本發(fā)明涉及西藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是一種益多酯在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：益多酯(EtofyllineClofibrateTablets)，本品為白色片，主要成分為益多酯，屬氯貝丁酸衍生物類血脂調(diào)節(jié)藥，具有降低血膽固醇及甘油三酯、增加血高密度脂蛋白、抗血小板聚集和抗血栓、降低血尿酸的作用，目前臨床上常用于治療高膽固醇血癥。當(dāng)用于治療高膽固醇血癥時(shí)，其服用方法為：口服，一次0.25g，一日0.5-0.75g；肝、腎功能不全患者慎用，孕婦禁用。本品口服吸收良好，服后1小時(shí)左右起效，2.5小時(shí)左右血藥濃度達(dá)峰值。降血脂藥。生產(chǎn)企業(yè)有山東健康藥業(yè)有限公司、吉林全威藥業(yè)股份有限公司、北京海德潤制藥有限公司、安徽圣鷹藥業(yè)有限公司、合肥第六制藥廠、遼寧倍奇藥業(yè)有限公司、沈陽市新城子制藥廠、河北遠(yuǎn)景藥業(yè)有限公司、石家莊一藥集團(tuán)、唐山市利康制藥廠等。目前，益多酯僅被用于臨床上治療高膽固醇血癥，關(guān)于益多酯除以上作用之外的用處還有待于進(jìn)一步研究。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種益多酯的新用途，具體是在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：益多酯在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的益多酯的成人給藥劑量為0.8-1.1mg/kg/日。作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的益多酯的成人給藥劑量為1.0-1.1mg/kg/日。作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的益多酯的成人給藥劑量為1.0mg/kg/日。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：經(jīng)過COX激酶體外抑制實(shí)驗(yàn)、炎癥介質(zhì)NO濃度抑制實(shí)驗(yàn)、小鼠耳腫實(shí)驗(yàn)、小鼠足腫實(shí)驗(yàn)、胃腸道損傷檢測實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，益多酯對(duì)炎癥具有很好的抑制作用，與傳統(tǒng)抗炎藥物相比，益多酯還同時(shí)具有對(duì)胃腸道的損傷極低的特點(diǎn)，因此其在制備抗炎藥物方面，具有很好的應(yīng)用前景。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。實(shí)施例1本發(fā)明實(shí)施例中，益多酯在制備抗炎藥物中的應(yīng)用，該益多酯的成人給藥劑量為0.8-1.1mg/kg，優(yōu)選給藥劑量為1.0-1.1mg/kg，最佳給藥劑量為1.0mg/kg。具體地，采用藥劑學(xué)上可接受的輔料和工藝，將益多酯制成抗炎藥物，即可用于抗炎作用。下面通過細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物說明益多酯對(duì)炎癥的抑制作用。一、細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的來源與培養(yǎng)1、細(xì)胞株原代腹腔巨噬細(xì)胞由小鼠腹腔新鮮提取，培養(yǎng)條件：用添加10％小牛血清的MEM培養(yǎng)液在37℃、5％CO2條件下常規(guī)培養(yǎng)。分離方法：取健康的雄性C57BL/6小鼠(體重28-30g)，按照2ml/只給小鼠腹腔注射BrewerThioglycollate肉湯，四天后，斷頸處死小鼠，在超凈臺(tái)內(nèi)采集巨噬細(xì)胞，用6ml細(xì)胞培養(yǎng)基沖洗小鼠腹腔得到細(xì)胞懸液，以5000rpm的速度將其離心5min，重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并按照不同實(shí)驗(yàn)進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物C57BL/6系雄性小鼠，體重28-30g，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(GLP)提供，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的執(zhí)行都參照歐洲實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的指導(dǎo)原則(86/609/EEC)，并且獲得安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的許可。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境為清潔級(jí)，環(huán)境溫度22±2℃，濕度50-55％，8：00-18：00光照。小鼠每籠7-8只飼養(yǎng)，可自由攝食飲水。雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重280-320g，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。飼養(yǎng)環(huán)境與小鼠相同，大鼠每籠4只飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前禁食但不禁水12-16h。二、具體實(shí)驗(yàn)操作1、COX激酶體外抑制實(shí)驗(yàn)采用COX檢測試劑盒(CaymanChemical，AnnArbor，MI)檢測益多酯的COX抑制活性，操作按照其說明書進(jìn)行。將益多酯水解后，加入反應(yīng)緩沖液(分別加有熒光底物的COX-1和COX-2酶)。加入花生四烯酸溶液，室溫反應(yīng)2min，采用大酶標(biāo)儀器VarioskanFlash4.00.53platefluorimeter(ThermoScitific，Waltham，MA，USA)檢測590nm波長(吸收波長：535nm)的吸光度，并根據(jù)公式：抑制率(％)＝(起始濃度孔OD值-樣品濃度孔OD值)/起始濃度孔OD值×100，計(jì)算抑制率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1.5μg/ml濃度的益多酯可以抑制環(huán)氧合酶COX的兩種亞型(對(duì)COX-1的抑制率為29.58％；對(duì)COX-2的抑制率為58.79％)，說明益多酯具有很好的抗炎活性，為后續(xù)抗炎藥物篩選奠定良好基礎(chǔ)。2、炎癥介質(zhì)NO濃度抑制實(shí)驗(yàn)原代巨噬細(xì)胞每孔加入的益多酯終濃度分別為1.5μg/ml、0.5μg/ml、0.1μg/ml、0.02μg/ml、0.005μg/ml、0.001μg/ml，2h后加入1μg/mlLPS。用含有溶媒的培養(yǎng)液作為空白對(duì)照，每個(gè)濃度組6復(fù)孔，置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，分別在加藥后24、48、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別進(jìn)行后續(xù)的檢測。吸取50μL細(xì)胞上清液至新的96孔板內(nèi)，然后依次加入50μLGriessRegent和50μLGriessRegent。避光靜置10min后在酶標(biāo)儀540nm測各孔吸光值，結(jié)果見表1。表1對(duì)NO濃度的抑制信息由表1可知：益多酯對(duì)炎癥狀態(tài)下原代巨噬細(xì)胞內(nèi)的炎癥介質(zhì)NO具有明顯的抑制作用，分別在24h、48h、72h濃度依賴性抑制NO的產(chǎn)生，進(jìn)而發(fā)揮抗炎作用。3、小鼠耳腫實(shí)驗(yàn)取40只健康雄性小鼠隨機(jī)分為5組，每組8只。分別腹腔注射Vehicle、益多酯以及陽性藥物吲哚美辛，20min后將20μL二甲苯均勻涂抹在小鼠右耳廓正反兩面，左耳不做處理，再過30min后脫頸椎處死小鼠，沿耳廓基線剪下完整左右耳朵，分別用直徑為7mm的打孔器在左右耳正中同一位置進(jìn)行打孔，取下標(biāo)本立即分別稱重，按照公式：腫脹率(％)＝(右耳片重量-左耳片重量)/左耳片重量×100，計(jì)算腫脹率，結(jié)果見表2。表2小鼠的右耳腫脹率信息由表2可知：益多酯在炎癥動(dòng)物模型(小鼠耳腫模型)上可以明顯抑制炎癥引起的耳腫反應(yīng)，益多酯在0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg劑量時(shí)小鼠的右耳腫脹率分別為44.17％、36.06％、27.22％。這表明益多酯均有很強(qiáng)的外周抗炎活性。4、小鼠足腫實(shí)驗(yàn)采用小鼠足腫脹炎癥模型，隨機(jī)分為5組，10只/組。(1)陰性對(duì)照組：腹腔注射生理鹽水，隨后在小鼠右足趾皮下注射25μL致炎因子角叉菜膠，左足趾皮下注射25μL生理鹽水作為對(duì)照。(2)抗炎藥物組：腹腔注射0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg)益多酯，隨后在小鼠右足趾皮下注射25μL致炎因子角叉菜膠，左足趾皮下注射25μL生理鹽水作為實(shí)驗(yàn)。(3)陽性對(duì)照藥物組：腹腔注射(5mg/kg)地塞米松，隨后在小鼠右足趾皮下注射25μL致炎因子角叉菜膠，左足趾皮下注射25μL生理鹽水作為對(duì)照。以上陰性對(duì)照、陽性藥物對(duì)照和抗炎藥物的腹腔注射體積都為10ml/kg。從致炎因子角叉菜膠注射足趾皮下開始計(jì)時(shí)，分別在1h、2h、3h、4h、5h、6h、24h、48h用游標(biāo)卡尺測量小鼠左右足底厚度，計(jì)算右左足底厚度差值，結(jié)果見如表3所示。表3小鼠的右左足底厚度差值信息由表2可知：益多酯在注射4h開始明顯降低小鼠足腫，直至24h，與現(xiàn)在臨床使用的最強(qiáng)陽性抗炎藥物地塞米松活性比較相近。說明益多酯對(duì)小鼠足腫模型具有很強(qiáng)的抗炎抑制作用。5、胃腸道損傷檢測實(shí)驗(yàn)取9只健康雄性大鼠隨機(jī)分為3組每組3只，分別口服灌胃給予溶劑對(duì)照(陰性藥物對(duì)照)、益多酯、吲哚美辛(陽性藥物對(duì)照)，6h后脫頸椎處死，解剖大鼠將胃取出，沿胃大彎剪開，將胃內(nèi)壁展開置于冰上，用冰冷的0.9％生理鹽水輕輕沖洗，測量每只大鼠胃壁上的潰瘍長度(mm)和出血長度(mm)，相加即為每只大鼠的胃損傷總分，結(jié)果如表4所示。表4大鼠的胃損傷結(jié)果項(xiàng)目溶劑對(duì)照益多酯(2.0mg/kg)吲哚美辛(30mg/kg)潰瘍(mm)0.25±0.180.26±0.2119.43±2.54出血(mm)0.00±0.000.96±0.8812.05±2.38由表4可知：陽性對(duì)照藥吲哚美辛可引起大鼠明顯胃粘膜出血及潰瘍，而益多酯對(duì)大鼠胃粘膜損傷極低。這說明與傳統(tǒng)藥物相比，益多酯具有極低的胃腸損傷作用。上述實(shí)驗(yàn)表明，益多酯對(duì)炎癥具有很好的抑制作用，與傳統(tǒng)抗炎藥物相比，益多酯還同時(shí)具有對(duì)胃腸道的損傷極低的特點(diǎn)，因此其在制備抗炎藥物方面，具有很好的應(yīng)用前景。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。當(dāng)前第1頁1 2 3