專利名稱：二氫苯并吡喃酮類化合物及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥領域，涉及一類用于預防和治療腫瘤,骨質疏松，老年癡呆疾病的新二氫苯 并吡喃酮類化合物。
背景技術：
雌激素是一種由內分泌系統(tǒng)產生的類固醇類激素，它在生殖系統(tǒng)、骨組織、心血管、免 疫系統(tǒng)及中樞神經系統(tǒng)中都發(fā)揮著重要的作用[J. CellSci., 2003， 116 (4): 585 - 586]。 雌激素信號傳遞系統(tǒng)在調節(jié)細胞生長、分化和凋亡過程中都起到很大的作用。雌激素依賴型 腫瘤，如乳腺癌、卵巢癌和子宮內膜癌等的發(fā)生和發(fā)展都與雌激素有著密切的關系[J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 2002, 81 (1): 1-24; J. Mammary Gland Biol. Neoplasia, 1998， 3(1): 49-61; Curr. Drug Targets Immune. Endocr. Metabol. Disord. ， 2001, 1 (1): 1-12; Cancer Res. ， 1998， 58(23): 5367-5373, J. Psychiatry Neurosci., 2002,27(1): 1-27]，因此對雌激素受體的研究具有指導抗雌激素和雌激素受體拮抗劑等藥物的開發(fā)和應用 和指導對雌激素依賴型腫瘤等疾病的治療的重要意義[Nat. Rev. DrugDiscov.， 2004， 3 (11): 950-964]。
目前已知的雌激素受體分為a、P兩種亞型。雌激素受體a在1958年被Toft和Gorski 等人[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1966， 55 (6): 1574-1581]率先從老鼠子宮細胞中分離 得到，1986年Green [Nature, 1986, 320 (6058): 134-139]和Greene [Science, 1986, 231 (4742) : 1150-1154]等人克隆得到第一個分子量為66kDa的人雌激素受體ERa ; 1996年， Kuiper等[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93 (12): 5925-5930]從大鼠前列腺中克隆 得到另一種雌激素受體ERP。此后，Mosselman等人[FEBS Lett. 1996， 392 (1): 49-53] 從人睪丸組織中克隆得到不完整的人ERP ; 0gawa[Biochem, Biophys. Res. Co腿un. 1998， 243 (1): 122-126]和Moore等人[Biochem. Biophys. Res. Commun., 1998, 247 (1): 75-78] 相繼克隆得到完整的人ERe 。雌激素受體ERa與ERP亞型具有類似的序列組成[FEBS Lett. 2003, 546: 17-24, Biochem. Soc. Trans. 2003, 31: 56 - 59];它們都由三個獨立但又相 互作用的功能區(qū)組成位于N端的A/B區(qū)，中間的C區(qū)，以及C端的D/E/F區(qū)。N端的A/B 區(qū)是一個不依賴于配體的轉錄活化區(qū)(AF-1)，負責與共活化因子的結合以及轉錄激活相關的
靶基因(圖1)。 C區(qū)是DNA結合區(qū)，含有兩個鋅指結構，對于分子的二聚化以及和特定DNA序 列的結合至關重要。C端的D/E/F區(qū)是一個配體結合區(qū)，由它介導配體的結合，受體的二聚 化，核定位，以及配體依賴的轉錄活化功能(AF-2)。
根據傳統(tǒng)理論，雌激素通過與細胞漿或核內的雌激素受體(ER)結合并通過調節(jié)基因轉 錄而發(fā)揮生物功能。近十年來對雌激素信號通路又有了許多新的認識雌激素信號轉導途徑 包括細胞核途徑(經典途徑)和細胞膜途徑(非經典途徑)。因此雌激素的生物效應，并不完 全依賴于配體-受體的細胞核激活途徑，還可通過其他信號通路發(fā)揮作用。非經典雌激素信號 通路在不同細胞產生的效應各異，例如17e雌二醇(E2P)可通過膜信號通路及P38激酶和 PI3K激酶調節(jié)心肌細胞調亡，從而對心血管系統(tǒng)具有保護作用[Curr. Treat. Options Cardiovasc. Med. 2001, 3 (1): 67-79];此外，細胞內幾個重要的信號傳導通路如G-蛋白 信號通路、磷脂酶C，腺苷酸環(huán)化酶及MAPK等信號傳導通路都和非經典的雌激素膜信號通路 有相互作用[Trends in Endocrinol. Metabol., 2002, 13, 349-354]。人們廣泛認為血清中 的高水平雌激素通過經典及非經典雌激素信號傳導途徑刺激腺管上皮細胞的持續(xù)增生，從而 參與雌激素依賴型腫瘤，如乳腺腫瘤、子宮內膜癌及卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展。然而非經典雌激 素膜信號通路的作用目前尚不清楚。
Flouriot等[EMB0， 2001， 19: 4688-4700]的研究發(fā)現除了全長的ER-a 66外還有一個 缺失了第一個外顯子所編碼的173個氨基酸的ER-a同源異構體。這個新發(fā)現的分子量為 46kDa的ER-ci同源異構體被稱為ER-ct 46 ，而較早發(fā)現的分子量為66kDa的 ER-a [Nature, 1986, 320 (6058): 134-139; Science, 1986， 231 (4742): 1150-U54]就被 稱為ER-a66。該異構體缺失了 AF1功能區(qū)，但保持了其他功能區(qū)的完整性。進一步研究發(fā) 現ER- a 46能競爭性抑制ER- a 66的AF1的功能，而對AF2的作用沒有影響。
2005年另一個分子量為36kDa的全新的ER-ci的同源異構體被發(fā)現并克隆了，并將其命 名為ER-a 36[Biochem. Biophy. Res. Commu. 2005， 336: 1023 - 1027; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006， 103 (24): 9063-9068]。該異構體從存在于ER-a 66基因的第一個內含子 中的啟動子開始轉錄，經一小段外顯子后，利用ER- a 66的外顯子2-6進行編碼。因此，ER- a 36 缺失兩個轉錄功能區(qū)AFl和AF2，但保留了 DNA結合功能區(qū)和二聚化功能區(qū)，重要的是ER- a 36 激素配體結合區(qū)(ligand binding domain)缺失了 8-12螺旋區(qū)(helix)，從而完全改變了其與 激素配體結合的專一性和親和力(圖l)。因此，ER-a 36具有和ER-a 66及ER-P完全不同 的激素配體結合能力，為篩選針對ER-a36的特異性配體提供了結構基礎。
因ER- a 36缺失AFl和AF2功能區(qū)，ER- a 36本身缺失任何轉錄調節(jié)功能，但可以有效
地抑制ER-a 66介導的經典的雌激素核信號通路。ER-a36主要分布在細胞膜和細胞槳中，
少量分布于細胞核中。ER-a 36從而可通過非經典的雌激素膜信號傳導通路并經過MAPK/ERK 信號傳遞途徑刺激細胞分裂[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006, 103 (24): 9063-9068]。 ER-a 36在不同的雌激素依賴型腫瘤，如乳腺癌、卵巢癌和子宮內膜癌中皆有高表達。因此 ER-a 36介導的信號途徑可能參與了多種雌激素依賴型腫瘤的形成和發(fā)展。
本發(fā)明的目的是通過合成新的化合物，提供新的可以調節(jié)ER-a和-e生物傳導系統(tǒng)的 化合物，可以用于抗腫瘤，心臟疾病，骨質疏松和老年癡呆的作用.
式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合物<formula>formula see original document page 6</formula>其中R2為C「Ce烷基、C2-Ce鏈烯基、C2-Ce鏈炔基、或是其卣素取代基，或d-C6 烷氧基，C3-Ce環(huán)垸氧基，Ce—d。芳基，C「Ce烷?；琑凡可一起為一(CH2CH2)n—，n為l到
所述鹽為有機酸鹽或無機酸鹽。
所述有機酸酸鹽為枸櫞酸鹽，富馬酸鹽，草酸鹽，蘋果酸鹽，乳酸鹽，樟腦磺酸鹽，對 甲苯磺酸鹽或甲磺酸鹽。
無機酸鹽為鹽酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽或硝酸鹽。
優(yōu)選的化合物的例子為
(S) -2，3_二氫-7-羥基-2-(4-羥苯基)-6-[2- (二甲基氨基)乙基]-4H-l-苯并吡喃-4-酮。
(S) -2，3-二氫-7-羥基-2-(4-羥苯基)-6-[2- (l-吡咯垸基)乙基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮。
所述式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合物在制備治療因雌激 素受體ER-a亞型ER-a36， ER-a 46以及ER-a 66和ER-0亞型引起的疾病的藥物中的 應用。
所述式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合物是作為雌激素受體

發(fā)明內容
ER-a和ER-0亞型的調節(jié)劑。
所述藥物包括片劑，口嚼劑，膠囊劑，懸浮液劑，溶液劑。 所述疾病包括腫瘤，骨質疏松，哮喘，心臟疾病或老年癡呆。
所述腫瘤為乳腺癌，卵巢癌，子宮內膜癌，胃癌，結腸癌，前列腺癌，血癌和肺癌。
所述腫瘤為乳腺癌，前列腺癌。
所述腫瘤為乳腺癌。
本發(fā)明的化合物的合成，按下列合成路線制備
其中RnR2為d-Ce烷基即甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基，或是鹵素取代的垸 基，可以是C廠Ce鏈烯基即乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基，或是其取代的烯基， C2-Ce鏈炔基即乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基，或是其取代的炔基，或C「Cs烷氧
基，C3-C6環(huán)烷氧基，C6—d。芳基即苯基、芐基、二甲基苯基，乙基苯基，二乙基苯基，丙基
苯基，C廠C6垸?；琑凡可一起為_(CH2CH2)n_， n為l到5。
實驗表明正常乳腺上皮細胞表達少量ER-a36，而在700例乳腺癌的檢査中發(fā)現大約 39. 9%乳腺癌樣品高表達ER- a 36，且40%雌激素受體陰性的乳腺癌樣品雖不表達ER- a 66， 但可表達ER-a36。 ER- a 36也表達在100% ER-， PR- and HER-2+乳腺癌樣品.上述結果表 明ER-a36不僅參與ER陽性的乳腺癌的形成和發(fā)展，而且可能參與過去被認為是ER陰性 的乳腺癌的形成和發(fā)展。進一步研究表明，表達ER-a36的乳腺腫瘤預后極差，并對抗雌激 素藥物，如他莫昔芬的治療反應不強。
雌激素受體陰性的乳腺癌細胞系MDA-MB-231不表達ER-a 66，但高表達ER-a 36，而且 雌激素可促進MDA-MB-231細胞快速增殖。因此ER-a 36啟動的促細胞生長信號轉導可導致細
胞增殖。同時表達ER- a 66和ER- a 36的ER-陽性MCF7細胞，對雌激素刺激可產生更強增殖 反應，并對抗雌激素藥物如他莫昔酚有抵抗作用。
此外，研究表明，心臟疾病，骨質疏松和老年癡呆等疾病同ER-a36的生物功能有著直 接的關系.因此以ER-a36為靶點篩選藥物將提供一種新的篩選抗腫瘤，心臟疾病，骨質疏松 和老年癡呆藥物的途徑。
通過實驗證明，化合物(I)能殺死表達ERa66， ERa46和ERa36的乳腺癌細胞MCF7 細胞。而式(I)化合物也可作為雌激素受體ERa36的調節(jié)劑，用于治療因雌激素受體ERa 36的異常表達而引起的疾病，如腫瘤，骨質疏松，哮喘，心臟疾病或老年癡呆等病癥。


圖l雌激素受體的結構分區(qū)
圖2 ERa66， ER a 46和ER a 36在6個不同患者的乳腺癌組織中的表達。
1、正常乳腺組織2、浸潤性導管癌組織，3、浸潤性導管癌組織，4、浸潤性導管癌組織，
5、浸潤性小葉癌，6、浸潤性小葉癌，7、非浸潤性導管癌
圖3 在乳腺癌細胞MDA-MB-231中，抗ER a 36特異性抗體顯色情況
aER-a36，陽性結果顯示為綠色，DAPI，陽性結果顯示為藍色，聯合顯色者標注為"Merge"。 圖4 MCF7細胞經化合物1和化合物2處理后，存活細胞數量變化情況。 圖5化合物1和化合物2對僅表達ER a -36或ER a -66的HEK293細胞的ERK的活化情況。 圖6 MCF7細胞和MDA-MB-231細胞經化合物1和化合物2處理后，存活細胞數量變化情況。 圖7 MCF7細胞經化合物1和化合物2處理后，Western blot檢測ER a 66， ER a 46和ER a 36表達的情況。
具體實施方法
技術領域：
本發(fā)明中的化合物可通過下述方法和步驟制得
本發(fā)明的起始原料A從上海友思生物技術有限公司購買。 實施例1: (S) -2,3-二氫-7^羥基-2-(4-羥苯基)-6-[2- (l-吡咯烷基)乙基]-4H-1-苯并吡 喃-4-酮(化合物l)的制備 <formula>formula see original document page 9</formula>
化合物1
化合物B的制備
在-78° C下，化合物A (320mg， 1.0 mmol)溶于20毫升甲醇中，然后通20分鐘臭氧。去掉 冷卻浴，然后在上述混合液中加入0. 5 mL 二甲基硫醚，攪拌IO分鐘。去掉溶劑后，用柱 層析分離產品，得到產物B (260 mg， 88%). 化合物1的制備
化合物B (250mg， 0.71mmo1)，吡咯垸鹽酸鹽(252mg, 2.34腿o1)，乙酸鈉(107mg， 1.30 mmol)，氰基硼氫化鈉(80 mg， 1. 28 mmol)和甲醇(4 mL)的混合物在室溫下攪拌5小時。然 后在上述混合液中加入5毫升水并攪拌30分鐘。然后在上述混合液用乙酸乙酯萃取(3X10mL)。 合并萃取液，用無水硫酸鈉干燥，去掉溶劑后，粗產品用柱層析純化，得到產物化合物l(68mg， 27%)。 ！H NMR (acetone-浙300 MHz): S 7.47 (s， 1H)， 7.37 ((d， J = 8.1 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 8.7 Hz， 1H), 6.23 (s, 1H), 5.37 (dd, ■/尸2.7 Hz, /2= 12.6 Hz， 1H), 2.96-2.82(m， 8H), 2.61 (dd, /尸2.9Hz: 72= 16.7 Hz, 1H), 1.96-1.85 (m， 4H); MS (ESI):附/z 354.6 [M+H+].
實施例2: (S) -2，3-二氫-7-羥基-2-(4_羥苯基)-6-[2- (二甲基氨基)乙基]-4H-1-苯并吡 喃-4-酮(化合物2)的制備
<formula>formula see original document page 10</formula>化合物2
化合物B (120mg, 0.34腿ol)， 二甲基胺鹽酸鹽(65mg， 0.80誦ol)， 乙酸鈉(43mg, 0.52 mmol)，氰基硼氫化鈉(32mg， 0. 51腿ol)和甲醇(2mL)的混合物在室溫下攪拌8小時。然后 在上述混合液中加入5毫升水并攪拌30分鐘。然后在上述混合液用乙酸乙酯萃取(3X10mL)。 合并萃取液，用無水硫酸鈉干燥，去掉溶劑后，粗產品用柱層析純化，得到產物化合物l(45mg， 41%)。 NMR (acetone-必，300 MHz): S 7.48 (s, 1H), 7.37 ((d， /= 8.1 Hz, 1H), 6.89 (d， 《/= 8.7 Hz， 1H), 6.23 (s, 1H), 5.37 (dd, J尸2.7 Hz, 12.6 Hz, 1H), 2.96 (dd, J產12.8 Hz, 16.7 Hz， 1H): 2.84-2.80(m, 1H)， 2.74-2.72 (m, 1H), 2.62 (dd, J產2.9Hz, /2= 16.7 Hz， 1H)， 2.46 (s, 6H).; MS (ESI):附/z 328.6 [M+H+].
實施例3式(I)化合物的體外生物試驗
試驗3-1:
試驗方法含有不同患者乳腺癌組織蛋白的pre-blot濾膜片購至ProSci公司(Poway， CA)。 使用ER ct 36特異性的抗ER a 36抗體[ER- 36特異抗體(針對ER- 36 C-端的20個氨基酸) 是由Alpha Diagnostic International (San Antonio, TX)制備，可參閱Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006， 103 (24): 9063-9068]， HRP標記的二抗以及增強化學發(fā)光試劑(ECL， AmerSham Pharmacia Biotech)檢測濾膜片并顯色。該膜洗脫后，使用能同時檢測ER三種亞 型(ERa66， ERa46禾nERa36)的抗ER a抗體H222 (Novocastra Laboratories Ltd, UK) 檢測膜片。(見圖2)
試驗結果ERa 66， ERa 46和ER a 36在浸潤性導管癌(泳道2)、浸潤性小葉癌(泳道5) 和非浸潤性導管癌(泳道7)中表達。此外，ERa36在浸潤性導管癌(泳道4)和浸潤性小 葉癌(泳道6)中表達。泳道2和泳道3是來源于兩位不同患者的浸潤性導管癌。泳道5和 泳道6是來源于兩位不同患者的浸潤性小葉癌。該結果顯示ER a 36可以在ER a 66和ER a 46 表達陰性的乳腺癌中表達，而在正常乳腺組織中無表達(泳道l)。 試驗3-2:
試驗方法MDA-MB-231細胞系是公認的缺乏ER a 66和ER a 46表達的乳腺癌細胞系[Relevance
of breast cancer cell lines as models for breast tumors:' an update. Breast Cancer Research and Treatment 2004， 83: 249-289] MDA-MB-231細胞(購至ATCC細胞庫)傳代 置于8孔BI0C0AT玻片(BD Science Discovery Labware)，培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基，并在37°C， 5%C02的條件下培養(yǎng)12小時。使用無菌PBS沖洗兩遍，4X多聚甲醛(PBS 配制，PH7.4)在室溫固定30分鐘；然后用PBS洗，和0. 5% (v/v) Triton X-100破膜10 分鐘；PBS洗，3%血清在室溫封閉l小時；抗ERa36特異性抗體在室溫孵育l小時，含0. 5 % Triton X-100的PBS (PBST)洗三次；異硫氰酸熒光素(FITC)標記的熒光二抗孵育1小 時；PBST洗三次，PBS洗一次；防淬滅封片劑(Molecular Probes, Eugene, OR)封片。于 Nikon E600顯微鏡下觀察，使用MRC-1024激光共聚焦顯微鏡(Bio-Rad)拍攝圖像。(見圖3)
試驗結果在ER a 66和ER a 46表達陰性的的乳腺癌細胞MDA-MB-231中，抗ER a 36特異性 抗體顯色陽性(標注為aER-a36，陽性結果顯示為綠色)，并可以被用作免疫的多肽所阻斷。 細胞核使用4， 6-聯咪-2-苯基-lH-吲哚染色(標注為DAPI，陽性結果顯示為藍色)。聯合顯 色者標注為"Merge"。(圖中的+P印tide表明在實驗中加免疫源多肽來阻斷抗體)
試驗3-3:
試驗方法MCF7細胞系是高表達ER a 66， ER a 46和ER a 36的乳腺癌細胞系(Relevance of breast cancer cell lines as models for breast tumors: an update. Marc Lacroix, Guy Leclercq， Breast Cancer Research and Treatment 2004, 83; 249—289。) MCF7細胞(購 至ATCC細胞庫)培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基(Invitrogen)，在37。C和5% C02 的條件中培養(yǎng)12小時?；衔?和化合物2，通過DMS0溶解稀釋。MCF7細胞按IX 105的密度 接種于100腿直徑的培養(yǎng)皿中，由濃度為0 u m至25 u m的化合物1和化合物2處理兩周后， 使用血球計數器在顯微鏡下對存活的細胞進行計數。按照濃度進行分組，5個培養(yǎng)皿為一組。 (見圖4)圖示的是MCF7細胞經濃度分別為0um， 5um， 10ym， 15nm， 20ym禾卩25um的 化合物1和化合物2處理兩周后，細胞數目變化的表現。細胞計數的單位為1X104個。 試驗結果如圖所示，MCF7細胞經濃度為5um的化合物l和化合物2處理后活細胞數量明 顯下降。
試驗3-4:化合物1和化合物2對僅表達ER a -36或ER a -66的HEK293細胞的ERK的活化(見 圖5)
試驗方法HEK293， HEK 293/ER a -36 (HEK293細胞用ER- 36表達質粒轉染并高表達ER- 36
的細胞株)；HEK 293/ER a -66 cells (HEK293細胞用ER- 66表達質粒轉染并高表達ER- 66
的細胞株)在10%胚胎牛血清(FBS)和無酚紅的DMEM中，和5%C02， 37° C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 細胞在含5%活性碳處理的FBS的DMEM中培養(yǎng)24小時后，以2X107培養(yǎng)皿的密度接種在O 100 mm培養(yǎng)皿中。細胞在經過24小時后，加到無血清的DMEM介質中培養(yǎng)18小時。細胞然后DMSO 和化合物1或化合物2在10—15， 10,禾tl 10—6M (圖五中標為0, -15， -10， -6)處理10分 鐘。細胞用PBS洗兩次，收獲和裂解細胞，用針對磷酸化或非磷酸化ERK的抗體做Western blotting分析d
試驗結果化合物1和化合物2可活化表達ER-a36的293細胞中的MAPK/ERK磷酸化，但不 活化表達ER-a66的293細胞中的ERK磷酸化。這一結果表明式化合物1和化合物2可和ER-a36 特異性結合并活化下游ERK信號通道。
試驗3-5:
試驗方法
MDA-MB-231細胞系是公認的缺乏ER a 66和ER a 46表達的乳腺癌細胞系[Relevance of breast cancer cell lines as models for breast tumors: an叩date. /Breast Cancer Research and Treatment /2004， 83: 249-289] MDA-MB-231細胞禾口 MCF7細胞(購至ATCC 細胞庫)傳代置于六孔板中(BD Science Discovery Labware)，培養(yǎng)于含10%胎牛血清的 1640培養(yǎng)基，并在37。C， 5%C02的條件下培養(yǎng)至細胞密度70%—80%，加藥(20umol)培 養(yǎng)2 4禾Q 4 8小時，Trypsin消化細胞，轉移到15mL離心管中，1000rpm， 4。C離心5分鐘， 收細胞，PBS和l*binding buffer各洗一遍，然后用200uLlX binding buffer重懸于流氏 管中，每個樣品做兩個平行樣，每管加10uLAnnexin V室溫避光染色10分鐘，上機前1 分鐘每管加5uL， 50ug/mL' PI，上機檢測凋亡細胞比例.
MCF7細胞系是高表達ER a 66， ER a 46和ER a 36的乳腺癌細胞系(Relevance of breast cancer cell lines as models for breast tumors: an update. Marc Lacroix， Guy Leclercq， Breast Cancer Research and Treatment 2004， 83; 249-289。) MCF7細胞(購至ATCC細胞庫)培 養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基(Invitrogen)，在37。C和5% C02的條件中培養(yǎng)12 小時。加藥(20umol)培養(yǎng)2 4和4 8小時，Trypsin消化細胞，轉移到15mL離心管中， 1000rpm， 4'C離心5分鐘，收細胞，PBS和l*binding buffer各洗一遍，然后用200uLlX binding buffer重懸于流氏管中，每個樣品做兩個平行樣，每管加10 u LAnnexin V 室溫避 光染色10分鐘，上機前1分鐘每管加5 y L, 50 y g / mL PI，上機檢測凋亡細胞比例.
試驗結果
化合物1和化合物2能夠引起MCF7細胞發(fā)生凋亡(圖6)。 試驗3-6:
MCF7細胞經濃度為0 u m至25 u m的化合物1和化合物2處理后，免疫印跡法(Western blot) 檢測ERa66，禾B ERa 36表達的情況。(見圖7)。
試驗結果如圖所示，隨著化合物1和化合物2濃度的上升，ERci 66和ERa 36的表達發(fā)生 變化。然而高濃度的化合物1和化合物2能影響二者的表達。
權利要求
1、式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合物式(I)其中R1，R2為C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6鏈炔基、或是其鹵素取代基，或C1-C6烷氧基，C3-C6環(huán)烷氧基，C6-C10芳基，C1-C6烷酰基，R1R2可一起為-(CH2CH2)n-，n為1到5。
2、 根據權利要求1所述的式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合物， 其中所述鹽為有機酸鹽或無機酸鹽。
3、 根據權利要求2所述的式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合物， 所述有機酸酸鹽為枸櫞酸鹽，富馬酸鹽，草酸鹽，蘋果酸鹽，乳酸鹽，樟腦磺酸鹽，對 甲苯磺酸鹽或甲磺酸鹽。
4、 根據權利要求2所述的式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合物， 所述無機酸鹽為鹽酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽或硝酸鹽。
5、 根據權利要求1所述的式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合物， 其中(I)化合物為(S) _2,3-二氫-7-羥基-2-(4-羥苯基)-6-[2， (二甲基氨基)乙 基]-4H-l-苯并吡喃-4-酮。
6、根據權利要求1所述的式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合物，其中(I)化合物為(S) -2，3-二氫-7-羥基-2-(4-羥苯基)-6-[2- (l-吡咯烷基) 乙基]-4H-l-苯并吡喃-4-酮。
7、 權利要求1-6任一所述的式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽或溶劑合 物在制備治療因雌激素受體ER-a亞型和ER-e亞型引起的疾病的藥物中的應用，所述 ER-a亞型所括ER-a36， ER-a 46以及ER-a 66。
8、 根據權利要求7所述的應用，所述式(I)化合物或式(I)化合物的藥學上可接受的鹽 或溶劑合物是作為雌激素受體ER- a和ER- e亞型的調節(jié)劑。
9、 根據權利要求7所述的應用，所述藥物包括片劑，口嚼劑，膠囊劑，懸浮液劑，溶液劑。
10、 根據權利要求7所述的應用，所述疾病包括腫瘤，骨質疏松，哮喘，心臟疾病或老年2 癡呆。
11、 根據權利要求10所述的應用，所述腫瘤為乳腺癌，卵巢癌，子宮內膜癌，胃癌，結腸 癌，前列腺癌，血癌和肺癌。
12、 根據權利要求ll所述的應用，所述腫瘤為乳腺癌，前列腺癌。
13、 根據權利要求12所述的應用，所述腫瘤為乳腺癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及新合成的化合物“二氫苯并吡喃酮類化合物及其用途”屬于化學藥領域。通過實驗證明，化合物(I)能殺死表達ERα66，FRα46和ERα36的乳腺癌細胞MCF7細胞。而式(I)化合物也可作為雌激素受體ERα36的調節(jié)劑，用于治療因雌激素受體ERα36的異常表達而引起的疾病，如腫瘤，骨質疏松，哮喘，心臟疾病或老年癡呆等病癥。
文檔編號C07D311/00GK101200460SQ200710177628
公開日2008年6月18日 申請日期2007年11月19日 優(yōu)先權日2007年11月19日
發(fā)明者坤 孟, 靖 李 申請人:北京珅奧基醫(yī)藥科技有限公司