一種吲哚二酮哌嗪類(lèi)化合物的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種吲哚二酮哌嗪類(lèi)化合物的制備方法。本發(fā)明從深海真菌Dichotomom yces cejpii FS110發(fā)酵產(chǎn)物的乙酸乙酯提取物中分離到化合物1,2,3,4?tetrahydro?2?methyl?3?methylene?1,4?dioxopyrazino[1,2?a]indole。從而為化合物1,2,3,4?tetrahydro?2?methyl?3?met hylene?1,4?dioxopyrazino[1,2?a]indole的制備提供了一條途徑。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種吲哚二酮哌嗪類(lèi)化合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于生物和醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及利用南海深海沉積物的真菌 Dichotomomyces ce jpi i FS110制備化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methy lene-1，4_dioxopyrazino[l，2_a]indole的方法。
【背景技術(shù)】：
[0002] 海洋擁有特殊的環(huán)境，像高鹽、弱堿性、低營(yíng)養(yǎng)、缺氧等，棲息于海洋環(huán)境的海洋微 生物為了適應(yīng)這些特殊環(huán)境，產(chǎn)生了獨(dú)特的代謝途徑，由此能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)特異、生物活性特 殊的次級(jí)代謝產(chǎn)物。近年來(lái)從海洋微生物中發(fā)現(xiàn)了大量結(jié)構(gòu)新穎、活性顯著的化合物，如生 物堿類(lèi)、萜類(lèi)、聚酮類(lèi)等(Blunt J.W.et al.2015;Yang J.G.et al.2013)。目前，海洋微生 物已經(jīng)成為天然產(chǎn)物研究的重要資源。與其它海洋微生物相比，海洋真菌來(lái)源的次生代謝 產(chǎn)物不僅數(shù)量占到整個(gè)海洋微生物的一半左右，還具有產(chǎn)量大、結(jié)構(gòu)和活性多樣等特點(diǎn)，目 前已經(jīng)成為海洋微生物天然產(chǎn)物的研究熱點(diǎn)（Bugni T.S.et al.2013;Saleem M.et al.2013；Rateb M.E.2011；Blunt J.W.et al.2013)〇
[0003] 本發(fā)明的前期研究表明，深海真菌Dichotomomyces cejpii FS110的發(fā)酵液乙酸 乙酯粗提物具有很好的細(xì)胞毒和抗菌活性，因此我們對(duì)該深海真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了深 入的研究。
[0004] 化合物1，2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazino[l，2_ a]indole，其結(jié)構(gòu)如式（I)所示，其公開(kāi)于文獻(xiàn)"Wan-Ling Liang，Xiu Le，Hou-Jin Li，et al.Exploring the chemodiversity and biological activities of the secondary metabolites from the marine fungus Neosartorya pseudofischeri[J].Mar.Drugs, 2014,12(11):5657-5676. "中。


【發(fā)明內(nèi)容】
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[0006] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methy 1-3-methylene-1,4-dioxopyra zino[ 1，2_a]indole的制備方法。
[0007] -種化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazino [1，2-a] indole的制備方法，其特征在于，所述的化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl_3-methylene-1，4_dioxopyrazino[ 1，2_a] indole是從深海真菌Dichotomomyces cejpii FS110的發(fā)酵培養(yǎng)物中制備得到。
[0008] 優(yōu)選，具體步驟如下：
[0009] 制備Dichotomomyces cejpii FS110的發(fā)酵培養(yǎng)物，將該發(fā)酵培養(yǎng)物的發(fā)酵液和 菌絲體分離，發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層經(jīng)濃縮后得到浸膏；將浸膏過(guò)硅膠柱，先 用石油醚-乙酸乙酯從30:l，20 :l，10:l，7:l，9:2,3:l，2 :l，l:l，l:2v/v梯度洗脫，收集浸膏 被石油醚：乙酸乙酯=1: lv/v洗脫的餾分F13組分，F(xiàn)13組份過(guò)Sephadex LH-20,以二氯甲 燒：甲醇=1: lv/v洗脫，收集洗脫的餾分，再經(jīng)純化后得到化合物1，2,3,4-七61:瓜117(11'〇-2-methyl-3-methylene-l,4-dioxo pyrazino[1，2_a]indole。
[0010]所述的經(jīng)純化后得到化合物1，2,3,4-七61:瓜117(11'〇-2-11161:1171-3-11161:11716116-1，4-dioxo pyrazino[ 1，2-a]indole優(yōu)選是將洗脫的餾分過(guò)正相制備HPLC(YMC柱，流動(dòng)相:體積 比70: 30的n-hexa ne/EtOAc，流速10ml/min)，于保留時(shí)間tR= 16min處得到化合物1，2，3， 4-tetrahydr〇-2_meth yl-3-methylene-l,4-dioxo pyrazino[1，2_a]indole。
[0011] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供Dichotomomyces cejpii FS110在制備化合物1,2,3， 4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene_l，4_dioxopyrazino[ 1，2_a] indole中的應(yīng)用。 [0012] 本發(fā)明從Dichotomomyces cejpii FS110發(fā)酵培養(yǎng)物中分離得一個(gè)吲噪二酮哌嗪 類(lèi)化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazin。[ 1，2_a] indole。從而為化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene_l ,4-dioxopyrazino [1，2-a]indole的制備提供了一條途徑。
[0013] 本發(fā)明所涉及的深海真菌Dichotomomyces cejpii FS110公開(kāi)于文獻(xiàn):楊小M，陳 玉嬋，李浩華，章衛(wèi)民.23株海洋真菌的分子鑒定及其抗植物病原真菌和細(xì)胞毒活性研究 2014,（8): 132-137。該菌株本
【申請(qǐng)人】也持有，并保證自申請(qǐng)日起20年內(nèi)向公眾提供。
【附圖說(shuō)明】：
[0014] 圖1是化合物1的1H-NMR譜；
[0015] 圖2是化合物1的13C-NMR譜；
[0016] 圖3是化合物1的質(zhì)譜。
【具體實(shí)施方式】：
[0017] 以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0018] 實(shí)施例1:
[0019] 將活化的Dichotomomyces cejpii FS110接入含質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5%海鹽的馬鈴薯葡 萄糖(PD)液體培養(yǎng)基（即在每升PD培養(yǎng)基中含有15g的海鹽）中，28°C，120rpm，培養(yǎng)5d制得 種子液10L，將種子液以體積比10%的接種量接入含質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5%海鹽的PD液體培養(yǎng)基 中，28°C，120rpm，振蕩培養(yǎng)7d，而制得發(fā)酵培養(yǎng)物100L。將該發(fā)酵培養(yǎng)物的發(fā)酵液和菌絲體 分離，發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層經(jīng)濃縮后得到浸膏。將浸膏過(guò)硅膠柱，先用石油 醚-乙酸乙酯從30 :1，20:1，10:1，7:1，9:2,3 :1，2:1，1:1，1:2(V/V)梯度洗脫，再用乙酸乙酯 洗脫，最后用二氯甲烷：甲醇=5: l(v/v)洗脫;收集浸膏被石油醚：乙酸乙酯= 1:1洗脫的餾 分F13，該餾分過(guò)Sephadex LH-20柱，以二氯甲燒：甲醇= l:l(v/v)洗脫，收集洗脫的餾分， 然后過(guò)正相制備HPLC(YMC柱，n-hexane/EtOAc，70:30，流速10ml/min)，于tR= 16min得到化 合物1 (化合物1，2,3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazino[ 1，2_a] indole 3.2mg，）。
[0020] 化合物的H-NMR譜、13C-NMR譜和質(zhì)譜分別如圖1、2和3所示，經(jīng)質(zhì)譜和核磁共振波譜 分析，其結(jié)構(gòu)鑒定如下：
[0021] 化合物1具有以下理化和波譜特性：白色固體;ESMS m/z ATSDM+NaFjH-NMR (500MHz,DMS0-d6)5H:8.39(lH,dt ,J = 8.3,1.0Hz,H-6), 7.83( lH,dt,J = 8.0,1.0Hz,H-9), 7.56(lH,ddd ,J = 8.3,7.2,1.0Hz,H-7) ,7.53( lH,t,J = 〇· 5Hz,H-10) ,7.44( lH,ddd,J = 8.0,7.2,1.0Hz,H-8),5.95(lH,d ,J = 1.7Hz,H-3a), 5.45( lH,d,J=1.7Hz,H-3a), 3.31 (3H, s，H-2a).13C NMR( 125MHz，CDCl3)SH: 155.2(C-4), 154.7(C-1 ),138.0(03),135.9(C-9a), 129.2(C-5a),128.4(C-7),127.9(C-10a),125.8(C-8),123.1(C-9),117.3(C-6),115.6(C-10) ,106.3 (C-12)，29.9(C-2a)。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，該化合物波譜數(shù)據(jù)為與文獻(xiàn)（Wan-Ling 1^已即，父;[111^，!1011-了;[111^，6七&1.2014)報(bào)道化合物1，2,3,4-七61:抑117(11'0-2-11161:1171-3-methylene-1，4-dioxopyra zino[l，2_a]indole的一致，故鑒定化合物1為化合物1，2,3,4_ tetrahydr〇-2-methy1-3-methylene-1,4-dioxopyra zino[1,2~a]indole〇
[0022] 經(jīng)過(guò)上述方法分離的目標(biāo)化合物1為1,2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methy lene-1,4_dioxopyrazino[ 1,2_a] indole，其結(jié)構(gòu)式如式（I)所示：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種化合物I，2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4_dioxopyrazino[l， 2- a] indole的制備方法，其特征在于，所述的化合物1，2,3,4-七61:抑117(11'〇-21161:1171-3-methylene-1，4_dioxopyrazino[ I，2_a] indole是從深海真菌Dichotomomyces ce jpii FS110的發(fā)酵培養(yǎng)物中制備得到的。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，具體步驟如下： 制備Dichotomomyces cejpii FSllO的發(fā)酵培養(yǎng)物，將該發(fā)酵培養(yǎng)物的發(fā)酵液和菌絲 體分離，發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層經(jīng)濃縮后得到浸膏；將浸膏過(guò)硅膠柱，先用石 油醚-乙酸乙酯從30:1,20:1，10:1，7:1，9:2,3:1，2:1，l :l，l:2v/v梯度洗脫，收集浸膏被石 油醚：乙酸乙酯=1: lv/v洗脫的餾分F13組分，F(xiàn)13組份過(guò)Sephadex LH-20柱，以二氯甲燒： 甲醇=I: lv/v洗脫，收集洗脫的餾分，再經(jīng)純化后得到化合物1，2,3,4-七61:^117(11'〇-2-methy1-3-methylene-1，4_dioxo pyrazino[I，2_a]indole。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的經(jīng)純化后得到化合物1，2,3,4_ tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxo pyrazino[I，2_a]indole是將洗脫的饋分 過(guò)正相制備HPLC(YMC柱，流動(dòng)相:體積比70:30的正己烷/乙酸乙酯，流速10ml/min)，于保留 時(shí)間tR= 16min處得到化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxo pyrazino[I，2_a]indole。4·真菌Dichotomomyces cejpii FSl 10在制備化合物I，2，3，4-tetrahydr〇-2_methyl- 3- methylene-l，4_dioxopyrazino[ I，2_a] indole中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12P17/18GK105884782SQ201610251501
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年4月20日
【發(fā)明人】李浩華, 范震, 章衛(wèi)民, 孫章華, 劉洪新, 葉偉
【申請(qǐng)人】廣東省微生物研究所