一種核-殼雙層微球及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種核-殼雙層微球及其制備方法，具體涉及一種縮酮或其衍生物-聚乳酸或聚乳酸-羥基乙酸共聚物核-殼雙層微球及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著生物技術(shù)的發(fā)展，蛋白、多肽類(lèi)藥物在臨床應(yīng)用也越加廣泛，蛋白、多肽類(lèi)藥物具有高活性、特異性強(qiáng)、低毒性、生物功能明確、有利于臨床應(yīng)用等特點(diǎn)；但是其也具有半衰期短、穩(wěn)定性差、通透性不好等缺點(diǎn)，并且蛋白、多肽類(lèi)藥物使用劑量一般很小，需要長(zhǎng)期給藥，口服會(huì)經(jīng)過(guò)肝臟代謝，發(fā)生首過(guò)效應(yīng)使大部分藥物失活，影響療效，因此將其制備成緩釋制劑而注射使用是一種有效的途徑。
[0003]微球制劑是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的藥物新劑型，藥物分散在基質(zhì)材料中，經(jīng)過(guò)固化而形成固體實(shí)心小球。注射給藥后，藥物隨著骨架降解、溶蝕會(huì)緩慢釋放出來(lái)，以達(dá)到緩釋的目的。但由于微球表面的粗糙、多孔及表面含有部分藥物，因此在釋放時(shí)會(huì)有部分藥物快速擴(kuò)散出來(lái)，使體內(nèi)的血藥水平陡然升高，從而產(chǎn)生不良反應(yīng)，即為突釋現(xiàn)象。
[0004]聚乳酸-羥基乙酸共聚物(以下簡(jiǎn)稱(chēng)PLGA)是目前應(yīng)用最廣泛的生物可降解高分子材料，其是由丙交酯與乙交酯隨機(jī)聚合而成，具有良好的生物相容性、無(wú)毒及可降解性。在蛋白、多肽類(lèi)藥物制劑研究中，大部分選用PLGA作為載體材料。但PLGA也具有一定缺陷性，即PLGA降解產(chǎn)物為乳酸與羥基乙酸，酸性物質(zhì)的積累會(huì)對(duì)組織產(chǎn)生一定刺激性，甚至?xí)a(chǎn)生炎癥；另一方面，蛋白、多肽類(lèi)藥物包埋于PLGA之中，其降解所產(chǎn)生的酸性環(huán)境會(huì)對(duì)蛋白或多肽的活性產(chǎn)生影響；再者多數(shù)PLGA微球表面具有孔隙，存在突釋及包封率低的缺點(diǎn)。
[0005]為解決蛋白藥物在載體材料中不穩(wěn)定的問(wèn)題，CN103977410采用聚縮酮(以下簡(jiǎn)稱(chēng)PCADK)與其他聚合物材料混合作為混合基質(zhì)，采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法來(lái)制備長(zhǎng)效制劑。由于聚縮酮降解產(chǎn)物為中性，與其它材料混合可降低其它材料尤其是PLGA降解所產(chǎn)生酸性對(duì)蛋白藥物的影響，但復(fù)乳法里的油水界面很容易使蛋白多肽類(lèi)藥物聚集，從而發(fā)生構(gòu)象變化，以致變性。同時(shí)該方法制備的微球表現(xiàn)較粗糙，首日突釋現(xiàn)象明顯，接近15%。
[0006]因此，有必要研發(fā)一種可解決突釋現(xiàn)象且包封率高的藥物新劑型。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種可解決突釋現(xiàn)象且包封率高的核-殼雙層微球的制備方法。
[0008]具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案:
[0009]—種核-殼雙層微球的制備方法，步驟如下:
[0010](I)制備兩種單獨(dú)的油相，分別是油相A:含有藥物、聚縮酮或其衍生物的有機(jī)溶液；油相B:含有聚乳酸或聚乳酸-羥基乙酸共聚物的有機(jī)溶液；
[0011]合并、混合油相A和油相B，高速攪拌得到A/B相，即ο/ο相；
[0012]所述聚縮酮或其衍生物與聚乳酸或聚乳酸-羥基乙酸共聚物重量比9:1-1:9，優(yōu)選為6:4-2:8，更優(yōu)選為3:7-2:8 ；
[0013](2)合并、混合步驟(I)得到的A/B相和溶液C，形成乳劑，即o/o/w相；
[0014]所述溶液C是重量百分比濃度為0.5-10%的氯化鈉和重量百分比濃度為0.5-5%的表面活性劑的水溶液；
[0015](3)將步驟⑵得到的乳劑低速攪拌l_5h，得到固化微球；
[0016](4)將步驟(3)得到的固化微球進(jìn)行離心、洗滌、冷凍干燥，得到核-殼雙層微球。
[0017]進(jìn)一步，所述步驟(I)中的藥物為生物大分子藥物，包括蛋白多肽類(lèi)大分子藥物、核酸、抗體、疫苗和多糖中的一種。
[0018]進(jìn)一步，所述步驟(I)中的油相A與油相B中聚合物質(zhì)量濃度分別為5-20%，優(yōu)選為 10-15%。
[0019]進(jìn)一步，所述步驟(I)中的聚縮酮通過(guò)1，4-環(huán)己烷二甲醇與2，2_ 二甲氧基丙烷聚合而成，具有縮酮單元結(jié)構(gòu)，縮酮單元中含有兩個(gè)氧原子，其重均分子量為2000?
10000ο
[0020]進(jìn)一步，所述步驟(I)中的聚縮酮衍生物為醇類(lèi)衍生物，優(yōu)選為二醇類(lèi)衍生物，其重均分子量為2000?100000。
[0021]進(jìn)一步，所述步驟(I)中的聚乳酸-羥基乙酸共聚物為未封端的丙交酯-乙交酯共聚物，其特性粘度為0.1?0.35dl/g ;其重均分子量為4000?45000 ;所述丙交酯與乙交酯的摩爾比為50:50?75:25。
[0022]進(jìn)一步，所述步驟(I)中的聚乳酸-羥基乙酸共聚物為未封端的丙交酯-乙交酯共聚物，其特性粘度為0.4?0.9dl/g ;其重均分子量為50000?145000 ;所述丙交酯與乙交酯的摩爾比為65:35?90:10
[0023]進(jìn)一步，所述步驟⑴的有機(jī)溶液，所述有機(jī)溶液中的有機(jī)溶劑是二氯甲烷、乙酸乙酯、庚烷、丙酮、乙腈及氯仿中的至少一種。
[0024]進(jìn)一步，所述步驟(2)的表面活性劑為聚乙烯醇、二 -乙基己基琥珀酸酯磺酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、羥乙基纖維素、聚乙二醇、聚山梨酯、司盤(pán)和泊洛沙姆中的一種。
[0025]本發(fā)明還提供一種上述制備方法制備的核-殼雙層微球，所述核-殼雙層微球包括核和包圍在所述核周?chē)臍ぃ龊耸且跃劭s酮或其衍生物為載體材料包裹藥物構(gòu)成，所述殼是聚乳酸-羥基乙酸共聚物構(gòu)成。
[0026]本發(fā)明另提供一種上述制備方法制備的核-殼雙層微球，所述核-殼雙層微球包括核和包圍在所述核周?chē)臍?，所述核是以聚縮酮或其衍生物為載體材料包裹藥物構(gòu)成，所述殼是聚乳酸構(gòu)成。
[0027]本發(fā)明采用聚縮酮或其衍生物作為內(nèi)核，藥物分散在其中，外層PLGA或PLA包裹，雙層微球?qū)崿F(xiàn)零級(jí)釋藥和脈沖式給藥，解決了普通微球突釋較為嚴(yán)重的情況，使得藥物可以在體內(nèi)保持較為恒定速率釋放。
【附圖說(shuō)明】
[0028]圖1為本發(fā)明實(shí)施例一中的載有胰島素的PCADK-PLGA核-殼雙層微球的掃描電鏡照片；
[0029]圖2為本發(fā)明實(shí)施例一中的載有胰島素的PCADK-PLGA核-殼雙層微球的光學(xué)顯微鏡照片；
[0030]圖3為本發(fā)明實(shí)施例一中的載有胰島素的PCADK-PLGA核-殼雙層微球的體外釋放曲線；
[0031 ] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例二中的載有牛血清白蛋白的PCADK-PLGA核-殼雙層微球的掃描電鏡照片；
[0032]圖5為本發(fā)明實(shí)施例二中的載有牛血清白蛋白的PCADK-PLGA核-殼雙層微球的光學(xué)顯微鏡照片；
[0033]圖6為本發(fā)明實(shí)施例二中的載有牛血清白蛋白的PCADK-PLGA核-殼雙層微球的體外釋放曲線；
[0034]圖7為本發(fā)明對(duì)比例一中的載有胰島素的PCADK單層微球的掃描電鏡照片；
[0035]圖8為本發(fā)明對(duì)比例一中的載有胰島素的PCADK單層微球的體外釋放曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0036]本發(fā)明提供了用于制備可以延遲特性釋放物質(zhì)如小分子藥物、蛋白質(zhì)和多肽或活性成分的微球的方法。
[0037]步驟如下:
[0038](I)制備兩種單獨(dú)的油相，分別是油相A:含有藥物、聚縮酮或其衍生物的有機(jī)溶液；油相B:含有聚乳酸或聚乳酸-羥基乙酸共聚物的有機(jī)溶液；
[0039]合并、混合油相A和油相B，高速攪拌得到A/B相，即ο/ο相；
[0040]所述聚縮酮或其衍生物與聚乳酸或聚乳酸-羥基乙酸共聚物重量比9:1-1:9，優(yōu)選為6:4-2:8，更優(yōu)選為3:7-2:8 ；
[0041](2)合并、混合步驟(I)得到的A/B相和溶液C，形成乳劑，即o/o/w相；
[0042]所述溶液C是重量百分比濃度為0.5-10%的氯化鈉和重量百分比濃度為0.5-5%的表面活性劑的水溶液；
[0043](3)將步驟(2)得到的乳劑低速攪拌l_5h，得到固化微球；
[0044](4)將步驟(3)得到的固化微球進(jìn)行離心、洗滌、冷凍干燥，得到核-殼雙層微球。
[0045]在本發(fā)明中，步驟(I)被認(rèn)為是重要的，本發(fā)明先分別制備油相A和油相B，再將油相A加到油相B中，得到A/B相，即油包油乳劑，具體混合為:在13500rpm高速剪切的條件下，逐滴地將油相A滴加到油相B中，由于油相A與油相B中的聚合物質(zhì)量濃度分別為15%和10%，且B相體積遠(yuǎn)大于A相，當(dāng)油相A滴加到油相B中時(shí)，可在一定時(shí)間內(nèi)形成o/ο液滴。本發(fā)明總聚合物最佳質(zhì)量濃度為10-15%，當(dāng)超過(guò)20%甚至更高時(shí)，聚合物溶液較粘稠，有機(jī)溶劑較難揮發(fā)，兩種聚合物材料易混合在一起，不易發(fā)生相分離，且A相與B相聚合物質(zhì)量濃度具有一定濃度差更有利于相分離的發(fā)生，從而形成雙層微球。
[0046]下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明核-殼雙層微球。
[0047]實(shí)施例一
[0048]載有胰島素的PCADK-PLGA核-殼雙層微球
[0049](I)制備兩種單獨(dú)的油相，分別是油相A:含有15mg的胰島素和90mg的PCADK的二氯甲烷0.6ml，具體為將胰島素通過(guò)超聲、渦旋等方法溶解或分散于溶有PCADK的二氯甲烷中；油相B:含有210mg的PLGA的二氯甲烷2.1ml ；
[0050]合并、混合油相A和油相B，13500rpm高速剪切30s得到A/B相(ο/ο);
[0051 ] 所述PCADK與PLGA重量比為3:7 ;
[0052]其中油相A中聚合物質(zhì)量濃度為15% (w/v);
[0053]其中油相B中聚合物質(zhì)量濃度為10% (w/v);
[0054](2)合并、混合步驟(I)得到的A/B相和溶液C，形成乳劑；
[0055]所述溶液C即是水相，具體的溶液C是重量百分比濃度為0.5-10%的氯化鈉和重量百分比濃度為0.5-5%的表面活性劑的水溶液，所述水溶液的體積為100-500mL ;
[0056]本發(fā)明中A/B相和水相溶液C的混合，具體混合時(shí)，在1500rpm攪拌下，將A/B相滴加到水相C中，形成o/o/w相；
[0057](3)將步驟⑵得到的乳劑200rpm低速攪拌l_5h，得到固化微球；
[0058](4)將步驟(3)得到的固化微球進(jìn)行離心、洗滌、冷凍干燥，得到核-殼雙層微球。
[0059]其中PCADK或其衍生物通過(guò)1，4_環(huán)己烷二甲醇與2，2_ 二甲氧基丙烷聚合而成，具有縮酮單元結(jié)構(gòu)，縮酮單元中含有兩個(gè)氧原子，其重均分子量為2000?10000，優(yōu)選為6000?9000 ;進(jìn)一步的，聚縮酮衍生物主要指醇類(lèi)衍生物，尤其為二醇類(lèi)衍生物。
[0060]本發(fā)明所用的PL