氘修飾的碳甙衍生物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物化學領域，涉及氘修飾的碳甙衍生物，具體涉及一種如式I所示的化合物。本發(fā)明還涉及氘修飾的碳甙衍生物的制備方法、含有氘修飾的碳甙衍生物的藥物組合物以及氘修飾的碳甙衍生物或其藥物組合物在制備治療糖尿病的藥物中的用途。
【專利說明】
気修飾的碳it衍生物
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學領域，涉及氘修飾的碳甙衍生物。本發(fā)明還涉及其制備方法、 含氘代修飾的碳甙衍生物的藥物組合物、氘代修飾的碳甙衍生物及其藥物組合物在制備治 療糖尿病的藥物中的用途。
【背景技術】
[0002] SGLT2是近年來發(fā)現(xiàn)的治療糖尿病的新靶點。血漿中的葡萄糖在腎小球中被過濾， 并在腎近端小管再被主動吸收回到血液中，研究表明，SGLT2是控制這一重吸收過程的主要 蛋白。因此，抑制SGLT2的活性就能增加尿中葡萄糖的排泄從而降低血糖濃度。 Canagliflozin(卡格列凈，（1S)-1，5-脫氫-1-C-[3-[[5-(4-氟苯基)-2-噻吩基]甲基]-4-甲基苯基]-D-葡萄糖醇)是目前首個獲得FDA批準的SGLT2抑制劑類藥物。canaglif lozin通 過抑制腎臟對葡萄糖的重吸收，增加葡萄糖排泄，進而降低糖尿病患者已升高的血糖水平。 目前，canagliflozin單藥治療以及與其它降糖藥(包括二甲雙胍、磺酰脲類、吡格列酮及胰 島素)聯(lián)合用藥的相關研究已經(jīng)完成。canagl if lozin不宜用于1型糖尿病患者、糖尿病酮癥 酸中毒患者、嚴重腎損傷、終末期腎臟病患者或透析患者。
[0003] FDA要求canagliflozin完善五項上市后研究：心血管轉(zhuǎn)歸試驗、藥物警戒方面的 研究(加強對惡性腫瘤、嚴重胰腺炎、嚴重過敏反應、光敏性反應、肝異常和不良妊娠結(jié)果的 監(jiān)測）、骨安全研究以及兩項針對兒童患者的研究(包括藥代動力學、藥效學研究以及安全 有效性研究hcanagliflozin常見的副作用有陰道真菌感染(外陰陰道念珠菌病)及尿路感 染。由于canagliflozin與利尿作用相關，所以該藥可造成血容量降低，進而引起直立性或 體位性低血壓（當站立時，血壓突然降低），或因此導致頭暈或昏厥癥狀。這些癥狀在治療頭 三個月較常見。盡管canagliflozin臨床療效顯著，但臨床上仍繼續(xù)需要副作用少且作用時 間長的高效安全降糖藥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明一方面提供一種式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0006]其中Ri、R2獨立地選自 Η(氫）、D(氘)或0H;R4、R5、R6、R7、R8、R9、RlQ、Rll、Rl2、Rl3、Rl4、Rl5 分別獨立地選自Η(氫)或D(氘），R3獨立地選自&-C4烷基或氘代&-C4烷基，條件是心~1? 15中 至少包含一個氘原子。
[0007] 在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，R3獨立地選自CH3、CH 2D、CHD2或⑶3。
[0008] 在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，式I所示化合物的實例如下：
[0009]
[0010]
[0011] 在本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方案中，式I所示的化合物的實例如下：
[0012]


[0015] 術語"藥學上可接受的鹽"指保留了特定化合物的游離酸和堿的生物學效力而沒 有生物學不良作用的鹽。藥學上可接受的鹽的例子包括但不限于：（1)酸加成鹽，和無機酸 例如鹽酸、硫酸、氫溴酸、硝酸、磷酸等形成的鹽;或和有機酸例如蘋果酸、富馬酸、馬來酸、 苯甲酸、苯乙酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、羥基乙酸、肉桂酸、丙酮酸、甲酸、 乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、丙烯酸、扁桃酸等形成的鹽;或者(2)堿加成鹽，和堿金屬例如鋰、 鈉、鉀等形成的鹽;和堿土金屬例如鈣、鎂等形成的鹽;和有機堿例如銨、膽堿、二乙醇胺、賴 氨酸、乙二胺、叔丁胺、叔辛胺、三(羥甲基)氨基甲烷、N-甲基葡萄糖胺、三乙醇胺、脫氫松香 胺等形成的鹽。
[0016] 本發(fā)明中所標記合成的化合物的任何原子若沒有特別指定，可代表該原子的任何 一種穩(wěn)定的同位素。除非特別說明，當結(jié)構(gòu)中某一位置被定義為Η即氫(H-1)時，該位置僅含 天然存在的同位素量。同樣，除非特別說明，當結(jié)構(gòu)中某一位置被定義為D即氘(Η-2)時，該 位置含同位素量至少比天然存在的同位素量(0.015%)大3340倍（即至少會50.1 %氘同位 素)。
[0017] 本發(fā)明中所標記合成的化合物的氘代率是指標記合成的同位素含量與天然存在 的同位素量的比值。本發(fā)明中所標記合成的化合物的每個指定氘原子的氘代率可至少為 3500倍（52.5%)、至少為 4000 倍(60%)、至少為 4500 倍(67.5%)、至少為 5000倍(75%)、至 少為5500倍（82.5%)、至少為6000倍（90%)、至少為6333.3倍（95%)、至少為6466.7倍 (97 % )、至少為6566 · 7倍(98 · 5 % )、至少為6600倍(99 % )、至少為6633 · 3倍(99 · 5 % )。
[0018]本發(fā)明中的同位素體(isotopologues)是指在化學結(jié)構(gòu)方面僅有同位素組成上不 同的化合物。本發(fā)明中所標記合成的化合物具有相同的化學結(jié)構(gòu)、僅在其分子的原子組成 中同位素的變化。因此，本發(fā)明中所標記合成的在特定位置含氘化合物也同樣會含非常少 的該位置的氫同位素體，本發(fā)明中所標記合成的化合物中的某位置的氫同位素體的量取決 許多因素，其中包括氘代試劑(〇 20、02、似804、1^104等）的氘同位素純度以及引入氘同位素 合成方法的有效性。然而，如前所述這種某位置的氫同位素體的量總數(shù)將少于49.9%。本發(fā) 明中所標記合成的化合物中的某位置的氫同位素體的量總數(shù)將少于47.5%、40%、32.5%、 25%、17.5%、10%、5%、3%、1%或0.5%。
[0019] 本發(fā)明中所標記合成的化合物會有不對稱手性中心，包括由氘取代引起的不對稱 手性中心。本發(fā)明中所標記合成的化合物可以是單一的對映體，也可以是對映體混合物。因 此，本發(fā)明中所標記合成的化合物可能會以消旋體的形式或單一的相應異構(gòu)體的形式被分 離出來。單一的相應異構(gòu)體含有非常少量的其它異構(gòu)體，例如小于25%、10%、2%或1 %。
[0020] 本文中，任何未指定為氘的各原子以其天然同位素豐度存在。
[0021 ]本發(fā)明再一方面提供了一種制備如I所示的化合物的方法，包括：
[0022] a)在還原劑（例如1^六1!14 4。3川、恥8!14/^1(：13、恥8〇4/^1(：13)存在下，式11化合物 被還原成式III化合物；
[0023] b)在堿(例如正丁基鋰)存在下，式III化合物與式IV化合物反應，得到式V化合物；
[0024] c)在還原劑（例如Et3SiH/BF3-Et20、Et 3SiD/BF3-Et20)存在下，式V化合物被還原成 式I化合物。
[0025]
[0026] 式II化合物可通過下述方法進行制備：
[0027]
[0028] 其中，氖代的2-溴噻吩可從Aldrich等公司購買；也可通過Pd-Pt_NaBH4組合催化 劑或磷酸催化的Η-D交換反應制備;也可在溴化試劑NBS存在下，將氘代噻吩轉(zhuǎn)化成2-溴氘 代噻吩。在鈀催化試劑存在下，式VI化合物與式VII化合物發(fā)生C-C偶聯(lián)反應制得式VIII化 合物，其中氘代或非氘代的4-氟苯硼酸VII可從Combiphos等公司購買;氘代4-氟苯硼酸VII 也可按文獻方法制備（Butters, Mike et al，Angewandte Chemie, International Edition,49(30) ,5156-5160，S5156/l-S5156/68; 2010)。在Lews酸如AlCl3、ZnO、ZnCl2等試 劑存在下，式VIII化合物與式IX化合物發(fā)生胡克酰化反應制得式II化合物。
[0029] 本發(fā)明如式I所示的化合物亦可按下述方法進行制備，
[0030]
[0031] 式X化合物可在金屬鎂存在下反應生成格式試劑，再與式XI化合物按文獻報道的 方法（例如Good,James A.D.et al,Journal of Medicinal Chemistry,56(5) ,1878-1893; 2013)反應得到式II化合物，其可進一步在還原劑(例如NaBH4或NaBD 4)存在下，反應得到式 XII化合物，然后用三甲基氯硅烷取代得到式XIII化合物。在n-BuLi存在下，將式XIII化合 物轉(zhuǎn)變成鋰試劑后，與式IV化合物縮合形成式XIV化合物，最后在還原試劑（例如Et 3SiH (D)/BF3-Et20)存在下，反應得到式I化合物。
[0032] 本發(fā)明再一方面提供一種藥物組合物，其含有式I所示的化合物或其藥學上可接 受的鹽，以及一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑和/或介質(zhì)。
[0033] "藥物組合物"是指一種或多種本發(fā)明的化合物或其鹽與在本領域中通常接受的 用于將生物活性化合物輸送至有機體，例如人，的載體、賦形劑和/或介質(zhì)的制劑。藥物組合 物的目的是有利于對有機體給予本發(fā)明的化合物。
[0034] 術語"藥學上可接受的載體"是指對有機體無明顯刺激作用，而且不會損害該活性 化合物的生物活性及性能的那些載體和稀釋劑。"藥學上可接受的賦形劑和/或介質(zhì)"是指 與活性成分一同給藥的、有利于活性成分的給藥的惰性物質(zhì)。"藥學上可接受的載體、賦形 劑和/或介質(zhì)"包括但不限于可用于人或家畜動物的任何載體、賦形劑、介質(zhì)、助流劑、增甜 劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、矯味增強劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、崩解劑、助懸 劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。所述賦形劑的非限制性實例包括碳酸鈣、磷酸鈣、各種 糖和各類淀粉、纖維素衍生物、明膠、植物油和聚乙二醇等等。
[0035]以純的形式或以適宜的藥物組合物形式的本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽 的給藥可通過提供類似用途的藥劑的任何可接受給藥模式來進行。本發(fā)明的藥物組合物可 通過將本發(fā)明的化合物與適宜的藥學上可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑組合而制備，且可 配制成固態(tài)、半固態(tài)、液態(tài)或氣態(tài)制劑，如片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、膏劑、乳劑、懸 浮劑、溶液劑、栓劑、注射劑、吸人劑、凝膠劑、微球及氣溶膠等等。
[0036]給予本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽或其藥物組合物的典型途徑包括但不 限于口服、直腸、透黏膜、經(jīng)腸給藥，或者局部、經(jīng)皮、吸入、腸胃外、舌下、陰道內(nèi)、鼻內(nèi)、目艮 內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)給藥。優(yōu)選的給藥途徑是口服給藥。
[0037] 本發(fā)明的藥物組合物可以采用本領域眾所周知的方法制造，如常規(guī)的混合法、溶 解法、制粒法、制糖衣藥丸法、磨細法、乳化法、冷凍干燥法等等。
[0038] 在優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物是口服形式。對于口服給藥，可以通過將活性化 合物與本領域熟知的藥物可接受的載體、賦形劑和/或介質(zhì)混合，來配制該藥物組合物。這 些載體、賦形劑和介質(zhì)能使本發(fā)明的化合物被配制成片劑、丸劑、錠劑、糖衣劑、膠囊劑、液 體、凝膠劑、漿劑、懸浮劑等，用于對患者的口服給藥。
[0039] 可以通過常規(guī)的混合、填充或壓片方法來制備固體口服組合物。例如，可通過下述 方法獲得:將所述的活性化合物與固體賦形劑混合，任選地碾磨所得的混合物，如果需要則 加入其它合適的輔劑，然后將該混合物加工成顆粒，得到了片劑或糖衣劑的核心。適合的賦 形劑包括但不限于:填充劑，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇;纖維素制劑例如玉 米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉和馬鈴薯淀粉；以及其它物質(zhì)，如明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥 丙基甲基纖維素、羥甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮;崩解劑，如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、 瓊脂或藻酸，也可以使用鹽，如藻酸鈉?？梢愿鶕?jù)通常藥物實踐中公知的方法任選地對糖衣 劑的核心進行包衣，尤其使用腸溶包衣。
[0040] 藥物組合物還可適用于腸胃外給藥，如合適的單位劑型的無菌溶液劑、混懸劑或 凍干產(chǎn)品。能夠使用適當?shù)馁x形劑，例如填充劑、緩沖劑或表面活性劑。
[0041] 本發(fā)明式I所示的化合物的劑量可根據(jù)患者的身體狀況(例如年齡、體重、待治療 疾病的類型和嚴重性)和給藥途徑而變化，并通常在約〇. 01-300mg/kg/天，臨床醫(yī)生可根據(jù) 實際情況合宜地選擇。
[0042] 本發(fā)明再一方面提供式I所示的化合物或其藥學上接受的鹽在制備治療受益于 SGLT-2抑制的疾病的藥物中的用途，所述受益于SGLT-2抑制的疾病選自糖尿病、糖尿病性 視網(wǎng)膜病、糖尿病性神經(jīng)病變、糖尿病性腎病變、傷口愈合延遲、胰島素抵抗、高血糖癥、高 膜島素血癥、脂肪酸血濃度升尚、甘油血濃度升尚、尚脂血癥、肥胖癥、尚甘油二酯血癥、X綜 合征、動脈粥樣硬化或高血壓等疾病。
[0043]本發(fā)明再一方面提供式I所示的化合物或其藥學上接受的鹽在制備治療糖尿病、 糖尿病并發(fā)癥、肥胖癥、飯后高血糖癥等疾病的藥物中的用途。所述糖尿病并發(fā)癥包括但不 限于例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性神經(jīng)病變、糖尿病性腎病變等。
[0044] 本發(fā)明式I所示的化合物亦可與其他抗糖尿病劑聯(lián)用治療上述疾病或者延緩所述 疾病的進展或發(fā)病，其他抗糖尿病劑的實例包括但不限于:雙胍類(例如，二甲雙胍或苯乙 雙胍）、葡萄糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖、米格列醇）、胰島素(例如，賴脯胰島素、甘精胰 島素、地特胰島素、門冬胰島素、德谷胰島素）、氯茴苯酸類(例如，瑞格列奈）、磺酰脲類(例 如，格列美脲、格列本脲、格列齊特、氯磺丙脲、格列吡嗪）、噻唑烷二酮類(例如，曲格列酮、 羅格列酮、吡格列酮）、PPAR_a/ γ雙重激動劑(例如，莫格列他）、GLP-1受體激動劑(例如，艾 塞那肽、利拉魯肽)和DPP4抑制劑(例如西格列汀、沙格列汀、阿格列?。?br>[0045] 與原藥卡格列凈相比，式I所示的化合物具有更優(yōu)異的藥代動力學性質(zhì)(體內(nèi)半衰 期更長），有望降低臨床的使用劑量，從而降低治療成本以讓更多患者受益。
【具體實施方式】：
[0046]下面的實施例可以更詳細地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
[0047]實施例1化合物3的制備
[0048]步驟 1): [ 2，3，4，5-D4]噻吩 I_2的制備：
[0050] 在耐壓管中稱量噻吩1-1 (5.0g，59.4mmol)，加入氖代水14ml (700mmol)，冷卻到0 °C后緩慢加入P2〇5(28.4g，200mmol)，室溫下攪拌5min，再加熱至丨」120°C攪拌24小時。冷卻到0 °(：后加入水(80ml)，用CH 2C12提取反應液(3 X 60ml) JgSOa干燥后，濾液在常壓下蒸餾除去 溶劑后得到油狀殘留物(5.0g)，常壓下蒸餾得到化合物1-24.0g，收率80%。
[0051] ^1^測氘含量為98.5%。
[0052] HRMS(ESI)m/z：88,0281〇
[0053] 步驟2): 2-溴-[3，4，5-D3 ]噻吩I-3的制備
[0055] 0°C下，將N-溴代丁二酰亞胺需3(2.4，11.8111111〇1)加到式1-2化合物（0.986 8， 11.2mmol)的AcOD(25ml)和CHC13(25ml)的溶液中，在50°C下攪拌反應混合物2小時（直到 TLC檢測無原料剩余）。冷卻到5-10°C，加水(80ml)，分離有機層，將水層再用CH2C12提取(3 X 50ml)。無水MgS04干燥后，濾液在減壓下室溫蒸餾除去溶劑后得到殘留物，將殘留物用硅膠 柱層析(EtOac/hexane 6:94)分離提純產(chǎn)物1-3,收率80%。
[0056] 4匪1?(300MHz，DMS0_d6): δ無芳香氫峰。
[0057] HRMS(ESI)m/z:164.9321。
[0058] 步驟3): 4-對氟苯基[3，4，5-D3 ]噻吩I-4的制備
[0060] 1000ml茄形瓶中加入式1-3化合物（13.98g，85.8mmol)，4-氟苯硼酸（12.0g， 85.8111111〇1)，？(1(??113)4(0.968,0.85111111〇1)，乙二醇二甲醚1501111，恥2〇)3(27.38,258臟〇1)的 水溶液150ml，加熱到80 °C反應3h。反應混合物降至室溫，倒入冰水中，CH2C12萃取（2 X l〇〇ml)，分離出有機層，無水MgS04干燥。蒸出溶劑，粗產(chǎn)物柱層析分離得到白色固體I-413.68g，收率 90.8%。
[0061 ] iHNMRUOOMHz，DMS0-d6): δ7.67~7 ·71 (m，2H)，7 · 22~7 · 28(m，2H)。
[0062] HRMS(ESI)m/z:181.0437。
[0063] ^1^測氘含量為98.5%。
[0064] 步驟4) :2-(5-溴-2甲基芐基)-5-(4-氟苯基）[3,4-D2]噻吩1-7的制備
[0065]
[0066] (5-溴-2甲基苯基）（5-( 4-氟苯基）[3，4-D2 ]噻吩-2-基酮1-6:500ml茄形瓶中加入 1-4(13.868,77.8臟〇1)，2-甲基-5-溴苯甲酰氯1-5(19.08 8,81.7臟〇1)，〇12(：122501111溶解，0 °C下加入A1C13(11.4g，85.6mmol)，30min后升至室溫反應過夜。反應混合物倒入冰水中， CH2CI2萃取(2 X 100ml)，有機層無水MgS〇4干燥。蒸出溶齊丨」，向混合物中加入正己燒，過濾，濾 餅用正己烷洗，干燥得淡黃色固體1-624.3g，收率83.2%。
[0067] 4匪1?(3001抱，〇)(：13):37.62~7.66(2!1，111)，7.57(1!1，8)，7.49~7.52(1!1，(1(1，了1 = 8.2Hz，j2=1.8Hz)，7.09~7.18(3H，m)，2.33(3H，s)。
[0068] 13C-匪R(300MHz，CDC13):δ188·32，164·99，161·68，153·23，142·62，140·06， 135.36,133.14,132.71,130.47,129.48,129.43,128.26,128.15,124.00,118.80,116.41， 116.12,19.15〇
[0069] HRMS(ESI)m/z:375.9908。
[0070] 2-(5-溴-2 甲基芐基)-5-(4-氟苯基）[3，4-D2]噻吩 1-7:
[0071] 方法一 ：500ml三頸瓶中加入 1-6 (10.0g，26.5mmol)，三乙基硅烷（18.5ml， 106.5mmol)，CH2Cl 250ml，乙腈50ml，降至0°C。向反應混合物中緩慢滴加三氟化硼乙醚溶液 (12.5ml，100.5mmol)，加畢，升至室溫反應過夜。冰浴下向反應物中加入飽和NaHC0 3溶液 50ml，CH2C12萃取，有機層無水MgS04干燥。蒸出溶劑，得到黃色固體1-78.9g，收率93.6 %。
[0072] 方法二：100ml瓶中加入 1-6(2.0g，5.3mmol)，四氫呋喃20ml，NaBH4(〇.2g， 5.3mmol)，降至0°C，加入A1C1 3(0.77g，5.8mmol)，升至70°C反應5h。將反應混合物倒入冰水 中，EA萃取，蒸出溶劑，得到白色固體1-7(1.85g)，收率96%。
[0073] 1HNMR(300MHz,CDCl3)：57.47(2H,dd ,Ji = 5.4HzJ2 = 8.4Hz,Ph), 7.33( lH,s,Ph), 7.29(lH，d，J = 8.1Hz，Ph)，6.99~7.04(3H，m，Ph)，4.06(2H，s，Ph-CH2-thio)，2.26(3H，s， Me)〇
[0074] 13C-匪R(300MHz，CDC13):δ 163.71,160.51,142.10,140.33,135.28,132.16， 130.74,130.69,129.89,127.20,127.10,122.64,119.65,115.87,115.58,33.78,18.98。
[0075] HRMS(ESI)m/z:362.0113。
[0076] 步驟5): (3R，4S，5S，6R) -2-3-((5-(4-氟苯基）[3 '，4 ' -D2 ]噻吩-2-基）甲基)-4-甲 苯基)-6-(羥甲基)-2-甲氧基四氫-2H-吡喃-3，4，5-三醇1-9的制備
[0077]
[0078] (31?，43,51?，61〇-3,4,5-三(三甲基硅烷氧基）甲基）四氫-2!1-吡喃-2-酮1-8 :將葡 萄糖酸內(nèi)酯（3(^，168.5111111〇1)、無水四氫呋喃（25〇1111)依次加入到11^三口燒瓶中，加入^甲 基嗎啉（150ml，1.35mol)。將反應瓶轉(zhuǎn)移至-20度低溫浴中，氮氣保護下將三甲基氯硅烷 (129ml，1. Olmol)于恒壓漏斗中緩慢滴加到反應液中，整個滴加過程持續(xù)30分鐘。加畢，繼 續(xù)低溫反應15分鐘后將反應瓶轉(zhuǎn)移至油浴鍋內(nèi)，開啟加熱至反應液回流。2小時后TLC檢測 顯示原料完全無剩余，基本均為目的產(chǎn)物。反應瓶降至室溫后，加入600ml石油醚，400ml水， 充分攪拌后分液，TLC顯示水層無明顯產(chǎn)物，有機層含目的產(chǎn)物及少量N-甲基嗎啉。有機層 加入300ml水、25g磷酸二氫鉀，充分攪拌后分液。有機層仍有微量N-甲基嗎啉，再次加入 200ml水、15g磷酸二氫鉀，充分攪拌后分液，TLC顯示無明顯N-甲基嗎啉及其它雜質(zhì)。有機層 用無水硫酸鈉（l〇〇g)干燥后旋蒸得淡黃色油狀液體，硅膠柱層析純化，石油醚-乙酸乙酯 (20:1，V/V)，得無色油狀液體 I-8(65.5g，140.2mmol)，收率 83.2%。
[0079] (3R，4S，5S，6R)-2-3-((5-(4-氟苯基）[3 '，4 ' -D2 ]噻吩-2-基）甲基)-4-甲苯基)-6_(羥甲基）-2-甲氧基四氫-2H-吡喃-3,4，5_三醇1-9 :100ml三頸瓶中加入1-7(1.85g， 5mmol)、THF(無水處理）15ml、甲苯(無水處理）15ml，N 2保護下，-78°C下緩慢滴加正丁基鋰 的正己燒溶液（2.13ml，5.4mmol)，反應20min。向反應混合物中滴加溶于5ml甲苯(無水處 理）的式1-8化合物(2.12g，4.5mmo 1)，5min加完。反應30min，加入溶于10ml無水甲醇的甲基 磺酸溶液（1.29g，13.5mmol)，5min加完。升至室溫反應過夜。冰浴下向反應物中加入飽和 NaHC03溶液20ml，乙酸乙酯萃取，有機層無水MgS〇4干燥。蒸出溶劑，柱層析分離得到白色固 體 I-9(0.8g)，收率 38%。
[0080] = 7.9Hz，Ph)，7· 13~7.22(3H，m，Ph) ,4.93( lH，d，J = 5.3Hz，0H) ,4.68( lH，d，J = 4.9Hz， OH)，4.63(lH，d，J = 7.3Hz，0H)，4.50(lH，t，J = 5.8Hz，0H)，4· 11~4.16(2H，dd，Ji = 15 · 7Hz，J2 = 29 · 2Hz，Ph_CH2-thio)，3 · 73~3 · 79( lH，m，sugar)，3 · 51~3 · 64(2H，m，sugar)， 3·37~3·41(lH，m，sugar)，3·22~3·26(lH，m，sugar)，2·96(3H，s，0Me)，2·90~2·92(lH，m， sugar),2.26(3H,s,Me)〇
[0081 ] 13C-匪R(300MHz，DMS0-d6): δ 162·94，159·70，143·69，140·05，137·22，136·90, 135.09,130.54,129.37,128.74,126.94,126.83,126.04,115.97,115.68,100.83,77.03， 74·33，73·80，70·21，60·94，48·18，33·59，18·66。
[0082] HRMS(ESI)m/z:476.1638。
[0083] 步驟6):(23,31?，41?，53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基）[3'，4'-02]噻吩-2-基）甲基)-4-甲苯基)-6-(羥甲基)-四氫-2H-吡喃-3，4，5-三醇3的制備
[0084]
[0085] 25ml三頸瓶中加入 1-9(0.5g，1.05mmol)，三乙基硅烷（0.72ml，4· 18mmol)， 8mlCHCl2，Ν2保護，降至-70 °C。向反應混合物中緩慢滴加三氟化硼乙醚溶液（0.5ml， 3.99mmol)。升至0°C反應2h。向反應混合物中加入飽和NaHC03溶液10ml，乙酸乙酯萃取，有 機層無水MgS0 4干燥。蒸出溶劑，柱層析分離得到白色固體3 (0.3g)，收率65 %。
[0086] 匪R(300MHz，DMS0-d6): δ7 · 56~7 · 60(2H，dd，Ji = 8 · 6Hz，J2 = 5 · 5Hz，Ph)，7 · 10 ~7.25(5H，m，Ph)，4.83(2H，s，0H)，4.65(lH，s，0H)，4.35(lH，s，0H)，4.12(2H，s，Ph-CH2-thio)，3.98(lH，d，J = 9.2Hz，sugar)，3·69~3·73(lH，m，sugar)，3·47(lH，m，sugar)，3· 18 ~3·28(4H，m，sugar)，2·26(3H，s，Me)〇
[0087] 13C-匪R(300MHz，DMS0-d6): δ 162·92，159·68，143·47，140·16，138·15，137·26， 134.83,130.49,129.56,128.98,126.93,126.82,126.15,123.32,115.91,115.62,81.24， 81.10,78.44,74.62,70.41,61.41,33.33,18.70〇
[0088] HRMS(ESI)m/z:446.1536。
[0089] 實施例2化合物1的制備
[0090] 步驟1):(5-溴-2-甲基苯基）（5-( 4-氟苯基)噻吩-2-基酮II-4的制備
[0091]
[0092] 2-溴-5-(4-氟苯基)噻吩 ΙΙ-2:將化合物 II-l(4.0g，22.47mmol)加入到 100ml 單口 燒瓶中，加入二氯甲烷(40ml)，開啟磁力攪拌，冰浴條件下加入N-溴代琥珀酰亞胺(4.0g， 22.47mmol)。繼續(xù)攪拌20分鐘后于室溫條件下攪拌過夜。TLC顯示無明顯原料剩余及雜質(zhì)。 反應液減壓濃縮除去大部分溶劑二氯甲烷，然后加入80ml石油醚充分攪拌20分鐘，減壓抽 濾，濾液濃縮后得約6.9g白色固體(含部分琥珀酰亞胺）。固體重新加入到50ml石油醚中充 分攪拌20分鐘后再次減壓抽濾，濾液減壓濃縮后干燥得5.70g雪白色固體11-2，收率 95.3%〇
[0093] iH-NMI^CDCh，300MHz): δ7 · 44-7 · 48(m，2H)，7 · 00-7 · 09(m，3H)，6 · 95-6 · 97(m，1H)。
[0094] 13C-匪R(CDC13,300MHz):δ164·14，160·85，144·75，130·84，127·40，127·30， 123·24，116·12，115·83，111·33。
[0095] 5-溴-N-甲氧基-N，2-二甲基苯酰胺II-3:將2-甲基-5-溴苯甲酸（2.15g，lOmmo 1) 加入到50ml單口燒瓶中，依次加入二氯甲烷（25ml)、N，0-二甲基羥胺鹽酸鹽（1.07g， llmmol)、二環(huán)己基碳二亞胺(2.26g，llmmol)、1-羥基苯并三唑一水物（1.48g，llmmol)。氮 氣保護下加入三乙胺（1.67ml，12mmol)。室溫攪拌過夜，TLC顯示原料2-甲基-5-溴苯甲酸仍 有較多剩余，補加 N，0-二甲基輕胺鹽酸鹽（1.07g，llmmol)、二環(huán)己基碳二亞胺（1.50g， 7 · 3mmol)、三乙胺（1 · 0ml，7 · 2mmol)。室溫攪拌5小時后TLC顯示原料無明顯剩余。反應液減 壓抽濾，濾餅用二氯甲燒洗滌兩次(5ml X 2)。濾液依次加入20ml二氯甲燒和20ml水，分液后 水層加入l〇ml二氯甲烷萃取。合并有機層，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥后減壓蒸餾得 產(chǎn)物粗品。粗品用硅膠柱層析純化，石油醚-乙酸乙酯（20:1，V/V)洗脫，得淡黃色粘稠液體 11-3(1.42 8,5.48臟〇1)，收率54.8%。
[0096] iH-NMI^CDCh，300MHz): δ7 · 39-7 ·41 (m，2H)，7 ·06-7 ·09(m，1H)，3 · 51 (s，3H)，3 · 30 (s，3H)，2.27(s，3H)。
[0097] 13C-匪R(CDC13,300MHz):δ136·99，134·82，133·88，132·05，131·77，128·95， 118.78,61.14,26.85，18.58。
[0098] (5-溴-2甲基苯基）（5-(4-氟苯基）噻吩-2-基酮II-4:將化合物11-2(0.386g， 1 ·5mmo 1)加入到干燥15ml三口燒瓶中，加入稀鹽酸活化過的鎂肩（0.096g，6.Ommo 1)，氮氣 置換反應瓶內(nèi)空氣。將無水乙醚(3ml)用注射器注入反應瓶內(nèi)，開啟加熱至溶劑回流。將少 許碘粒(5粒)快速加入到反應液中，反應液呈深棕色，繼續(xù)加熱攪拌約5分鐘后反應液顏色 逐漸變淺至無色。繼續(xù)在回流狀態(tài)下反應15分鐘后直接用于格氏加成反應。將化合物II-3 (0.39g，1.5mmol)溶于無水四氫呋喃(2ml)，氮氣置換反應瓶內(nèi)空氣。冰浴條件下將自制格 氏試劑(3ml，0.5M in Ether)緩慢滴加到反應瓶中。5分鐘后撤掉冰浴常溫攪拌，2小時后 TLC顯示有大量產(chǎn)物生成(標準樣對照），將反應液加入到冰水(6g)中，充分攪拌后靜置分 液，水層用二氯甲烷萃取(2 X 15ml)。合并有機層，飽和食鹽水洗滌(3 X 10ml )，無水硫酸鈉 干燥后旋蒸得灰白色固體。將上述固體加入到50ml石油醚中打漿攪拌30分鐘，減壓抽濾，濾 餅烘干后得類白色固體11-4(0.402g)。
[0099] 匪R(CDC13，300MHz): δ7 · 62-7 · 66(m，2H)，7 · 57(d，J= 1 · 5Hz，1H)，7 · 49-7 · 52 (dd，Ji = 1.9Hz，j2 = 5.2Hz，lH)，7.37(d，J = 3.9Hz，lH)，7.25(d，J = 3.8Hz，lH)，7.09-7.18 (m，3H)，2.33(s，3H)〇
[0100] 13C-匪R(CDC13,300MHz):δ118·29，164·99，153·27，140·08，136·68，135·33， 133.12,132.07,130.46,128.25,128.14,124.09,118.80,116.39,116.10,19.13。
[0101] 步驟2):2-(5-溴-2甲基[1，1-02]芐基)-5-(4-氟苯基)噻吩11-5的制備：
[0103] 將化合物II-4(2.06g，5.51mmol)加入到50ml三口燒瓶中，加入乙腈（20ml)，氮氣 置換反應瓶中空氣，快速加入氘代硼氫化鈉（0.568，13.78111111〇1)、三氯化鋁（1.1(^， 8.26mmol)，將反應瓶轉(zhuǎn)移至55度油浴鍋內(nèi)，有大量氣泡逸出，10分鐘后TLC顯示原料已反應 完全。反應瓶冷卻至室溫，攪拌狀態(tài)下將反應液緩慢加入到30ml冰水混合液中，大量白色固 體析出，減壓抽濾，濾餅用l〇ml水洗滌兩次。濾餅干燥后得類白色固體11-5( 1.64g， 4.52_〇1，收率82.0%)。
[0104] 4^1^(30011^,0)(:13):37.45-7.49(211,111^11),7.24-7.28(111,11131110),7.30-7.34(lH，m，Ph)，6.99~7.05(4H，m，Ph)，6.66~6.67(lH，d，J = 3.3Hz，thio)，2.26(3H，s， Me) 〇
[0105] 13C-匪R(CDC13,300MHz):δ163·79,160.52,142.12,141.86,140.24,135.26， 132.15,132.02,129.89,127.21,127.11,126.22,122.72,119.65,115.85,115.56,18.94， 15.07〇
[0106] HRMS(ESI)m/z:362.0111。
[0107] 步驟 3):(31?，43,53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基）[1，1-02]甲基)-4-甲苯 基)-6-(羥甲基)-2-甲氧基四氫-2H-吡喃-3，4，5-三醇II-6的制備
[0108]
[0109] 將化合物11-5(1.41g，3.88mmol)加入到100ml干燥三口燒瓶中，氮氣置換反應瓶 中空氣。氮氣保護下依次將無水甲苯（12ml)、無水四氫呋喃（18ml)用注射器注入反應瓶。將 反應瓶置于-78 °C低溫浴中，待反應液內(nèi)溫降至-78 °C后，將正丁基鋰溶液（1.71ml， 4.27mmol，2.5M)緩慢注入反應液中，反應液很快變?yōu)樯钏{色，整個滴加過程持續(xù)3分鐘，反 應液內(nèi)溫低于-66 °C。30分鐘后，將溶于6ml無水甲苯的TMS-葡萄糖酸內(nèi)酯（1 . 81g， 3.88mmol)溶液緩慢注入反應液中，整個滴加過程持續(xù)3分鐘，保持反應液內(nèi)溫低于-66°C。 反應液繼續(xù)在_78°C低溫浴中攪拌2小時。將甲基磺酸（1.49 8，15.52!11111〇1)的無水甲醇 (12ml)溶液緩慢注入反應瓶中，保持反應液內(nèi)溫低于-60°C。滴加完畢，將反應瓶置于室外 條件下繼續(xù)攪拌反應3小時。冰浴條件下將80ml飽和碳酸氫鈉溶液緩慢加入到反應液中，充 分攪拌后分液，水層用80ml乙酸乙酯萃取兩次，合并有機層，飽和氯化鈉溶液(3X 15ml)洗 滌，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得類白色固體。粗品用硅膠柱層析純化，乙酸乙酯-甲醇洗脫 (10:1，￥八），得白色固體11-6(1.4(^，2.94臟〇1，收率75.8%)。
[0110] 匪R(300MHz，DMS0-d6):δ7·55~7.60(2H，m，Ph)，7.44(lH，s，Ph)，7.33~7.35 (lH，d，J = 7.8Hz，Ph)，7.26~7.27(lH，d，J = 3.3Hz，thio)，7.13~7.22(3H，m，Ph)，，6.76~ 6·77(lH，d，J=3.4Hz，thio),4.95(lH，d，5·3Ηζ，0Η),4.71(lH，d，4.9Hz，0H),4.65(lH，d, 7·2Hz，0H)，4.53(lH，t，5.8Hz，0H)，3·75~3·80(lH，m,sugar)，3·52~3·65(2H，m,sugar)， 3·39~3·44(lH，m，sugar)，3·20~3·28(lH，m，sugar)，2·99(3H，s，0Me)，2·26(3H，s，Me)〇
[0111] 13C-匪R(300MHz，DMS0-d6): δ 162·94，159·70，143·68，140·13，137·20，136·81， 135.05,130.53,129.34,128.70,126.94,126.83,126.12,126.01,123.33,115.95,115.66， 100·81，77·03，74·32，73·78，70·22，60·94，48·16，18·63。
[0112] HRMS(ESI)m/z:476.1638。
[0113] 步驟 4):(23,31?，41?，53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基）噻吩-2-基）[1，1-02]甲基）-4- 甲苯基)-6-(羥甲基)-四氫-2H-吡喃-3,4,5-三醇1的制備
[0114]
[0115] 將化合物II-6(1.20g，2.52mmol)加入到50ml三口反應瓶中，依次加入二氯甲烷 (20ml)、三乙基硅烷（1.20ml，7.56mmol)。將反應瓶置于-50 °C低溫浴中。將三氟化硼乙醚 (0.96ml，7.56mmol)溶液緩慢注入反應瓶中。待三氟化硼乙醚溶液加畢，將反應瓶置于室溫 條件下攪拌過夜。將30ml飽和碳酸氫鈉溶液緩慢加入到反應液中，充分攪拌后分液，水層用 30ml乙酸乙酯萃取，合并有機層，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到類白色固體。粗品硅膠柱層析 純化，乙酸乙酯-甲醇洗脫（10:1，V / V)，得白色固體1 (900m g)。
[0116] ^-NMRCSOOMHz,DMS0-d6)： 57.59(2H,dd,Ji = 5.4Hzj2 = 8.7Hz,Ph), 7.27( lH,d,J = 3.5Hz，thio)，7.13~7.22(5H，m)，6.80(lH，d，J = 3.5Hz，thio)，4.90(2H，d，J = 4.4Hz， OH) ,4.71(lH,d,J = 5.5Hz,OH),4.42(lH,t,J = 5.7Hz,OH),3.97(lH,d,J = 9.2Hz,sugar), 3·67~3·73(lH，m,sugar)，3·40~3·48(lH，m,sugar)，3·12~3·27(4H，m,sugar)，2·26(s， 3H)〇
[0117] 13C-匪R(300MHz，DMS0-d6):Sl62.94,159.70,143.49,140.18,138.16,137.22, 134.85,130.51,129.57,128.98,126.96,126.85,126.27,126.17,123.32,115.94,115.65， 81.26，81.13，78.45，74.63，70.42，61.42，18.71。
[0118] HRMS(ESI)m/z:446.1536。
[0119] 實施例3化合物4的制備
[0120] 步驟1):2-[D3]甲基5-溴苯甲酸III-2的制備：
[0122] 在微波耐壓管中稱量2-甲基5-溴苯甲酸III-l(5.0g，23.3mmol)，Na0D(40%， 28. Ommol)，加入氘代水24ml (24g，1.2mol)，室溫下攪拌30分鐘，加熱到160°C攪拌4小時。除 去重水，再加入氘代水24ml。加熱到160°C攪拌2小時。冷卻到0°C后加 DC1調(diào)pH = 3左右，用 CH2C12提取反應液(3 X 30ml) JgSCk干燥后，濾液在減壓下蒸餾除去溶劑后得到油狀殘留物 III-2(4.6g，收率 90%)。
[0123] 4 NMR(CDCl3):S7.70(m，2H)，7.25(m，2H)。
[0124] HRMS(ESI)m/z:181.0439。
[0125] 步驟2) :(5-溴-2_[D3]甲基苯基）（5-(4-氟苯基)噻吩-2-基酮III-3的制備
[0126] 方法一
[0128] 參照實施例1步驟4)制備化合物II1-3。
[0129] 4匪1?(3001抱，〇)(：13):37.62~7.66(2!1，111)，7.57(1!1，111)，7.49~7.52(1!1，(1(1，了1 = 8.2Hz，j2 = 1.8Hz)，7.36~7.38(lH，d，J = 3.8Hz)，7.24~7.25(lH，d，J = 3.8Hz)，7.09~ 7.18(3H，m)。
[0130] HRMS(ESI)m/z:376.9961。
[0131] 方法二
[0133] 在微波耐壓管中加入化合物11-4(5.(^，13.31111]1〇1)，似00(3.〇1]11]1〇1)，加入氖代水 24ml (24g，1.2mol)，加熱到160°C攪拌4小時。除去重水，再加入新鮮氘代水12ml及THF (12ml)。加熱到160°C攪拌4小時。冷卻到室溫，用CH2C12提取反應液（3 X 30ml) JgSOa干燥 后，濾液在減壓下蒸餾除去溶劑后得到油狀殘留物111-3(4.3g，收率84%)。
[0134] 步驟3):2-(5-溴-2-[03]甲基芐基)-5-(4-氟苯基)噻吩111-4的制備
[0136] 將化合物II1-3(2.0g，5.3lmmol)加入到三口燒瓶中，加入THF(20ml)，氮氣置換反 應瓶中空氣，快速加入鋁氫化鋰(0.50g，13.3mmol)，將反應瓶轉(zhuǎn)移至55度油浴鍋內(nèi)，有大量 氣泡逸出，10分鐘后TLC顯示原料已反應完全。反應瓶冷卻至0°C，攪拌狀態(tài)下加入到0.5ml 冰水，0.5ml 15 % NaOH及1.5ml冰水到反應混合液中，攪拌2小時后，大量白色固體析出，減 壓抽濾，濾餅用l〇ml THF洗滌兩次。濾液干燥后蒸餾除去THF，得類白色固體II1-4(1.64g， 4.52_〇1，收率 82.0%)。
[0137] 4^1^(30011^,0)(:13):37.45-7.49(21111),7.24-7.34(211,111),6.99-7.05(411, m)，6.66~6.67(lH，d，J = 3.3Hz)，4.04(2H，s)。
[0138] HRMS(ESI)m/z:363.0112。
[0139] 步驟4):(31?，43,53,61?)-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基）甲基)-4-[0 3]甲苯基)- 6-羥甲基-2-甲氧基四氫-2H-吡喃-3，4，5-三醇III -5的制備
[0140]
[0141 ]參照實施例1步驟5)制備化合物II1-5。
[0142] ^^^(30010^,0150-(16):37.55-7.60(2^111^11),7.42(111,8^11),7.32-7.34 (lH，d，J = 7.0Hz，Ph)，7.26~7.27(lH，d，J = 3.4Hz，thio)，7.13~7.22(3H，m，Ph)，6.76~ 6.77(lH，d，J = 3.3Hz，thio)，4.92(lH，s，0H)，4.50~4.64(3H，m，0H)，4.11，4.16(eachlH， s，Ph_CH2-thio)，3·74~3.77(lH，m，sugar)，3·51~3.62(2H，m，sugar)，3·37(1H，m， sugar)，3·17~3·25(lH，m，sugar)，2·96(3H，s，0Me)，2·90(lH，s，sugar)〇
[0143] HRMS(ESI)m/z:477.1705。
[0144] 步驟5):(25,31?，41?，53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基）噻吩-2-基）甲基)-4-[03]甲苯 基)-6-(羥甲基)_四氫-2H-吡喃-3,4,5-三醇4的制備
[0145]
[0146] 參照實施例1步驟6)制備化合物4。
[0147] 4^^(30010^,01^0-(16):37.56-7.61(21(1(^1 = 8.61^,12 = 5.5^^11),7.26-7.27(lH，d，J = 3.5Hz，thio)，7.10~7.22(5H，m，Ph)，6.78~6.80(lH，d，J = 3.4Hz，thio)， 4.89~4.90(2H，d，J = 4.4Hz，0H)，4.69~4.71(lH，d，J = 5.6Hz，0H)，4.39~4.43(lH，t，J = 5.7Hz，0H)，4.11，4.12(eachlH，s，Ph-CH2-thio)，3.94~3.98(lH，d，J = 9.3Hz，sugar)， 3·67~3·72(lH，m，sugar)，3·40~3·47(lH，m，sugar)，3·12~3·27(4H，m，sugar)〇
[0148] HRMS(ESI)m/z:447.1591。
[0149] 實施例4化合物5的制備
[0150] 步驟1):2-(5-溴-2[D3]甲基[Γ，1'-D2]芐基)-5-(4-氟苯基)噻吩IV-1的制備
[0152] 參照實施例2步驟2)制備化合物IV-1。
[0153] 4^1^(30011^,0)(:13):37.44-7.47(21111),7.23-7.34(211,111),6.97-7.05(411, m)，6.64~6.67(lH，d，J = 3.3Hz)。
[0154] HRMS(ESI)m/z:365.0237。
[0155] 步驟 2):(31?，43,53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基）[1，1-02]甲基)-4-[1， 1，1 -D3 ]甲苯基)-6-(輕甲基)-2-甲氧基四氫-2H-吡喃-3，4，5-三醇IV-2的制備
[0156]
[0157] 參照實施例1步驟5)制備化合物IV-2。
[0158] ^^1^(30010^,01^0-(16):37.54-7.61(2^111^11),7.42(1^8^11),7.32-7.34 (lH，d，J = 7.0Hz，Ph)，7.26~7.27(lH，d，J = 3.4Hz，thio)，7.13~7.22(3H，m，Ph)，6.76~ 6.77(lH，d，J = 3.3Hz，thio)，4.92(lH，s，0H)，4.50~4.64(3H，m，0H)，3.74~3.77(lH，m， sugar)，3·51~3·62(2H，m，sugar)，3·37(lH，m，sugar)，3·17~3·25(lH，m，sugar)，2·96 (3H,s,0Me),2.90(lH,s, sugar)〇
[0159] HRMS(ESI)m/z:479.1804。
[0160] 步驟3):(23,31?，41?，53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基）噻吩-2-基）[1，1-02]甲基）-4-[1，1，1 -D3 ]甲苯基)-6-(羥甲基)-四氫-2H-吡喃-3，4，5-三醇5的制備
[0161]
[0162] 參照實施例1步驟6)制備化合物5。
[0163] 4匪1?( 300MHz，DMS0-d6): δ7 · 55~7 · 60(2H，dd，Ji = 8 · 6Hz，J2 = 5 · 5Hz，Ph)，7 · 26~ 7.27(lH，d，J = 3.5Hz，thio)，7.10~7.22(5H，m，Ph)，6.78~6.80(lH，d，J = 3.4Hz，thio)， 4.89~4.90(2H，d，J = 4.4Hz，0H)，4.69~4.71(lH，d，J = 5.6Hz，0H)，4.39~4.43(lH，t，J = 5.7Hz，0H)，3.94~3.98(lH，d，J = 9.3Hz，sugar)，3.67~3.72(lH，m，sugar)，3.40~3.47 (lH，m，sugar)，3·12~3·27(4H，m，sugar)〇
[0164] HRMS(ESI)m/z:449.1771。
[0165] 實施例5化合物13的制備
[0166] 步驟丨）：2-(5-溴-2-[D3]甲基芐基)-5-(4-氟苯基）[3，4-D2]噻吩V-2:
[0167]
[0168] (5-溴-2-[D3]甲基苯基）（5-(4-氟苯基）[3,4-D2]噻吩-2-基酮V-1:參照實施例1步 驟4)的方法制備化合物V-1。
[0169] 4匪1?(3001抱，〇)(：13):37.61~7.65(2!1，111)，7.57(1!1，111)，7.49~7.52(1!1，(1(1，了1 = 8.2Hz，j2=1.8Hz)，7.09~7.18(3H，m)。
[0170] HRMS(ESI)m/z:379.0040。
[0171] 2-(5-溴-2-[D3]甲基芐基)-5-(4-氟苯基）[3,4-D 2]噻吩V-2:參照實施例3步驟3) 的方法制備化合物V-2。
[0172] 4^1^(30011^,0)(:13):37.45-7.49(21111),7.24-7.34(211,111),6.99-7.05(411, m)，6.66~6.67(lH，d，J = 3.3Hz)，4.06(2H，s)。
[0173] HRMS(ESI)m/z:365.0247。
[0174] 步驟2): (3R，4S，5S，6R)-2-3-( (5-(4-氟苯基）[3 '，4' -D2]噻吩-2-基）甲基)-4-[D3 ]甲苯基)-6-(羥甲基)-2-甲氧基四氫-2H-吡喃-3，4，5-三醇V-3
[0175]
[0176] 參照實施例1步驟5)的方法制備化合物V-3。
[0177] ^^^(30010^,0150-(16):37.55-7.60(2^111^11),7.42(111,8^11),7.32-7.34 (lH，d，J=7.0Hz，Ph)，7·13~7.22(3H，m，Ph)，4.92(lH，s，0H)，4.50~4.64(3H，m，0H)， 4.11，4.16(eachlH，s，Ph-CH2-thio)，3.74~3.77(lH，m，sugar)，3.51~3.62(2H，m， sugar)，3·37(lH，m，sugar)，3·17~3.25(lH，m，sugar)，2·96(3H，s，OMe)，2.90(lH，s， sugar)〇
[0178] 13C-匪R(DMS0,300MHz):δ162·97，159·73，143·80，140·16，137·23，136·90， 135.10,130.55,129.38,128.76,126.96,126.86,126.14,126.05,123.35,115.59,115.69， 100.84,77.06,74.36,73.81，70.25,60.98,48.20,33.63。
[0179] HRMS(ESI)m/z:476.1638。
[0180] 步驟3): (2S，3R，4R，5S，6R)-2-3-( (5-(4-氟苯基）[3 '，4 ' D2 ]噻吩-2-基）甲基)-4-[1，1，1-D3]甲苯基)-6-(羥甲基)-四氫-2H-吡喃-3,4,5-三醇13。
[0181]
[0182] 參照實施例1步驟6)的方法制備化合物13。
[0183] 4匪1?(3001抱，0150-(16):37.56~7.61(2!1，(1(1，了1 = 8.6!^，了2 = 5.5抱，？11)，7.10~ 7.22(5H，m，Ph)，4.89~4.90(2H，d，J = 4.4Hz，0H)，4.69~4.71(lH，d，J = 5.6Hz，0H)，4.39 ~4.43(lH，t，J = 5.7Hz，0H)，4.11，4.12(eachlH，s，Ph-CH2-thio)，3.94~3.98(lH，d，J = 9·3Hz，sugar)，3·67~3·72(lH，m，sugar)，3·40~3·47(lH，m，sugar)，3·12~3.27(4H，m， sugar)〇
[0184] HRMS(ESI)m/z:449.1701。
[0185] 實施例6化合物10的制備
[0186] 步驟1):2-(5-溴-2-[D3]甲基[D2]芐基)-5-(4-氟苯基）[3,4-D2]噻吩VI-1
[0188] 參照實施例2步驟2)的方法制備化合物VI-1。
[0189] 4^1^(30011^,0)(:13):37.45-7.49(21111),7.23-7.34(211,111),6.97-7.05(311, m) 〇
[0190] HRMS(ESI)m/z:367.0411。
[0191] 步驟2):(31?，43,53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基）[3'，4'-02]噻吩-2-基）[02]甲基)-4-[D 3]甲苯基)-6-(羥甲基)-2-甲氧基四氫-2H-吡喃-3,4,5-三醇￥1-2。
[0193] 參照實施例2步驟3)制備化合物VI-2。
[0194] ^^^(30010^,0150-(16):37.53-7.60(2^111^11),7.42(111,8^11),7.32-7.34 (lH，d，J = 7.0Hz，Ph)，7.13~7.22(3H，m，Ph)，4.92(lH，s，0H)，4.50~4.64(3H，m，0H)，3.74 ~3·77(lH，m，sugar)，3·51~3·62(2H，m，sugar)，3·37(lH，m，sugar)，3·17~3.25(lH，m， sugar)，2·95(3H，s，0Me)〇
[0195] HRMS(ESI)m/z:481.1912。
[0196] 步驟3):(23,31?，41?，53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基）[3'，4'02]噻吩-2-基）[0 2]甲 基)-4-[l，l，l-D3]甲苯基)-6-(羥甲基)-四氫-2H-吡喃-3,4,5-三醇10
[0197]
[0198] 參照實施1步驟6)的方法制備化合物10。
[0199] 4匪1?(3001抱，0150-(16):37.56~7.61(2!1，(1(1，了1 = 8.6!^，了2 = 5.5抱，？11)，7.10~ 7.22(5H，m，Ph)，4.89~4.90(2H，d，J = 4.4Hz，0H)，4.69~4.71(lH，d，J = 5.6Hz，0H)，4.39 ~4.43(lH，t，J = 5.7Hz，0H)，3.94~3.98(lH，d，J = 9.3Hz，sugar)，3.67~3.72(lH，m， sugar)，3·40~3·47(lH，m，sugar)，3·12~3·27(4H，m，sugar)〇
[0200] HRMS(ESI)m/z:451.1814。
[0201] 實施例7化合物7的制備：
[0202] 步驟0:2-(5-溴-2-甲基苯[Γ，1'-D2]芐基5-(4-氟苯基）[2'，3'-D2]噻吩VII-1
[0204] 參照實施例1步驟4)的方法制備化合物VII-1。
[0205] 匪R(CDC13,300MHz) :S7.47(2H，dd，Ji = 5.4Hz，j2 = 8.4Hz，Ph)，7.34(lH，s， Ph)，7.29(lH，d，J=8.1Hz，Ph)，6.99-7.04(3H，m，Ph)，2.26(3H，s，Me)。
[0206] 13C-匪R(300MHz，DMS0-d6): δ 163·78，160·51，142·05，141·83，140·25，135·27， 132.16,132.03,130.74,130.70,129.90,127.21,127.10,119.65,115.87,115.58,18.97〇
[0207] 步驟2): (3R，4S，5S，6R) -2-3-( (5-(4-氟苯基）[3 '，4 ' -D2]噻吩-2-基）[D2 ]甲基)_ 4-甲苯基)-6-(羥甲基)-2-甲氧基四氫-2H-吡喃-3，4，5-三醇VII-2
[0208]
[0209] 參照實施例2步驟3)的方法制備化合物VII-2。
[0210] 1HNMR(300MHz,DMS0-d6)：57.55-7.60(2H,m,Ph),7.43(lH,s,Ph),7.33(lH,d,J= 7.0Hz，Ph) ,7.13-7 · 22(3H，m，Ph) ,4.88( lH，d，J = 5.3Ηζ，0Η)，4· 63( lH，d，J = 4.9Hz，0H)， 4.57(lH，d，J = 7.3Hz，0H)，4.46(lH，d，J = 6.0Hz，0H)，3.73-3.79(lH，m，sugar) ,3.52-3.64 (2H,m,sugar),3.39-3.42(lH,m,sugar),3.19-3.24(lH,m,sugar),2.96(3H,s,OMe),2.90-2.93(lH,m,sugar),2.26(3H,s,Me)；
[0211] 13C-匪R(300MHz,DMS0-d6): δ 162·92,159·68,143·66,140·04,137·19,136·79， 135.03,130.51,129.32,128.68,126.91,126.81,125.99,123.33,115.92,115.64,100.79， 77·02，74·32，73·77，70·22，60·94，48·15，18·60。
[0212] HRMS(ESI)m/z:478.1713。
[0213] 步驟3):(23,31?，41?，53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基）[3'，4'02]噻吩-2-基）[0 2]甲 基)-4-甲苯基)-6-(羥甲基)-四氫-2H-吡喃-3,4,5-三醇7
[0214]
[0215] 參照實施例1步驟6)的方法制備化合物7。
[0216] ^NMRC300MHz,DMS〇-d6) ：δ7.56-7.60(m,2Η,dd,Ji = 8.6Hz,J2 = 5.5Hz,Ph),7. Ι?-7 . 25(5H,m ,Ph), 4. 86 (2Η, d ,J=4. 4Ηζ ,ΟΗ), 4. 66( 1Η, d, J= 5 . 0Hz , OH), 4. 37( 1Η, t, J= 5.7Ηζ,0Η),3.98(lH,d,J=9.1Hz,sugar),3.69-3.74(lH,m,sugar),3.45-3.48(lH,m, sugar),3.15-3.29(4H,m,sugar),2.26(s,3H)〇
[0217] 13C-匪R(300MHz，DMS0-d6):Sl62.94,159.69,143.39,140.18,138.16,137.21, 134.83,130.47,129.57,128.98,126.94,126.83,126.16,123.22,115.92,115.63,81.26， 81 · 11，78·46，74·64，70·43，61·43，33·33，18·70。
[0218] HRMS(ESI)m/z:448.1618。
[0219] 實施例8化合物6的制備：
[0220] (23,31?，41?，53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基）噻吩-2-基）[02]甲基）-4-甲苯基）-6-(羥甲基)-四氫-2D-吡喃-3，4，5-三醇6
[0221]
[0222] 參照實施例1步驟6)的方法制備化合物6。
[0223] 4匪1?( 300MHz，DMS0-d6): δ7 · 56~7 · 61 (2H，dd，Ji = 8 · 6Hz，J2 = 5 · 5Hz，Ph)，7 · 10~ 7.22(5H，m，Ph)，4.89~4.90(2H，d，J = 4.4Hz)，4.69~4.71(lH，d，J = 5.6Hz)，4.39~4.43 (lH，t，J = 5.7Hz)，3.67~3.72(lH，m，sugar)，3.40~3.47(lH，m，sugar)，3.12~3.27(4H， m，sugar)，2·25(s，3H)。
[0224] HRMS(ESI)m/z:448.1618。
[0225] 實施例9化合物28的制備
[0226] 歩驟1):2-溴-5-(4-氟苯基）[2,3_D2]噻酚IX-1
[0228] 在耐壓管中稱量式II-1化合物(5.0g，28.1mmol)，加入氘代水14ml(700mmol)，冷 卻到〇°C后緩慢加入P 2〇5(28.4g，200mmol)，室溫下攪拌5min，再加熱到120°C攪拌24小時。冷 卻至lj〇°C后加入水(80ml)，用CH 2C12提取反應液(3 X 60ml) JgSO*干燥后，濾液在常壓下蒸餾 除去溶劑后得到油狀殘留物式I-4化合物(5.0g)。
[0229] iH-NMI^CDCh，300MHz):δ7· 71-7·67(m，2H)，7· 22-7· 28(t，2H)。
[0230] HRMS(ESI)m/z:181.0494。
[0231] 用式1-4化合物代替式II-l化合物，并參照實施例2步驟1)所述的方法制備式IX-1 化合物。
[0232] 4-匪1?(0)(：13,3001抱）：37· 51 (m，2H)，7 ·02(ι?，2H)。
[0233] HRMS(ESI)m/z:257.9481。
[0234] 歩驟2): (5-溴-2甲基苯基）（5-( 4-氟苯基）[2，3-D2 ]噻酚-2-基酮IX-2
[0236] 用式IX-1化合物代替式II-2化合物，并參照實施例2步驟1)所述的方法制備式IX-2化合物。
[0237] 4^^(30010^,0)(:13):37.62-7.66(211,111),7.57(111,8),7.49-7.52(111,(1(1,11 = 8.2Hz，J2 = 1.8Hz)，7.09~7.18(3H，m)，2.33(3H，s)。
[0238] HRMS(ESI)m/z:375.9906。
[0239] 歩驟3):(5-溴-2-甲基苯基）（5-(-4-氟苯基)-[2,3-02]噻吩）[0]-甲醇1父-3
[0241] 將式IX-2化合物（2.658,7.06111111〇1)加入到10011^單口燒瓶中，依次加入乙腈 (2511^)、[04]硼氫化鈉(0.4(^，10.87111111〇1)。開啟加熱至反應液回流，3小時后11(：顯示原料 反應完全。反應液降溫至室溫后攪拌狀態(tài)下加入到20mL重水中，有較多固體析出?；旌弦簻p 壓抽濾。濾餅干燥后得淡黃色固體IX-3 (2.51 g)。
[0242] ^NMRUOOMHz，CDC13):S7.79(s，lH) ,7.52-7.47(m，2H)，7.33((1,1H) ,7.06-6.98 (m，3H)，6.66(d，lH)，2.25(s，3H)。
[0243] HRMS(ESI)m/z：379.,0123〇
[0244] 步驟4):((5-溴-2-甲基苯基）（5-(-4-氟苯基)-[2,3-02]噻吩）[0]甲氧基)三甲基 硅烷IX-4
[0246] 將化合物IX-3 (1 · 5g，3 · 95mmol)加入到25mL三口燒瓶中，依次加入四氫呋喃 (15mL)、N-甲基嗎啉(0.61mL，5.13mmol)。將反應瓶轉(zhuǎn)移到-20°C低溫反應浴中，待反應液溫 度降至-20°C后緩慢加入三甲基氯硅烷(0.61 1^，4.74111111〇1)。低溫下繼續(xù)攪拌5分鐘后反應 瓶轉(zhuǎn)移至室溫攪拌，三小時后TLC顯示原料剩余較少。將30mL石油醚、20mL水依次加入到反 應液中，充分攪拌后分液，水相用20mL石油醚再萃取一次，分液，合并有機相，有機相用15mL 飽和磷酸二氫鉀溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得淡黃色粘稠液體。粗品柱層析純化，石 油醚-乙酸乙酯（10:1，V/V)系統(tǒng)洗脫，得淡黃色粘稠液體式IX-4化合物（1.5g，3.32mmo 1，收 率 84.1%)。
[0247] ^NMRUOOMHz，CDC13):S7.79(s，lH) ,7.52-7.47(m，2H)，7.32((1,1H) ,7.06-6.98 (m,2H),2.25,(s,3H),0.14(s,9H)〇
[0248] HRMS(ESI)m/z：451.0514〇
[0249] 步驟5): (2S，3R，4R，5S，6R) -2-3-((5-(4-氟苯基）[2，3-D2 ]噻吩-2-基)羥基[D ]甲 基)-4-甲苯基)-6-(羥甲基)-2-甲氧基四氫-2H-吡喃-3，4，5-三醇IX-5
[0251] 將化合物IX_4(1.6lg，3.55mmol)加入到100mL干燥三口燒瓶中，氮氣置換反應瓶 中空氣。氮氣保護下依次將無水甲苯(10mL)、無水四氫呋喃（15mL)用注射器注入反應瓶。將 反應瓶置于_78°C低溫浴中，待反應液內(nèi)溫降至_78°C后，將正丁基鋰溶液（1.56mL， 3.9mmol，2.5M)緩慢注入反應液中，反應液很快變?yōu)樯钏{色，整個滴加過程持續(xù)10分鐘，保 持反應液內(nèi)溫低于-65 °C。30分鐘后，將溶于50mL無水甲苯的TMS-葡萄糖酸內(nèi)酯1-8 (1.66g， 3.55mmol)溶液緩慢注入反應液中，整個滴加過程持續(xù)10分鐘，保持反應液內(nèi)溫低于-61°C。 反應液繼續(xù)在_78°C低溫浴中攪拌2小時。將甲基磺酸（1.368，14.2臟〇1)的無水甲醇（151^) 溶液緩慢注入反應瓶中，保持反應液內(nèi)溫低于-60°C。滴加完畢，將反應瓶置于室外條件下 繼續(xù)攪拌反應3小時。冰浴條件下將30mL飽和碳酸氫鈉溶液緩慢加入到反應液中，充分攪拌 后分液，水層用20mL乙酸乙酯萃取兩次，合并有機層，飽和氯化鈉溶液(3 X 10mL)洗滌，無水 硫酸鈉干燥后旋蒸得類白色固體。粗品用硅膠柱層析純化，乙酸乙酯-甲醇洗脫（10:1，V/ V)，得白色固體式IX-5化合物(1.12g，收率63.9 % )。
[0252] 七匪以 300MHz，CDC13): δ 1H-匪R( 300MHz，DMS0-d6): δ7 · 57~7 · 65 (3H，m，Ph)，7 · 36 ~7.38(lH，m，thio)，7·11~7.29(m，3H，Ph)，4.93(lH，d，5.3Hz，0H),4.64~4.69(2H，m， OH),4.49~4.51(lH，m，0H),3.73~3.76(lH，m，sugar),3.54~3.61(2H，m，sugar),3.38~ 3·43(lH，m，sugar)，3·20~3·30(lH，m，sugar)，2·99(3H，s，0Me)，2·25(3H，s，Me)〇
[0253] HRMS(ESI)m/z:493.1652。
[0254] 步驟6):(23,31?，41?，53,61〇-2-3-((5-(4-氟苯基）[3'，4'-02]噻吩-2-基）甲基）-4-甲苯基)-6-(羥甲基)-四氫-2H-吡喃-3,4,5-三醇28
[0256] 25ml三頸瓶中加入式IX-5化合物（0.5g，l .03mmol)，三乙基硅烷（(K72ml， 4.18mmol)，8ml CHC12，N2保護，降至-70°C。向反應混合物中緩慢滴加三氟化硼乙醚溶液 (0.5ml，3.99mmol)。升至0°C反應2h。向反應混合物中加入飽和NaHC0 3溶液10ml，乙酸乙酯 萃取，有機層無水MgS04干燥。蒸出溶劑，柱層析分離得到白色固體式28化合物(0.3g)，收率 65%〇
[0257] 匪R(300MHz，DMS0-d6):δ7·56~7·60(2H，dd，J1 = 8·6Hz，J2 = 5·5Hz，Ph)，7·10 ~7.25(5H，m，Ph)，4.83(2H，s，0H)，4.65(lH，s，0H)，4.35(lH，s，0H)，4.12(lH，s，Ph-CHD-thio)，3.98(lH，d，J = 9.2Hz，sugar)，3·69~3·73(lH，m，sugar)，3·47(lH，m，sugar)，3· 18 ~3·28(4H，m，sugar)，2·26(3H，s，Me)〇
[0258] 13C-匪R(300MHz，DMS0-d6): δ 162·92，159·68，143·47，140·16，138·15，137·26， 134.83,130.49,129.56,128.98,126.93,126.82,126.15,123.32,115.91,115.62,81.24， 81.10,78.44,74.62,70.41,61.41,33.33(m),18.70〇
[0259] HRMS(ESI)m/z:447.1593。
[0260] 實施例9卡格列凈、化合物1、化合物3和化合物7對正常SD大鼠糖耐量和尿糖排泄 量的影響
[0261] 一)試驗方法
[0262] 大鼠[CD(SD)體重160-180克]20只，禁食18h不禁水，按血糖和體重隨機分為5組： 正常對照組、卡格列凈（1. 〇mg/kg)組、化合物1 (1. Omg/kg)組、化合物3 (1. Omg/kg)組、化合 物7(1.0mg/kg)組，灌胃給予相應藥物（1.0mg/kg)，正常組給予等體積注射用水。給藥后 30min，ig給予大鼠葡萄糖3g/kg，給藥體積為1.5ml/100g，大鼠禁食至實驗結(jié)束，尾尖采血 測定給藥前及給GLU后0.511、1、2、4、6、8、2411的血糖，收集給予葡萄糖后0-2、2-4、4-6、6-10、 10-24h大鼠尿液，（4、6h收集尿液后每只大鼠補充水，ig 5mL注射用水），測定尿量并且取 lml，1000r/min*5min離心后，測定尿糖。檢測指標及計算方法如下：
[0263] (l)AUC(0~tn) = (給藥前+給藥后tQ)*to/2+(給藥后to+給藥后。)*(。-如)/2+(給 藥后 tl+給藥后 t2)*(t2_tl)/2+......+(給藥后 tn-l+給藥后 tn)*(tn-tn-1)/2
[0264] (2)血糖下降率（％ )=(正常組一給藥組)/正常組X 100%
[0265] (3)血糖AUC下降率（％ )=(正常組血糖AUC-給藥組血糖AUC)/正常組血糖AUCX 100%
[0266] (4)糖排泄量=尿糖*尿液體積
[0267] (5)糖排泄率=糖排泄量/給糖量
[0268] 二)數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理方法
[0269] 數(shù)據(jù)按統(tǒng)計要求，用平均值土標準差(X土 s)表示，所有數(shù)據(jù)使用Microsoft Exce 1 軟件進行t檢驗，并分析結(jié)果。
[0270]三)實驗結(jié)果
[0271] (1)對正常大鼠糖耐量的影響
[0272] 正常對照組大鼠灌胃給予葡萄糖后，30min血糖值顯著升高，60min血糖達最高， 120min血糖值出現(xiàn)下降。與正常對照組比較，除化合物1組動物給糖后大鼠血糖時間曲線下 面積AUC (0-24)顯著性減少(p〈0.05)以外，各組大鼠在糖負荷0.5h、1、2、4、6、8、24h血糖與 不同時段血糖AUC無顯著差異。給糖后2h對大鼠血糖下降率分別為：15%、-13%、-8%、_ 4 %，大鼠血糖AUC(0-2h)下降率分別為:5 %、3 %、0 %、0 % ;給糖后24h對大鼠血糖下降率分 別為：15%、18%、6%、13%，大鼠血糖六1](：(0-2411)下降率分別為 ：13%、12%、4%、7%。結(jié)果 見表1-4。
[0273] 表1.對糖負荷大鼠血糖的影響士 s，n = 4)
[0274]
[0275] 表2.對糖負荷大鼠血糖-AUC的影響（? 土 s，n = 4)
[0276]
[0277] 表3.對糖負荷大鼠血糖AUC下降的影響
[0279]表4.對糖負荷大鼠血糖下降的影響
[0281] (2)對正常大鼠尿糖排泄量的影響
[0282]與正常組比較，各組均能增加糖負荷大鼠24h內(nèi)的葡萄糖排泄量，由大到小依次為 化合物l(lmg/kg)組》卡格列凈（lmg/kg)組>化合物7(lmg/kg)組》化合物3(lmg/kg)組。 卡格列凈、化合物1、化合物3、化合物7 (lmg/kg)組大鼠0-1 Oh尿糖排泄率分別為：11.6 %、 14.7%、10.5%、11.2%，與正常對照組相比差異極顯著(P<0.01);各組大鼠10-24h尿糖排 泄率分別為:2.4%、1.5%、2.2%、1.6%。表明排糖主要集中在0~1 Oh，10~24h時段排糖量 較少。各實驗組大鼠在0-2、2-4、4-6、6-10、10-2411的排糖量相差不大，降尿糖作用比較緩 和，且與其降血糖作用趨勢相應。結(jié)果見表5-10。
[0283]表5.對糖負荷大鼠不同時間段尿排糖量影響(?± s,n = 4)
[0285] 注：與正常對照組相比，*P〈0 · 05，林P〈0 · 01
[0286] 表6.對糖負荷大鼠不同時間段尿量影響（X土 s，n = 4)
[0288] 注：與正常對照組相比，*P〈0 · 05，林P〈0 · 01。
[0289] 表7.對糖負荷大鼠不同時間段尿糖排泄率的影響（￡± s.,n = 4)
[0291 ] 注:與正常對照組相比，*P〈0 · 05，#P〈0 · 01。
[0292]表8.對糖負荷大鼠累積尿排糖量影響士 s:，n = 4)
[0293]
[0294] 注：與正常對照組相比，*P〈0 · 05，林P〈0 · 01。
[0295] 表9.對糖負荷大鼠累積尿量影響（_x_：t s，.n = 4)
[0297] 注：與正常對照組相比，*P〈0 · 05，#P〈0 · 01。
[0298] 表10.對糖負荷大鼠累積尿糖排泄率的影響（X土 s，n = 4)
[0300] 注：與正常對照組相比，*P〈0 · 05，林P〈0 · 01。
[0301] 四）小結(jié)
[0302]對正常SD大鼠降血糖作用由大到小依次為:化合物l(lmg/kg)組》卡格列凈（lmg/ kgHii>化合物7(lmg/kg)組》化合物3(lmg/kg)組。
[0303]對尿糖的排泄作用由大到小為:化合物1 (lmg/kg)組 > 卡格列凈（lmg/kg)組 > 化 合物7(lmg/kg)組》化合物3(lmg/kg)組。
[0304]實施例10卡格列凈與化合物1在人肝微粒體中代謝穩(wěn)定性研究 [0305] (1)體外溫孵操作
[0306] 1)拿出人肝微粒體3管（每管50yL，20mg/mL)，每管肝微粒體溫孵溶液體系：395μ LPBS，加入50yL肝微粒體溶液(5. Omg/mL)，5yL底物，混勻即得。
[0307] 2)稱取約8.4mg NADPH加入500yL PBS溶解，加入500yL MgCh混勻。
[0308] 3)分取450yL(n = 2)溫孵溶液用恒溫搖床溫孵，于37 °C預溫孵5min JADPH混合溶 液(含MgCl2)亦于37°C預溫孵5min待用。
[0309] 4)吸取54yL溫孵溶液至1.5mL Eppendorf管中，加入6yL pH7.4PBS緩沖液，渦旋混 勾，即為Omin樣品。
[0310] 5)剩余溫孵溶液中每份加入44yL NADPH混合溶液(含MgCl2)啟動反應(其中有機 溶劑的比例為1 % )，37°C溫孵并計時。到達設定時間后，轉(zhuǎn)移60yL樣品至已加入120yL反應 終止液的1 · 5mL Eppendorf管中終止反應。
[0311] 6)渦旋混勻3min，于4°C、12000rpm離心3min，取80yL上清夜，加入80yL純水，混勻， 進行LC-MS/MS分析。
[0312] 7)如有異?，F(xiàn)象及操作，及時記錄。
[0313] (2)微粒體樣品處理
[0314] 吸取60yL微粒體樣品，加入200yL含內(nèi)標的冰乙腈沉淀，渦旋震蕩5min后，離心 (13800rpm，4°C)10min。TQ1501-754a、TQ1501-001a、DEX吸取上清液80μL，在96孔板中加入 80yL的1:1的乙腈:水，禍旋混勻，lyL進樣分析。
[0315] ⑶數(shù)據(jù)采集和處理方法
[0316]此次試驗主要看化合物在體外的消除情況，以〇點作為參照，以與內(nèi)標峰面積的比 值作為數(shù)據(jù)進行比較。因此沒有做每個化合物的相應的標準曲線及質(zhì)控。
[0317] (4)藥動學參數(shù)的估算
[0318]清除率計算公式：
[0319] (5)實測數(shù)據(jù)結(jié)果
[0320] i.陽性對照右美莎芬(DEX)結(jié)果
[0321] 體外ΙμΜ DEX溫孵120min，相對于Omin變化數(shù)值參見表11。
[0322] 表11體外ΙμΜ DEX溫孵相對Omin剩余百分比
[0323]
[0324] i i .體外卡格列凈及化合物1溫孵結(jié)果
[0325] 將卡格列凈、化合物1溫孵90min，相對于Omin變化數(shù)值參見表12。
[0326] 表12卡格列凈、化合物1溫孵90min內(nèi)，相對于Omin剩余百分比
[0327]
[0328] iii.體外溫孵參數(shù)擬合結(jié)果
[0329 ]陽性藥物、卡格列凈、化合物1參數(shù)擬合結(jié)果見表13。
[0330]表13陽性藥物、卡格列凈、化合物1參數(shù)擬合結(jié)果
[0331]
[0332] (6)小結(jié)
[0333] 1)陽性藥物右美沙芬的半衰期為34.79min，介于30~50min，符合要求，提示實驗 結(jié)果可靠。
[0334] 2)卡格列凈與化合物1在人肝微粒體中90min內(nèi)有一定代謝，但半衰期均>200min， 提示代謝非常緩慢。
[0335] 3)相同濃度的化合物1比卡格列凈在人肝微粒體體系中的半衰期更長，穩(wěn)定性更 好。
【主權項】
1. 一種式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽： 丄其中Rl、R2獨立地選自 H、D或0出1?4、1^、1?6、1?7、1?8、1?9、1?1()、1?11、1?12、1?13、1?14、1?15分別獨立地選 自H或D，R3獨立地選自C1-C4烷基或氘代C1-C 4烷基，條件是R1-R15中至少包含一個氘原子。2. 權利要求1的化合物，其中R3獨立地選自CH3、CH2D、CHD 2或CD3。3. 權利要求1的化合物，其選自以下化合物：5. -種藥物組合物，其包含權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，以及一種或多 種藥學上可接受的載體、賦形劑和/或介質(zhì)。6. 權利要求1-4中任一項的化合物或其藥學上可接受的鹽、權利要求5的藥物組合物在 制備治療受益于SGLT-2抑制的疾病的藥物中的用途。7. 權利要求6的用途，其中所述受益于SGLT-2抑制的疾病選自糖尿病、糖尿病性視網(wǎng)膜 病、糖尿病性神經(jīng)病變、糖尿病性腎病變、傷口愈合延遲、胰島素抵抗、高血糖癥、高胰島素 血癥、脂肪酸血濃度升高、甘油血濃度升高、高脂血癥、肥胖癥、高甘油三酯血癥、X綜合征、 動脈粥樣硬化或高血壓。8. 權利要求7的用途，其中所述受益于SGLT-2抑制的疾病選自糖尿病。
【文檔編號】A61P5/50GK105884755SQ201610077280
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年2月4日
【發(fā)明人】張寅生, 柳英帥
【申請人】正大天晴藥業(yè)集團股份有限公司