1,2,4-三取代哌嗪化合物在制備抗流感病毒藥物中的用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及1，2，4?三取代哌嗪化合物在制備抗流感病毒藥物中的用途。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，1，2，4?三取代哌嗪化合物對(duì)甲型流感病毒具有較強(qiáng)的抑制作用，其半數(shù)抑制濃度IC50為29.97μM，且1，2，4?三取代哌嗪化合物對(duì)細(xì)胞毒性低，藥物使用安全性高，其細(xì)胞半數(shù)毒性濃度CC50≥400μM。因此，1，2，4?三取代哌嗪化合物在治療甲型流感病毒感染疾病中具有廣泛的應(yīng)用背景，可應(yīng)用于制備抗流感病毒藥物。
【專利說明】
1，2,4-Ξ取代脈瞎化合物在制備抗流感病毒藥物中的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物在制備抗流感病毒 藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 流行性感冒簡(jiǎn)稱流感，是由流感病毒引起的急性發(fā)熱性呼吸道傳染病，主要傳播 途徑是帶有流感病毒的飛沫，經(jīng)呼吸道進(jìn)入體內(nèi)，少數(shù)也可經(jīng)共用手帕、毛巾等間接接觸而 感染，臨床典型特征為突起畏寒、高熱、頭痛、全身酸痛、疲弱乏力等全身中毒癥狀，而呼吸 道癥狀較輕。流感具有流行面廣、傳染性強(qiáng)、發(fā)病率高等特點(diǎn)，在嬰幼兒、老年人、有屯、肺疾 病及其他慢性疾病患者或免疫功能低下者可并發(fā)肺炎，預(yù)后較差。
[0003] 流感病毒屬正黏病毒科，是一種有包膜的RNA病毒，其包膜成分中含有血凝素化Α) 及神經(jīng)氨酸酶(ΝΑ)兩種類型的糖蛋白突起，運(yùn)兩種糖蛋白突起均具有抗原性，并有亞型特 異性。流感病毒變異的來源主要是由于ΗΑ和ΝΑ抗原結(jié)構(gòu)的改變。全球每年有25萬-50萬人死 于流感或流感病毒感染引發(fā)的并發(fā)癥。近年來，隨著全球物種活動(dòng)范圍的加大，流感病毒的 變異性增強(qiáng)，人、禽、豬和(或)其他種屬間流感病毒相互作用產(chǎn)生具有高致病性的新變種病 毒，人感染高致病性禽流感病例的發(fā)生、新發(fā)病毒的人群間高傳染性及感染者的高死亡率， 曾一度引起了全球范圍對(duì)流感的恐慌，嚴(yán)重影響了人類的日常生活和經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定發(fā)展。
[0004] 應(yīng)對(duì)流感病毒的主要方式是疫苗和藥物治療。疫苗預(yù)防的有效性是建立在疫苗的 病毒株與正在流行的流感病毒株相似的基礎(chǔ)上的，只對(duì)已知的流感病毒亞型有預(yù)防作用， 而對(duì)于由抗原性漂移或抗原性轉(zhuǎn)換所產(chǎn)生的新型流感病毒保護(hù)率不高或無效，目前通過現(xiàn) 有手段無法預(yù)測(cè)將要流行的流感病毒株，因此疫苗對(duì)流感病毒的作用有限。因此，抗流感藥 物始終是有效對(duì)抗流感、保護(hù)人類健康的第一道防線。當(dāng)前許多國(guó)家應(yīng)用的抗流感病毒藥 物為鹽酸金剛燒胺，包括金剛燒胺和金剛乙胺，可預(yù)防甲型流感病毒，但對(duì)乙型流感病毒則 無效。在甲型流感流行期間，預(yù)防性給予健康成人或兒童金剛燒胺或金剛乙胺，對(duì)于預(yù)防甲 型流感病毒具有70 % -90 %的有效率，已感染者起病后4她內(nèi)給予運(yùn)兩種藥物，也能發(fā)揮治 療作用，可減輕病情和縮短病程。神經(jīng)氨酸酶抑制劑是可用于預(yù)防流感的另一類藥物，可W 在流感病毒流行期間試用于健康成人。但是目前運(yùn)兩類抗流感病毒藥物均面臨的一個(gè)共性 問題就是經(jīng)常出現(xiàn)不同程度的耐藥性。因此，尋找具有預(yù)防和治療作用的新型抗流感病毒 藥物就顯得尤其重要和緊迫。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物在制備抗流感病毒藥物中的用途。
[0006] 本發(fā)明所述1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物由法國(guó)己黎第屯大學(xué)合成和提供，其分子式 為C3日也2斯〇1日，分子量為627.68，具有如式（I)所示的結(jié)構(gòu)：
[0007]
[000引本發(fā)明提供的1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物可單獨(dú)應(yīng)用于制備抗流感病毒藥物，還可 W與其他具有防治流行性感冒功效的成分復(fù)配形成組合物應(yīng)用于制備抗流感病毒藥物。
[0009] 優(yōu)選地，所述流感病毒為甲型流感病毒。
[0010] 優(yōu)選地，所述抗流感病毒藥物可制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如制成 片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、口服液、針劑、粉針劑、注射液或噴霧劑等。
[0011] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明首次公開1，2,4-Ξ取代贓嗦化合 物在制備抗流感病毒藥物中的用途。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物對(duì)甲型流感 病毒具有較強(qiáng)的抑制作用，其半數(shù)抑制濃度IC50為29.97μΜ，且1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物對(duì) 細(xì)胞毒性低，藥物使用安全性高，其細(xì)胞半數(shù)毒性濃度CC5〇>400μΜ，因此，1，2，4-Ξ取代贓 嗦化合物在治療甲型流感病毒感染疾病中具有廣泛的的應(yīng)用背景，可應(yīng)用于制備抗流感病 毒藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0012] W下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0013] 本發(fā)明實(shí)施例中，所述MDCK細(xì)胞(犬腎細(xì)胞)為暨南大學(xué)暨南生物醫(yī)藥基地自存的 細(xì)胞;所述流感病毒為Inf luenza A/PR/8化1Ν1)，為暨南大學(xué)暨南生物醫(yī)藥基地自存的甲 型流感病毒，將其接種于10日齡雞胚尿囊腔內(nèi)，接種量為2(K)yL，35°C培養(yǎng)2天后回收尿囊 液，于-80°C保存?zhèn)溆?，病毒半?shù)組織培養(yǎng)感染劑量(TCIDso) = 10-5;所述1，2，4-立取代贓嗦 化合物由法國(guó)己黎第屯大學(xué)合成和提供，1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物粉末經(jīng)二甲基亞諷 (DMS0)(購(gòu)自Sigma公司）充分溶解后-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0014] 實(shí)施例1 1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物細(xì)胞毒性測(cè)定
[001引將細(xì)胞密度為1.2Xl05cells/mL的MDCK細(xì)胞接種于96孔板中，每孔100化，在含體 積百分比濃度為10% (v/v)的胎牛血清（購(gòu)自廣州百旺生物科技有限公司）的DMEM培養(yǎng)基 (品牌為gibco,購(gòu)自英濰捷基貿(mào)易有限公司）中培養(yǎng)24h后，吸取除去培養(yǎng)基，將1，2,4-Ξ取 代贓嗦化合物用不含血清的DMEM培養(yǎng)基W2倍比做系列稀釋(400μΜ-6.25μΜ)后按稀釋順序 接種于96孔板中的MDCK細(xì)胞上，每孔10化L，每個(gè)濃度平行設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)細(xì)胞對(duì) 照組。在37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4她后用ΜΤΤ法進(jìn)行檢測(cè)，在570皿波長(zhǎng)下測(cè)吸光度0D值， 將藥物實(shí)驗(yàn)組與細(xì)胞對(duì)照組的0D值相比計(jì)算細(xì)胞存活率，根據(jù)Reed-Muench法計(jì)算細(xì)胞半 數(shù)毒性濃度CC50。重復(fù)4次實(shí)驗(yàn)，取平均值。
[0016] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:細(xì)胞對(duì)照組細(xì)胞在顯微鏡下觀察，細(xì)胞貼壁緊密、形態(tài)良好。根據(jù)MTT結(jié) 果，采用Reed-Muench法計(jì)算1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物的細(xì)胞半數(shù)毒性濃度(Χ5〇>400ιχΜ。
[0017]實(shí)施例2 1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物抗流感病毒活性的CPE觀察
[001引將細(xì)胞密度為1.2X105cells/mL的MDCK細(xì)胞接種于96孔板中，每孔lOOyL，在含體 積百分比濃度為10 % (v/v)的胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)2地后，吸取除去培養(yǎng)基，將1， 2.4- Ξ取代贓嗦化合物用不含血清的DMEM培養(yǎng)基W2倍比做系列稀釋(200μΜ-6.25μΜ)后按 稀釋順序接種于96孔板中的MDCK細(xì)胞上，每孔10化L，每個(gè)濃度平行設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)復(fù)孔，加藥 完畢后每孔加100TCID50的流感病毒1(Κ)化作為1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物藥物實(shí)驗(yàn)組，同時(shí) 設(shè)細(xì)胞對(duì)照組（即正常對(duì)照組）和病毒對(duì)照組。將陽性對(duì)照藥利己韋林（粉末批號(hào) is2013081301，購(gòu)自廣州愛純醫(yī)藥科技有限公司，經(jīng)DMS0充分溶解后使用）用不含血清的 DMEM培養(yǎng)基W2倍比做系列稀釋(200μΜ-6.25μΜ)后按稀釋順序接種于96孔板中的MDCK細(xì)胞 上，每孔l(K)yL，每個(gè)濃度平行設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)復(fù)孔，加藥完畢后每孔加100TCI化0的流感病毒 100化作為陽性對(duì)照藥利己韋林藥物實(shí)驗(yàn)組。在37°C，5 %C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4她后，觀察1，2， 4-Ξ取代贓嗦化合物和利己韋林的抗病毒活性，并與正常對(duì)照組和病毒對(duì)照組比較，觀察 并記錄細(xì)胞病變(CPE)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
[0019] 表1 1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物和利己韋林的CPE觀察
[0020]
[0021] 注:與正常對(duì)照組相比，"-":細(xì)胞無病變；"+":細(xì)胞病變率〇-24%;"++":細(xì)胞病變 率25-49% :細(xì)胞病變率50-74% ;''++++":細(xì)胞病變率75-100%。
[0022] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：顯微鏡下觀察，正常對(duì)照組細(xì)胞貼壁致密、形態(tài)良好，流感病毒在MDCK 中的CPEW折光性增強(qiáng)、壞死、破碎為主要特征。藥物實(shí)驗(yàn)組各組細(xì)胞，按照藥物稀釋梯度， 梯度規(guī)律出現(xiàn)CPE，且由表1結(jié)果可知C陽隨1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物濃度減少而逐漸加重。 同時(shí)，通過對(duì)比1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物與利己韋林的抗病毒活性，可W發(fā)現(xiàn)1，2,4-Ξ取 代贓嗦化合物與利己韋林相比，1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物抗病毒活性更好，對(duì)宿主細(xì)胞的 活性更低。
[0023] 實(shí)施例3 1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物抗流感病毒活性測(cè)定
[0024] 將細(xì)胞密度為1.2X105cells/mL的MDCK細(xì)胞接種于96孔板中，每孔10化L，在含體 積百分比濃度為10% (v/v)的胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)2地后，吸取除去培養(yǎng)基，將1， 2.4- Ξ取代贓嗦化合物用不含血清的DMEM培養(yǎng)基W2倍比做系列稀釋(200μΜ-6.25μΜ)后按 稀釋順序接種于96孔板中的MDCK細(xì)胞上，每孔50yL，每個(gè)濃度平行設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)復(fù)孔，加藥 完畢后每孔加100TCID50的流感病毒50化作為1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物藥物試驗(yàn)組，同時(shí) 設(shè)細(xì)胞對(duì)照組、病毒對(duì)照組和陽性對(duì)照組，陽性對(duì)照藥為利己韋林。在37°C，5%C〇2培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)72h后用MTT法進(jìn)行檢測(cè)，在570nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度OD值，計(jì)算藥物抗病毒有效率 化R)，計(jì)算公式為?。?=(藥物處理組平均OD值-病毒對(duì)照組平均OD值)/(細(xì)胞對(duì)照組平均 OD值-病毒對(duì)照組平均OD值）X 100%，根據(jù)Reed-Muench法計(jì)算藥物對(duì)流感病毒致C陽產(chǎn)生 50 %抑制的濃度，即半數(shù)抑制濃度IC5Q，重復(fù)4次實(shí)驗(yàn)，取平均值，并按照公式TI = CCsq/ICso 計(jì)算藥物治療指數(shù)ΤΙ。
[002引實(shí)驗(yàn)結(jié)果:根據(jù)ΜΤΤ結(jié)果，采用Reed-Muench法計(jì)算1，2，4-立取代贓嗦化合物的半 數(shù)抑制濃度IC50為29.97μΜ，治療指數(shù)TI > 13.34。
[00%]結(jié)論：1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物對(duì)甲型流感病毒具有較強(qiáng)的抑制作用，且藥物使 用安全性高，因此1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物在治療甲型流感病毒感染疾病中具有廣泛的的 應(yīng)用背景，可應(yīng)用于制備抗流感病毒藥物。
[0027] W上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定 本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于運(yùn)些說明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在 不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可W做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的 保護(hù)犯i圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.1，2,4-三取代哌嗪化合物在制備抗流感病毒藥物中的用途，其特征在于，所述1，2， 4_三取代哌嗪化合物具有如式(I)所示的結(jié)構(gòu)：2. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述流感病毒為甲型流感病毒。3. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗流感病毒藥物制成片劑、膠囊劑、顆粒 劑、散劑或口服液。4. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗流感病毒藥物制成針劑、粉針劑、注射 液或噴霧劑。
【文檔編號(hào)】A61K31/495GK105920004SQ201610351594
【公開日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年5月24日
【發(fā)明人】劉忠, 張卓, 王飛, 王一飛, 董長(zhǎng)治
【申請(qǐng)人】暨南大學(xué)