專利名稱：苯并吡喃類化合物和它們作為治療劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是基于申請?zhí)枮?5194413.4(國際公布號WO/95/34545)的分案申請。
本發(fā)明涉及新的化合物，制備它們的方法以及它們作為治療劑的用途。
歐洲專利申請No 0126311公開了具有降低血壓活性的取代的苯并吡喃化合物，包括6-乙?；?反-4-(4-氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3-醇。
EP-A-0376524，EP-A-0205292，EP-A-0250077，EP-A-0093535，EP-A-0150202，EP-A-0076075和WO/89/05808(BeechamGroup ple)也記載了某些具有抗高血壓活性的苯并吡喃衍生物。
EP-A-0350805(Biersdorf)，EP-A-0277611，EP-A-0277612，EP-A-0337179和EP-A-0355565(HoechstAktiengesellschaft)；EP-A-0466131(Nissan Chemical IndustriesLtd)，EP-A-0339562(Yoshitomi Pharma Ceuticals)，EP-A-415065(E.Merck)，EP-A-450415(Squibb)，EP-A-0482934，EP-A-0296975，JO-2004791和WO/89/07103也記載了某些可以相信具有抗高血壓活性的苯并吡喃衍生物。
EP-A-0430621和EP-A-0385584(Beecham Group plc)記載了用于制備上述專利申請中記載的化合物的某些中間體的拆分方法。
EP-A-0139992(Beecham Group plc)描述了某些在3-和4-位為順式異構(gòu)現(xiàn)象的苯并吡喃衍生物，它們具有抗高血壓活性。
PCT/GB92/01045(Smithkline Beecham plc)記載了某些氟代苯甲酰氨基苯并吡喃，吡喃并吡啶和四氫萘類化合物，其中3-和4-位的取代基彼此為反式。這些化合物具有特別是抗焦慮和抗驚厥活性。PCT/GB93/02512和PCT/GB93/02513記載了另外一組具有特別是抗驚厥活性的化合物。這些專利申請在本申請的優(yōu)先權(quán)日之時均未公開?，F(xiàn)在驚異地發(fā)現(xiàn)，某些下述化合物具有抗驚厥活性，因之可用于治療癲癇(eilepsy)并相信可以用于治療或預(yù)防焦慮，狂躁，抑郁，與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克有關(guān)的疾病，與停止濫用藥物有關(guān)的疾病，帕金森氏病，精神病，有或無先兆的偏頭痛，大腦局部缺血，早老性癡呆(Alzheimer′s)疾病，精神分裂癥，OCD，即強(qiáng)迫性疾病和/或恐慌和/或攻擊行為。
因之本發(fā)明提供順-6-乙?；?4S-(2，3-二氯苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3S-醇，反-6-乙酰基-4S-(2，3-二氯-4-氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4S-(3，5-二氯苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4S-(3，5-二氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4-(2-苯硫基羰基氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3-醇，反-6-乙?；?4S-(3-苯硫基羰基氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4S-(2，5-二氯-3-苯硫基羰基氨基)-3，4-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，順-6-乙?；?4S-(2，5-二氯-3-苯硫基羰基氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3S-醇，反-6-乙?；?4S-(2，3，5-三氯苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4S-(2，3，4-三氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4S-苯甲酰氨基-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4S-(3-碘代苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-苯并吡喃-2H-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙酰基-4S-(5-氟-2-甲基苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙酰基-4S-(5-氯-2-甲氧苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4-(2，3-二甲基苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3-醇，順-6-乙?；?4S-(2，3-二氯-4-氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3S-醇，順-6-乙酰基-4S-(3-氯-4-氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3S-醇，反-6-乙酰基-4S-(2-氟-5-吡啶羰基氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙酰基-4-(2-苯氧基苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3-醇，反-7-乙?；?4-(4-氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3-醇，反-6-乙酰基-4S-(2-氯-5-氟-2-苯硫基羰基氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，順-6-乙?；?4S-(2-氯-5-氟-2-苯硫基羰基氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3S-醇，順-6-乙?；?4S-(2，3，4-三氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3S-醇，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
這些化合物下文稱為式(I)化合物。
應(yīng)該理解式(I)化合物在3-和4-位有手性碳原子，因此存在對映體，本發(fā)明包括每種對映異構(gòu)體及包括其外消旋體的混合物。還應(yīng)進(jìn)一步理解為，對于不同的應(yīng)用，個別的對映體形式是優(yōu)選的，因此，除了用于蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克之外，3R，4S和3S，4S對映體是優(yōu)選的，但是對于用于治療蛛網(wǎng)膜下出血和神經(jīng)性休克，3S，4R和3R，4R對映體是優(yōu)選的。
應(yīng)理解式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽也包括這些化合物的溶劑化物，例如水合物。
本發(fā)明還提供上述定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，根據(jù)其是順式或反式，它們主要是以3S，4S或3R，4S對映異構(gòu)體形式存在。
例如，應(yīng)理解術(shù)語“主要是以3S，4S對映異構(gòu)體存在”意思是和3R，4R對映異構(gòu)體比較，存在大于50％的3S，4S對映異構(gòu)體。
更優(yōu)選存在大于60％的3S，4S對映異構(gòu)體，進(jìn)一步優(yōu)選存在大于70％的3S，4S對映異構(gòu)體，甚至更優(yōu)選存在大于80％的3S，4S對映異構(gòu)體，進(jìn)一步更優(yōu)選存在大于90％的3S，4S對映異構(gòu)體，最優(yōu)選和3R，4R對映體比較，存在大于95％的3S，4S對映異構(gòu)體化合物。
同樣情況適用于3R，4S異構(gòu)體的情況。
這些化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽是新的化合物并且構(gòu)成本發(fā)明的優(yōu)選方面。
對哺乳動物給藥可以通過口服，非腸道，舌下或透皮給藥的方式。
治療上述疾病的有效量依賴于一般的因素如被治療疾病的性質(zhì)及嚴(yán)重程度以及哺乳動物的體重。但是單位劑量通常含1-1000mg，合適的為1-500mg，例如2-400mg的數(shù)量范圍如2，5，10，20，30，40，50，100，200，300和400mg的活性化合物。單位劑量通常可一次給藥，或每天給藥一次以上，例如每天1，2，3，4，5或6次。更通常是每天給藥1-4次，例如對于70kg體重的成年人，總的日劑量范圍是1-1000mg，例如1-500mg，即約為0.01-15mg/kg/天的范圍，更通常為0.1-6mg/kg/天，例如1-6mg/kg/天。
極為優(yōu)選式(I)化合物以單位劑量組合物的形式給藥，如單位劑量口服(包括舌下給藥)，直腸，局部或非腸道(特別是靜脈)給藥的組合物。
這種組合物可以通過混合來制備，并合適地采用口服或非腸道給藥，可以是片劑，膠囊，口服液體制劑，粉劑，顆粒劑，錠劑，可配制的粉劑，注射或灌注用溶液或懸浮液或栓劑。口服給藥的組合物是優(yōu)選的，特別是成型的口服組合物，因為它們對于一般使用更為方便。
口服給藥的片劑和膠囊通常以單位劑量形式被提供，通常含有賦形劑如粘合劑，填充劑，稀釋劑，成片劑，潤滑劑，崩解劑，著色劑，矯味劑和潤濕劑。片劑可以按照本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行包衣。
使用的合適的填充劑包括纖維素，甘露醇，乳糖和其它類似物。合適的崩解劑包括淀粉，聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物如淀粉乙醇酸鈉。合適的潤滑劑例如包括硬脂酸鎂。合適的藥學(xué)上可接受的潤濕劑包括十二烷基硫酸鈉。
這些固體的口服組合物可以用摻合，填充，壓片等常規(guī)方法制備。重復(fù)的摻合操作可使活性成分充分分散到使用大量填充劑的這種組合物中。這種操作當(dāng)然是本領(lǐng)域的常規(guī)操作。
口服液體制劑例如可以是水的或油的懸浮液，溶液，乳液，糖漿或酏劑，或者可以干的產(chǎn)品形式提供，使用前用水或其它合適的載體現(xiàn)場配制，這種液體制劑可以含常規(guī)的添加劑如懸浮劑例如山梨糖醇，糖漿劑，甲基纖維素明膠，羥乙基纖維素，羧甲基纖維素，硬脂酸鋁膠體或氫化的食用脂肪；乳化劑例如卵磷脂，脫水山梨醇單油酸酯，阿拉伯膠；非水性載體(可包括食用油)例如是杏仁油，分餾的椰子油，油性的酯如甘油酯，聚乙二醇酯或乙醇酯；防腐劑如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸，假如需要還可加入常規(guī)調(diào)味劑或著色劑。
口服制劑也包括常規(guī)的緩釋劑，例如腸溶片或顆粒。
對于非腸道給藥，液體單位劑量形式可以包括化合物和無菌載體被制備。根據(jù)載體性質(zhì)及所需濃度，化合物可以被懸浮或被溶解在其中。非腸道給藥的溶液的制備方法通常是將化合物溶在載體里，過濾，滅菌，再裝入合適的小瓶或安瓶中并封口。佐劑如局部麻醉劑，防腐劑和緩沖劑溶在載體中也是有利的。為了增加穩(wěn)定性，裝入小瓶后可將組合物冷凍并于真空下除去水。
非腸道給藥的懸浮液實質(zhì)上用和上述相同的方法制備，只是將化合物懸浮在載體中而不是溶解在載體中，并且于懸浮在無菌載體中之前通過暴露于環(huán)氧乙烷滅菌。將表面活性劑和潤濕劑加入到組合物中以促進(jìn)本發(fā)明化合物的均勻分布是有利的。
通常，組合物一般帶有書寫的或印刷的用于所涉及的藥物治療的使用指南。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種藥物組合物，它用于治療和預(yù)防焦慮，狂躁，抑郁，和蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克有關(guān)的疾病，與停止濫用藥物如可卡因，尼古丁，醇及苯并二氮雜有關(guān)的疾病，用抗驚厥劑可治療或可預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛，大腦局部缺血，早老性癡呆，精神分裂癥和/或攻擊行為。該組合物包括式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還提供治療和/或預(yù)防下述疾病的方法焦慮，狂躁，抑郁，與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克有關(guān)的疾病，與停止濫用藥物如可卡因，尼古丁，醇和苯并二氮雜有關(guān)的疾病，用抗驚厥劑可治療和/或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏疾病，精神病，偏頭痛，大腦局部缺血，早老性癡呆，精神分裂癥和或攻擊行為。該方法包括對需要的患者施用有效量的或預(yù)防量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)化合物包括其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療和或預(yù)防下述疾病的藥物方面的用途，這些疾病是焦慮，狂躁，抑郁，與蛛網(wǎng)膜下出血或神經(jīng)性休克有關(guān)的疾病，與停止濫用藥物如可卡因，尼古丁，醇和苯并二氮雜有關(guān)的疾病，用抗驚厥劑可治療或預(yù)防的疾病如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛，大腦局部缺血，早老性癡呆，精神分裂癥和/或攻擊行為。
本發(fā)明另一方面提供了含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為治療劑的用途，特別是治療和/或預(yù)防焦慮，狂躁，抑郁，和蛛網(wǎng)膜下出血及神經(jīng)性休克有關(guān)的疾病，和停止濫用藥物如可卡因，尼古丁，醇及苯并二氮雜有關(guān)的疾病，用抗驚厥劑可治療或預(yù)防的疾病，如癲癇，帕金森氏病，精神病，偏頭痛，大腦局部缺血，早老性癡呆，精神分裂癥和/或攻擊行為。
這種組合物可以按照前述方法被制備。
一般來說式(I)順式化合物可以從相應(yīng)的反式化合物制備，其制備方法一般記載于EP-0126311，EP-0376524，EP-205292，EP-0250077，EP-0093535，EP-0150202，EP-0076075，WO/89/05808，EP-0350805，EP-0277611，EP-0277612，EP-0337179，EP-0339562，EP-0355565，EP-A-415065(E.Merlk)，EP-A-450415(Squibb)EP-0466131，EP-A-0482934，EP-A-0296975，JO-2004-791和WO/89/07103中。
式(I)的順式化合物可按照通常的方法或EP-A-0139992中記載的類似方法制備。
式(I)的順式化合物也可以按照G.Burrell等人(Tet.Letters，31，3649-3652(1990)或按照U.Quast和E.Villhauer，Eur(J.Pharmacol，Molecular Pharmacology Section 245，165-171(1993))所述的方法制備。
應(yīng)該懂得式(I)的外消旋體可以被拆分，或者式(I)的對映體純的化合物可以用本領(lǐng)域常規(guī)的方法制備，特別是用EP-043063l和EP-0355584中所述的方法制備。
應(yīng)該明白，式(I)化合物優(yōu)選以所需的對映體形式被制備，方法是用在WO/91/14694或WO93/17026中所述的催化劑和條件下形成手性純的環(huán)氧化物，然后用其中所述方法將該環(huán)氧化物轉(zhuǎn)化成所需的化合物。
式(I)的反式化合物可按照PCT/GB 92/01045所述的方法制備，該方法本文作為參考，或者式(I)的反式化合物可以按照上述專利中提到的類似方法被制備。
以下化合物按照上述專利公開中所述的類似方法制備。
下述說明， 實施例及藥理學(xué)的試驗結(jié)果用以說明本發(fā)明。說明12，3-二氯-4-氟苯甲酸2，3-二氯氟苯(5g)，三氯化鋁(6，91g)和乙酰氯(3.85ml)于130℃，氬氣氛中加熱20小時，將黑色殘留物倒入濃鹽酸-冰的混合物中，再加入乙醚，分層，有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉溶液和食鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到的黑色殘留物用正己烷處理，過濾正已烷溶液，蒸發(fā)溶劑得到2，3-二氯-4-氟苯乙酮(1.04g)。
將此粗產(chǎn)品(0.69g)和5％高氯酸鈉(23ml)，二噁烷(20ml)一起回流16小時，將溶液冷卻并蒸發(fā)，加入水(20ml)和濃-HCl至pH為1，過濾沉淀出的固體，從丙酮-水中重結(jié)晶，得到2，3-二氯-4-氟苯甲酸(0.36g)說明2順8-乙?；?2-(3-氯-4-氟苯基)-3a，9b-二氫-4，4-二甲基-4H-苯并[b]吡喃并[4，3-d]噁唑反6-乙烯基-4S-(3-氯-4-氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-苯并[b]吡喃-3R-醇(WO94/13656的實施例62化合物)(3.37g，8.6mmol)的無水二氯甲烷(90ml)溶液和DAST(1.40ml，10.59mmol)于室溫保持2天。真空蒸發(fā)，殘留物用Kieselgel 60色譜法提純，用25％乙酸乙酯/正己烷洗脫，得到標(biāo)題的噁唑啉，為無色膠狀物(2.50g，78％)
1Hnmr(CDCl3)δ1.35(3H，s)，1.59(3H，s)，2.60(3H，s)，4.80(1H，d)，5.35(1H，d)，6.90(1H，d)，7，15(1H，t)，7.82(1H，m)，8.00(1H，dd)，8.10(1H，d).
mp203℃，[α]20D＋28.9°(MeOH，c＝1.0)
NMR(CDCl3)δ1.40(3H)，1.54(3H)，2.06(1H，d)，3.84(1H，dd)，5.60(1H，dd)，6.92(1H，d)，7.22(1H，brd)，7.30(1H)，7.85(1H，dd)，7.96(1H).
真空蒸發(fā)得到淺黃色膠狀物，在Kieselgel 60上用色譜法提純，用25％乙酸乙酯/正己烷洗脫。合并適當(dāng)?shù)募壏?，從丙?正己烷中重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物，為白色晶體(1.20g，46％)，mp151-153℃測定位 C61.04，H4.91，N3.86％理論值 C61.31，H4.89，N3.57％(C20H19ClFNO4)
νmax(KBr)3360，3310，2950，1680，1640，1260 and 840cm-11Hnmr(CDCl3)δ1.40(3H，s)，1.56(3H，s)，2.12(1H，d，exD2O)，2.50(3H，s)，3.84(1H，dd)，5.62(1H，dd)，6.91(1H，d)，6.95(1H，br，d)，7.23(1H，t)，7.75(1H，m)，7.83(1H，dd)，7.92(1H，d)，7.96(1H，dd).
m/z391 (M+，1％)，373(4)，358(88)，203(50)，157(100).
本發(fā)明式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用下述方法做治療用途方面的試驗。
用原先由File(1980，J.Neurosci.Methods，2，219-238)所述的鼠群居互相作用方法評估潛在的抗焦慮性質(zhì)。在此模型中，抗焦慮劑選擇性地增加群居互相作用，不依賴于對運動活性的任何影響。方法試驗前將雄性Spragne-Dawley大鼠(Charles River，U.K.，250-300g)單獨喂養(yǎng)3天，在試驗當(dāng)天將動物任意分成8-16只的組，用各種劑量的化合物(1-300mg/kg)或賦形劑口服劑量體積1ml/kg，給藥后60分鐘，以重量-和治療-匹配的雄鼠對(第一次相通)放入一高亮度的，條件不熟悉的群居相互作用箱中，該箱由白色甲基丙烯酸甲酯制成，54×37×26cm，帶透明的甲基丙烯酸甲酯前窗。地板被分成24塊相等的方?jīng)Q并照亮(115勒克司)。通過遙控“隱蔽的”監(jiān)視所跨過的方塊的數(shù)目對在積極的群居相互作用(嗅，修飾，跟隨，騎，上下攀登，打斗，咬)中所用的時間(秒)評分(做為運動指數(shù))。
對每一特定的治療組計算在群居互相作用中所用時間和跨過方塊的數(shù)量的平均和標(biāo)準(zhǔn)誤差。給藥引起的變化用和對照值比較增加或降低的百分?jǐn)?shù)表示，使用Dunnett′s多次比較方法隨后用變化的數(shù)值單向分析，在給賦形劑和給藥治療組之間進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較。
藥物懸浮在1％甲基纖維素中。2.MES試驗最大電休克發(fā)作(MES)界線試驗在嚙齒目動物中對于測定潛在的抗驚厥性質(zhì)是特別敏感的。1在此模型中，抗驚厥劑提高電誘發(fā)的發(fā)作界線，而防預(yù)驚厥劑降低發(fā)作界線。方法小鼠(雄性，Charles River.U.K.CD-1株，25-30g)被隨意分為10-20只為一組，以各種劑量的化合物(0.3-300mg/kg)或賦形劑口服或腹膜內(nèi)給藥劑量體積10ml/kg。給藥30或60分鐘后通過角膜電極進(jìn)行簡單的電休克(0.1秒，50Hz，正弦波)。在特定治療組中50％鼠被誘發(fā)強(qiáng)直性發(fā)作所需的平均電流和標(biāo)準(zhǔn)偏差(CC50)通過Dixon和Mood(1948)2的“上下法”測定。用Litchfield和Wilcoxon(1949)的方法在給賦形劑組和給藥組之間進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較。
在對照組動物中，CC50一般是14-18mA，因之對照組的第一只動物遭到16mA的電流。假如強(qiáng)直性發(fā)作未出現(xiàn)，對隨后的小鼠增加電流。假如出現(xiàn)了強(qiáng)直性驚厥，隨后就降低電流，直到該組內(nèi)所有的鼠做完試驗。
計算出對比于對照組，每一組CC50的百分?jǐn)?shù)增加或降低。
使用Hugo Sachs Electronik Constant Current Shoek Generator完成研究，上述休克發(fā)生器能在全部的0-300mA變化之間控制休克水平，通常使用2mA的間隔。
藥物被懸浮于1％甲基纖維素中。參考1、Losche，W.和Schmidt，D.(1988)癲癇Res.，2，145-181；2、Dixon.W.J.和Mood，A.M.(1948)，J.Amer.Stat.Assn.，43，109-126；3、Litchfield，J.T.和Wilcoxon，F(xiàn).(1949)。藥理學(xué)與實驗治療學(xué)雜志，96，99-113。結(jié)果實施例17化合物在p.o.10mg/kg給藥時增加休克界線105％。3X-型迷宮試驗用下述方法檢查式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的治療用途。引言測試焦慮的X-型迷宮試驗(Handley and Mithani，1984)檢查天真的大鼠在裝置中的探索性反應(yīng)，上述裝置有抗焦慮的(打開的臂)和相對不抗焦慮的(關(guān)閉的臂)兩個地方。用藥物處置后對打開的臂的探索選擇性增加被假定指出抗焦慮效果。方法將X-型迷宮從地面提高70cm。迷宮由兩個關(guān)閉的臂45cm長×15cm(寬)×10cm(高)和兩個打開的臂45×10×1cm構(gòu)成，并且每一類型的兩個臂被此相對。兩種類型的臂標(biāo)志成兩個相等的部分。將鼠放在X-迷宮的中心，觀察10分鐘，在此期間記錄以下參數(shù)1)進(jìn)入(a)打開的臂(b)關(guān)閉的臂(c)打開的臂的末端(d)關(guān)閉的臂的末端的次數(shù)及所用時間。2)十字路口部分的次量。在打開的臂中引起的恐懼驅(qū)動超過在關(guān)閉的臂中引起的恐懼驅(qū)動，鼠通常表現(xiàn)出明顯地選擇關(guān)閉的臂?？菇箲]藥增加鼠進(jìn)入打開的臂的外半部的次數(shù)和所用的時間，以及進(jìn)入整個打開的臂的百分?jǐn)?shù)和所用的時間，對每一動物計算這四個表示焦慮的數(shù)據(jù)及在十字路口部分游蕩的次數(shù)。在試驗前30到60分鐘對6-12只鼠的每組用腹膜內(nèi)或口服方式給藥。用Mann-Whitncy“U”試驗(twotailed)方法在給賦形劑和給藥組之間作統(tǒng)計學(xué)比較。
S.L.Handley和S.Mithani，藥學(xué)文獻(xiàn)(Arch.Pharmacol)，1984，327，1-5。4.Mongrel狗推遲的大腦血管痙攣用下述方法試驗式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在治療方面的用途。
25只雄性mongrel狗，體重9-12kg被用以此項研究。
動物按照實驗室動物護(hù)理和使用指南被喂養(yǎng)[DHEW(DHHS)公開號No(NIH)85-23修正版1985]。使用實驗室動物的所有方法都是Smithkline.Beecham Pharmaceutical的Institutional Animal Care andUse Committee批準(zhǔn)的。每個動物用戊巴比妥(35mg/kg，iv)麻醉并以仰臥姿勢放于加熱的手術(shù)臺上。所有的動物被切開氣管并使癱瘓(筒箭毒堿，0.1mg/kg，iv)并用室內(nèi)空氣人工通氣。末端一定時起落的CO2(etCO2)被連續(xù)監(jiān)視并周期性地進(jìn)行動脈血氣體的分析，以保證在每一試驗的整個過程中穩(wěn)定的和適當(dāng)?shù)赝?。聚乙烯的插管被放入左外頸靜脈和右股動脈及給藥的靜脈，分別監(jiān)視動脈血壓和血樣，然后左椎動脈的經(jīng)股動脈的導(dǎo)管插入術(shù)使用5只法國的Lehman滌綸插管(Bard，Tewksbury MA)通過左股動脈進(jìn)行。需要的話試驗前用戊巴比妥(5mg/kg，iv)補(bǔ)充麻醉。
本發(fā)明化合物對于急性大腦血管痙攣的效果用15只狗評價。椎間注射放射性對比物(碘海醇300)后，在所有動物中得到在前的脊柱動脈和基底動脈的對照數(shù)減血管造影照片。在每只狗中，通過寰枕膜針穿刺術(shù)從骨池中取出4ml腦脊液，并注入4ml自身靜脈血。腦池內(nèi)供血30分鐘后對每只狗重復(fù)血管造影照片，基底的和在前脊柱動脈的急性血管痙攣被鑒定并被定量。灌注賦形劑(10％聚乙二醇200)30分鐘對急性血管痙攣沒有影響，30分鐘灌注試驗化合物對急性血管痙攣的逆轉(zhuǎn)的影響在底基的和在前的脊椎動脈中被觀察到。
本發(fā)明化合物的效果也用推遲大腦血管痙攣的慢性犬模型檢查(大腦血管痙攣的兩個血友病性出血模型)。在此模型中，對照的椎骨血管造影照片被得到，自身血在腦池內(nèi)被供給1天(如上述)，3天時重復(fù)腦池內(nèi)供血，7天時對所有動物用血管造影術(shù)方法定量嚴(yán)重的推遲血管痙攣。灌注賦形劑(1％聚乙二醇200)60分鐘對在底基的和在前的脊柱動脈中看到的推遲血管痙攣無影響(n＝5)；灌注試驗化合物對于極大地推遲腦血管痙攣的逆轉(zhuǎn)的效果指出，本發(fā)明化合物是有活性的。
使用下述方法可以檢查式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的治療用途。
1)抗帕金森氏病活性6-羥基多巴胺-損害的鼠模型由Ungerstedt，U，1971，斯堪的納維亞生理學(xué)報367，49-68和/或Ungerstedt，U，1971 ActuPhysiol，Scand.367，69-93記載的上述試驗可用于確定本發(fā)明式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的抗帕金森氏病活性。
2)抗精神病活性苯異丙胺誘發(fā)的鼠過度運動模型由Kokkindis L，和Anisman，M，1980，Psychological Bulletin，88，551-579記載的上述試驗可用于確定本發(fā)明式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的抗精神病活性3)抗偏頭痛活性皮質(zhì)擴(kuò)散抑郁的偏頭痛由Wahl等人1987，BrainResearch，411，72-80所述的上述試驗可用于確定本發(fā)明式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的抗偏頭痛的活性。動物的準(zhǔn)備試驗用雌性或雄性貓(2.5-3.0kg)進(jìn)行，它們被禁食過夜，可以飲水。用4-5％三氟溴氯乙烷麻醉并通過靜脈給藥α-氯醛糖(90-110mg/kg)維持。直腸溫度和酸堿狀況維持在生理學(xué)范圍內(nèi)，切開右股動脈和靜脈以便分別測量壓血，動脈血樣和給藥，從血壓信號測定心率并記錄，實行左側(cè)頂骨顱骨切開術(shù)和durectomy，腦用37℃預(yù)熱的礦物油覆蓋，用體內(nèi)電視顯影術(shù)研究脈管大小的變化并記錄于錄相帶上。皮質(zhì)擴(kuò)散抑郁的誘發(fā)。
通過向遠(yuǎn)離記錄電極的大腦側(cè)裂上的腦回區(qū)，可看到的脈管和其它血管給少量(30mg結(jié)晶)KCl誘發(fā)CSD。因大腦用一層溫?zé)岬牡V物油覆蓋，KCl在加入5分鐘內(nèi)慢慢溶于大腦，隨后殘留的KCl用鹽水拭子從腦表面洗刷掉，在至120分鐘期間內(nèi)記錄細(xì)胞外潛在的和動脈及靜脈尺寸的變化。藥物處理實施例17的化合物，懸浮液(10mg/kg，ip)或賦形劑(1％labrasol i.p)在CSD開始前90分鐘被給藥。
在對照動物(n＝4)中，KCl-誘發(fā)的再現(xiàn)CSD過程在觀察期間被監(jiān)視，相反，實施例17處理的動物(n＝3)僅僅最初的CSD過程被檢查對于施用KCl的反應(yīng)。在對照和治療組中CSD過程的總的中值(min-max)數(shù)分別是5.5(4-9)和2(1-2)。類CSD過程的總持續(xù)時間在對照組是60.3±6分鐘(n＝4)，在實施例17治療動物(l＝3)大大(p＜0.05)降低到13.7±0.3分。4)大腦局部缺血a)Mongolian沙土鼠試驗體內(nèi)試驗用成年Mongalian沙土鼠(Tumblebrook Farm(MA)體重60-80g)完成。暫時的前腦缺血通過在2.5％isoflourane 100％O2麻醉下兩側(cè)頸動脈的結(jié)扎產(chǎn)生，動物被放在加熱墊上以維持體溫37℃。普通的頸動脈被暴露，動脈瘤小夾放在兩動脈上一段時間，如圖的說明。在閉塞(預(yù)處理)前30分鐘或者其后30分鐘，溶于食鹽水中的PBN以藥丸腹膜內(nèi)給藥，并于6小時再灌注，隨后以同樣劑量b.i.d兩天(后處理)。為了定量CA 1神經(jīng)元，將動物于局部缺血后7天殺死并用緩沖的福爾馬林灌注。取出腦，放于福爾馬林中3天，包埋在石蠟中，切下7-μm厚的冠狀部分(1.5-1.9mm前囪15)，用勞思氏紫染色。對每只動物計算在3部分兩海馬邊的CA1層約750-μm長的完整神經(jīng)元的數(shù)目。b)MCAO方法從商店買到三種成熟的雄性鼠(SHR)(Taeonic Farms，Germantown，NY；Charles River，Danvers，MA，和Charles River)18周令，體重250-300g，用于此研究之前喂養(yǎng)2-4周。為了證實所研究的三種動物確實是高血壓和正常血壓的，將每種動物的組用isoflourane(Anaquest，Madison，WI)麻醉，并在無菌條件下經(jīng)常地記錄血壓。股動脈用聚乙烯管(PE 60；Clay Adams.Parsippany，NJ)插套管并延伸到降主動脈。管子從動脈經(jīng)皮下導(dǎo)入，并在頸背正下方的肩甲骨之間施外置術(shù)，并用無菌等滲食鹽水清洗/填充。切口用2-0絲線縫好，并用5％利多卡因軟膏處理(Astra Pharmaceuticals，Westborough，M.A.)。從外科手術(shù)/麻醉5分鐘內(nèi)記錄動物的狀況，手術(shù)后4-5小時記錄平均動脈血壓(5min/rat)。記錄是通過每只鼠外置術(shù)管連接到Statham壓力傳導(dǎo)器(P2.3Db；Statham MediealInstrumentS.Los Angeles，(A)進(jìn)行的，傳導(dǎo)器連接到多種波動描記器(ModelR 711Beckman Instruments，Inc.，F(xiàn)ullerton，CA)上。病灶的發(fā)作方法在用戊巴比妥鈉(65mg/kg i.p.，需要的話補(bǔ)加)麻醉下，對SHR，SD大鼠完成MCA0或Sham手術(shù)。手術(shù)前后所有的動物都可以喂養(yǎng)后飲水。在整個手術(shù)過程中使用加熱墊維持體溫為37℃。類似于上述方法(2.4)進(jìn)行外科手術(shù)。剃光頭右背側(cè)表面并涂上碘，將鼠放在超實體性的裝置上(David Kopf.Instruments，Tujunga，CA)，在頭頂右側(cè)手術(shù)。在眶和外聽道之間切開1-2cm的切口，從頭顱剖開顳肌，并不要損傷顴骨或下頜神經(jīng)縮合，在顯微鏡下用食鹽水灌注，在嘴到顴骨-鱗部顳骨頭顱骨縫之間作2-3mm的顱骨切開術(shù)。使用30口徑針的改進(jìn)的針尖在動脈上打開硬腦膜。對于永久性的右部MCAO，使用電凝集(Force2Electrosurgicul Generator，Valley LabInc.，Boulder，Co)。動脈同時被閉合，在嘴到外側(cè)嗅覺道之間在下大腦靜脈處切開，一小條無菌鹽水浸漬的Gelfoam(Upjohn，Kalamazoo，M1)放在顱骨上，顳肌和皮被封在兩層內(nèi)。動物在加熱燈下從麻醉中恢復(fù)并放回它們的籠子。MCAO后24小時將其殺死，腦子準(zhǔn)備作反應(yīng)性組織學(xué)檢查。局部缺血損傷測定神經(jīng)學(xué)評價之后(手術(shù)后24小時)鼠用過量的戊巴比妥鈉致死。在2-3分鐘內(nèi)取出腦，用鼠腦切片器[(59)；Zivic-Miller Laboratories Inc；Allison Park，PA)從嗅球到皮層腦的接合處制備六個冠前腦切片(2mm厚)，將切片立即浸入1％三苯基四唑鎓氯化物(TTC)的磷酸鹽緩沖溶液中，(37℃，20-30分鐘(6.78))。通過過濾到10％磷酸鹽緩沖的福爾馬林中固定染色的組織。用偏振照像機(jī)給每個TTC染色部分的兩側(cè)拍彩色照片。用影像分析系統(tǒng)對上述照片作局部缺血性損傷的定量分析。(Amersham RAS 3000；Loats Associates，Inc.)。手術(shù)后對每只鼠的全部前腦(共11個平面)評估形態(tài)學(xué)變化，從6個2mm厚部分的每邊及從前鹵(97)的相應(yīng)的約1mm部分(+5mm-5mm)得到11個平面圖像并包括完整的前腦，這些平面圖象表面(從照片上看)被數(shù)字化，并用于圖象分析系統(tǒng)確定梗死的和腫脹的面積，如前述(2，4，98，122)對每一切片確定由于MCA0導(dǎo)致的局部缺血損傷的兩個參數(shù)。“半球腫脹”表示同側(cè)半球(即手術(shù)邊)對于對側(cè)半球(正常的)大小的增加的百分比，用下式計算 表示對于對側(cè)半球(正常的)梗死組織百分?jǐn)?shù)的“梗死面積”用下式計算 腫脹和梗死面積參照對側(cè)半球表示(即同側(cè)局部缺血損傷被標(biāo)準(zhǔn)化為正常的對側(cè)半球)。對每個切片確定這些參數(shù)，評估整個前腦損傷的外形(即“前腦外形圖”)，使用上述公式中每個切片數(shù)據(jù)的總和評估“總的”前腦變化。
與半球腫脹有關(guān)的隨著MCAO的腦水腫的出現(xiàn)是通過比較前述的濕/干重量確定的(45，118)，Sham或MCAO手術(shù)后24小時將鼠用過量的戊巴比妥鈉致死，迅速取出腦，在腦皮層接合部分離出前腦，切成兩個半球，在斷頭術(shù)2分鐘內(nèi)用Mettler Type H5 Chemical balance(化學(xué)樣)(Mettler Instruments Corp，Hightstown，NJ)測量每個前腦半球。于80℃干燥器中將該半球干燥48-72小時后用同一個秤測出干重，每個半球的水份從濕干重差除以濕重乘100計算
權(quán)利要求
1.選自下述的化合物反-6-乙?；?4S-(3，5-二氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4S-(2，3，4-三氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，反-6-乙?；?4S-(5-氟-2-甲基苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3R-醇，和反-7-乙酰基-4-(4-氟苯甲酰氨基)-3，4-二氫-2，2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3-醇。
2.用于治療和/或預(yù)防下述疾病的藥物組合物抑郁，用抗驚厥劑可治療/或可預(yù)防的疾病，癲癇，偏頭痛，和/或大腦局部缺血，該組合物包含權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和藥學(xué)上可接受的載體。
3.權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用作藥物。
4.權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療和/或預(yù)防下述疾病的藥物上的用途抑郁，用抗驚厥劑可治療或可預(yù)防的疾病，癲癇，偏頭痛，和/或大腦局部缺血。
5.含權(quán)利要求1化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
6.權(quán)利要求1化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為治療劑的用途，特別是用于治療和/或預(yù)防抑郁，用抗驚厥劑可治療或可預(yù)防的疾病，癲癇，偏頭痛，和/或大腦局部缺血。
全文摘要
本發(fā)明涉及某些在C－4位具有取代的苯甲酰氨基的順－和反－苯并吡喃化合物以及它們在治療和/或預(yù)防某些CNS疾病中的用途。
文檔編號A61K31/00GK1336369SQ0112436
公開日2002年2月20日 申請日期1995年5月31日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月10日
發(fā)明者W·N·陳, H·K·A·莫爾根, M·湯普森, J·M·埃文斯 申請人:史密絲克萊恩比徹姆有限公司