一種化合物藥物載藥組織粘貼膜及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種化合物藥物載藥組織粘貼膜及其制備方法。本發(fā)明提供一種載藥組織粘貼膜，所述載藥組織粘貼膜包括交替疊加的陽離子層和陰離子層，所述陽離子層和陰離子層中的至少一層為藥物層、或所述陽離子層和陰離子層中的至少一層含有帶電荷的藥物，所述藥物為化合物藥物。本發(fā)明所提供的載藥組織粘貼膜具有良好的組織黏附性、良好的生物相容性及可降解吸收性、良好的穩(wěn)定性，其物理、化學(xué)性能可通過調(diào)節(jié)材料的組成而調(diào)節(jié)。
【專利說明】
一種化合物藥物載藥組織粘貼膜及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種化合物藥物載藥組織粘貼膜及其制備方法，該載藥組織粘貼膜可通過外科手術(shù)植入病患組織部位進行局部直接緩釋控釋給藥治療各種疾病。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著科技的迅速發(fā)展，大量新種類的藥物不斷被發(fā)現(xiàn)，但是目前阻止很多新藥物臨床使用的最大障礙就是缺乏有效的給藥技術(shù)?，F(xiàn)有技術(shù)中很多給藥技術(shù)存在無法真正針對病灶，緩釋難以有效控制等問題，這些問題會導(dǎo)致全身給藥、給藥劑量大、副作用大、靶向性差、進入細胞內(nèi)部的藥物劑量少，達不到臨床治療效果。所以對于絕大多數(shù)藥物，具體如化合物藥物，其在載體方面也都存在各種類似的需要改善的問題，所以對于給藥系統(tǒng)，尤其是載體方面的研究越來越受到重視。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明的目的在于提供一種化合物藥物載藥組織粘貼膜及其制備方法和用途，該載藥組織粘貼膜可通過外科手術(shù)植入病患組織部位，進行局部直接緩釋控釋給藥治療各種疾病，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。
[0004]為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明第一方面提供一種載藥組織粘貼膜，更具體為化合物藥物載藥組織粘貼膜，所述載藥組織粘貼膜包括交替疊加的陽離子層和陰離子層，所述陽離子層和陰離子層中的至少一層為藥物層、或所述陽離子層和陰離子層中的至少一層含有帶電荷的藥物，所述藥物為化合物藥物。
[0005]具體的，所述陽離子層整體上顯示為正電荷，所述陰離子層整體上顯示為負電荷。
[0006]當所述陽離子層和陰離子層中的至少一層為藥物層時，作為藥物層的陽離子層和/或陰離子層為帶電荷的藥物，不作為藥物層的陽離子層可含有帶陽離子基團的載體材料，不作為藥物層的陰離子層可含有帶陰離子基團的載體材料。
[0007]當所述陽離子層和陰離子層中的至少一層含有帶電荷的藥物時，陽離子層可含有帶陽離子基團的載體材料，陰離子層可含有帶陰離子基團的載體材料。
[0008]在本發(fā)明所提供的載藥組織粘貼膜中，所述帶陽離子基團的載體材料為本身帶有正電荷或在溶于溶劑發(fā)生電離后帶有正電荷的材料，在本發(fā)明一實施方式中可以是溶于水發(fā)生電離后，帶有正電荷的物質(zhì)。
[0009]所述帶陽離子基團的載體材料優(yōu)選為可體內(nèi)降解的生物相容性材料。
[0010]具體的，所述帶陽離子基團的載體材料可選自帶陽離子基團的有機高分子聚合物、帶陽離子基團的多聚糖、帶陽離子基團的多肽、帶陽離子基團的蛋白、以及陽離子脂質(zhì)體等中的一種或多種的組合。
[0011]所述有機高分子聚合物具體指由許多相同的結(jié)構(gòu)單元(一種結(jié)構(gòu)單元或多種結(jié)構(gòu)單元)通過共價鍵重復(fù)連接而成的高分子量化合物，在本發(fā)明一實施方式中，具體可選用的帶陽離子基團的有機高分子聚合物包括但不限于:聚乙烯亞胺、樹形聚酰胺胺高分子、陽離子聚酯(具體例子如陽離子聚磷酸酯、聚磷酰酯、聚甲基丙烯酸酯等)、聚乙烯基吡啶等中的一種或多種的組合。
[0012]所述多聚糖具體指一分子水解時可以生成多個單糖，更具體為十個以上單糖的糖，所述帶陽離子基團的多聚糖可以是本身帶陽離子基團的多聚糖，也可以是通過改性獲得的帶有陽離子基團的多聚糖。對多聚糖進行改性以使其帶有陽離子基團的技術(shù)為本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)，具體可以是在側(cè)鏈上接枝氨基等方法。在本發(fā)明一實施方式中，具體可選用的帶陽離子基團的多聚糖包括但不限于:殼聚糖及其衍生物(具體例子如殼聚糖季銨鹽、低取代度羧甲基殼聚糖、三甲基殼聚糖、含咪唑基殼聚糖、巰基化殼聚糖等)、陽離子淀粉及衍生物(具體例子如帶有陽離子基團的環(huán)糊精等)以及其他帶有陽離子基團的多聚糖中的一種或多種的組合。
[0013]所述帶陽離子基團的多肽或蛋白可以是本身帶有陽離子基團的多肽或蛋白，也可以是通過改性獲得的帶有陽離子基團的多肽或蛋白。在本發(fā)明一實施方式中，具體可選用的帶陽離子基團的多肽或蛋白包括但不限于:聚賴氨酸或聚精氨酸及他們的衍生物(具體衍生物的例子如:在多肽上引入PEG、半乳糖、乳糖、葉酸、轉(zhuǎn)鐵蛋白等)、膠原、明膠、血清白蛋白等中的一種或多種的組合。由于一些蛋白(如膠原、明膠、血清白蛋白等)在不同PH值下既可能顯示為帶正電荷，也可能顯示為帶負電荷(在低于等電點的PH值下帶有正電荷，在高于等電點的PH值下帶有負電荷)，所以此類物質(zhì)既可作為陽離子層，也可作為陰離子層。
[0014]所述陽離子脂質(zhì)體可選用本領(lǐng)域各種陽離子脂質(zhì)體，具體可選用的例子包括但不限于:用DOTMA類似體、D0TAP、亞精胺膽固醇制備的陽離子脂質(zhì)體。
[0015]在本發(fā)明所提供的載藥組織粘貼膜中，所述帶陰離子基團的載體材料為本身帶有負電荷或在溶于溶劑發(fā)生電離后帶有負電荷的材料，在本發(fā)明一實施方式中可以是溶于水發(fā)生電離后，帶有負電荷的物質(zhì)。
[0016]所述帶陰離子基團的載體材料優(yōu)選為可體內(nèi)降解的生物相容性材料。
[0017]具體的，所述帶陰離子基團的載體材料可選自帶陰離子基團的有機高分子聚合物、帶陰離子基團的多聚糖、帶陰離子基團的多肽、帶陰離子基團的蛋白、以及陰離子脂質(zhì)體等中的一種或多種的組合。
[0018]在本發(fā)明一實施方式中，具體可選用的帶陰離子基團的有機高分子聚合物包括但不限于:如CNl 524184A中給出的由二羧酸構(gòu)成的陰離子。
[0019]所述帶陰離子基團的多聚糖可以是本身帶陰離子基團的多聚糖，也可以是通過改性獲得的帶有陰離子基團的多聚糖。對多聚糖進行改性以使其帶有陰離子基團的技術(shù)為本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)，具體為如陰離子淀粉等(更具體的例子如羧甲基淀粉等)。在本發(fā)明一實施方式中，具體可選用的帶陰離子基團的多聚糖包括但不限于:羧甲基纖維素、羧甲基殼聚糖、透明質(zhì)酸、海藻酸、羧甲基淀粉、硫酸軟骨素、肝素及他們的衍生物、以及其他帶有陰離子基團的多聚糖等中一種或多種的組合。
[0020]所述帶陰離子基團的多肽可以是本身帶有陰離子基團的多肽，也可以是通過改性獲得的帶有陰離子基團的多肽。在本發(fā)明一實施方式中，具體可選用的帶陰離子基團的多肽包括但不限于:聚谷氨酸或聚天冬氨酸及其衍生物、膠原、明膠等中的一種或多種的組入口 ο
[0021]所述陰離子脂質(zhì)體可選用本領(lǐng)域各種陰離子脂質(zhì)體，具體可選用的例子包括但不限于:AS-ODNs陰離子脂質(zhì)體、D0PG/D0PE陰離子脂質(zhì)體等。
[0022]在本發(fā)明所提供的載藥組織粘貼膜中，所述帶電荷的藥物具體可以是帶正電荷的藥物和/或帶負電荷的藥物，只要其帶有電荷，均可被用于作為藥物層或包含于所述載藥組織粘貼膜中，其包含的量一般為有效治療量。治療有效量對應(yīng)于治療適應(yīng)癥的目的，具體指一用量在經(jīng)過適當?shù)慕o藥期間后，能夠達到治療適應(yīng)癥的效果。治療具體包括藥學(xué)和/或生理效果的預(yù)防性、治愈性或緩和性處置。該效果較佳地是指醫(yī)療上可減少適應(yīng)癥的一種或多種癥狀或者完全消除適應(yīng)癥，或阻滯、延遲適應(yīng)癥的發(fā)生和/或降低適應(yīng)癥發(fā)展或惡化的風(fēng)險。
[0023]具體的，當所述陽離子層和陰離子層中的至少一層為藥物層時，所述藥物層具體可選用帶電荷的藥物，具體來說，當陽離子層為藥物層時，其可包括帶正電荷的藥物，而當陰離子層為藥物層時，其可包括帶負電荷的藥物。
[0024]更具體的，對于帶正電荷的藥物來說，當陽離子層的至少一層為藥物層時，帶正電荷的藥物可作為藥物層，與臨近的陰離子層形成靜電作用；當其作為藥物包含于陽離子層和/或陰離子層中時，其可位于陽離子層中與臨近的陰離子層形成靜電作用，從而穩(wěn)定地被包含于所述載藥組織粘貼膜中，或可位于陰離子層中，帶正電荷的藥物與帶陰離子基團的載體材料作用后，該層整體上仍顯示為負電荷，與帶陽離子基團的載體材料形成靜電作用，從而穩(wěn)定地被包含于所述載藥組織粘貼膜中。而對于帶負電荷的藥物來說，當陰離子層的至少一層為藥物層時，帶負電荷的藥物可作為藥物層，與臨近的陽離子層形成靜電作用；當其作為藥物包含于陽離子層和/或陰離子層中時，其可位于陰離子層中與臨近的陽離子層形成靜電作用，從而穩(wěn)定地被包含于所述載藥組織粘貼膜中，或可位于帶陽離子基團材料沖層中，帶負電荷的藥物與帶陽離子基團的載體材料作用后，該層整體上仍顯示為正電荷，與帶陰離子基團的載體材料形成靜電作用，從而穩(wěn)定地被包含于所述載藥組織粘貼膜中。
[0025]所述帶電荷的藥物，具體為帶電荷的化合物藥物，可以是一些本身即帶有電荷的化合物藥物，也可以是一些化合物藥物經(jīng)與帶電荷(正電荷或負電荷)物質(zhì)或材料結(jié)合或包裹形成的帶有電荷的藥物復(fù)合體。將藥物與帶電荷(正電荷或負電荷)物質(zhì)或材料結(jié)合或包裹形成的帶有電荷的藥物復(fù)合體的方法為本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)，具體的藥物復(fù)合體包括但不限于藥物脂質(zhì)體、藥物磷脂、藥物與陰離子基團材料形成的聚合物、藥物與陽離子基團材料形成的聚合物等。藥物復(fù)合體的形式可以是微球、微囊、微粒、微團、膠束等。
[0026]具體的，所述藥物為化合物藥物。
[0027]所述化合物藥物一般指具有單一結(jié)構(gòu)的化合物，更具體為小分子化合物藥物，其分子量一般不大于20000，更具體一般不大于15000，更具體一般不大于10000，更具體一般不大于8000，更具體一般不大于6000，更具體一般不大于4000，更具體一般不大于3000，更具體一般不大于2000，更具體一般不大于1500，進一步具體一般不大于1000。所述化合物藥物可以是通過化學(xué)合成，也可以是從植物、動物、微生物中分離提取的化合物。具體包括但不限于:如氟尿嘧啶、舒尼替尼、索拉非尼、喜樹堿、紫杉醇、雷帕霉素、依托泊苷，也包括抗生素類藥物(如:粘桿菌素、氧氟沙星、阿莫西林、克拉霉素、頭孢唑林等)、抗病毒藥物(恩替卡韋、阿糖腺苷、二脫氧胸苷、聚肌胞、疊氮胸苷、阿昔洛韋、金剛烷胺、溴澳烯尿苷)等，化合物藥物所形成的帶有電荷的藥物復(fù)合體的具體例子如用海藻酸鈉包裹的索拉非尼微球等。
[0028]在本發(fā)明所提供的載藥組織粘貼膜中，陽離子層和陰離子層交替疊加，并可通過靜電吸引力結(jié)合，形成供載藥的組織粘貼膜，所述陽離子層整體上顯示為正電荷，所述陰離子層整體上顯示為負電荷。具體可以是陽離子層材料和帶陰離子層材料通過靜電吸引力進行交替沉積的方法，如聚電解質(zhì)層層自組裝法等。其對于陽離子層和陰離子層交替疊加的次數(shù)沒有特殊限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實際需要(如，載藥量、降解時間等)調(diào)整組織粘貼膜的總厚度，所述組織粘貼膜的總厚度可以彡ΙΟΟΟμπι，更具體可以彡600μπι，更具體可以<400μηι，更具體可以<200μηι，進一步具體可以為0.05μηι-1000μηι。對于每一層陽離子層和/或陰離子層而言，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)材料的種類和實際需要(如，載藥量、降解時間等)調(diào)整各陽離子層和/或陰離子層的厚度，并可以進一步確定藥物、帶陽離子基團的載體材料和帶陰離子基團的載體材料的使用量，其厚度可以為0.0005μπι--100μπι，更具體可以0.001μπι--50μπι，更具體可以為納米級別，而陽離子層和陰離子層制備時材料的使用量為1:0.005—200 O
[0029]本發(fā)明第二方面提供所述載藥組織粘貼膜的制備方法，包括如下步驟:在基板上交替沉積陽離子層和陰離子層，制備獲得組織粘貼膜。
[0030]本發(fā)明所提供的載藥組織粘貼膜在制備完成后可以被完整地揭離基板，并可獨立于其他附著材料(如基板、背襯等)穩(wěn)定地存在。
[0031]具體的，當所述陽離子層和陰離子層中的至少一層為藥物層，所述制備方法可以是聚電解質(zhì)層層自組裝法，具體可以包括如下步驟:
[0032]在基板上交替沉積陽離子層和陰離子層，制備獲得組織粘貼膜，在沉積作為藥物層的材料層時，使用帶電荷的藥物進行沉積。
[0033]具體的，在基板上交替沉積陽離子層和陰離子層方法具體包括如下步驟:在沉積非藥物層時，基板交替浸泡或噴涂帶陽離子基團的載體材料的溶液和帶陰離子基團的載體材料的溶液，在沉積藥物層時，則浸泡或噴涂帶電荷的藥物的溶液，每次沉積后洗滌(具體可以為用水洗滌)、干燥，完成交替沉積后揭膜，即得所述組織粘貼膜。
[0034]更具體的，所述帶陽離子基團材料的溶液、帶陰離子基團材料的溶液、帶電荷的藥物的溶液均可為水溶液，也可在水溶液中添加適當?shù)柠}離子以改變分子的空間伸展情況，具體可用于改變分子的空間伸展情況的鹽離子的種類是現(xiàn)有技術(shù)中已知的，如在溶液中添加 NaCl、KCl 等。
[0035]本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)材料的種類調(diào)整沉積時所使用材料的溶液的濃度、pH值、鹽離子濃度等，在本發(fā)明一實施方式中，沉積時所使用的溶液中，鹽離子濃度具體可以為<10mol/L，更具體可以為0.05-10mol/L，pH值可以為3-11。
[0036]當所述陽離子層和陰離子層中的至少一層含有帶電荷的藥物時，所述制備方法可以是聚電解質(zhì)層層自組裝法，具體可以包括如下步驟:
[0037]在基板上交替沉積陽離子層和陰離子層，制備獲得組織粘貼膜;并在制備組織粘貼膜的過程中，將藥物植入所述組織粘貼膜中。
[0038]具體的，在基板上交替沉積陽離子層和陰離子層方法具體包括如下步驟:基板交替浸泡或噴涂帶陽離子基團的載體材料的溶液和帶陰離子基團的載體材料的溶液(在沉積包括藥物的材料層時，用于沉積該材料層的溶液中則可以進一步包括藥物)，每次沉積后洗滌(具體可以為用水洗滌)、干燥，完成交替沉積后揭膜，即得所述組織粘貼膜。
[0039]本領(lǐng)域技術(shù)人員可選用合適的方法，將藥物植入所述組織粘貼膜中，具體可以是:在沉積含有帶電荷的藥物的陽離子層時，將藥物與帶陽離子基團的載體材料混合進行沉積(具體可以是浸泡或噴涂帶陽離子基團的載體材料和藥物的混合溶液);在沉積含有帶電荷的藥物的陰離子層時，將藥物與帶陰離子基團的載體材料混合進行沉積(具體可以是浸泡或噴涂帶陰離子基團的載體材料和藥物的混合溶液)；此外，也可以在制備獲得組織粘貼膜以后，再使用高壓瞬時噴涂含有藥物的溶液，并進一步進行洗滌、干燥。
[0040]本發(fā)明第三方面提供一種組織粘貼膜在制備藥物載體材料中用途。
[0041]所述藥物具體為帶電荷的藥物，更具體為如上所述的帶電荷的化合物藥物。
[0042]具體的，所述組織粘貼膜包括交替疊加的陽離子層和陰離子層。
[0043]更具體的，所述陽離子層和陰離子層中的至少一層為藥物層、或所述陽離子層和陰離子層中的至少一層用于包含帶電荷的藥物。
[0044]本發(fā)明所提供的載藥組織粘貼膜具有良好的組織黏附性、良好的生物相容性及可降解吸收性、良好的穩(wěn)定性，其物理、化學(xué)性能可通過調(diào)節(jié)材料的組成而調(diào)節(jié)。此外，所述載藥組織粘貼膜制備方法簡單，載藥量可根據(jù)需要量進行調(diào)節(jié)，載體材料能保護被攜帶的藥物(如使RNA免于被降解)，并能將被攜帶的藥物高效率地轉(zhuǎn)運至靶細胞內(nèi)，具體例如:所述載藥組織粘貼膜可通過外科手術(shù)直接將載藥組織粘貼膜粘貼在病灶部位(即通過外科手術(shù)植入式緩釋給藥治療各種疾病)，給藥直接，靶向性好，藥物局部濃度高治療效果好，副作用小，對生物體的潛在毒性低，具有很高的生物安全性。
【附圖說明】
[0045]圖1顯示為實施例29siRNA的凝膠電泳實驗示意圖。
[0046]圖2顯示為實施例30細胞轉(zhuǎn)染試驗示意圖。
[0047]圖3顯示為實施例30相對熒光強度示意圖。
【具體實施方式】
[0048]以下通過特定的具體實例說明本發(fā)明的實施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點與功效。本發(fā)明還可以通過另外不同的【具體實施方式】加以實施或應(yīng)用，本說明書中的各項細節(jié)也可以基于不同觀點與應(yīng)用，在沒有背離本發(fā)明的精神下進行各種修飾或改變。
[0049]在進一步描述本發(fā)明【具體實施方式】之前，應(yīng)理解，本發(fā)明的保護范圍不局限于下述特定的具體實施方案;還應(yīng)當理解，本發(fā)明實施例中使用的術(shù)語是為了描述特定的具體實施方案，而不是為了限制本發(fā)明的保護范圍；在本發(fā)明說明書和權(quán)利要求書中，除非文中另外明確指出，單數(shù)形式“一個”、“一”和“這個”包括復(fù)數(shù)形式。
[0050]當實施例給出數(shù)值范圍時，應(yīng)理解，除非本發(fā)明另有說明，每個數(shù)值范圍的兩個端點以及兩個端點之間任何一個數(shù)值均可選用。除非另外定義，本發(fā)明中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的意義相同。除實施例中使用的具體方法、設(shè)備、材料外，根據(jù)本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對現(xiàn)有技術(shù)的掌握及本發(fā)明的記載，還可以使用與本發(fā)明實施例中所述的方法、設(shè)備、材料相似或等同的現(xiàn)有技術(shù)的任何方法、設(shè)備和材料來實現(xiàn)本發(fā)明。
[0051]除非另外說明，本發(fā)明中所公開的實驗方法、檢測方法、制備方法均采用本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)的分子生物學(xué)、生物化學(xué)、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和分析、分析化學(xué)、細胞培養(yǎng)、重組DNA技術(shù)及相關(guān)領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)。這些技術(shù)在現(xiàn)有文獻中已有完善說明，具體可參見Sambrook等MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL，Second edit1n,Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edit1n，2001;Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR B1LOGY,John Wiley&Sons,New York,1987and per1dic updates；theseries METHODS IN ENZYM0L0GY,Academic Press,San Diego；Wolffe,CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCT1N,Third edit1n,Academic Press,San Diego，1998;METH0DS INENZYM0L0GY，Vol.304,Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe,eds.),AcademicPress,San Diego，1999;和METHODS IN MOLECULAR B1LOGY,Vol.119,ChromatinProtocols(P.B.Becker,ed.)Humana Press，Totowa，1999等。
[0052]實施例1
[0053]在無菌工作臺中，準備一 12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑硅片膜(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(lmg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2moI/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml羧甲基殼聚糖，0.15moI/LNaCl , pH = 6 );取部分B液加入小干擾核酸藥物(eGFP-siRNA(sense:5’_GGCACAAGCUGGAGUACAAUU-3 ’ ；antisense: 5’ -UUGUACUCCAGCUUGUGCCUU-3’，20ug/mL)及細胞靶向因子(透明質(zhì)酸，分子量小于2萬道爾頓，lOug/mL)與靶向多肽(1X10—4mg/ml)配制成C液，靶向多肽氨基酸順序為:纈氨酸-甘氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸;把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂C液，干燥成膜;接著高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗;接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作;接著再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗;最后高壓瞬時噴涂C液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載小干擾核酸藥物植入式組織粘貼膜。
[0054]實施例2
[0055]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的海藻酸，6至8萬分子量，0.15moI/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入小干擾核酸藥物(同實施例1，20ug/mL)及細胞靶向因子(透明質(zhì)酸，分子量小于2萬道爾頓，10ug/mL)，A液中再加入靶向多肽(I X 10—4mg/ml)，靶向多肽氨基酸順序為:異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-纈氨酸;將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行160次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載小干擾核酸藥物植入式組織粘貼膜。
[0056]實施例3
[0057]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;A液中再加入小干擾核酸陽離子脂質(zhì)體(陽離子脂質(zhì)制備方法參考《陰離子脂質(zhì)體-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染》，藥學(xué)實踐雜志，2011 (29): 4，小干擾核酸同實施例1，小干擾核酸陽離子脂質(zhì)體加入量為0.5mg/ml，小核酸載藥量21.7% )攪拌均勻與靶向多肽(I X 10—4mg/ml)，靶向多肽氨基酸順序為:精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸;將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行180次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載小干擾核酸藥物植入式組織粘貼膜。
[0058]實施例4
[0059]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入小干擾核酸陰離子脂質(zhì)體(制備方法參考《陰離子脂質(zhì)體-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染》，藥學(xué)實踐雜志，2011(29):4，小干擾核酸同實施例1，小干擾核酸陰離子脂質(zhì)體加入量為0.5mg/ml，小核酸載藥量12.4%)攪拌均勻與靶向多肽(1\10—41^/1111)，靶向多肽氨基酸順序為:纈氨酸-甘氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行180次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載小干擾核酸藥物植入式組織粘貼膜。
[0060]實施例5
[0061]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L NaCl，pH=6) ;A液中再加入小干擾核酸陽離子脂質(zhì)體(制備方法如實施例3，濃度為0.5mg/ml)與革El向多肽(I X 10—4mg/ml)攪拌均勾，革El向多肽氨基酸順序為:精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸;把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作200次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載小干擾核酸藥物植入式組織粘貼膜。
[0062]實施例6
[0063]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的海藻酸，6至8萬分子量，0.15moI/L NaCl，pH=6)簡稱B液；B液中再加入索拉非尼透明質(zhì)酸微球(濃度1.5mg/ml，微球直徑ΙΟμπι至16μπι;載藥量7.58%)，A液中再加入靶向多肽(I X 10—4mg/ml)，靶向多肽氨基酸順序為:異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-纈氨酸;將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行30次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載索拉非尼藥物植入式組織粘貼膜。
[0064]實施例7
[0065]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mo I /L NaC I，pH=6); B液中再加入舒尼替尼海藻酸鈉微球(濃度1.0mg/ml，微球直徑1μπι至15μπι;載藥量6.28%)4液中再加入靶向多肽(1乂10—411^/1111)攪拌均勾，靶向多肽氨基酸順序為:精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸;把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作50次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載舒尼替尼藥物植入式組織粘貼膜。
[0066]實施例8
[0067]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入神經(jīng)節(jié)苷脂海藻酸鈉微球(濃度1.0mg/ml，微球直徑0.15μπι至0.26ym;載藥量7.3 % )攪拌均勻與靶向多肽(I X 10—4mg/ml)，靶向多肽氨基酸順序為:纈氨酸-甘氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行30次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載神經(jīng)節(jié)苷脂藥物植入式組織粘貼膜。
[0068]實施例9
[0069]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L NaCl，pH = 6) ;B液中再加入抗菌肽(1.5mg/ml);把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作80次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載抗菌肽藥物植入式組織粘貼膜。
[0070]實施例10
[0071]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L NaCl，pH=6);B液中再加入白介素-2(0.5mg/ml);把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作50次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載白介素-2藥物植入式組織粘貼膜。
[0072]實施例11
[0073]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L NaCl，pH = 6);A液中再加入阿法替尼(Afatinib)陽離子PEG納米微粒(濃度為0.5mg/ml)與革El向多肽(I X 10—4mg/ml)攪拌均勾，革El向多肽氨基酸順序為:精氨酸_甘氨酸_天冬氨酸;把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作200次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載阿法替尼(Afatinib)藥物植入式組織粘貼膜。
[0074]實施例12
[0075]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L NaCl，pH = 6);A液中再加入伊馬替尼(Imatinib)陽離子PEG納米微粒(濃度為0.8mg/ml)與靶向多肽(I X 10—4mg/ml)攪拌均勻，靶向多肽氨基酸順序為:精氨酸_甘氨酸_天冬氨酸;把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作200次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載伊馬替尼(Imatinib)藥物植入式組織粘貼膜。
[0076]實施例13
[0077]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L NaCl，pH = 6);B液中再加入阿西替尼(Axitinib)陰離子PEG納米微粒(濃度為0.8mg/ml)與靶向多肽(I X 10—4mg/ml)攪拌均勻，靶向多肽氨基酸順序為:精氨酸_甘氨酸_天冬氨酸;把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作200次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載阿西替尼(Axitinib)藥物植入式組織粘貼膜。
[0078]實施例14
[0079]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L NaCl，pH=6);A液中再加入色瑞替尼陽離子PEG納米微粒(濃度為0.8mg/ml)與靶向多肽(I X 10—4mg/ml)攪拌均勻，靶向多肽氨基酸順序為:精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸;把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作200次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載色瑞替尼藥物植入式組織粘貼膜。
[0080]實施例15
[0081]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH = 6); B液中再加入氟尿嘧啶(1.0mg/ml);把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作100次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載氟尿嘧啶藥物植入式組織粘貼膜。
[0082]實施例16
[0083]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的海藻酸，6至8萬分子量，0.15moI/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入帕妥珠單抗(Pertuzumab)藥物(20ug/mL)，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行100次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載帕妥珠單抗(Pertuzumab)藥物植入式組織粘貼膜。
[0084]實施例17
[0085]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L NaCl，pH=6) ;13液中再加入帕妥珠單抗(Pertuzumab)藥物(20ug/mL);把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作100次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載帕妥珠單抗(Pertuzumab)藥物植入式組織粘貼膜。
[0086]實施例18
[0087]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L NaCl，pH=6); B液中再加入力達霉素(0.5mg/ml，大分子蛋白類抗腫瘤抗生素)；把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作80次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載力達霉素藥物植入式組織粘貼膜。
[0088]實施例19
[0089]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入血管內(nèi)皮生長因子(VEGF )(0.5mg/ml )，攪拌均勻與靶向多肽(I X I O—4mg/ml)，靶向多肽氨基酸順序為:纈氨酸-甘氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行80次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)藥物組織粘貼月吳。
[0090]實施例20
[0091]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入表皮生長因子(EGF) (0.5mg/ml )，攪拌均勻，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行100次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載表皮生長因子(EGF)藥物組織粘貼膜。
[0092]實施例21
[0093]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，0.15mol/L他(:1，？!1=6);8液中再加入神經(jīng)生長因子(如？)(0.51^/1111);把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作50次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載神經(jīng)生長因子(NGF)藥物植入式組織粘貼膜。
[0094]實施例22
[0095]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，
0.15mol/L NaCl，pH=6) ;B液中再加入成纖維細胞生長因子(FGF)(0.5mg/ml);把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作80次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得成纖維細胞生長因子(FGF)藥物組織粘貼膜。
[0096]實施例23
[0097]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的海藻酸，6至8萬分子量，0.15moI/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入肝素藥物(1.5mg/mL)，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行100次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載肝素藥物組織粘貼膜。
[0098]實施例24
[0099]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，
0.15mol/L NaCl，pH = 6) ;B液中再加入枸杞多糖藥物(1.0mg/mL);把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作100次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載枸杞多糖藥物組織粘貼膜。
[0100]實施例25
[0101]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，
0.15mol/L NaCl，pH = 6) ;B液中再加入香菇多糖(0.5mg/ml);把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作80次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載香菇多糖藥物植入式組織粘貼膜。
[0102]實施例26
[0103]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入茯苓多糖(0.5mg/ml)，攪拌均勻與靶向多肽(I X 10—4mg/ml)，靶向多肽氨基酸順序為:纈氨酸-甘氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行80次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載茯苓多糖藥物組織粘貼膜。
[0104]實施例27
[0105]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入豬苓多糖(0.5mg/ml)，攪拌均勻，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行100次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載豬苓多糖藥物組織粘貼膜。
[0106]實施例28
[0107]將實施例1-27制備獲得的載藥組織粘貼膜給藥系統(tǒng)進行生物相容性評價檢測，具備優(yōu)良的生物相容性，具體如下:
[0108]1.細胞毒性試驗:
[0109]參照/ 技術(shù)標準:GB/T 16886.5-2003
[0110]細胞株:L-929細胞(小鼠成纖維細胞)
[0111]培養(yǎng)液:含1 % (V/V)小牛血清的DMEM
[0112]空白對照:同批細胞培養(yǎng)液
[0113]陰性對照:高密度聚乙烯(見GB/T16886細胞毒性試驗標準)
[0114]陽性對照:5g/L苯酚溶液
[0115]浸提介質(zhì):同批不含小牛血清的DMEM
[0116]浸提時間:24小時
[0117]供試品浸提比例:lg/5ml
[0118]試驗方法:浸提液試驗(MTT法)
[0119]在27°C、5%C02的空白對照、陰性對照、陽性對照和供試品浸提液接觸貼壁生長的細胞，培養(yǎng)72h后，加入MTT液，孵育4h。吸除后，加入DMSO，通過分光光度計在波長630nm下對各組進行吸光度測定，并計算細胞的相對增殖率。
[0120]結(jié)果:供試品的細胞毒性:O級
[0121]結(jié)論:參照GB/T 16886.5-2003，該供試品無細胞毒性。
[0122]2.皮內(nèi)刺激試驗
[0123]參照/ 技術(shù)標準:GB/T 16886.10-2005
[0124]試驗動物:健康新西蘭兔
[0125]浸提介質(zhì):0.9%氯化鈉注射液
[0126]供試品:材料浸提液
[0127]陰性對照:同批浸提介質(zhì)
[0128]接觸途徑:皮內(nèi)注射
[0129]評判指標:觀察24h、48h、72h紅斑、水腫反應(yīng)程度
[0130]結(jié)果:注射后24h、48h、72h注射局部及周圍皮膚組織均無紅斑、水腫反應(yīng)，試驗側(cè)皮膚反應(yīng)不大于對照側(cè)皮膚反應(yīng)。
[0131]結(jié)論:參照GB/T 16886.10-2005，該供試品無皮內(nèi)刺激反應(yīng)。
[0132]3.急性全身毒性試驗
[0133]參照/技術(shù)標準:GB/T16886.11-1997/ASTM F 750
[0134]試驗動物:健康小白鼠
[0135]浸提介質(zhì):0.9%氯化鈉注射液
[0136]供試品:材料浸提液
[0137]陰性對照:同批浸提介質(zhì)
[0138]接觸途徑:尾靜脈注射
[0139]評判指標:觀察4h、24h、48h、72h動物一般狀態(tài)、毒性表現(xiàn)和死亡動物數(shù)。
[0140]結(jié)果:72h觀察期內(nèi)供試品組動物反應(yīng)不大于陰性對照組動物。
[0141]結(jié)論:參照GB/T 16886.11-1997/ASTM F 750，該供試品急性全身毒性試驗結(jié)果符合要求。
[0142]4.溶血試驗
[0143]參照/ 技術(shù)標準:GB/T 16886.4-2003/GB/T 16175-1996
[0144]試驗動物:健康新西蘭兔
[0145]稀釋抗凝兔血制備:新鮮抗凝兔血+0.9 %氯化鈉注射液
[0146]陰性對照:0.9%氯化鈉注射液
[0147]陽性對照:蒸餾水
[0148]接觸途徑:尾靜脈注射
[0149]試驗方法:將供試品按一定比例浸入0.9%氯化鈉注射液中，37°C水浴保溫30min后，加入0.2ml稀釋新鮮抗凝兔血，37°C水浴保溫GOminJSOOrpm離心5min后取上清液，用紫外分光光度計在545nm處測定其吸光度，計算溶血率。
[0150]結(jié)果:該供試品的溶血率為0.2%。
[0151]結(jié)論:參照GB/T 16886.4-2003，該供試品的溶血試驗結(jié)果符合醫(yī)用材料的要求。
[0152]實施例29
[0153]穩(wěn)定性和完整性試驗:
[0154]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;取部分B液加入小干擾核酸藥物(如實施例1，10ug/mL)配制成C液，把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥成膜;接著高壓瞬時噴涂液B，用注射用水沖洗;接著高壓瞬時噴涂液A，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作總共4次;接著再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗;再高壓瞬時噴涂C液，用注射用水沖洗，干燥，如此交替噴涂A液、C液、沖洗，重復(fù)操作總共7次，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載小干擾核酸藥物植入式組織粘貼膜。
[0155]將上述制備獲得的多層薄膜置于IMNaCl溶液中，孵育一定時間，將所得的緩釋液先經(jīng)過截留分子量為30KDa的超濾離心管過濾處理，除去大分子物質(zhì)。然后經(jīng)過截留分子量為3KDa的超濾離心管再過濾處理，去除緩釋液中的鹽離子，即脫鹽處理。最后把處理過的緩釋液，作為樣品液在電泳槽跑膠處理。本文采用聚丙烯酰氨凝膠電泳法(PAGE)，來驗證多層薄膜釋放siRNA的基因完整性和相關(guān)穩(wěn)定性實驗。
[0156]圖1的凝膠電泳實驗驗證緩釋siRNA序列的穩(wěn)定性和完整性。載SiRNA的組織粘貼膜在IM NaCl溶液中孵育，膜逐漸破裂溶解，6天后，已難以觀察到成型物。從圖1凝膠電泳實驗中，我們可看到，6天溶解液脫鹽后未能觀察到解離的siRNA，而10天溶解液脫鹽后能清晰地看到解離的siRNA，由此我們推測，膜在逐漸破裂溶解過程中，溶出物為siRNA與陰、陽離子基團結(jié)合體，隨著陰、陽離子基團的降解，siRNA逐漸解離出來，并保持了siRNA序列的穩(wěn)定性和完整性。
[0157]實施例30
[0158]細胞轉(zhuǎn)染實驗:
[0159]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;取部分B液加入小干擾核酸藥物(如實施例1，10ug/mL)配制成C液，把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥成膜;接著高壓瞬時噴涂液B，用注射用水沖洗;接著高壓瞬時噴涂液A，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作總共4次;接著再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗;再高壓瞬時噴涂C液，用注射用水沖洗，干燥，如此交替噴涂A液、C液、沖洗，重復(fù)操作總共2次，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載小干擾核酸藥物植入式組織粘貼膜。
[0160]將上述制備獲得的組織粘貼膜作為實驗組，即實驗組為載有eGFP-siRNA交替聚電解質(zhì)反應(yīng)2次的膜，陰性對照組為載有普通siRNA交替聚電解質(zhì)反應(yīng)2次的膜(制備方法同實驗組，僅eGFP-siRNA替換為普通siRNA)。將實驗組和陰性對照組分別放置6孔板中，分別將eGFP-HEK 293T細胞接種于其上的6孔板中(另外將未放置粘貼膜的孔直接接種細胞作為空白對照組)，分別于I天、2天和3天觀察其熒光強度變化情況，結(jié)果顯示圖2。圖3中，列出了實驗組、陰性對照組和空白組的相對熒光強度，可以看到，空白組和陰性對照組在3天內(nèi)熒光強度幾乎沒有變化，而實驗組在3天內(nèi)隨著時間增加熒光強度明顯減少。由次驗證載有eGFPsiRNA的組織粘貼膜能使eGFP-HEK 293T細胞的熒光強度減弱，說明eGFP siRNA轉(zhuǎn)染進細胞誘導(dǎo)了靶基因沉默。
[0161]實施例31
[0162]穩(wěn)定性和完整性試驗:
[0163]在無菌工作臺中，準備一12厘米直徑培養(yǎng)皿，內(nèi)置一張同樣直徑高分子材料膜(經(jīng)洗滌及滅菌除熱原處理)，注射用水沖洗干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A液(lmg/ml膠原，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=3.5)和帶陰離子基團材料的B液(lmg/ml透明質(zhì)酸，
0.15mol/L NaCl，pH = 6);A液中再加入阿法替尼(Afatinib)陽離子PEG納米微粒(濃度為
0.5mg/ml)與革El向多肽(I X 10—4mg/ml)攪拌均勾，革El向多肽氨基酸順序為:精氨酸_甘氨酸_天冬氨酸;把上述溶液分別灌裝到高壓瞬時噴涂設(shè)備中，首先往培養(yǎng)皿內(nèi)高壓瞬時噴涂A液，干燥，接著高壓瞬時噴涂B液，用注射用水沖洗，如此交替噴涂A液、B液、沖洗，重復(fù)操作200次;最后再高壓瞬時噴涂A液，用注射用水沖洗，干燥，揭膜，貼面用注射用水沖洗，干燥處理得載阿法替尼(Afatinib)藥物植入式組織粘貼膜。
[0164]將上述制備獲得的多層薄膜置于IMNaCl溶液中，孵育一定時間，將所得的緩釋液純化，可以分離獲得阿法替尼，分離獲得的阿法替尼的量相較于制備時加入的阿法替尼的量沒有明顯下降?？梢?，藥物的穩(wěn)定性和完整性得到了保持。
[0165]實施例32
[0166]細胞轉(zhuǎn)染實驗:
[0167]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入血管內(nèi)皮生長因子(VEGF )(0.5mg/ml )，攪拌均勻與靶向多肽(I X I O—4mg/ml)，靶向多肽氨基酸順序為:纈氨酸-甘氨酸-纈氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行80次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)藥物組織粘貼月吳。
[0168]將上述制備獲得的多層薄膜置于IMNaCl溶液中，孵育一定時間，將所得的緩釋液純化，可以分離獲得血管內(nèi)皮生長因子，通過VEGF檢測試劑盒檢測，分離獲得的VEGF的量相較于制備時加入的VEGF的量沒有明顯下降。可見，藥物的穩(wěn)定性和完整性得到了保持。
[0169]實施例33
[0170]在無菌工作臺中，準備一高分子材料平板(經(jīng)洗滌、滅菌及除熱原處理)，干燥;分別配制帶陽離子基團材料的A溶液(2mg/ml殼聚糖，0.lmol/L乙酸，0.2mol/L NaCl，pH=4)和帶陰離子基團材料的B液(2mg/ml的透明質(zhì)酸，0.15mo 1/L NaCl，pH=6)簡稱B液;B液中再加入豬苓多糖(0.5mg/ml)，攪拌均勻，將平板先浸入A溶液中20分鐘，取出入清洗液洗滌干燥;再將平板浸入B溶液中30分鐘，取出入清洗液洗滌干燥，如此交替進行100次，最后用注射用水沖洗，干燥，揭膜，得載豬苓多糖藥物組織粘貼膜。
[0171]將上述制備獲得的多層薄膜置于IMNaCl溶液中，孵育一定時間，獲得緩釋液。測量緩釋液中的多糖成分，可以發(fā)現(xiàn)分離獲得的緩釋液中多糖的量相較于制備時加入的多糖的量沒有明顯下降。可見，藥物的穩(wěn)定性和完整性得到了保持。
[0172]綜上所述，本發(fā)明效克服了現(xiàn)有技術(shù)中的種種缺點而具高度產(chǎn)業(yè)利用價值。
[0173]上述實施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾或改變。因此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【主權(quán)項】
1.一種載藥組織粘貼膜，所述載藥組織粘貼膜包括交替疊加的陽離子層和陰離子層，所述陽離子層和陰離子層中的至少一層為藥物層、或所述陽離子層和陰離子層中的至少一層含有帶電荷的藥物，所述藥物為化合物藥物。2.如權(quán)利要求1所述的一種載藥組織粘貼膜，其特征在于，當所述陽離子層和陰離子層中的至少一層為藥物層時，作為藥物層的陽離子層和/或陰離子層為帶電荷的藥物，不作為藥物層的陽離子層含有帶陽離子基團的載體材料，不作為藥物層的陰離子層含有帶陰離子基團的載體材料；當所述陽離子層和陰離子層中的至少一層含有帶電荷的藥物時，陽離子層含有帶陽離子基團的載體材料，陰離子層含有帶陰離子基團的載體材料。3.如權(quán)利要求2所述的一種載藥組織粘貼膜，其特征在于，所述帶陽離子基團的載體材料選自帶陽離子基團的有機高分子聚合物、帶陽離子基團的多聚糖、帶陽離子基團的多肽、帶陽離子基團的蛋白、以及陽離子脂質(zhì)體中的一種或多種的組合。4.如權(quán)利要求2所述的一種載藥組織粘貼膜，其特征在于，所述帶陰離子基團的載體材料選自帶陰離子基團的有機高分子聚合物、帶陰離子基團的多聚糖、帶陰離子基團的多肽、帶陰離子基團的蛋白、以及陰離子脂質(zhì)體中的一種或多種的組合。5.如權(quán)利要求2所述的一種載藥組織粘貼膜，其特征在于，所述帶陽離子基團的載體材料和帶陰離子基團的載體材料選用生物相容性材料。6.如權(quán)利要求1所述的一種載藥組織粘貼膜，其特征在于，所述陽離子層整體上顯示為正電荷，所述陰離子層整體上顯示為負電荷。7.如權(quán)利要求1所述的一種載藥組織粘貼膜，其特征在于，所述帶電荷的藥物為藥物復(fù)合體。8.如權(quán)利要求1-7任一權(quán)利要求所述的載藥組織粘貼膜的制備方法，包括如下步驟:在基板上交替沉積陽離子層和陰離子層，制備獲得組織粘貼膜。9.一種組織粘貼膜在制備藥物載體材料中用途，所述組織粘貼膜包括交替疊加的陽離子層和陰離子層。10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述陽離子層和陰離子層中的至少一層為藥物層或所述陽離子層和陰離子層中的至少一層用于包含帶電荷的藥物。
【文檔編號】A61K38/00GK106038516SQ201610377528
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月31日
【發(fā)明人】劉光萬, 吳昌琳
【申請人】蘇州博創(chuàng)康源生物技術(shù)有限公司