一種新型三唑并嘧啶衍生物及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種式Ⅱ所示的新型三唑并嘧啶衍生物及其晶型和制備方法，以及它們在制備抗凝血、抗血栓、治療或預(yù)防腦缺血性疾病或改善睡眠的藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】
一種新型三唑并嘧啶衍生物及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機化學(xué)和藥學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種新型三唑并嘧啶衍生物及其晶型 和制備方法，以及在制備抗凝血、抗血栓、治療或預(yù)防腦缺血性疾病或改善睡眠的藥物中的 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 血栓是在凝血過程中通過血小板聚集形成的，在非損傷情況下形成的血栓能夠降 低血流速度甚至堵塞末端血管從而引起缺血性腦卒中、組織壞死，粥樣動脈硬化、心肌梗死 等疾病。
[0003] 缺血性腦卒中是指突然發(fā)生的腦組織局部供血動脈血流灌注減少或血流完全中 斷，停止供血、供氧、供糖等，使該局部腦組織崩解破壞。缺血性腦卒中的主要原因為:①動 脈粥樣硬化所致血栓栓塞;②心臟來源的栓子所致腦栓塞;③各種原因引起的血管炎、血管 損傷以及外傷等。缺血性腦卒中一般在夜間睡眠中發(fā)病，常為次晨起床時發(fā)現(xiàn)肢體無力或 偏癱，多無意識障礙，血壓可正常或偏高，可有動脈硬化史。缺血性腦卒中占腦卒中病人總 數(shù)的60%~70 %，主要包括腦血栓形成和腦栓塞。血小板的凝聚往往是腦血栓形成的開端， 因此防止血小板凝聚的藥物可用來治療或預(yù)防缺血性腦卒中。
[0004] 血小板的激活有多種途徑和機制，其中P2Y12受體參與纖維蛋白原受體激活、血栓 形成、血栓素A2生成、外傷引發(fā)的血小板聚集等過程。人類的P2Y12受體由342個氨基酸組 成，主要分布于血小板和腦組織中。當(dāng)內(nèi)源性刺激因子如ADP等激活P2Y12受體時，會激活 PI3K等通路，進而激活Raplb、Akt、ERK通路，共同引起纖維蛋白原受體的激活，從而激活纖 維蛋白原，引發(fā)血栓形成或血小板聚集。這一過程必須在P2Y12受體激活的情況下才可以實 現(xiàn)，因此阻斷P2Y12受體可以顯著抑制由ADP和其它刺激因子引發(fā)的血小板聚集和血栓形 成。
[0005] 目前，全球已有多個P2Y1 2受體抑制劑成功開發(fā)上市，其中由阿斯利康 (八81:瓜26116〇3)開發(fā)上市的替格瑞洛(1';[038^101')是全球首個可逆的？2￥12抑制劑，2010年 12月在歐盟首次獲得上市批準(zhǔn)，2011年2月在英國首次上市；2011年8月在美國也獲準(zhǔn)上市 批準(zhǔn)，現(xiàn)已在全球40多個國家上市。替格瑞洛臨床上主要用來減少急性冠狀動脈綜合征 (ACS)患者的血栓性心血管事件的發(fā)生率。替格瑞洛的用法用量為：口服，起始劑量180mg， 維持劑量調(diào)整為一天兩次，每次90mg;治療時間一般至少12個月。
[0006] 替格瑞洛化學(xué)名為：（15,25,31?，55)-3-[7-{[(11?，25)-2-(3,4-二氟苯基)環(huán)丙基] 氨基}_5_丙硫基-3H-1，2,3-三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羥基乙氧基)-1，2_環(huán)戊二 醇，結(jié)構(gòu)如式I所示，其可按CN1432017A中公開的方法制備得到。
[0008] 替格瑞洛具有三唑并嘧啶的獨特化學(xué)結(jié)構(gòu)，可直接與P2Y12受體可逆性結(jié)合，不但 能更快地發(fā)揮抑制血小板聚集效應(yīng)，而且在末次劑量的24小時內(nèi)，隨著血藥濃度的下降，抑 制作用快速衰減，血小板功能也隨之快速恢復(fù)。因此，替格瑞洛是一種可快速起效、強效抑 制血小板聚集、安全性良好的新型口服抗血小板藥物，無疑是臨床上急性冠狀動脈綜合征 (ACS)患者抗血小板治療的更優(yōu)選擇。
[0009] 但替格瑞洛仍存在一些不足之處，比如生物利用度較低（人體中替格瑞洛生物利 用度平均為36%)，用藥順應(yīng)性不高(在長期用藥中，需一天用藥兩次，增加漏服可能性)等。 因此，有必要開發(fā)替格瑞洛的新衍生物，以期在保持替格瑞洛作為可逆P2Y12抑制劑優(yōu)勢的 基礎(chǔ)上，進一步提高生物利用度、增強用藥順應(yīng)性。
[0010] 通過合理的基團修飾可以改善藥物理化性質(zhì)或體內(nèi)藥代動力學(xué)性質(zhì)，提高口服生 物利用度，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。盡管理論上可以根據(jù)分子中的化學(xué)官能團合理 設(shè)計假定的修飾，但母藥經(jīng)基團修飾后產(chǎn)生的是全新的分子實體，該新化合物往往會顯示 母藥不存在的有害物理化學(xué)或生物活性性質(zhì)。雖然基團修飾化合物看似"簡單"，但由于人 體與藥物相互作用的復(fù)雜性，鑒定具有適當(dāng)?shù)睦砘再|(zhì)、藥代動力學(xué)性質(zhì)、體內(nèi)轉(zhuǎn)化和安全 性是復(fù)雜的多學(xué)科任務(wù)，因此實際中常常通過"合理設(shè)計"得到的基團修飾化合物，往往與 預(yù)期的結(jié)果相差甚遠，甚至得到理化性質(zhì)或生物活性比母藥更差的基團修飾化合物。因 此，通過基團修飾開發(fā)出改善藥物理化性質(zhì)或體內(nèi)藥代動力學(xué)性質(zhì)的新化合物非常具有不 可預(yù)測性，這些新化合物的晶型等固態(tài)特征、新用途更是不可預(yù)測。
[0011] 本發(fā)明在對替格瑞洛基團修飾的研究過程中，驚喜地發(fā)現(xiàn)了替格瑞洛的一種經(jīng)基 團修飾的新型三唑并嘧啶衍生物，該化合物活性與替格瑞洛相當(dāng)，口服吸收優(yōu)于替格瑞洛， 在體內(nèi)可代謝成替格瑞洛，從而延長了作用時間，為臨床上減少給藥次數(shù)、提高順應(yīng)性提供 了良好的物質(zhì)基礎(chǔ);再者，該化合物可以以晶型的固態(tài)形式存在，有利于生產(chǎn)、貯存和制劑 的制備；另外，該化合物不僅具有抗凝血、抗血栓的作用、而且還可用于治療或預(yù)防腦缺血 性疾病或改善睡眠。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的一個目的在于提供一種新型三唑并嘧啶衍生物，該化合物不僅具有抗凝 血、抗血栓的作用，可用于治療或預(yù)防腦缺血性疾病或改善睡眠，而且藥代動力學(xué)性質(zhì)優(yōu)于 替格瑞洛。
[0013] 本發(fā)明的另一目的在于提供該新型三唑并嘧啶衍生物的制備方法。
[0014] 本發(fā)明的又一目的在于提供該新型三唑并嘧啶衍生物的一種晶型和該晶型的制 備方法。
[0015] 本發(fā)明的又一目的在于提供包含該新型三唑并嘧啶衍生物或其晶型的藥物組合 物。
[0016] 本發(fā)明的又一目的在于提供該新型三唑并嘧啶衍生物或其晶型在制備抗凝血或 抗血栓的藥物中的用途。
[0017] 本發(fā)明的又一目的在于提供該新型三唑并嘧啶衍生物或其晶型在制備治療或預(yù) 防腦缺血性疾病或改善睡眠的藥物中的用途。
[0018] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供了一種式n所示的三唑并嘧啶衍生物或 其可藥用鹽、共晶、水合物或溶劑合物，
[0021] 所述"鹽"的定義是本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，是指由陽離子和陰離子通過離子 鍵的作用而形成的化合物。
[0022] 所述"共晶"（Co-Crystals)是指一種具有固定化學(xué)計量比的多組分晶體，在該晶 體中各組分是以分子水平，通過氫鍵或其他非共價鍵、非離子鍵的作用結(jié)合而共存。在藥物 共晶中，一般包括藥物活性成分和另一種或多種共晶形成體(Co-crystal former)。當(dāng)單獨 的純共晶形成體在室溫下以液態(tài)存在時，該共晶也被稱為"溶劑合物"，其中溶劑為水時被 稱為"水合物"。所述"共晶"還包括這樣一些具有固定化學(xué)計量比的多組分晶體，在這些晶 體中藥物活性成分與其他組分之間，一部分通過氫鍵或其他非共價鍵作用，另一部分通過 離子鍵或介于氫鍵與離子鍵之間的作用力而結(jié)合。
[0023]所述"鹽"或"共晶"還包括鹽或共晶的溶劑合物、水合物等形式。當(dāng)鹽或共晶在某 種溶劑中制備、漿化或結(jié)晶時，該溶劑有可能進入到鹽或共晶晶體中，形成溶劑合物；當(dāng)該 溶劑為水時，即有可能形成水合物。
[0024]確定"共晶"或"鹽"的方法是本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，如用單晶X-射線衍射分 析等。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了式n所示的三唑并嘧啶衍生物或其可藥用鹽、 共晶、水合物或溶劑合物的制備方法，該方法包括：
[0026] (1 )、將式m化合物與式IV化合物或其酸加成物反應(yīng)生成式V化合物，
[0028] 式m中，辦為？、(：1、8^1、011或(^，其中厶為羥基活化基；
[0029] (2)、將式V化合物脫保護得到式n化合物，
[0031] (3)、可選的，根據(jù)需要將式n化合物制成鹽、制成共晶、制成水合物或制成溶劑合 物。
[0032] 上述方法步驟（1)中，所述式m化合物中的"羥基活化基"是指這樣一種基團，引入 該基團后，能提高作為離去基的羥基的反應(yīng)活性，包括磺酰基、亞磺?；?、烴酰基等，具體的 如甲磺?；?、三氟甲磺?；?、對甲苯磺?；⑷阴；?。
[0033] 上述方法步驟(1)中，所述"酸加成物"是指某一酸性化合物通過離子鍵、氫鍵或其 他非共價鍵的作用與另一化合物相結(jié)合的物質(zhì)，包括鹽、共晶、溶劑合物等。所述式IV化合 物為制備替格瑞洛的常用中間體，可商業(yè)化購得或按文獻方法制得。所述式IV化合物酸加 成物中的酸包括無機酸或有機酸;其中適宜的無機酸選自鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、磷酸 或硫酸等；適宜的有機酸選自L-酒石酸、二苯甲?；?L-酒石酸、二對甲苯甲?；?L-酒石 酸、R-扁桃酸、R-a_甲氧基苯乙酸、富馬酸、D-蘋果酸、D-樟腦磺酸、S-酮基蒎酸、草酸、乙酸、 三氟乙酸、甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸等。
[0034] 上述方法步驟（1)中，一般需加入一定量的堿中和反應(yīng)產(chǎn)生的酸或由式IV化合物 酸加成物引入的酸。所述堿包括有機堿或無機堿;其中適宜的有機堿包括叔胺(如三乙胺、 二異丙基乙基胺等）；適宜的無機堿包括堿金屬、堿土金屬的氫氧化物(如氫氧化鋰、氫氧化 鈉、氫氧化鉀等）、碳酸鹽(如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等）、碳酸氫鹽(如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀 等）、磷酸鹽(如磷酸鈉、磷酸鉀等）、磷酸氫鹽(如磷酸氫鈉、磷酸氫鉀等)等。
[0035] 上述方法步驟（1)中，當(dāng)所述式m化合物中心為側(cè)時，該步驟可進一步包括先將0H 活化為〇A(A為羥基活化基，定義同上），再與式IV化合物或其酸加成物反應(yīng)的過程。
[0036] 上述方法步驟(1)中，反應(yīng)溶劑可選為不混溶于水的溶劑與水的混合溶劑，其中所 述不混溶于水的溶劑可選自甲苯、二氯甲烷等或它們的混合物;反應(yīng)溶劑也可選為非質(zhì)子 溶劑，其中所述非質(zhì)子溶劑選自可乙腈、甲苯、二氯甲烷、丙酮、二甲氧基乙烷、四氫呋喃、二 氧六環(huán)、N-甲基吡咯烷酮、N，N_二甲基甲酰胺、N，N_二甲基乙酰胺、六甲基磷酰胺、二甲基亞 砜、環(huán)丁砜等或它們的混合物。
[0037] 上述方法步驟（1)中，所述式m化合物與式IV化合物或其酸加成物的投料摩爾比 一般為 0.7:1 到1.3:1。
[0038] 上述方法步驟(1)中，反應(yīng)溫度一般為-10°C至溶劑沸點。
[0039] 上述方法步驟(2)中，所述脫保護的試劑一般為酸，選自有機酸和無機酸;適宜的 有機酸選自甲磺酸或三氟乙酸等;適宜的無機酸選自鹽酸、氫溴酸、氫碘酸或硫酸等。
[0040] 上述方法步驟(2)中，反應(yīng)溶劑一般包含水與有機溶劑組成的混合溶劑，其中有機 溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇、四氫呋喃、二氧六環(huán)、乙腈、丙酮、甲苯、二氯甲烷等。
[0041] 上述方法步驟(2)中，反應(yīng)溫度一般為0°C至溶劑沸點。
[0042] 上述方法步驟（1)或（2)中，反應(yīng)時間的確定可采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法進行，如采 用TLC、HPLC監(jiān)控等。
[0043] 上述方法步驟(1)中，所述式m化合物可通過本發(fā)明提供的制備方法制備，該方法 包括：
[0044] (a)、將式VI化合物或其酸加成物與式W化合物反應(yīng)得到式VI化合物，
[0046] 式W和珊中的辦定義同上，式W中的R2為？、(：1、8廣1或-(^4定義同上；
[0047] (b)、將式VI化合物在重氮化試劑存在下轉(zhuǎn)化成式m化合物，
[0049] 式m和珊中，的定義同上。
[0050] 上述方法步驟(a)中，所述式VI化合物的酸加成物中的酸包括無機酸或有機酸;其 中適宜的無機酸選自鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、磷酸或硫酸等;適宜的有機酸選自L-酒石 酸、二苯甲酰基-L-酒石酸、二對甲苯甲?；?L-酒石酸、草酸、乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、苯磺 酸、對甲苯磺酸等。
[0051]上述方法步驟(a)中，所述式W化合物與式VI化合物或其酸加成物的投料摩爾比 一般為 3:1 至0.8:1。
[0052]上述方法步驟(a)中，一般需加入一定量的堿中和反應(yīng)產(chǎn)生的酸或由式VI化合物 酸加成物引入的酸。所述堿包括有機堿或無機堿;其中適宜的有機堿包括叔胺(如三乙胺、 二異丙基乙基胺等）；適宜的無機堿包括堿金屬、堿土金屬的氫氧化物(如氫氧化鋰、氫氧化 鈉、氫氧化鉀等）、碳酸鹽(如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等）、碳酸氫鹽(如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀 等）、磷酸鹽(如磷酸鈉、磷酸鉀等）、磷酸氫鹽(如磷酸氫鈉、磷酸氫鉀等)等。
[0053]上述方法步驟(a)中，反應(yīng)溶劑選自乙醇、異丙醇、三乙二醇、叔丁醇、異丁醇、二甲 氧基乙烷、甲苯、正丁醇、甘油、乙二醇、聚乙二醇-200、聚乙二醇-400、聚乙二醇-600、聚乙 二醇-800、N-甲基吡咯烷酮、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、六甲基磷酰胺、二甲基 亞砜、環(huán)丁砜、二氧六環(huán)等或它們的混合物。
[0054]上述方法步驟(a)中，反應(yīng)溫度一般為70°C至溶劑沸點。
[0055]上述方法步驟(b)中，所述"重氮化試劑"選自亞硝酸或亞硝酸酯等，其中亞硝酸可 由亞硝酸鹽(如亞硝酸鈉、亞硝酸鉀等）與酸(如鹽酸、乙酸等)原位制備，其中亞硝酸酯包括 亞硝酸異戊酯等。
[0056]上述方法步驟(b)中，所述式珊化合物與重氮化試劑的投料摩爾比一般為1:0.8至 1:2〇
[0057]上述方法步驟(b)中，溶劑選自甲苯、乙酸、水等或其混合物。
[0058] 上述方法步驟(b)中，反應(yīng)溫度一般為_15°C~40°C。
[0059] 上述方法步驟(a)或(b)中，反應(yīng)時間的確定可采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法進行，如采 用TLC、HPLC監(jiān)控等。
[0060] 上述方法步驟(a)或(b)中，在反應(yīng)結(jié)束后，可進一步包括用本領(lǐng)域常規(guī)的方法對 產(chǎn)物進行分離、純化等后處理或經(jīng)分離后不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。
[0061] 上述方法步驟(a)中，所述式W化合物為制備替格瑞洛的常用中間體，可商業(yè)化購 得或按文獻方法制得;所述式VI化合物或其酸加成物可按下述實施方案中的制備方法制 得。
[0062] 在一實施方案中，本發(fā)明提供了一種式VI化合物或其酸加成物的制備方法，該方 法包括：
[0063] (i )、將式IX化合物或其酸加成物經(jīng)氨基保護得到式X化合物，
[0065]式X中，R3為氨基保護基，R4為氫或與R3-并作為氨基保護基；
[0066] ( ii )、將式X化合物與式XI化合物反應(yīng)得到式M化合物，
[0068] 式X和M中的R3和R4定義同上，式XI中的抱為？、(：1、8廣1、-(?1或-(^4定義同上； [0069] (iii )、將式M化合物去除氨基保護基得到式VI化合物，
[0071] 式M中的R3和R4定義同上；
[0072] ( iv )、可選的，根據(jù)需要將式VI化合物轉(zhuǎn)化成式VI化合物的酸加成物。
[0073] 上述方法步驟(i)中，所述式IX化合物為制備替格瑞洛的常用中間體，可商業(yè)化購 得或按文獻方法制得。所述式K化合物的酸加成物中的酸包括無機酸或有機酸;其中適宜 的無機酸選自鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、磷酸或硫酸等;適宜的有機酸選自L-酒石酸、二 苯甲?；?L-酒石酸、二對甲苯甲?；?L-酒石酸、草酸、乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、苯磺酸、對 甲苯磺酸等。
[0074] 上述方法步驟(i)中，所述"氨基保護"是本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù);常用的氨基保護基包 括節(jié)氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)、竊甲氧羰基(Fmoc)、稀丙氧羰基(Alloc)、三甲基娃乙 氧羰基(Teoc)、鄰苯二甲?；?Pht)、對甲苯磺?；?Tos)、三氟乙?；?Tfa)、鄰(對)硝基苯 磺?；?Ns)、三苯甲基(Trt)、2,4_二甲氧基芐基(Dmb)、對甲氧基芐基(?11113)等 ;所述"R4與R3 一并作為氨基保護基"的情形例如，當(dāng)氨基保護基選用鄰苯二甲酰基(Pht)時，R4與R3-并代 表鄰苯二甲?；?。在選用氨基保護基時，優(yōu)選的氨基保護基為在去除該氨基保護基時所使 用的方法有利于式VI化合物中醚鍵保持穩(wěn)定。
[0075]上述方法步驟（i)中，一般需加入一定量的堿中和反應(yīng)產(chǎn)生的酸或由式IX化合物 酸加成物引入的酸。所述堿包括有機堿或無機堿;其中適宜的有機堿包括叔胺(如三乙胺、 二異丙基乙基胺等）；適宜的無機堿包括堿金屬、堿土金屬的氫氧化物(如氫氧化鋰、氫氧化 鈉、氫氧化鉀等）、碳酸鹽(如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等）、碳酸氫鹽(如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀 等）、磷酸鹽(如磷酸鈉、磷酸鉀等）、磷酸氫鹽(如磷酸氫鈉、磷酸氫鉀等)等。
[0076]上述方法步驟（ii )中，所述式XI化合物可商業(yè)化購得。
[0077] 上述方法步驟（ii )中，一般需加入一定量的堿，所述堿包括有機堿或無機堿;其中 適宜的有機堿包括叔胺（如三乙胺、二異丙基乙基胺等），堿金屬、堿土金屬的醇化物（如叔 丁醇鋰、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀、叔丁醇鎂等)等;適宜的無機堿包括堿金屬、堿土金屬的氫化 物(如氫化鈉、氫化鉀等），堿金屬、堿土金屬的氫氧化物(如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀 等），碳酸鹽(如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等），碳酸氫鹽(如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等），磷酸鹽 (如磷酸鈉、磷酸鉀等），磷酸氫鹽(如磷酸氫鈉、磷酸氫鉀等)等。
[0078] 上述方法步驟（iii)中，所述"去除氨基保護基"是本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，優(yōu)選有利于 式VI化合物中醚鍵保持穩(wěn)定的方法，比如使用堿性試劑、氫解等方法去除氨基保護基。
[0079] 上述方法步驟或（m)中，在反應(yīng)結(jié)束后，可進一步包括用本領(lǐng)域常規(guī)的 方法對產(chǎn)物進行分離、純化等后處理或經(jīng)分離后不經(jīng)進一步純化直接用于下一步。
[0080] 本發(fā)明在提供制備式n所示的三唑并嘧啶衍生物的基礎(chǔ)上，進一步提供了系列中 間體化合物:式m化合物、式v化合物、式vi化合物、式Vi化合物或式xn化合物，它們的結(jié)構(gòu) 及優(yōu)選化合物匯總于下：
[0082]式中RiSFJUBrJ'OH [0083] 或0A，其中A為羥基活化
[0087]式中RiSFXUBhKOH [0088] 或0A，其中A為羥基活化 [0089]基，
[0091]式中R3為氨基保護基，R4為。氫或與R3-并作為氨基保護
[0092] 基，
[0093] 根據(jù)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種結(jié)晶態(tài)的式n化合物，進一步地，本發(fā)明提 供了式n化合物的一種晶型，將其定義為晶型a。
[0094] 本發(fā)明提供的式n化合物晶型A的粉末X-射線衍射圖譜的特征為:在20值為4.4° ±0.2°、15.4° ±0.2°、15.7° ±0.2°、18.8° ±0.2°、20.0° ±0.2°、20.7° ±0.2°、21.1° 土 0.2°、26.2° ±0.2°、26.6° ±0.2°、27.5° ±0.2° 等位置有特征衍射峰。
[0095] 在一具體實施方案中，本發(fā)明提供的式n化合物晶型A的粉末X-射線衍射圖譜的 特征為：在29值為4.4° ±0.2°、10.3° ±0.2°、15.4° ±0.2°、15.7° ±0.2°、17.3° ±0.2°、 18.8° ±0.2°、20.0° ±0.2°、20.7° ±0.2°、21.1° ±0.2°、21.7° ±0.2°、26.2° ±0.2°、26.6° ± 0 ? 2°、27 ? 5° ± 0 ? 2°、28 ? 2° ± 0 ? 2° 等位置有特征衍射峰。
[0096] 進一步地，本發(fā)明所述的式n化合物晶型A以20角度表示的粉末X-射線衍射圖譜 在以下位置具有特征衍射峰及相對強度：
[0099]在一具體實施方案中，本發(fā)明提供的式n化合物晶型A具有如圖1所示的粉末X-射 線衍射圖譜所代表的特征，即本發(fā)明提供的式n化合物晶型a的粉末x-射線衍射圖譜基本 如圖1所示。
[0100] 本發(fā)明的式n化合物晶型a的粉末x-射線衍射分析是在環(huán)境溫度及環(huán)境濕度下， 經(jīng)荷蘭帕納科X'Pert PRO型粉末X-射線衍射儀的CuKa源(a= 1.54A)測定完成的。"環(huán)境溫 度" 一般是0~40 °C ; "環(huán)境濕度" 一般是30 %~80 %的相對濕度。
[0101] 在一具體實施方案中，本發(fā)明提供的式n化合物晶型A具有如圖2所示的差示掃描 量熱法(DSC)圖譜所代表的特征，即其吸熱峰峰值溫度是150°C ± 2°C或150°C ± 1°C。
[0102] 在一具體實施方案中，本發(fā)明提供的式n化合物晶型A具有如圖3所示的熱重分析 (TGA)圖譜所代表的特征，即本發(fā)明提供的式II化合物晶型A的熱重分析(TGA)圖譜基本如 圖3所示。
[0103] 在一具體實施方案中，本發(fā)明提供的制備的式n化合物晶型A混合物中式n化合 物晶型A含量(質(zhì)量含量)一般大于70 %，優(yōu)選大于80 %，最優(yōu)選大于90 %。
[0104] 本發(fā)明提供了 一種式n化合物晶型A的制備方法，該方法包括：
[0105] (1 )、將式n化合物溶于酯類溶劑中；
[0106] (2)、析出固體；
[0107] (3)、分離析出的固體；
[0108] (4)、可選的，將所分離的固體進行干燥。
[0109] 上述方法步驟（1)中，所述"酯類溶劑"選自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸異丙酯、乙酸 正丙酯、乙酸正丁酯等或它們的混合溶劑，優(yōu)選乙酸乙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丙酯或它們 的混合物。
[0110] 上述方法步驟(1)中，以ml為單位的所選溶劑用量與以g為單位的式n化合物用量 的比例一般為1:1至30:1;可采用加熱的方式進行溶解。
[0111]上述方法步驟(1)中，式n化合物的溶解溫度一般為室溫至溶劑沸點。
[0112] 上述方法步驟(2)中，所述"析出固體"的方式包括冷卻析出固體、加入反溶劑析出 固體、濃縮出部分溶劑后析出固體、加入晶種析出固體等，這些方法可以單獨使用也可以組 合使用，可以在靜置條件下進行，也可以在攪拌條件下進行。所述"反溶劑"是指在常溫下對 式n化合物的溶解性不好的溶劑，如異辛烷、正己烷、正庚烷、石油醚等或它們的混合物，其 中優(yōu)選異辛烷、正庚烷。
[0113] 上述方法步驟(3)中，所述"分離"的方式可以采用抽濾或離心。
[0114] 上述方法步驟(4)中，所述"干燥"的溫度一般為20~120 °C，優(yōu)選40~100 °C ;可以 常壓干燥，也可以減壓干燥。
[0115] 在一實施方案中，本發(fā)明的式n化合物晶型A的制備方法包括：
[0116] (1)、將式n化合物溶于乙酸異丙酯中；
[0117] (2)、冷卻或加入反溶劑析晶；其中反溶劑選自異辛烷、正己烷、正庚烷、石油醚等 或它們的混合物，優(yōu)選異辛烷、正庚烷；
[0118] (3)、分離析出的固體；
[0119] (4)、可選的，將所分離的固體進行干燥;干燥溫度一般為20~120°C，優(yōu)選40~100 °c;可以常壓干燥，也可以減壓干燥。
[0120]本發(fā)明的另一目的在于提供含有式n化合物、結(jié)晶態(tài)式n化合物或式n化合物晶 型a的藥物組合物和將式n化合物、結(jié)晶態(tài)式n化合物或式n化合物晶型a用于制造人用藥 物的應(yīng)用。
[0121]為了實現(xiàn)該目的，一方面本發(fā)明提供了一種包含治療有效量的式n化合物、結(jié)晶 態(tài)式n化合物或式n化合物晶型a和藥用輔料的藥物組合物。
[0122]另一方面，本發(fā)明提供了式n化合物、結(jié)晶態(tài)式n化合物或式n化合物晶型a在制 備抗凝血、抗血栓、治療或預(yù)防腦缺血性疾病或改善睡眠的藥物中的應(yīng)用。一般是將治療有 效量的式n化合物、結(jié)晶態(tài)式n化合物或式n化合物晶型a與一種或多種藥用輔料制成藥 物組合物或制劑，該藥物組合物或制劑是以本技術(shù)領(lǐng)域中熟知的方式進行制備的。
[0123] 上述藥物組合物或制劑可作為一種抗凝血或抗血栓的藥物，主要用于治療或預(yù)防 具有冠狀動脈、腦血管或外周血管疾病患者的血栓形成及其并發(fā)癥，特別的，用來減少急性 冠狀動脈綜合征患者的血栓性心血管事件的發(fā)生率。另外，上述藥物組合物或制劑可作為 一種治療或預(yù)防腦缺血性疾病(如缺血性腦卒中等)或改善睡眠的藥物。
[0124] 上述藥物組合物或制劑的劑型包括:片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、糖漿劑、散劑、舌 下片劑、混懸劑、溶液劑、可注射制劑、氣霧劑、干粉劑、栓劑、乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑等。它 們根據(jù)各自劑型的特點，給藥途徑包括口服、舌下、腸道外（如靜脈注射、肌內(nèi)注射、皮下注 射等）、經(jīng)肺/氣管或經(jīng)皮等。
[0125] 上述組合物或制劑的給藥量根據(jù)患者病情性質(zhì)和嚴重性、給藥途徑和患者年齡、 體重等進行調(diào)整，一般日劑量在lmg至lg之間，優(yōu)選30mg至300mg之間；每日可以一次給藥， 也可以多次給藥。
[0126] 上述藥物組合物或制劑中還可以包含其他適宜的活性成分。
[0127] 在一具體實施方案中，本發(fā)明提供的藥物組合物為口服固體制劑，優(yōu)選片劑或膠 囊劑。該口服固體制劑除活性成分式n化合物、結(jié)晶態(tài)式n化合物或式n化合物晶型a外， 還含有藥用輔料，所述的藥用輔料均是本領(lǐng)域常規(guī)的藥用輔料，包括填充劑、崩解劑、粘合 劑、潤滑劑等。
[0128] 所述的填充劑一般包括甘露醇、磷酸氫鈣、微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉、乳糖、蔗糖、 硫酸鈣、微粉硅膠等，它們可以單獨使用也可以混合使用。
[0129] 所述的崩解劑一般包括羧甲基淀粉鈉、羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、微晶 纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素、瓊脂、碳酸鈣和碳酸 氫鈉等，它們可以單獨使用也可以混合使用。
[0130] 所述的粘合劑一般包括羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇、聚維酮、微 晶纖維素、淀粉漿、水、各種濃度的乙醇溶液等，它們可以單獨使用也可以混合使用。
[0131] 所述的潤滑劑一般包括硬脂酸鎂、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鈣、棕櫚酸、硅酸鋁、硬 脂酰胺、固體聚乙二醇等，它們可以單獨使用也可以混合使用。
[0132] 如果需要的話，還可以向上述藥物組合物或制劑中添加其他輔料，如甜味劑(如阿 司帕坦、甜菊素等）、著色劑(如二氧化鐵、二氧化鈦等）、穩(wěn)定劑(如維生素 E、麝香草酚、甘氨 酸等）、表面活性劑(如月桂硫酸鈉等)等。
[0133] 上述口服固體制劑的制備可以按照本技術(shù)領(lǐng)域中制備口服固體制劑的常規(guī)方法 進行，如：片劑可以采用濕法制粒壓片等方式制備，膠囊可采用濕法制粒裝膠囊等方式制 備。當(dāng)所述口服固體制劑為片劑時，可根據(jù)需要對其進一步包衣，制成薄膜衣片劑或糖衣片 劑。包衣基質(zhì)包括纖維素類、丙烯酸樹脂類、糖類，如羥丙級甲基纖維素、蔗糖等，其中還可 添加增塑劑、抗粘劑、遮光劑。
[0134] 試驗表明，本發(fā)明提供的式n化合物、結(jié)晶態(tài)式n化合物或式n化合物晶型a活性 與替格瑞洛相當(dāng)，口服吸收優(yōu)于替格瑞洛，在體內(nèi)可代謝成替格瑞洛，從而延長了作用時 間，為臨床上減少給藥次數(shù)、提高順應(yīng)性提供了良好的物質(zhì)基礎(chǔ);再者，式n化合物、結(jié)晶態(tài) 式n化合物或式n化合物晶型a的理化性質(zhì)有利于生產(chǎn)、貯存和制劑的制備；另外，該化合 物不僅具有抗凝血、抗血栓的作用，而且還可用于治療或預(yù)防腦缺血性疾病或改善睡眠。
【附圖說明】
[0135] 圖1為式n化合物晶型A的粉末X-射線衍射(PXRD)圖譜。
[0136] 圖2為式n化合物晶型A的差示掃描量熱(DSC)圖譜。
[0137] 圖3為式II化合物晶型A的熱重分析(TGA)圖譜。
【具體實施方式】
[0138] 下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明，可以使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員更全面的 理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0139] 實施例中1H NMR和13C NMR測試是以氘代二甲基亞砜作為測試溶劑，以四甲基硅烷 作內(nèi)標(biāo)，用Bruke AV-II 400MHz核磁共振儀在室溫下測定的。
[0140] 實施例中質(zhì)譜測試是用Agilent Quadrupole LC/MS 6120B，ESI正模式完成的。 [0141 ]實施例中粉末X-射線衍射分析是由荷蘭帕納科X'Pert PRO型粉末X-射線衍射儀 測定的，測試條件為以構(gòu)型、掃描范圍為4° -50°，步長為0.0130°，連續(xù)掃描。測試光源為 銅靶Ka輻射；電壓和電流分別為40kV和40mA。制樣方法為:在環(huán)境條件下用藥匙取適量樣 本置于玻璃載樣片的凹槽中，用載玻片適當(dāng)碾壓，使樣品均勻分布在載樣片凹槽中，再用載 玻片將樣品表面刮平。測試期間樣品在其自身平面內(nèi)不旋轉(zhuǎn)。
[0142] 實施例中差示掃描量熱分析是由耐馳生產(chǎn)的DSC 214Polyma型差示掃描量熱儀測 定的。測試條件為:升溫速率為10 °C /min，測試溫度范圍為35 °C -220 °C。
[0143] 實施例中熱重分析是由耐馳生產(chǎn)的TG 209F3型熱重分析儀測定的。測試條件為： 升溫速率為10 °C /min，測試溫度范圍35 °C -350 °C。
[0144] 實施例 1 2-[[(3&1?，43,61?，6&3)-6-氨基四氫-2,2-二甲基-紐-環(huán)戊二烯并-1，3-二氧基-4-基]氧基]-環(huán)丙基甲基乙基醚(式VI化合物）的制備
[0145] 步驟丨：^[(3&3,41?，63,6&10-四氫-6-(2-羥基乙氧基)-2,2-二甲基-411-環(huán)戊二烯 并-1，3-二氧基-4-基]-氨基甲酸芐酯(式X-1化合物)的制備
[0147]將2-[ [ (3aR，4S，6R，6aS)-6_氨基四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-二氧雜-4-基]氧基]-乙醇L-酒石酸鹽（式IX化合物的L-酒石酸鹽）106.06g、甲基異丁基甲酮 1500ml、碳酸鉀131.618和水658!111混合，然后在25~35°(：下滴加氯甲酸芐酯（0^-(：1) 54.16g，滴加完后繼續(xù)攪拌約14小時，停止反應(yīng)，分出上層有機相，水相用甲基異丁基甲酮 500ml反萃，合并有機相，減壓濃縮，濃縮物經(jīng)硅膠柱層析純化得式X -1化合物。
[0148] 咕 Mffi(400MHz，DMS0-d6)S: 1.215(s，3H) ;1.359(s，3H) ;1.715-1.769(111，1H); 2.083-2.147(m,lH)；3.415-3.509(m,4H)；3.785-3.839(m,2H)；4.406-4.420(d,lH)； 4.467-4.482(d,lH)；4.714-4.739(m,lH)；5.027(s,2H)；6.855-6.875(d,lH)；7.293-7.372 (m，5H)〇
[0149] (+)-ESI-MS:352.2〇
[0150] 步驟ii 4-[(3&5,41?，65,6&10-四氫-6-(2-環(huán)丙基甲氧基乙氧基）-2,2-二甲基-4H-環(huán)戊二烯并-1，3-二氧基-4-基]-氨基甲酸芐酯(式M-l化合物）的制備
[0152] 氮氣保護下，將式X -1化合物48.00g和N，N-二甲基甲酰胺300mr混合，然后在-5~ 5 °C下分批加入叔丁醇鉀18.37g，再在-5~5 °C下攪拌約1小時后滴加溴甲基環(huán)丙烷(式XI-1 化合物)22.14g和N，N-二甲基甲酰胺15ml的混合溶液，加完后在-5~5 °C下繼續(xù)攪拌反應(yīng)約 5小時；加水200ml淬滅反應(yīng)，然后加乙酸乙酯400ml萃取，分出有機相，有機相依次經(jīng)水 400ml X 3洗滌、飽和氯化鈉水溶液200ml洗滌、無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮，濃縮物經(jīng)硅膠柱 層析純化得式M-1化合物。
[0153] Mffi(400MHz，DMS0-d6)S:-0.023-0.012(m，2H);0.276-0.319(m，2H) ;0.803-0.874(m,lH)；1.154(s,3H)；1.297(s,3H)；1.679-1.714(m,lH)；1.998-2.061(m,lH)； 3.039-3.180(m,2H)；3.428-3.525(m,4H)；3.743-3.809(m,2H)；4.350-4.366(d,lH)； 4.415-4.431(d，lH);4.912-4.986(m，2H);6.56卜6.582(d，lH);7.254-7.324(m，5H)。
[0154] (+)-ESI-MS:406.2〇
[0155] 步驟iii : 2-[ [ (3aR，4S，6R, 6aS)-6-氛基四氛-2，2-二甲基環(huán)戊二稀并 -1，3-二 氧基-4-基]氧基]-環(huán)丙基甲基乙基醚(式VI化合物）的制備
[0157] 將XH-1化合物29.00g、無水乙醇250ml和10%鈀碳11.60g混合，通入氫氣，在20~ 25°C下攪拌約21小時;過濾，用無水乙醇50ml洗滌濾餅并合并入濾液，濾液經(jīng)減壓濃縮得式 VI化合物。
[0158] (+)-ESI-MS：272.3〇
[0159] 實施例2 2-[{(3&1?，43,61?，6&3)-6-[7-溴-5-(丙硫基)-311-[1，2,3]三唑并[4,5- d]嘧啶-3-基]-2,2-二甲基四氫-3aH-環(huán)戊二烯并[d] [1,3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基}氧基]-1-環(huán)丙基甲基乙基醚(式m-2化合物）的制備
[0160]步驟a: 2- [ ((3aR，4S，6R，6aS) -6- {[ 5-胺基-6-溴-2-(丙硫基）嘧啶-4-基]氨基}-2,2_二甲基四氫-3aH-環(huán)戊二烯并[d][l，3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基)氧基]-1-環(huán)丙基甲基乙基 醚(式珊-2化合物）的制備
[0162] 將式VI化合物17.20g、式VH-1化合物23.87g和N-甲基吡咯烷酮67mr混合，加入三 乙胺22.45g，氮氣保護下在86~93 °C下攪拌約6小時；加水70ml和乙酸異丙酯200ml萃取，分 出有機相，水相用乙酸異丙酯l〇〇ml反萃，合并有機相，有機相依次經(jīng)水150ml X3洗滌、減壓 濃縮，濃縮物經(jīng)硅膠柱層析純化后得式珊-2化合物。
[0163] 咕匪1?(4001他，0150-(16)8:0.113-0.150(111，211);0.407-0.453(111，211) ;0.940-0.977(m，4H); 1.226(s，3H); 1.383(s，3H); 1.597-1.689(111，2H); 1.794-1.850(111，1H); 2.244-2.309(m，1H);2.957-2.993(m，2H);3.229-3.246(d，2H);3.498-3.601(m，4H); 3?865-3?886(t，1H);4.260-4?302(m，1H);4?508-4.549(m，2H) ;4.626(s，2H);6.556-6.573 (d，lH)〇
[0164] (+)-ESI-MS：517.2,519.2〇
[0165] 步驟 13:2-[{(3&1?，43,61?，6&3)-6-[7-溴-5-(丙硫基）-311-[1，2,3]三唑并[4,5-(1] 嘧啶-3-基]-2,2-二甲基四氫-3aH-環(huán)戊二烯并[d] [1,3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基}氧基]-1-環(huán) 丙基甲基乙基醚(式m-2化合物）的制備
[0167] 將珊-2化合物24.50g和甲苯245mr混合，然后在0~10°C下依次加入乙酸15.61g和 亞硝酸鈉水溶液(亞硝酸鈉5.55g+水8.9ml)，加完后繼續(xù)在0~10°C下攪拌約1小時；加入 碳酸鉀水溶液(碳酸鉀17.00g+水94ml)淬滅反應(yīng)，分出有機相，得式m-2化合物的甲苯溶 液，可直接用于下一步反應(yīng)。
[0168] (+)-ESI-MS：528.2,530.2〇
[0169] 實施例 3(13,25,31?，55)-3-[7-{[(11?，25)-2-(3,4-二氟苯基)-環(huán)丙基]氨基}-5- (丙硫基)-3H-[l，2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-環(huán)丙基甲氧基乙氧基)-1，2_環(huán)戊 烷二醇(式n化合物)的制備
[0170]步驟 1:2-({(3&1?，43,61?，6&3)-6-{[7-{[(11?，23)-2-(3,4-二氟苯基)-環(huán)丙基]氨 基}-5_(丙硫基)-3H-[l，2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]_2,2_二甲基四氫-3aH-環(huán)戊二烯 并[d][l，3]二氧雜環(huán)戊烯-4-基}氧基]-1-環(huán)丙基甲基乙基醚(式V化合物)的制備
[0172] 將實施例2所得的式m-2化合物的甲苯溶液、水70ml和（11?，25)-2-(3,4-二氟苯 基)環(huán)丙基胺R-扁桃酸鹽(式IV化合物的R-扁桃酸鹽)15.18g混合，然后在0~10°C下滴加三 乙胺11.95g，滴完后再在10~20°C下攪拌約2小時；分出有機相，有機相依次經(jīng)乙酸水溶液 (乙酸1.96g+水245ml)和飽和氯化鈉水溶液250ml洗滌后得式V化合物的甲苯溶液，可直接 用于下一步反應(yīng)。
[0173] (+)-ESI-MS：617.3〇
[0174] 步驟 2:(lS，2S，3R，5S)-3-[7-{[(lR，2S)-2-(3,4-二氟苯基)-環(huán)丙基]氨基}-5-(丙硫基)-3H-[l，2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-環(huán)丙基甲氧基乙氧基)-l，2-環(huán)戊 烷二醇(式n化合物)的制備
[0176] 將步驟1所得式V化合物的甲苯溶液和鹽酸甲醇溶液(濃鹽酸39.4ml+甲醇55ml) 混合，在10~15°C下攪拌約4.5小時；加水100ml，然后在0~10°C下用三乙胺調(diào)pH約為8,分 出有機相，水相用乙酸異丙酯250ml X2反萃，合并有機相，有機相依次經(jīng)水200ml洗滌、飽和 氯化鈉水溶液200ml洗滌、無水硫酸鈉干燥和減壓濃縮，得式II化合物。
[0177] 咕 Mffi(400MHz，DMS〇-d6)5:0.127-0.163(m，2H);0.417-0.462(m，2H);0.807-0.843and 0.941-1.006(m,4H)；1.343-1.393(m,lH)；1.468-1.579and 1.661-1.715(m, 3H) ;2.〇n-2.081(m，lH) ;2.103-2.149and 2.253(m，lH) ;2.6(U-2.676(m，lH) ;2.82卜 2.890(m，lH);2.916-2.985(m，lH);3.083-3.093and 3.129-3.178(m，lH);3.232-3.249(d， 2H)；3.509-3.631(m,4H)；3.759-3.785(maH)；3.950(maH)；4.546-4.596(maH)；4.941-5.009(q，lH) ;5.031-5.041(d，lH); 5.099-5.115(d，lH) ;7.066(111，1H) ;7.262-7.350(111， 2H);8?913-8?924and 9?326-9?336(d，1H)。
[0178] 13C 匪R( 100MHz，DMS〇-d6) S : 3 ? 30，10 ? 96，13 ? 42，15 ? 44，22 ? 77，24 ? 48，32 ? 82， 33.62,34.51，61.09,68.94,69.61，74.26,74.76,75.17,82.32，115.24，115.42，117.38， 117.55,123.25,123.28,123.31，123.66,139.37,139.68,139.72,139.74,139.78,146.99， 147?11，148?59，148?72，149?41，149?53，149?86，151?02，151?15，154?43，155?85，168?79， 169.65 〇
[0179] (+)-ESI-MS：577.3〇
[0180] 實施例4式n化合物晶型A的制備
[0181] 將式n化合物2g在40~50°C下溶于乙酸異丙酯6ml中，然后加入異辛烷6ml，攪拌 析晶約4小時，過濾，濾餅在40~45 °C下減壓干燥，得式II化合物晶型A。
[0182] 所測的粉末X-射線衍射圖譜見圖1，其測量值如下表(取相對強度大于5%的衍射 峰對應(yīng)的測量值）：
[0184]所測的差示掃描量熱(DSC)圖譜見圖2。所測的熱重分析(TGA)圖譜見圖3。應(yīng)當(dāng)理 解用其他類型設(shè)備或用不同于上述的條件可能給出不同的溫度讀數(shù)。因此，所提供的數(shù)字 不能作為絕對值。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)明白這些溫度的準(zhǔn)確值將受化合物純度、樣品重量、加 熱速率和粒徑的影響。
[0185] 實施例5式n化合物晶型A的制備
[0186] 將式n化合物2g在50~55°C下溶于乙酸異丙酯2ml中，然后加入異辛烷4ml，攪拌 析晶約4小時，過濾，得晶型A。
[0187] 實施例6式n化合物晶型A的制備
[0188] 將式n化合物2g在室溫下溶于乙酸異丙酯12ml中，然后加入異辛烷20ml，攪拌析 晶約4小時，過濾，濾餅在70~75°C下減壓干燥，得晶型A。
[0189] 實施例7式II化合物晶型A的制備
[0190] 將式n化合物2g在40~50°C下溶于乙酸乙酯4ml中，然后冷卻至-10~0°C，攪拌析 晶約2小時，過濾，濾餅40~45°C下減壓干燥，得晶型A。
[0191] 實施例8式n化合物晶型A的制備
[0192] 將式n化合物2g在40~50 °C下溶于乙酸異丙酯20ml中，然后加入正庚烷40ml，攪 拌析晶約4小時，過濾，濾餅在40~45°C下減壓干燥，得晶型A。
[0193] 實施例9式n化合物晶型A的制備
[0194] 將式n化合物2g在40~50°C下溶于乙酸異丙酯4ml和乙酸乙酯2ml中，然后加入異 辛烷8ml，攪拌析晶約4小時，過濾，濾餅90~100°C下減壓干燥，得晶型A。
[0195] 實施例10式n化合物晶型A穩(wěn)定性試驗
[0196] 以下為式II化合物晶型A在高溫、高濕條件下進行試驗，15天后進行有關(guān)物質(zhì)和晶 型檢測。
[0197] 有關(guān)物質(zhì)用HPLC法進行檢測：
[0198] 色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠(Agilent ZORBAX SB-C18,4.6 X 150mm，1.8y m)為固定相，以0.01m〇l/L的NaH2P〇4緩沖溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.5)為流動相六、乙腈為流動 相B，柱溫為40 °C，流速為lml/min，檢測波長為242nm，照下表梯度洗脫：
[0200] 流動相的配制：取二水合磷酸二氫鈉1.56g，加水1000ml溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH3.5， 用0.22mi濾膜過濾即得流動相A;取色譜乙腈為流動相B。
[0201] 供試品溶液：（避光操作）取本品約20mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用稀釋劑溶解 并稀釋至刻度，搖勻，即得。
[0202] 測定法:照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄VD)試驗。
[0203] 檢測結(jié)果如下：
[0204]
[0205] 該試驗結(jié)果表明：式n化合物晶型A具有良好的穩(wěn)定性。
[0206] 實施例11含式n化合物晶型A的片劑及其制備
[0207] 處方：
[0209] 制備:將上表組分中的式n化合物晶型A、甘露醇、二水合磷酸氫鈣、羥丙基纖維素 和羧甲基淀粉鈉混勻，用水濕法制粒，干燥，整粒，與硬脂酸鎂混勻，壓片，即得。
[0210] 實施例12抗血小板聚集的體外藥效學(xué)試驗
[0211] 本發(fā)明通過抑制ADP誘導(dǎo)兔血小板聚集試驗評價了式n化合物與替格瑞洛的體外 活性。
[0212] 取兔后肢靜脈血離心，分出富含血小板的血漿，分別加入溶媒、一系列濃度的式n 化合物或替格瑞洛，在37°C共同孵育5min后，加入ADP誘導(dǎo)血小板聚集。加入ADP后檢測5min 內(nèi)血小板最大聚集率(PAGm)。各組均設(shè)3個平行管。
[0213] 分組及加樣情況如下：
[0214]
[0215] 溶媒DMS0在血小板體系中的終濃度為0.1%，與空白對照組相比，不會對血小板體 系產(chǎn)生影響。
[0217]不同濃度的式II化合物與替格瑞洛組5min內(nèi)最大聚集率和抑制率的對比如下：
[0219] 該試驗結(jié)果表明：式n化合物在體外具有與替格瑞洛類似的抗血小板活性。
[0220] 實施例13抗血小板聚集的體內(nèi)藥效學(xué)試驗
[0221] 本發(fā)明通過Beagle犬血小板聚集試驗評價了式II化合物與替格瑞洛的體內(nèi)活性。
[0222] 6條雄性Beagle犬隨機分為2組，禁食過夜后按照等摩爾比分別經(jīng)口給予式II化合 物和替格瑞洛。首次給藥后清洗7天，進行第2輪給藥。給藥后定時取血測定相應(yīng)指標(biāo)。
[0223] 每次藥前及藥后0.5、1、1.5、2、4、8、24、30各采集全血2mL，3.2%枸櫞酸鈉1:9抗 凝。低速離心(300g)5min制取富血小板血衆(zhòng)(PRP)。剩余樣品繼續(xù)高速離心(3000g)10min制 取貧血小板血漿(PPP)。以PPP調(diào)整PRP至血小板濃度為2 X 108/mL，檢測血小板最大聚集率， 計算血小板聚集抑制率。
[0225] 該試驗結(jié)果表明，式II化合物的血小板聚集抑制率在給藥后8小時內(nèi)低于替格瑞 洛，但在8小時后，高于替格瑞洛。
[0226] 實施例14體內(nèi)藥代動力學(xué)試驗
[0227] 本發(fā)明通過SD大鼠經(jīng)口給藥評價了式II化合物與替格瑞洛的體內(nèi)藥代動力學(xué)。
[0228] 16只SD大鼠，隨機分為2組，每組8只（雌雄各半），禁食過夜后按照等摩爾比分別給 予式II化合物、替格瑞洛。分別于給藥前及給藥后0.133(8min)、0.25(15min)、0.5(30min)、 1、2、4、8、12和24h各米集全血200iiL，肝素抗凝。于4 °C，3200rpm/min離心1 Omin分離血衆(zhòng)，檢 測其中式n化合物和替格瑞洛的濃度。
[0230] 各組主要藥動學(xué)參數(shù)如下：
[0234] 該試驗結(jié)果表明：
[0235] (1 )、式n化合物或替格瑞洛經(jīng)口給予大鼠后，均存在性別差異，與替格瑞洛原研 資料中大鼠口服替格瑞洛后的情況一致。
[0236] (2 )、式n化合物組中檢測到大量的替格瑞洛，表明式n化合物在體內(nèi)可以順利的 代謝為替格瑞洛。
[0237] (3)、式n化合物組或替格瑞洛組等摩爾給藥，但式n化合物組替格瑞洛的AUC、 Cmax明顯高于替格瑞洛組，由于式n化合物本身也具有與替格瑞洛類似的藥效活性，因此， 若按藥效活性物計，式n化合物組的藥效活性物暴露量將更明顯高于替格瑞洛組。這表明 式n化合物及其性代謝物的生物利用度高于替格瑞洛。
[0238] (4)、式n化合物組替格瑞洛的Tmax比替格瑞洛的有所延遲，有利于延長藥效時 間。
[0239] 實施例15對局部腦缺血大鼠腦梗塞體積的影響
[0240] (1)、試驗材料和方法
[0241] Wistar大鼠，體重250-280g。手術(shù)前后單獨飼養(yǎng)，室溫保持23-25°C，自有進食和進 水。按照1〇1^等的方法制備七100模型。大鼠用10%水合氯醛麻醉(35〇11^/1^，;[4.)，體溫 維持在37±0.5°C，仰臥位固定于手術(shù)臺上。沿頸正中線切開皮膚，仔細分離右側(cè)頸總動脈 (CCA)，頸外動脈(ECA)，頸內(nèi)動脈(ICA)。將ECA結(jié)扎剪斷，拉直與ICA成一直線。在ECA上剪一 小口，將一根長4.0cm，直徑0.26mm的圓頭硅化尼龍繩（用0.1 %多聚賴氨酸包被）由此開口 插入ICA約1.85-2.00cm，指大鼠大腦前動脈起始處，阻斷大腦中動脈的血流供應(yīng)。缺血2小 時后小心抽出尼龍線，結(jié)扎ECA開口并縫合手術(shù)切口，動物放回籠中再灌24小時。
[0242] (2)、試驗分組及給藥
[0243] 大鼠隨機分組：模型對照組，注射用水（10 0m 1 / k g)，式II化合物給藥組（2 5、5 0、 100mg/kg)，MCA阻斷造成缺血后10分鐘時口服給藥。
[0244] (3 )、腦梗塞體積的測定
[0245] 大鼠再灌注損傷24小時后，即刻斷頭取腦，去除嗅束、小腦和低位腦干，將其冠狀 切成6片（第一至第五片21111]1/片，第六片41]11]1)，迅速置于51]11含有1.51]114%1'1'〇及 0.1mllMK 2HP〇4的溶液中染色(37°C，避光)20-30分鐘，其間每隔5分鐘翻動一次。經(jīng)TTC染色 后，正常組織深染呈紅色，梗死組織呈白色。將每組腦片排列整齊，拍照保存。求算每片的梗 死面積，并最終疊加換算成梗塞體積。梗塞體積以所占大腦半球的百分率來表示，以消除腦 水腫的影響。
[0246] 腦梗塞體積（％ )=(手術(shù)對側(cè)半球體積-手術(shù)側(cè)半球未梗塞部分的體積)/手術(shù)對 側(cè)半球的體積*1〇〇 %
[0247] (4)、試驗結(jié)果
[0248] 缺血2小時再灌注24小時后，溶劑對照組的腦梗塞體積（％)為33.8%。假手術(shù)組沒 有任何腦梗塞出現(xiàn)。其他組腦梗塞體積結(jié)果如下：
[0249]
[0250] 該試驗結(jié)果表明：與溶劑對照組比，式n化合物口服給藥均可以顯著縮小腦梗塞 體積，即式n化合物具有良好的改善腦缺血癥狀的作用。
[0251 ]實施例16對大鼠睡眠作用的影響
[0252] (1)、試驗材料
[0253] 動物來源:昆明種小白鼠，18-22克，雄性。試驗動物飼養(yǎng)室溫度22±2°C，相對濕度 50-70%，動物飼養(yǎng)料。
[0254] 本試驗設(shè)式II化合物給藥劑量為25mg/kg，另設(shè)蒸餾水對照組。
[0255] 樣品處理:各取樣品25mg分別加蒸餾水至20ml，使成均勻懸液，供試。
[0256] (2)、戊巴比妥鈉閾上劑量催眠試驗
[0257] 小鼠隨機分為對照組和式II化合物給藥組，連續(xù)灌胃給樣30天，于第30天樣品灌 胃15分鐘后，給各組動物50mg/kg.b.w的戊巴比妥鈉腹腔注射，注射量為0.2ml/20g.b.w， 以小鼠翻正反射消失達1分鐘以上作為入睡判斷標(biāo)準(zhǔn)，觀察給戊巴比妥鈉60分鐘內(nèi)各組動 物的入睡時間和睡眠時間。
[0258] 式n化合物對動物體重的影響如下：
[0260] 該試驗結(jié)果表明：式n化合物組動物體重與對照組相比，均無顯著性差異。
[0261] 閾上劑量的戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響如下：
[0263] *P〈0 ? 05與對照組相比（經(jīng)方差分析）
[0264] 該試驗結(jié)果表明：式n化合物組動物在閾上劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)下的睡眠時間與 對照組相比，有顯著性差異。
[0265] (3)、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗
[0266] 小鼠隨機分為對照組和式II化合物給藥組，連續(xù)灌胃給樣28天，于第28天樣品灌 胃15分鐘后，給各組動物30mg/kg. b. w的戊巴比妥鈉腹腔注射，注射量為0.2ml/20g. b. w，以 小鼠翻正反射消失達1分鐘以上作為入睡判斷標(biāo)準(zhǔn)，觀察給戊巴比妥鈉25分鐘內(nèi)各組動物 發(fā)生睡眠的動物數(shù)。
[0267]閾下劑量的戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠發(fā)生率的影響如下：
[0269] *P〈0 ? 05與對照組相比（經(jīng)卡方檢驗）
[0270] 該試驗結(jié)果表明：式n化合物組在閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)下的入睡動物數(shù)和睡 眠發(fā)生率與對照組相比，均有顯著性差。
[0271] 上述試驗結(jié)果表明：式n化合物具有良好的改善睡眠的作用。
【主權(quán)項】
1. 一種式π所示的Ξ挫并喀晚衍生物或其可藥用鹽、共晶、水合物或溶劑合物，2. -種式Π 所示的Ξ挫并喀晚衍生物或其可藥用鹽、共晶、水合物或溶劑合物的制備 方法，該方法包括： (1)、將式m化合物與式IV化合物或其酸加成物反應(yīng)生成式V化合物，式虹中，Ri為F、C1、Br、I、0H或0A，其中A為徑基活化基； (2 )、將式V化合物脫保護得到式Π 化合物，(3)、可選的，根據(jù)需要將式Π 化合物制成鹽、制成共晶、制成水合物或制成溶劑合物。3. 用于制備式Π 化合物的中間體化合物，選自：式m化合物、式m-1化合物、式m-2化 合物、式V化合物、式VI化合物、式Μ化合物、式Μ-1化合物、式VDI-2化合物、式Μ化合物、式 Μ-1化合物或式Μ-2化合物。4. 結(jié)晶態(tài)的式Π 化合物。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的結(jié)晶態(tài)式Π 化合物，其晶型為晶型A，該晶型的粉末X-射線衍 射圖譜在 2 目值為 4.4° ±0.2°、15.4° ±0.2°、15.7° ±0.2°、18.8° ±0.2°、20.0° ±0.2°、 20.7° ±0.2°、21.1° ±0.2°、26.2° ±0.2°、26.6° ±0.2°、27.5° ±0.2° 的位置有特征衍射 峰。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的式Π 化合物晶型A，其粉末X-射線衍射圖譜中在2Θ值為4.4° ± 0.2°、10.3° ±0.2°、15.4° ±0.2°、15.7° ±0.2°、17.3° ±0.2°、18.8° ±0.2°、20.0° ±0.2°、 20.7° ±0.2°、21.1° ±0.2°、21.7° ±0.2°、26.2° ±0.2°、26.6° ±0.2°、27.5° ±0.2°、28.2° ±0.2°的位置有特征衍射峰。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的式Π 化合物晶型A，其粉末X-射線衍射圖譜基本如圖1所示。8. -種式Π 化合物晶型A的制備方法，該方法包括： (1 )、將式Π 化合物溶于醋類溶劑中； (2) 、析出固體； (3) 、分離析出的固體； (4) 、可選的，將所分離的固體進行干燥。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其中，步驟（1)中醋類溶劑選自乙酸乙醋、乙酸甲 醋、乙酸異丙醋、乙酸正丙醋、乙酸正下醋或它們的混合溶劑，優(yōu)選乙酸乙醋、乙酸異丙醋、 乙酸正丙醋或它們的混合物;步驟(2)中析出固體的方式選自冷卻析出固體、加入反溶劑析 出固體、濃縮出部分溶劑后析出固體或加入晶種析出固體。10. -種藥物組合物，其包含治療有效量的權(quán)利要求1所述的式Π 化合物或其可藥用 鹽、共晶、水合物或溶劑合物，或治療有效量的權(quán)利要求4所述的結(jié)晶態(tài)式Π 化合物，或治療 有效量的權(quán)利要求5~7任一項所述的式Π 化合物晶型A，W及藥用輔料。11. 權(quán)利要求1所述的式Π 化合物或其可藥用鹽、共晶、水合物或溶劑合物，或權(quán)利要求 4所述的結(jié)晶態(tài)式Π 化合物，或權(quán)利要求5~7任一項所述的式Π 化合物晶型A在制備抗凝血、 抗血栓、治療或預(yù)防腦缺血性疾病或改善睡眠的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/519GK105968113SQ201610122570
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年3月4日
【發(fā)明人】袁道義, 趙雄, 陳真, 李學(xué)超, 彭丹, 歐興蓉, 程鶴, 羅杰, 嚴龐科, 宮愛申, 向志祥, 王明霞, 劉國強, 王庚禹
【申請人】四川海思科制藥有限公司, 廣州諾威生物技術(shù)有限公司