一種決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對照品的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種決明酮-8-0-f-D-吡喃葡萄糖苷對照品的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]決明酮-8-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，又名決明酮苷，屬于奈苷類化合物，英文名稱torachrysone-8-O-β-D-glucopyranoside，具有具有 α -葡萄糖苷酶抑制作用[Babu KS，et al.B10rg Med Chem Lett，2004，14:3841]、神經(jīng)保護作用[Xiang L，et al.TsinghuaSci Technol，2005，10:426]、促進毛發(fā)生長作用[Sun YN，et al.B10rg Med Chem Lett，2013，23:4801]和抗炎作用[Matsuda H，et al.B10rg Med Chem Lett，2000，10:323]。本案發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷具有明顯抑制黃嘌呤氧化酶活性，已申請中國發(fā)明專利(申請?zhí)?201510113689.3)。
[0003]決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷主要存在于虎杖、巴天酸模、尼泊爾酸模、戟葉酸模、何首烏、掌葉大黃、唐古特大黃、喜馬拉雅大黃、波葉大黃、長柱琉璃草、刺亦模、毛脈廖等植物中。其中虎杖收載于《中華人民共和國藥典》虎杖項下，何首烏收載于《中華人民共和國藥典》何首烏項下，掌葉大黃和唐古特大黃收載于《中華人民共和國藥典》大黃項下，但是目前無法從國內(nèi)外市場購得決明酮-8-0- β -D-吡喃葡萄糖苷對照品，未見有關(guān)植物中決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷含量測定的文獻報道。
[0004]2000年日本學者Matuda Η從波葉大黃根莖中分離鑒定出決明酮-8-0-β _D_吡喃葡萄糖苷[Matsuda H，et al.B10rg Med Chem Lett，2000，10:323]，米用的方法為甲醇提取物經(jīng)大孔吸附柱色譜、硅膠柱色譜、0DS柱色譜和高效液相柱色譜；2001年土耳其學者Demirezer G從巴天酸模根中分離鑒定出決明酮-8_0_ β _D_ R比喃葡萄糖苷[Demirezer
0,et al.Phytochemistry，2001，56:399-402]，采用的方法為甲醇提取物經(jīng)聚酰胺柱色譜、中低壓柱色譜和硅膠柱色譜；2001年中國學者原源從巴天酸模根中分離鑒定出決明酮-8-0- β -D-吡喃葡萄糖苷[原源，等.中國中藥雜志，2001，26:256]，采用的方法為80%乙醇提取經(jīng)有機溶劑萃取和硅膠柱色譜；2005年中國學者戚歡陽從毛脈寥根中分離鑒定出決明酮-8-0-β-D-吡喃葡萄糖苷[戚歡陽，等.中國藥學雜志，2005，11:819]，采用的方法為80%乙醇提取經(jīng)有機溶劑萃取、硅膠柱色譜、0DS柱色譜和S印hardex LH-20柱色譜；2006年中國學者張志國從何首烏根中分離鑒定出決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷[張志國，等.中國中藥雜志，2006，12: 1027]，采用的方法為90%乙醇提取經(jīng)有機溶劑萃取、硅膠柱色譜和S印hardex柱色譜；2013年中國學者曾涌從巴天酸模地上部位根中分離鑒定出決明酮-8-0-β-D-吡喃葡萄糖苷[曾涌，等.中藥材，2013，36:57]，采用的方法為95%乙醇提取經(jīng)有機溶劑萃取、硅膠柱色譜和聚酰胺柱色譜。上述分離方法均使用硅膠柱色譜，硅膠柱色譜目標成分分離周期長，重復性差；有機溶劑消耗量大，成本高；死吸附嚴重，產(chǎn)率低；同時未進行純度檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷對照品的制備方法。
[0006]本案發(fā)明人通過對虎杖化學成分進行細致深入的研究，發(fā)明了虎杖的根及根莖回流提取，提取物經(jīng)大孔吸附柱色譜和脫色樹脂柱色譜結(jié)合制備高效液相色譜制備決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷，經(jīng)純度檢測大于98 %，符合含量測定用中藥化學對照品的要求，因而完成了本發(fā)明。
[0007]本發(fā)明提供一種決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷對照品的制備方法，該方法包括以下步驟:
a)虎杖的根及根莖粗粉加50~90%乙醇回流提取，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；
b)將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂柱色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用50%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得決明酮-8-0-f-D-吡喃葡萄糖苷粗提取物；
c)將步驟b)獲得的決明酮-8-0-f-D-卩比喃匍萄糖苷粗提取物經(jīng)制備尚效液相色譜，色譜柱:十八烷基鍵合硅膠，流動相為48%體積甲醇和52%體積水，同步采用紫外檢測器檢測波長280nm監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得決明酮_8_0- β-Υ)~吡喃葡萄糖苷。
[0008]所述的虎杖的根及根莖粗粉回流提取溶劑優(yōu)選的濃度為80 %乙醇。
[0009]所述的大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂或弱極性大孔吸附樹脂，優(yōu)選大孔吸附樹脂為D101。
本發(fā)明制備的決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷經(jīng)es1-ms/h-nmr^c-nmi^hsqc^hmbc鑒定為決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷；經(jīng)高效液相色譜純度檢查，不同色譜柱和不同流動相梯度洗脫條件測定結(jié)果表明均為一個主色譜峰；以峰面積歸一化法和不加校正因子的主成分自身對照法測定質(zhì)量分數(shù)均大于98 %，符合含量測定用中藥化學對照品的要求。而且本發(fā)明方法分離周期短，具備可重復性，產(chǎn)率高，成本低。
【附圖說明】
[0010]
圖1為本發(fā)明制備的決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷的高效液相色譜條件Α純度檢查圖
圖2為本發(fā)明制備的決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷的高效液相色譜條件Β純度檢查圖
圖3為本發(fā)明制備的決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷的高效液相色譜條件C純度檢查圖
圖4為本發(fā)明制備的決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷的高效液相色譜峰面積歸一化法純度檢查圖
以下通過具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，并非對本發(fā)明的限定，依照本領(lǐng)域公知的現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的實施方式并不限于具體實施例。
【具體實施方式】
[0011]
實施例1
(1)虎杖藥材提取:取虎杖根及根莖粗粉1000g，加80%乙醇回流提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；
(2)柱色譜分離:提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂D101柱色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30 %乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用50 %乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得決明酮-8-0-β -D-啦喃葡萄糖苷粗提取物；
(3)制備高效液相色譜分離:決明酮-8-0-β-D-吡喃葡萄糖苷粗提取物加甲醇溶解，微孔濾膜(0.45 ^m)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱:十八烷基鍵合硅膠，流動相為48%體積甲醇和52%體積水，同步采用紫外檢測器檢測波長280nm監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷對照品0.52go
[0012]化合物結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù):
mp 151~153°C。ES1-MS m/z..407 [Μ - Η] , ^-NMR (CD30D，500 MHz) δ 6.98 (2H，s，H-4，5)，6.77 (1H，s，H_2)，5.07 (1H，d，/ = 7.7 Hz, H_l’ ),3.94 (1H，dd，/= 12.1，1.8 Hz，H-6，a)，3.84 (3H，s，3_0CH3)，3.75 (1H, dd, / = 12.1,5.6 Hz，H_6，b)，3.42?3.58(4H，m，H-2’~5’ ),2.58 (3H，s，Η_12)，2.27 (3H，s，H—13) ；13C-NMR (CD30D，125 MHz) δ208.1 (C-ll)，160.4 (C_3)，157.1 (C_l)，153.7 (C_8)，139.1 (C—10)，135.4 (C_6)，123.9(C-7)，120.3 (C-5)，110.3 (C_9)，104.4 (C_2)，104.3 (C_l，)，102.5 (C_4)，78.8 (C_5，)，78.1 (C-3，)，74.9 (C_2，)，71.3 (C_4，)，62.4 (C_6，)，56.0 (3_0CH3)，32.6 (C_12)，20.2(C-13)。
高效液相色譜純度檢測:
溶液的制備
精密稱取決明酮-8-0-β -D-吡喃葡萄糖苷適量，加50 %甲醇制成0.3414 mg -mL 1的溶液。
[0013]色譜條件
色譜條件A色譜柱為Zorbax SB_Cls，柱溫為25 °C，流動相為乙腈(A) -0.1%甲酸水(B)，梯度洗脫條件為:0 min (A 15%,Β 85%)—20 min (A 20%,B 80%)—35 min (A 30%，B 70%) — 80 min (A 30%，B 70%)，檢測波長為 236 nm，流速為 1.0 mL.min、
[0014]色譜條件B色譜柱為Zorbax SB_Cls，柱溫為25 °C，流動相為乙腈(A)_0.1%甲酸水(B)，梯度洗脫條件為:0 min (A 15%，Β 85%) — 20 min (A 30%，B 70%) — 80 min (A30%，B 70%)，檢測波長為 236 nm，流速為 1.0 mL.min、
[0015]色譜條件C色譜柱為Eclipse XDB_C1S，柱溫為25 °C，流動相為乙腈(Α)_0.1%甲酸水(Β)，梯度洗脫條件為:0 min (A 15%,Β 85%) — 20 min (A 30%,B 70%) — 80 min (A30%，B 70%)，檢測波長為 236 nm，流速為 1.0 mL.min、
[0016]方法與結(jié)果精密吸取10 piU注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，決明酮-8-0- β -D-吡喃葡萄糖苷為一個主色譜峰，色譜峰保留時間分別為:38.270 min、25.027min和24.674 min，色譜圖見附圖1?附圖3。
[0017]峰面積歸一化法純度檢測:
溶液的制備
精密稱取決明酮-8-0- β-V)-吡喃葡萄糖苷對照品適量，加50%甲醇制成3.4140mg.mL 1的溶液。
[0018]色譜條件
色譜柱為Zor