Schiglautone A衍生物的組合物用于制備抗缺氧藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物及其在抗缺氧藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實驗表明，本發(fā)明的組合物具有抗缺氧作用，具有開發(fā)抗缺氧藥物的價值。
【專利說明】
Sch i g I autone A衍生物的組合物用于制備抗缺氧藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 氧是人類及許多生物賴以生存的重要條件。低氧(Hypoxia)是指機(jī)體生命活動所 需的氧不能得到充足的供給。氧和低氧是生命活動最重要的關(guān)鍵因素，是生命科學(xué)基本理 論的重要課題。低氧的形成可分為三類:第一類是外界環(huán)境氧含量降低，使正常生理活動過 程不能攝取足夠氧，如高原和航空缺氧;第二類是指因疾病等導(dǎo)致外界正常氧量不能充分 到達(dá)機(jī)體內(nèi)，造成心、腦和呼吸系統(tǒng)等的缺氧;第三類是機(jī)體活動所需氧消耗量，超過了生 理動員能力，造成相對氧供給不足，常見于劇烈運動和超限量勞動。長期低氧是危害人體健 康的重要隱患，嚴(yán)重者可危及生命。因此，低氧造成心、腦和呼吸系統(tǒng)等損傷已成為21世紀(jì) 醫(yī)學(xué)界急待解決的主要問題之一。
[0003] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個201 1年發(fā)表（Fan-Yu Meng et al .， 2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011) 1502-1505)的化合物，我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物 III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物的抗缺氧活性進(jìn)行 了評價，其具有抗缺氧活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為50%和50%。
[0006]
[0007] 本發(fā)明公開的化合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0008] 藥效學(xué)實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗缺氧作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接 受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] 以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體 實施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1化合物Schiglautone A的制備
[0011] 化合物Schiglautone A(I)的制備方法參照Fan-Yu Meng等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Fan-Yu Meng et al.,2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/ 7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011 )1502-1505)的方法。
[0012]
[0013] 實施例2 Schiglautone A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(502mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(7.52(^，40.00111111〇1)和61^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏 度攪拌Shdh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后 對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(508mg，71 % )。
[0015] ΧΗ NMR(500MHz,DMS0-d6)5l3.40(s,lH),6.10(s,lH),5.63(s,lH),5.53(s,lH), 3.85(d,J = 11.2Hz,4H) ,3.52(d,J=10.8Hz,4H) ,2.96(s,lH) ,2.20(s,lH) ,2.16(s,2H), 2.00(s,lH),1.84(d,J=13.9Hz,4H),1.69(s,lH),1.58(dd,J = 22.2,8.5Hz,4H) ,1.51(s, lH),1.47(s,lH),1.26(dd,J=9.1,4.4Hz,4H),1.21(s,lH),1.08-0.98(m,4H),0.96-0.94 (m,9H),0.94-0.85(m,6H).
[0016] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S211.46(s),209.14(s),170.06(s),161.12(s),143.51 (s),132.01(s),127.77(s),85.96(s),82.40(s),70.19(s),69.10(s),57.14(s), 52.73 (s),51.90(s),45.77(s),40.67(s),38.57(s),38.32(s),35.04(s),33.55(s),33.27(s), 29.85(s),28.98(s),26.71(s),25.50(s),24.05(s),22.31(s),21.06(s),20.56(s),20.00 (s),18.69(s),18.11(s),15.07(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M-H]_calcd for C34H5iBr2〇6:715.2032；found 715.2027.
[0018]
[0019] 實施例3 Schiglautone A的0-(1Η-四氮挫基）乙基衍生物（III)的合成 [0020] 將化合物II(358mg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmo 1)，碘化鉀（84mg，0 · 5mmo 1)和1H-四氮唑（140 lmg，20mmo 1)，混合物加熱回流5h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。因 為互變異構(gòu)作用，在反應(yīng)條件下會生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑基兩種取代產(chǎn)物。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1，v/v)，收集淡黃色集中洗脫帶，再將 淡黃色洗脫帶濃縮，用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:0.5，v/v)，依次收集 兩個淡黃色的洗脫帶，濃縮前1個洗脫帶即得到化合物III的淡黃色固體(79.8mg，23%)。
[0021] ΧΗ NMR(500MHz,DMS0-d6)5l6.29(s,lH),9.99(s,lH),9.93(s,lH),6.25(s,lH), 5.76(s,lH),5.40(s,lH),4.57(s,1H),4.38(s,1H),4.32(s,1H),4.21(s,1H),3.96(d,J= 11.9Hz,4H),3.33(s,lH),2.55(s,lH),2.51(s,2H),2.39(s,lH),l.98(s,3H),1.82-1.76 (m,3H),1.73(s,lH),1.65(d,J=6.5Hz,2H),l.60(s,lH),1.53(s,1H),1.47-1.37(m,4H), 1.30(s,lH),1.19(s,lH),1.10(t,J=12.5Hz,3H),1.08(t,J=12.5Hz,9H),1.03(s,3H), 0.86(s,3H).
[0022] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S211.72(s),209.42(s),170.36(s),161.38(s),145.37 (s),143.80(s),132.29(s),128.04(s),86.25(s),82.68(s),66.14(s),65.60(s),57.33 (s),52.91(s),52.08(s),46.81(s),45.95(s),40.84(s),38.76(s),38.50(s),35.21(s), 33.74(s),30.01(s),29.16(s),26.91(s),25.66(s),24.23(s),22.51(s),21.22(s),20.74 (s),20.20(s),18.85(s),18.29(s),15.27(s).
[0023] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C36H55N8〇6:695.4245;found:695.4248〇
[0024]
[0025] 實施例4 Schiglautone A的0-(苯并咪唑基）乙基衍生物的合成
[0026] 將化合物II(358mg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmol)，鵬化鉀(84mg，0 · 5mmol)和苯并咪唑（1180mg，lOmmol)，混合物加熱回流6h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮 即得到化合物IV的棕色固體（169.9mg，43 % )。
[0027] ΧΗ NMR(500MHz,DMS0-d6)5l3.32(s,lH) ,8.38(s,2H) ,7.66(d,J = 25.0Hz,4H), 7.39(s,2H),7.32(s,2H),6.25(s,1H),5.64(d,J=18.7Hz,2H),4.34(s,1H),4.28(s,lH), 4.18(d,J=13.7Hz,2H),4.04(s,2H),3.99(s,2H),3.13(s,1H),2.65(s,2H),2.26(s,1H), 2.17(s,lH) ,2.06(s,lH),l.98(s,3H) ,1.87(d,J= 16.4Hz,2H) ,1.66(dd,J = 8.0,6.6Hz, 4H),1.62(s,lH),1.49(s,lH),1.41(dd J=19.6,10.4Hz,2H),1.37(d,2H),1.20-l.ll(m, 4H) ,1.07(d,J = 20.0Hz,6H),103(d,J = 20.0Hz,3H),1.01(d,J = 20.0Hz,3H) ,0.95(d,J = 20.0Hz,3H).
[0028] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)δ211·30(s),208·98(s),169·90(s),160·96(s),146·28 (s),143.34(s),139.64(s),133.48(s),131.85(s),127.61(s),123.92(s),123.35(s), 118.55(s),110.85(s),85.79(s),82.26(s),67.74(s),67.20(s),57.00(s),52.56(s), 51.73( s),45.63(s),44.94(s),40.49(s),38.42(s),38.17(s),34.86(s), 33.40(s), 29.68(s),28.81(s),26.57(s),25.33(s),23.88(s),22.17(s),20.89(s),20.39(s),19.86 (s),18.52(s),17.87(s),14.93(s).
[0029] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C48H63N4〇6:791.4748;found:791.4744。
[0030]
[0031] 實施例5小鼠特異性心肌缺氧實驗
[0032] 1、方法：
[0033]組合物的制備:將研磨之后過200目網(wǎng)的50mg化合物III的粉末和研磨之 [0034]后過200目網(wǎng)的50mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀 [0035] 混合即得到1 OOmg組合物，使用時用水溶解這1 OOmg的組合物即得到組合
[0036]物的溶液。
[0037] 50只昆明小鼠，體重(20±2)g。隨機(jī)分為5組，灌胃給藥。前2組給予0.3%羧甲基纖 維素鈉(CMC-Na)溶液，后3組分貝給予化合物III、化合物IV和組合物，50min后，除第1組外， 均腹腔注射異丙腎上腺素（IS0)15mg · Kg-^lSmin后，將小鼠放入常壓缺氧裝置中，記錄小 鼠死亡時間及耗氧量。
[0038]結(jié)果：
[0039]異丙腎上腺素可通過興奮心臟β受體，使心肌耗氧量增加。本實驗顯示，與溶媒對 照組相比，組合物O.OlOg · Kg-1能顯著對抗異丙腎上腺素（ISO)導(dǎo)致的心肌耗氧量增加(Ρ〈 0.01)，同時延長小鼠缺氧狀態(tài)下的存活時間（Ρ〈〇.01)，結(jié)果見表1。而化合物III和化合物 IV均不具備此作用。
[0040] 表1待試物對異丙腎上腺素致特異性缺氧小鼠的影響(χ，η = 10)
[0041]
[0042] 注:1〉P〈0.01，與對照組比較，2)P〈0.01，與異丙腎上腺素組比較。
[0043] 實施例6小鼠常壓室息性缺氧實驗
[0044] 1、方法：
[0045] 40只昆明小鼠，體重(20±2)g。隨機(jī)分為4組，灌胃給藥。第1組給予0.3%羧甲基纖 維素鈉(CMC-Na)溶液，后3組分別給予含組合物、化合物III和化合物IV的CMC-Na溶液，濃度 為O.OlOg · Kg<。給藥50min后，置于廣口瓶中并蓋緊瓶塞(瓶內(nèi)放置5g鈉石灰）。以呼吸停止 為標(biāo)志，記錄小鼠存活時間。
[0046] 2、結(jié)果：
[0047]與溶媒對照組相比，組合物的O.OlOg · Kg<使小鼠在常壓密閉條件下的存活時間 延長了39.26%，差異具有顯著性(P〈0.01 )，而化合物III和化合物IV均未能使小鼠在常壓 密閉條件下的存活時間顯著延長。
[0048]實施例8小鼠減壓缺氧實驗 [0049] 1、方法：
[0050] 40只昆明小鼠，體重（20±2)g。隨機(jī)分為4組，灌胃給藥。給藥組分別給予組合物、 化合物III和化合物IV，濃度為0.010g · Kg<，對照組給予0.3 % CMC-Na溶液，灌胃體積均為 2ml · Kg<。50min后，各給藥組和對照組各取5只，放入減壓裝置中，在26.7Kpa(相當(dāng)于海拔 約10000m)時停止減壓，保持此壓力不變，待對照組動物死亡80 %時，立即停止減壓，緩緩放 入空氣，取出動物，記錄各組死亡及存活數(shù)目，重復(fù)操作至實驗完成。
[0051] 2、結(jié)果：
[0052]組合物0.010g · Kg<使小鼠在減壓缺氧條件下的存活率由對照組的20%提高至 40%，差異具有顯著性(P〈0.05);而化合物III和化合物IV對小鼠在減壓缺氧條件下的存活 率為20%，均未有提高。
[0053]結(jié)論:組合物可顯著提高異丙腎上腺素致特異性缺氧的存活時間，室息性缺氧和 急性減壓缺氧小鼠的存活率，提供了組合物在制備抗缺氧藥物中的用途。而化合物III和化 合物IV均不具有上述活性。
[0054] 實施例8本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0055] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0056] 實施例9本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0057]取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為50%和50%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為50 %和50 %充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在抗缺氧藥物中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物在抗缺氧藥物中的應(yīng)用，其特征在于:所述缺氧為異丙 腎上腺素致特異性缺氧。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物在抗缺氧藥物中的應(yīng)用，其特征在于:所述缺氧為常壓 室息性缺氧。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物在抗缺氧藥物中的應(yīng)用，其特征在于:所述缺氧為減壓 缺氧。
【文檔編號】A61K31/41GK106038552SQ201610416000
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月13日
【發(fā)明人】陸賢
【申請人】南京廣康協(xié)生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司