計未校正。層析用硅膠由青島海洋化工廠生產(chǎn)。Sephadex購自Sigma公司。
實(shí)施例1.Boc-Lys(ClZ)-OBzl的制備160mg(0.491mmol)Cs2CO3溶于蒸餾水，加入到400mg(0.966mmol)Boc-Lys(ClZ)-OH的無水乙醇溶液中，40min后減壓除去溶劑，殘留物置干燥器過夜，得白色固體，該固體溶于無水DMF，滴加0.112ml(0.98mmol)溴芐，于50℃攪拌16hr后，濾除CsBr沉淀，濾液減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解后，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌。分出的有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液在37℃下減壓濃縮，得標(biāo)題化合物480mg(98.5％)，為無色油狀物。
實(shí)施例2.HCl·Lys(ClZ)-OBzl的制備100mg(0.2mmol)Boc-Lys(ClZ)-OBzl溶于3ml 4mol/L無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，20min后有白色沉淀生成，2hr后TLC(氯仿/甲醇，40/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，抽去乙醚，得白色固體，該固體用石油醚(60-90℃)浸泡，傾去石油醚，如此反復(fù)數(shù)次后抽干得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例3.Boc-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備38mg(0.2mmol)Boc-Ala-OH溶于3ml無水THF中，冰浴下加入30mg(0.22mmol)N-羥基苯并三氮唑和45mg(0.22mmol)DCC?；旌?3min后待用。將88mg(0.2mmol)HCI·Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水THF，滴加N-甲基嗎啉使pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反應(yīng)2hr后，室溫反應(yīng)4hr，TLC(氯仿/甲醇，30/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌。分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物112mg(98％)，mp94-96℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)5 75[M+H]+，475[M-Boc]+。
實(shí)施例4.HCl·Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備115mg(0.2mmol)Boc-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于4ml 4mol/L無水氯化氯/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，2hr后TLC(氯仿/甲醇，30/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例5.Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備
280mg(1.3mmol)Boc-Pro-OH溶于30ml無水THF中，冰浴下加入170mg(1.26mmol)N-羥基苯并三氮唑和270mg(1.31mmol)DCC，混合30min后待用。將657mg(1.28mmol)HCI.Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水THF，滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反應(yīng)2hr后，室溫反應(yīng)6hr，TLC(氯仿/甲醇，20/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物134mg(98％)mp86-88℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)674[M+H]+實(shí)施例6.HCl·Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備128mg(0.19mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，5hr后TLC(氯仿/甲醇，20/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫，殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例7.Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將45mg(0.074mmol)HCI Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入33mg(0.077mmol)Boc-Arg(Tos)-OH，10mg(0.074mmol)N-羥基苯并三氮唑和16mg(0.077mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，15/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物70mg(96％)mp68-70℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)984[M+H]+。
實(shí)施例8.HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備128mg(0.13mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，5hr后TLC(氯仿/甲醇，15/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例9.Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備320mg(1.69mmol)Boc-Ala-OH溶于40ml無水THF中，冰浴-下加入220mg(1.63mmol)N-羥基苯并三氮唑和350mg(1.70mmol)DCC，混合30min后待用。將1490mg(1.63mmol)HCI.Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于25ml無水THF，滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反應(yīng)2hr后，室溫反應(yīng)16hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物粗品，經(jīng)200-300目硅膠常壓柱層析(展開劑CHCl3/CH3OH，30/1)分離純化，得白色泡狀粉末1620mg(94％)mp96-98℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1076.7[M+Na]+，1093.4[M+K]+，954.9[M-Boc]+。
實(shí)施例10.Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備200mg(1.14mmol)Boc-Gly-OH溶于40ml無水THF中，冰浴下加入150mg(1.11mmol)N-羥基苯并三氮唑和235mg(1.14mmol)DCC，混合30min后待用。將930mg(1.01mmol)HCI.Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于15ml無水THF，滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反應(yīng)2hr后，室溫反應(yīng)12hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物粗品，經(jīng)200-300目硅膠常壓柱層析(展開劑CHCl3/CH3OH，30/1)分離純化，得白色泡狀粉末770mg(73％)，mp82-84℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1038.6[M+H]+，1061.7[M+Na]+。
實(shí)施例11.Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備340mg(0.82mmol)Boc-Lys(ClZ)-OH溶于40ml無水THF中，冰浴下加入110mg(0.82mmol)N-羥基苯并三氮唑和170mg(0.82mmol)DCC，混合30min后待用。將746mg(0.81mmol)HCl.Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于50ml無水THF，滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反應(yīng)2hr后，室溫反應(yīng)16hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物粗品，經(jīng)200-300目硅膠常壓柱層析(展開劑CHCl3/CH3OH，30/1)分離純化，得白色泡狀粉末850mg(81％)，mp78-88℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1111.3[M+H]+，1132.5[M+Na]+，1010.0[M-Boc]+。
實(shí)施例12.Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將467mg(0.51mmol)HCl.Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水DMF，滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，加入Boc-Gln-ONp195mg(0.53mmol)，室溫反應(yīng)96hr，TLC(氯仿/甲醇，9/1)顯示原料點(diǎn)基本消失，停止反應(yīng)，室溫吹干溶劑，殘留物用氯仿溶解，直接經(jīng)200-300目硅膠常壓柱層析(展開劑CHCl3/CH3OH，10/1)分離純化，得白色泡狀粉末450mg(80％)，mp80-82℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1111.3[M+H]+，1132.5[M+Na]+，1010.0[M-Boc]+。
實(shí)施例13.Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將1160mg(1.26mmol)HCI.Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于50ml無水DMF，滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，加入Boc-Asn-ONp500mg(1.41mmol)，室溫反應(yīng)96hr，TLC(氯仿/甲醇，9/1)顯示原料點(diǎn)基本消失，停止反應(yīng)，室溫吹干溶劑，殘留物用氯仿溶解，直接經(jīng)200-300目硅膠常壓柱層析(展開劑CHCl3/CH3OH，15/1)分離純化，得白色泡狀粉末800mg(57％)，mp86-88℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1097[M+H]+。
實(shí)施例14.Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將1636mg(1.78mmol)HCl Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入760mg(1.77mmol)Boc-Arg(Tos)-OH，240mg(1.78mmol)N-羥基苯并三氮唑和370mg(1.80mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)基本消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌。分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物粗品，經(jīng)200-300目硅膠常壓柱層析(展開劑CHCl3/CH3OH，30/1)分離純化，得到標(biāo)題化合物1330mg(58％)，mp90-92℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1293[M+H]+。
實(shí)施例15.H-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備250mg(0.237mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物100mg(77.8％)，mp224-6℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)542[M+H]+。
實(shí)施例16.H-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備300mg(0.289mmol)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物150mg(98％)，mp168-170℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)528[M+H]+。
實(shí)施例17.H-Lys-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備290mg(0.227mmol)Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物109mg(80％)，mp168-170℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)599[M+H]+。
實(shí)施例18.H-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備250mg(0.225mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物130mg(96％)，mp180-182℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)600[M+H]+。
實(shí)施例19.H-Asn-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備102mg(0.1mmol)Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物43mg(80％)，mp168-170℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)585[M+H]+。
實(shí)施例20.H-Arg-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備280mg(0.188mmol)Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex GIO脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物100mg(85％)，mp168-170℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)627[M+H]+。
實(shí)施例21.H-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備280mg(0.285mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物100mg(75％)，mp158-160℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)472[M+H]+。
實(shí)施例22.H-Pro-Ala-Lys-OH的制備280mg(0.417mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)0.5hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物110mg(84％)，mp150-152℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)315[M+H]+。
實(shí)施例23.Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OH的制備1000mg(0.95mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于20ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 10ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，10/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物880mg(91％)。
實(shí)施例24.Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OH的制備230mg(0.221mmol)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于6ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 2.5ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，10/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物180mg(86％)。
實(shí)施例25.Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OH的制備250mg(0196mmol)Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 2.0ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，10/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物200mg(86％)。
實(shí)施例26.Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OH的制備770mg(0.694mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于18ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 7.0ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，10/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物610mg(86％)。
實(shí)施例27.Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OH的制備300mg(0.210mmol)Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 2.0ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，10/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物230mg(83％)。
實(shí)施例28.Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OH的制備600mg(0.464mmol)Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于10ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 4.0ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，10/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物420mg(76％)。
實(shí)施例29.Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OH的制備500mg(0.51mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 5ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，15/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物380mg(84％)，mp 108-110℃，TOF-MS(m/e)893.2[M+H]+，915.5[M+Na]+，937.2[M+2Na]+。
實(shí)施例30.Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OH的制備135mg(0.2mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 2.0ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，20/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物100mg(86％)。
實(shí)施例31.Boc-Pro-OH的制備(1)Boc-N3法800mg(6.96mmol)脯氨酸懸浮于12ml無水DMF中，加入1.8ml三乙胺，冰浴攪拌下，30分鐘內(nèi)加入1.5mlBoc-N3，固體溶解，溶液澄清，室溫攪拌3天，TLC(氯仿/甲醇，30/1)顯示原料基本反應(yīng)完畢，停止反應(yīng)，吹干溶劑，殘留物以50ml乙酸乙酯溶解，依次以5％KHSO4、飽和氯化鈉水溶液洗，酯層以無水硫酸鎂干燥，過濾，蒸至近干時，將其濃溶液放置于冰箱內(nèi)析晶，得1200mg白色結(jié)晶，收率80％。
(2)(Boc)2O法800mg(6.96mmol)脯氨酸懸浮于20ml無水THF中，加入2.5ml三乙胺，室溫下加入1625mg(7.45mmol)(Boc)2O，室溫攪拌過夜，TLC(氯仿/甲醇，30/1)顯示原料基本反應(yīng)完畢，停止反應(yīng)，蒸干溶劑，殘留物以50ml乙酸乙酯溶解，依次以5％KHSO4，飽和氯化鈉水溶液洗，酯層以無水硫酸鎂干燥，過濾，蒸至近干時，將其濃溶液放置于冰箱內(nèi)析晶，得1350mg白色結(jié)晶，收率90％。
實(shí)施例32.Boc-Pro-OBzl的制備33mg(0.10mmol)Cs2CO3溶于蒸餾水，加入到43mg(0.20mmol)Boc-Pro-OH的無水乙醇溶液中，40min后減壓除去溶劑，殘留物置干燥器過夜，得白色固體，該固體溶于無水DMF，滴加34mg(0.2mmol)溴芐，于50℃恒溫攪拌16hr后，濾除CsBr沉淀，濾液減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解后，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌。分出的有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液在37℃下減壓濃縮，殘留物以石油醚研磨，得標(biāo)題化合物54mg(88％)，呈無色油狀物。
實(shí)施例33.HCl-Pro-OBzl的制備61mg(0.2mmol)Boc-Pro-OBzl溶于3ml 4mol/L無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，20min后有白色沉淀生成，2hr后TLC(氯仿/甲醇，30/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，抽去乙醚，得白色固體，該固體用石油醚(60-90℃)浸泡，傾去石油醚，如此反復(fù)數(shù)次后抽干得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例34.Boc-Arg(Tos)-Pro-OBzl的制備將18mg(0.075mmol)HCI Pro-OBzl溶于5ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入33mg(0.077mmol)Boc-Arg(Tos)-OH，10mg(0.074mmol)N-羥基苯并三氮唑和16mg(0.077mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，30/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物37mg(80％)，mp60-62℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)617[M+H]+。
實(shí)施例35.HCl·Arg(Tos)-Pro-OBzl的制備123mg(0.2mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-OBzl溶于3ml 4mol/L無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，20min后有白色沉淀生成，2hr后TLC(氯仿/甲醇，20/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例36.Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-OBzl的制備280mg(1.3mmol)Boc-Ala-OH溶于30ml無水THF中，冰浴下加入170mg(1.26mmol)N-羥基苯并三氮唑和270mg(1.31mmol)DCC，混合30min后待用。將793mg(1.44mmol)HCI.Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水THF，滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反應(yīng)2hr后，室溫反應(yīng)6hr，TLC(氯仿/甲醇，20/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物粗品，經(jīng)200-300目硅膠常壓柱層析(展開劑CHCl3/CH3OH，30/1)分離純化，得到標(biāo)題化合物550mg(55％)，mp86-88℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)685[M+H]+，724[M+K]+。
實(shí)施例37.HCl·Ala-Arg(Tos)-Pro-OBzl的制備137mg(0.2mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-OBzl溶于3ml 4mol/L無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，20min后有白色沉淀生成，2hr后TLC(氯仿/甲醇，20/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例38.Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-OH的制備550mg(0.80mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-OBzl溶于10ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 5ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，20/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物130mg(27％)。
實(shí)施例39.H-Ala-Arg-Pro-OH的制備105mg(0.153mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物10mg(19％)，mp150-2℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)344[M+H]+。
實(shí)施例40.HCl·Ala-OBzl的制備1070mg(0.012mol)L-Ala加入到25ml芐醇和5g多磷酸得均勻溶液中，反應(yīng)液在90-95℃反應(yīng)4小時，然后將反應(yīng)液傾入到含10ml濃鹽酸的200ml水中，加入乙醚，分出水層，醚層用2％鹽酸洗3次，合并水相，加固體碳酸鈉使PH約為10，加100ml乙醚振搖，分出醚層，以無水硫酸鈉干燥后，過濾，向?yàn)V液中通入無水氯化氫氣體，有大量白色柱狀沉淀生成，過濾，沉淀以無水乙醚洗，干燥，得1500mg(58％)，mp140-142℃，文獻(xiàn)140℃。
實(shí)施例41.Boc-Pro-Ala-OBzl的制備將500mg(2.326mmol)HCI Ala-OBzl溶于50ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入500mg(2.326mmol)Boc-Pro-OH，300mg(2.222mmol)N-羥基苯并三氮唑和480mg(2.331mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，30/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物782mg(89％)mp100-101℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)377[M+H]+。
實(shí)施例42.HCl·Pro-Ala-OBzl的制備75mg(0.2mmol)Boc-Pro-Ala-OBzl溶于3ml 4mol/L無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，20min后有白色沉淀生成，2hr后TLC(氯仿/甲醇，30/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例43.Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl的制備將72mg(0.231mmol)HCl.Pro-Ala-OBzl溶于50ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，往反應(yīng)液中加入100mg(0.234mmol)Boc-Arg(Tos)-OH，31mg(0.230mmol)N-羥基苯并三氮唑和48mg(0.233mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，20/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物120mg(75.6％)mp70-71.5℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)688[M+H]+。
實(shí)施例44.HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl的制備137mg(0.2mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl溶于3ml 4mol/L無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，20min后有白色沉淀生成，2hr后TLC(氯仿/甲醇，20/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例45.Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl的制備將45mg(0.072mmol)HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl溶于50ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入15mg(0.079mmol)Boc-Ala-OH，10mg(0.074mmol)N-羥基苯并三氮唑和16mg(0.077mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，15/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物粗品，經(jīng)200-300目硅膠常壓柱層析(展開劑CHCl3/CH3OH，30/1)分離純化，得到標(biāo)題化合物30mg(54％)mp80-82℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)758[M+H]+。
實(shí)施例46.HCl·Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl的制備151mg(0.2mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl溶于3ml 4mol/L無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，20min后有白色沉淀生成，2hr后TLC(氯仿/甲醇，15/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例47.Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OH的制備550mg(0.726mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl溶于20ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 8ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，15/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物330mg(67％)。
實(shí)施例48.H-Ala-Arg-Pro-Ala-OH的制備250mg(0.330mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用SephadexG-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物80mg(58％)，mp157-159℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)415[M+H]+。
實(shí)施例49.2，3，4，9-Tetrahydro-1H-Pyrido[3，4-b]-Indole-3-Carboxylic Acid的制備1g(5mmol)色氨酸加入到含0.5ml濃H2SO4的80ml水中，攪拌10分鐘后，加入8ml甲醛(36-38％)，反應(yīng)液澄清后即又析出大量固體，室溫攪拌2hr后，用濃氨水調(diào)溶液PH值6-7，冰箱放置過夜，抽濾得黃色固體，將其溶于250ml 50％得乙醇中，加熱到50℃，滴加濃氨水使溶液澄清，加入0.4g活性炭脫色，過濾，濾液濃縮析出大量固體，抽濾得類白色粉末6.0g，母液濃縮后得3.0g淺黃色固體，總收率85％。
實(shí)施例50.2-N-tert-Butyloxycarbonyl-3，4，9-Trihydro-1H-Pyri-do[3，4-b]-Indole-3-Carboxylic Acid的制備0.9g(4.17mmol)化合物(49)懸浮于含1.25g(Boc)2O和1.5ml三乙胺的15ml無水DMF溶液中，45℃下反應(yīng)4hr，反應(yīng)過程中化合物49漸漸溶解，TLC(氯仿/甲醇，20/1)顯示反應(yīng)完畢，蒸干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解后，依次用5％KHSO4，飽和NaCl洗，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸干，氯仿重結(jié)晶得1g標(biāo)題化合物，收率76％，TLC(氯仿/甲醇，20/1)與標(biāo)準(zhǔn)品一致，mp168-171℃，文獻(xiàn)165-170℃。
實(shí)施例51.2，3，4，9-Tetrahydro-1H-Pyrido[3，4-b]-Indole-3-Carboxylic AcidBenzyl Ester的制備280mg(0.86mmol)Cs2CO3溶于蒸餾水，加入到540mg(1.71mmol)化合物(50)的無水乙醇溶液中，40min后減壓除去溶劑，殘留物置干燥器過夜，得白色固體，該固體溶于無水DMF，滴加0.2ml(1.75mmol)溴芐，于50℃恒溫攪拌16hr后，濾除CsBr沉淀，濾液減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解后，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液在37℃下減壓濃縮至10ml體積時停止?jié)饪s，往反應(yīng)液中加入20ml 4mol/L無水氯化氫一乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，30min后有褐色沉淀生成，TLC(氯仿/甲醇，20/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗至堿性，再用飽和氯化鈉水溶液洗，分出有機(jī)層并用無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸干得近白色固體400mg(76％)，TLC(氯仿/甲醇，20/1)與標(biāo)準(zhǔn)品一致。
實(shí)施例52.Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl的制備將320mg(1.046mmol)化合物(51)溶于25ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入600mg(1.031mmol)化合物30，140mg(1.037mmol)N-羥基苯并三氮唑和220mg(1.068mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，15/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物890mg(98％)，mp68-70℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)872[M+H]+。
實(shí)施例53.Boc-KL-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將390mg(0.670mmol)HCI Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于15ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入210mg(0.686mmol)Boc-KL-OH，100mg(0.149mmol)N-羥基苯并三氮唑和150mg(0.728mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，15/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物520mg(89％)mp76-78℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)870[M+H]+。
實(shí)施例54.Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-KL-OBzl的制備將320mg(1.046mmol)化合物(51)溶于25ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入130mg(0.218mmol)化合物38，30mg(0.222mmol)N-羥基苯并三氮唑和45mg(0.218mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，15/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物140mg(73％)mp70-72℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)886[M+H]+。
實(shí)施例55.Boc-KL-Ala-Arg(Tos)-Pro-OBzl的制備將208mg(0.335mmol)HCI Ala-Arg(Tos)-Pro-OBzl溶于15ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入110mg(0.348mmol)Boc-KL-OH，45mg(0.333mmol)N-羥基苯并三氮唑和72mg(0.350mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，15/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物150mg(51％)mp76-78℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)883[M+H]+。
實(shí)施例56.Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl的制備將100mg(.326mmol)化合物(51)溶于25ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入290mg(0.338mmol)化合物29，40mg(0.296mmol)N-羥基苯并三氮唑和70mg(.340mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物340mg(89％)mp114-6℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)884[M+H]+。
實(shí)施例57.Boc-KL-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將450mg(0.490mmol)HCI Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于15ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入180mg(0.570mmol)Boc-KL-OH，70mg(0.518mmol)N-羥基苯并三氮唑和120mg(0.582mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物500mg(83％)，白固，mp94-96℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1182[M+H]+，1214[M+CH3OH]+。
實(shí)施例58.Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-KL-OBzl的制備將160mg(0.522mmol)化合物(51)溶于25ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入330mg(0.495mmol)化合物47，70mg(0.518mmol)N-羥基苯并三氮唑和110mg(534mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物200mg(42％)mp104-6℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1183[M+H]+。
實(shí)施例59.Boc-KL-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl的制備將250mg(0.361mmol)HCI Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl溶于15ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入120mg(0.392mmol)Boc-KL-OH，50mg(0.370mmol)N-羥基苯并三氮唑和80mg(0.388mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物160mg(45％)mp98-100℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)957[M+H]+實(shí)施例60.HCl·Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備100mg(0.080mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，5hr后TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例61.HCl·Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備100mg(0.081mmol)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，5hr后TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例62.HCl·Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備100mg(0.068mmol)Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，5hr后TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例63.HCl·Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備100mg(0.076mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，5hr后TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例64.HCl·Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備100mg(0.077mmol)Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，5hr后TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例65.HCl·Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備100mg(0.067mmol)Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于5ml無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，5hr后TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例66.Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl的制備將280mg(0.915mmol)化合物(51)溶于25ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入860mg(0.893mmol)化合物23，120mg(0.889mmol)N-羥基苯并三氮唑和190mg(0.922mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物850mg(76％)mp109-110℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1253.9[M+H]+，1277.3[M+Na]+。
實(shí)施例67.Boc-KL-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將280mg(0.283mmol)HCI Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于15ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入100mg(0.316mmol)Boc-KL-OH，43mg(0.318mmol)N-羥基苯并三氮唑和65mg(0.315mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物300mg(84.7％)mp129-31℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1252.1[M+H]+，1274.0[M+Na]+，1152.7[M-Boc]+。
實(shí)施例68.Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl的制備(將60mg(0.196mmol)化合物(51)溶于25ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入180mg(0.190mmol)化合物24，25mg(0.185mmol)N-羥基苯并三氮唑和40mg(0.194mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物220mg(93％)mp118-9℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1239.4[M+H]+，1275.7[M+K]+。
實(shí)施例69.Boc-KL-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將300mg(0.307mmol)HCI Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于15ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入115mg(0.364mmol)Boc-KL-OH，50mg(0.370mmol)N-羥基苯并三氮唑和75mg(0.364mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物270mg(72％)mp114-6℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1239.1[M+H]+，1261.4[M+Na]+，1137.9[M-Boc]+，1373.9[M+Cs]+。
實(shí)施例70.Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl的制備將53mg(0.173mmol)化合物(51)溶于25ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入200mg(0.1683mmol)化合物25，23mg(0.170mmol)N-羥基苯并三氮唑和36mg(0.175mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物200mg(80％)mp94-6℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)[M+H]+1477。
實(shí)施例71.Boc-KL-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將330mg(0.271mmol)HCI Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于15ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入90mg(0.285mmol)Boc-KL-OH，40mg(0.296mmol)N-羥基苯并三氮唑和60mg(0.291mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物320mg(79％)mp86-88℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1477[M+H]+實(shí)施例72.Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl的制備將180mg(0.570mmol)化合物(51)溶于25ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入540mg(0.529mmol)化合物26，70mg(0.52mmol)N-羥基苯并三氮唑和120mg(0.582mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物550mg(79％)mp118-120℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1311.4[M+H]+，1333.4[M+Na]+，1209.1[M-Boc]+。
實(shí)施例73.Boc-KL-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將440mg(0.421mmol)HCI Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于35ml無水DMF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入140mg(0.443mmol)Boc-KL-OH，60mg(0.444mmol)N-羥基苯并三氮唑和90mg(0.437mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物250mg(45％)mp126-8℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1309.3[M+H]+，1209.3[M-Boc]+。
實(shí)施例74.Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl的制備將13mg(42.48umol)化合物(51)溶于10ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入40mg(39.76umol)化合物27，6mg(44.44mol)N-羥基苯并三氮唑和9mg(43.69umol)DCC的無水DMF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物40mg(77％)mp115-7℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1553[M+8CH3OH+H]+。
實(shí)施例75.Boc-KL-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將94mg(0.091mmol)HCI Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于15ml無水DMF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入30mg(0.095mmol)Boc-KL-OH，20mg(0.148mmol)N-羥基苯并三氮唑和25mg(0.121mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物50mg(42％)mp123-126℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1351[M+C4H9]+實(shí)施例76.Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl的制備將120mg(0.392mmol)化合物(51)溶于35ml無水THF，0℃下依次往反應(yīng)液中加入420mg(0.349mmol)化合物28，50mg(0.370mmol)N-羥基苯并三氮唑和80mg(0.388mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物230mg(44％)mp96-99℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1491[M+H]+。
實(shí)施例77.Boc-KL-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl的制備將665mg(0.541mmol)HCI Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于15ml無水THF，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，保持在0℃，依次往反應(yīng)液中加入180mg(0.570mmol)Boc-KL-OH，80mg(0.592mmol)N-羥基苯并三氮唑和120mg(0.582mmol)DCC的無水THF溶液，0℃反應(yīng)2hr后，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)5hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，濾除DCU，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，得到標(biāo)題化合物350mg(43％)，mp120-122℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)1492[M+H]+。
實(shí)施例78.H-Pro-Ala-Lys-KL-OH的制備500mg(0.330mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)0.5hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集標(biāo)題化合物水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物250mg(85％)，mp130-134℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)669[M+H]+實(shí)施例79.H-KL-Prolyl-Alanyl-Lysine的制備200mg(0.230mmol)Boc-KL-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入3ml無水HF，0℃反應(yīng)0.5hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物70mg(67％)，mp 186-188℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)513[M+H]+。
實(shí)施例80.H-Ala-Arg-Pro-KL-OH的制備120mg(0.230mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-KL-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)0.5hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集標(biāo)題化合物水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物250mg(85％)，mp130-134℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)669[M+H]+。
實(shí)施例81.H-KL-Alanyl-Arginyl-Proline的制備120mg(0.230mmol)Boc-KL-Ala-Arg(Tos)-Pro-Obzl與1ml苯甲醚混合后，通入3ml無水HF，0℃反應(yīng)0.5hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物40mg(55％)，mp 186-188℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)541[M+H]+。
實(shí)施例82.H-Arg-Pro-Ala-Lys-KL-OH的制備220mg(0.186mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入3ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物60mg(48％)，mp114-116℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)667[M+H]+。
實(shí)施例83.H-KL-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備440mg(0.373mmol)Boc-KL-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1.5ml苯甲醚混合后，通入1ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 3ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物240mg(96％)，mp240-245℃分解。FAB-MS(m/e)669[M+H]+。
實(shí)施例84.H-Ala-Arg-Pro-Ala-KL-OH的制備220mg(0.186mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-KL-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入3ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用SephadexG-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物60mg(48％)，mp114-116℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)612[M+H]+。
實(shí)施例85.H-KL-Ala-Arg-Pro-Ala-OH的制備440mg(0.373mmol)Boc-KL-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl與1.5ml苯甲醚混合后，通入1ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 3ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物240mg(96％)，mp240-245℃分解。FAB-MS(m/e)612[M+H]+。
實(shí)施例86.H-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-KL-OH的制備100mg(0.080mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl與0.5ml苯甲醚混合后，通入1ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物50mg(84.6％)，mp236-239℃分解，ESI-MS(m/e)741[M+H]+。
實(shí)施例87.H-KL-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備100mg(0.080mmol)Boc-KL-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入0.5ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物45mg(76％)，mp220-224℃分解，F(xiàn)AB-MS(m/e)740[M+H]+。
實(shí)施例88.H-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-KL-OH的制備100mg(0.081mmol)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-KL-OBzl與0.5ml苯甲醚混合后，通入1ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物50mg(85％)，mp214-218℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)726[M+H]+。
實(shí)施例89.H-KL-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備250mg(0.330mmol)Boc-KL-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用SephadexG-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物45mg(75％)，mp210-213℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)726[M+H]+。
實(shí)施例90.H-Lys-Arg-Pro-Ala-Lys-KL-OH的制備185mg(0.125mmol)Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl與0.5ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，-再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物90mg(87％)，mp250-260℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)797[M+H]+。
實(shí)施例91.H-KL-Lys-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備290mg(0.196mmol)Boc-KL-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物130mg(83％)，mp206-208℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)797[M+H]+。
實(shí)施例92.H-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-KL-OH的制備280mg(0.200mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入3ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物130mg(81％)，mp230-232℃分解，F(xiàn)AB-MS(m/e)798[M+H]+。
實(shí)施例93.H-KL-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備250mg(0.330mmol)Boc-KL-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物80mg(58％)，mp218-220℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)797[M+H]+。
實(shí)施例94 H-Asn-Arg-Pro-Ala-Lys-KL-OH的制備200mg(0.182mmol)Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物70mg(51％)，mp198-200℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)782[M+H]+。
實(shí)施例95 H-KL-Asn-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備250mg(0.330mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用SephadexG-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物80mg(58％)，mp211-214℃，F(xiàn)AB-MS(m/e)784[M+H]+。
實(shí)施例96 H-Arg-Arg-Pro-Ala-Lys-KL-OH的制備200mg(0.134mmol)Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OBzl與0.5ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物80mg(72％)，mp208-212℃分解，F(xiàn)AB-MS(m/e)825[M+H]+。
實(shí)施例97 H-KL-Arg-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備340mg(0.228mmol)Boc-KL-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl與1ml苯甲醚混合后，通入2ml無水HF，0℃反應(yīng)2hr，減壓除去HF，再次通入無水HF 2ml，0℃反應(yīng)1hr，減壓除去HF，殘留物用無水乙醚固化，抽濾后的固體物用Sephadex G-10脫鹽，蒸餾水為流動相，茚三酮檢測收集水溶液，冷凍干燥后得標(biāo)題化合物130mg(69％)，mp238-240℃分解，F(xiàn)AB-MS(m/e)825[M+H]+。
實(shí)施例98 Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OH的制備550mg(0.439mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl溶于10ml甲醇中，冰浴下滴加2mol/L NaOH 50ml，30min后TLC(氯仿/甲醇，10/1)檢測原料點(diǎn)消失，加入適量2mol/L HCl中和反應(yīng)液至pH7，減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物加適量2mol/L HCl使pH1-2，傾入大量蒸餾水中，有大量白色沉淀生成，抽濾，濾餅以蒸餾水洗滌數(shù)次，置干燥器中過夜，得標(biāo)題化合物450mg(88％)，F(xiàn)AB-MS(m/e)1201.2[M+K]+。
實(shí)施例99HCl·Ala-Arg-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OH的制備100mg(0.086mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-KL-OH溶于5ml無水氯化氫/乙酸乙酯溶液，室溫攪拌，5hr后TLC(氯仿/甲醇，5/1)顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并在室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直到除凈游離的氯化氫。殘留物用無水乙醚研磨，得標(biāo)題化合物，直接用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施例100.Cyclo(Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ))的制備100mg化合物(93)溶于2ml無水DMF中，0℃下加入15mg(0.111mmol)N-羥基苯并三氮唑和20mg(0.097mmol)DCC，0℃反應(yīng)5hr后，TLC顯示原料點(diǎn)消失，加入無水DMF 200ml，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，0℃下滴加N-甲基嗎啉使溶液pH8-9，轉(zhuǎn)入室溫反應(yīng)36hr，TLC(氯仿/甲醇，10/1)顯示原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)，吹干溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液、5％硫酸氫鉀水溶液洗滌，分出的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥。過濾，濾液在37℃減壓濃縮至干，殘留物走大板分離得到標(biāo)題化合物10mg(10％)，ESI-MS(m/e)1045[M+H]+，1061[M+H2O]+。
實(shí)施例101.通式(3)、(6)、(7)的溶栓活性101.1血栓的制備往垂直固定的玻璃管(長15mm，內(nèi)徑2.5mm，外徑5.0mm，管底用膠塞密封)中注入0.1ml枸櫞酸化的大鼠動脈血液，該血液復(fù)鈣未凝。往管內(nèi)迅速插入一根不銹鋼質(zhì)料的血栓固定螺栓。該血栓固定螺栓用直徑為0.2mm的不銹鋼絲繞成，螺旋部分長12mm，含15個螺圈，螺圈的直徑為1.0mm，托柄與螺旋相連，長7.0mm，呈問號型。血液凝固15分鐘后，打開玻璃管底部的膠塞，用鑷子固定血栓固定螺旋的托柄，從玻璃管中小心地取出被血栓包裹的血栓固定螺旋，精確稱重(質(zhì)量范圍為74-84mg)。
101.2旁路管道的制備旁路管道由3段構(gòu)成，中段為聚乙烯膠管，長60.0mm，內(nèi)徑3.5mm，兩端為相同的聚乙烯管，長100.0mm，內(nèi)徑1.0mm，外徑2.0mm，該管的一端拉緊成尖管(用于插入大鼠頸動脈或靜脈)，外徑為1.0mm，另一端的外部套一段長7.0mm，外徑3.5mm的聚乙烯管，用于插入中段的聚乙烯管內(nèi)。3段管的內(nèi)壁均硅烷化。將精確稱重的血栓包裹的血栓固定螺栓放入中段聚乙烯管內(nèi)，膠管的兩端分別與剛描述過的兩根聚乙烯管的套管端相連。用注射器通過尖管端將管中注滿肝素生理鹽水溶液(50 IU/kg體重)，備用。
101.3大鼠頸動靜脈旁路插管模型Wistar大鼠(雄性，250～300g)按80mg/kg劑量腹腔注射戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行麻醉。麻醉大鼠仰臥位固定后進(jìn)行手術(shù)分離氣管，分離右頸總動脈和左頸外靜脈。在暴露的左頸外靜脈上小心地剪一斜口，將上面制備好的旁路管道的尖管由斜口插入左頸外靜脈開口的近心端，同時遠(yuǎn)離旁路管中段血栓固定螺栓的托柄。用注射器通過另一端的尖管推入準(zhǔn)確量的肝素生理鹽水(50Iu/kg)，此時注射器不要撤離聚乙烯管。在右頸總動脈的近心端用動脈夾止血，在距動脈夾不遠(yuǎn)處將右頸總動脈小心地剪一斜口。從聚乙烯管的尖部拔出注射器，將聚乙烯管的尖部插入動脈斜口的近心端。旁路管道的兩端都用4號手術(shù)縫線與動靜脈固定。打開動脈夾，使血流通過旁路管道從動脈流向靜脈。于是，構(gòu)成了大鼠動靜脈旁路溶栓模型。
101.4通式(3)(6)(7)的化合物的溶栓作用用頭皮針將生理鹽水(3ml/kg)、尿激酶的生理鹽水溶液(20000IU/kg)、通式(3)、(6)、(7)的化合物的生理鹽水溶液(10umol/kg)通過旁路管的中段刺入遠(yuǎn)離血栓固定螺旋的近靜脈處，緩慢注入到血液中(大約6分鐘)。使生理鹽水(空白對照)、尿激酶(陽性對照)以及通式(3)、(6)、(7)的化合物過血液循環(huán)，按靜脈—心臟—動脈的順序作用到血栓上。從開始注射對照液或藥物溶液開始計時，1.5小時后從旁路管中取出血栓固定螺栓，精確稱重，求出每只大鼠旁路管道中血栓固定螺栓進(jìn)入旁路管道前后的質(zhì)量差，統(tǒng)計各組動物的血栓質(zhì)量差值(x±S)，并進(jìn)行t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)列入表1。
表1.通式(3)、(6)、(7)的化合物的溶栓作用組別劑量(劑量/kg)血栓減重(x±S)NS3ml 15.31±3.57UK20000IU 24.10±3.54P6A 5.4mg18.84±3.181)2)GP6A 5.3mg25.90±2.051)QP6A 6.0mg21.28±3.461)2)dAKL 7.4mg26.43±3.841)dKLA 7.4mg16.13±7.832)dGKL 7.2mg24.02±5.211)dKLG 7.2mg19.7±3.712)dQKL 8.0mg22.88±9.211)dKLQ 8.0mg17.27±3.572)dPAKKL5.1mg26.40±4.211)3)dPAKKL2.5mg22.31±3.661)dPAKKL0.5mg18.22±5.842)3)dKLPAK5.1mg20.80±3.962)1)與NS相比，P＜0.05；2)與UK相比，P＜0.05；3)與dPAKKL2.5mg/mg相比，P＜0.05，N＝9結(jié)果表明，dPAKKL的溶栓活性具有劑量依賴性。10umol/kg組，5umol/kg組和1umol/kg組的溶栓活性與劑量具有線性相關(guān)性。P6A組，GP6A組和QP6A組溶栓活性呈結(jié)構(gòu)依賴性。dXKL(X＝Ala，Gly，Gln，PAK)組活性與UK相當(dāng)，相應(yīng)的dKLX(X＝PAK，Ala，Gly，Gln)組沒有溶栓活性。
權(quán)利要求
1.通式(1)、(3)、(4)和(5)的P6A相關(guān)序列多肽，是通過液相法逐步接肽，或者進(jìn)一步脫保護(hù)制得Boc-AA1-AA2-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OBzl(1)H-AA1’-AA2’-Pro-Ala-LysOH(3)HCl·AA1-AA2-Pro-Ala-Lys(C1Z)-OBzl(4)Boc-AA1-AA2-Pro-Ala-Lys(ClZ)OH(5)其中AA1和AA2共同為H，或AA1為A、G、Q、K、N或R，AA2為Arg(Tos)殘基；AA1’和AA2’共同為H；或AA1’為A、G、Q、K、R或N，AA2’為Arg殘基；或AA1’為H，AA2’為Arg殘基。
2.通式(2)、(8)、(9)和(10)的P6A相關(guān)序列多肽，是通過液相法逐步接肽，或者進(jìn)一步脫保護(hù)制得Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-AA3-OBzl (2)H-Ala-Arg-Pro-AA3OH(8)HCl·Ala-Arg(Tos)-Pro-AA3-OBzl (9)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-AA3OH(10)在上述各式中，其中AA3為Ala殘基或AA3缺失。
3.一種擬肽，其特征在于它包括了P6A相關(guān)序列多肽和咔啉羧酸殘基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的擬肽，其特征在于它包括了以下通式的化合物及其衍生物 其中AA1’和AA2’共同為H；或AA1’為A，G，Q，K，R或N，AA2’為Arg殘基；或AA1’為H，AA2’為Arg殘基。 其中AA1’和AA2’共同為H；或AA1’為A，G，Q，K，R，N，或AA2’為Arg殘基；或AA1’為H，AA2’為Arg殘基。 其中AA3為Ala殘基或AA3缺失。 其中AA3為Ala殘基或AA3缺失。
5.通式(6)的化合物的制備方法，包括將權(quán)利要求1中通式(4)的化合物與N-Boc-咔啉羧酸的羧基縮合，縮合產(chǎn)物經(jīng)HF脫保護(hù)得通式(6)的化合物。
6.通式(7)化合物的制備方法，包括將權(quán)利要求1中通式(5)的化合物與咔啉羧酸芐酯的氨基縮合，縮合產(chǎn)物經(jīng)HF脫保護(hù)得通式(7)的化合物。
7.通式(11)的化合物的制備方法，包括將權(quán)利要求2中通式(9)的化合物與N-Boc-咔啉羧酸的羧基縮合，縮合產(chǎn)物經(jīng)HF脫保護(hù)得通式(11)的化合物。
8.通式(12)的化合物的制備方法，包括將權(quán)利要求2中通式(10)的化合物與咔啉羧酸芐酯的氨基縮合，縮合產(chǎn)物經(jīng)HF脫保護(hù)得通式(12)的化合物。
9.權(quán)利要求1或2的P6A相關(guān)序列多肽作為溶血栓劑的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求1或2的P6A相關(guān)序列多肽在制藥中，尤其在制備治療血栓性疾病，如冠心病、腦血栓、心肌梗塞、腦栓塞、肺栓塞、靜脈血栓形成等的藥物中的應(yīng)用。
11.權(quán)利要求3或4的擬肽作為溶血栓劑的應(yīng)用。
12.權(quán)利要求3或4的擬肽在制備治療血栓性疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及P6A相關(guān)序列的保護(hù)中間體化合物以及脫保護(hù)產(chǎn)物的化合物,涉及將脫保護(hù)產(chǎn)物的化合物與咔啉羧酸的羧基偶聯(lián)并脫保護(hù)生成相應(yīng)的擬肽,以及將脫保護(hù)產(chǎn)物的化合物與咔啉羧酸的仲氨基偶聯(lián)并脫保護(hù)生成相應(yīng)的擬肽;涉及它們的制備方法,以及進(jìn)一步涉及它們在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用,例如作為溶血栓劑的應(yīng)用。本發(fā)明的化合物表現(xiàn)了較強(qiáng)的溶栓活性。
文檔編號C07K7/06GK1373139SQ0210042
公開日2002年10月9日 申請日期2002年1月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年1月28日
發(fā)明者彭師奇, 趙明, 王超, 吳艷芬 申請人:廣州白云山制藥股份有限公司廣州白云山制藥總廠