專利名稱：肽衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及針對(duì)孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)具有配體活性的新型肽及其用途。
通過(guò)這種激素和神經(jīng)遞質(zhì)與G蛋白偶聯(lián)型受體的相互作用維持體內(nèi)的平衡、對(duì)機(jī)體的生殖、個(gè)體的發(fā)育、代謝、生長(zhǎng)、神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、代謝系統(tǒng)的調(diào)解等起著重要的調(diào)節(jié)作用。現(xiàn)在已知在這種生物體內(nèi)機(jī)能的調(diào)節(jié)中，存在著各種各樣的激素和神經(jīng)遞質(zhì)的受體蛋白，它們對(duì)機(jī)體機(jī)能調(diào)解起著重要作用，然而作為未知的作用物質(zhì)(激素和神經(jīng)遞質(zhì)等)是否存在與其相對(duì)應(yīng)的受體，至今有很多地方不清。
近年來(lái)，利用G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白質(zhì)中的部分結(jié)構(gòu)顯示出氨基酸序列的類似性，根據(jù)聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction以下簡(jiǎn)稱PCR)已經(jīng)在探索編碼新的受體蛋白的DNA，如很多配體不明的，所謂孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白已經(jīng)被克隆出來(lái)(Libert，F(xiàn).，et al.Science，244，569-572，1989，Welch，S.K.，et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，209，606-613，1995，Marchese，A.，et al.，Genomics，23，609-618，1994，Marchese，A.，Genomics，29，335-344，1995)。另外，根據(jù)基因組DNA或cDNA的隨機(jī)順序決定，相繼發(fā)現(xiàn)了新的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(Nomura，N.，et al.，DNA Research 1卷、27-35頁(yè)、1994年)。然而，作為決定這些孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的配體，一般采取的方法是只能從G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)的類似性上推斷它們。但是，多數(shù)孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白在很多情況下與已知的受體同源性較低，除了已知配體的受體亞型外，實(shí)際上僅靠一級(jí)結(jié)構(gòu)的類似性推斷其配體是困難的。從另一方面來(lái)看，盡管從基因分析中發(fā)現(xiàn)了很多孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體，但是還存在很多與其對(duì)應(yīng)的未知配體，直到現(xiàn)在為止，真正鑒定出孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體配體的例子卻很少。
最近，有人報(bào)道，在動(dòng)物細(xì)胞中導(dǎo)入編碼孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白cDNA，從而發(fā)現(xiàn)了新的類鴉片肽(Reinsheid，R.K.et al.，Science、270卷、792-794頁(yè)、1995年、Menular，J.-C.，et al.，Nature 377卷、532-535頁(yè)、1995年)。但這時(shí)很容易從與已知G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的類似性上及組織分布中聯(lián)想到配體應(yīng)屬于類鴉片肽的家族。有關(guān)在生物體內(nèi)通過(guò)類鴉片受體作用研究和開發(fā)其物質(zhì)的歷史已久，并開發(fā)出各種的拮抗劑和激動(dòng)劑。至此，從人工合成化合物組群中找出針對(duì)受體的激動(dòng)劑，將激動(dòng)劑作為探針，在受體cDNA導(dǎo)入細(xì)胞中驗(yàn)證受體的表達(dá)后，再找出與激動(dòng)劑相同的具有細(xì)胞內(nèi)信息傳遞的活性物質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行純化，進(jìn)而確定配體的構(gòu)造。
另外，有人報(bào)道在CHO細(xì)胞中導(dǎo)入編碼蝸牛孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體(GRL104)的cDNA，在受體表達(dá)細(xì)胞中以特異細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度的上升作為指標(biāo)而鑒定出新的生理活性肽(Cox，K.J.A.，et al.，J.Neurosci.，17(4)，1197-1205，1997)，這個(gè)新生理活性肽具有已知的leucokinin高同源性，GRL104還具有與已知leucokinin的反應(yīng)性。在這些孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白中大致能被推定的配體幾乎沒(méi)有，尤其是在和已知的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白家族類似性低時(shí)，根本沒(méi)有配體的報(bào)道，所以推定配體是很難的。
關(guān)于孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體的報(bào)道之一是APJ(O′Dowd，B.F.，et al.，Gene，436，355-359，1993)。APJ與血管緊張素受體(AT1)同源性很低。針對(duì)APJ的天然配體和其部分肽，在Biochemical and BiophysicalReaearch Communications 251，471-476(1998)、WO 99/33976號(hào)(特願(yuàn)平10-220853號(hào))等中被描述，然而有關(guān)在天然型配體中進(jìn)行人工修飾形成的修飾物還處于未知的狀態(tài)(例如，將天然型配體中的1個(gè)至數(shù)個(gè)構(gòu)成氨基酸被其他氨基酸置換的修飾物，天然型配體1個(gè)至數(shù)個(gè)構(gòu)成氨基酸的側(cè)鎖被適當(dāng)?shù)娜〈〈男揎椢锏鹊?。

發(fā)明內(nèi)容
在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等部位表達(dá)的是針對(duì)孤兒G蛋白偶聯(lián)型受體APJ在天然型配體中采用人工的方法加入肽的修飾，該肽與天然型配體相比，被認(rèn)為在醫(yī)藥方面是有用的，然而直到現(xiàn)在與天然型配體相比作為藥物等有用的肽的構(gòu)造和機(jī)能還不清楚。
本發(fā)明人根據(jù)所述的課題，以該天然型配體修飾物的肽和上述受體蛋白結(jié)合性的變化作為指標(biāo)，合成各種新肽，通過(guò)聯(lián)想天然型配體的活性及特定部位，找到了作為藥物更為有用的天然型配體的修飾物。
即，本發(fā)明提供(1)以式(I)P1-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-P2-P3-Gly-Pro-P4-P5[式中、P1表示氫原子或者由相同或不同且側(cè)鏈可被取代的1-25個(gè)氨基酸組成的氨基酸殘基或肽鏈，P2表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基或側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，P3表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基、側(cè)鏈可被取代的芳香族氨基酸殘基或側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，P4表示結(jié)合鍵或側(cè)鏈可被取代的中性或芳香族氨基酸殘基，P5表示①側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基或者其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；陌被嵫苌?，②羥基或③側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基和側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌?，式-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-或-Gly-Pro-中的每個(gè)氨基酸殘基的側(cè)鏈均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其鹽；(2)根據(jù)(1)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中P1為氫原子、pGlu或Arg-Arg-Gln；(3)根據(jù)(2)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中P2為可被取代的His或可被取代的Ala；(4)根據(jù)(3)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中P3為可被取代的Arg或可被取代的Lys；(5)根據(jù)(1)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中-P4-P5為-Cha-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Phe或-Met-Phe；(6)如下表示的根據(jù)(1)中所述的肽①Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、②Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、③Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、④Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、⑤Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑥Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、⑦pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe或⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Phe，或其酯或其酰胺或其鹽；(7)以式(II)Q1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Q2-Gly-Q5-Q3-Q4[式中、Q1表示氫原子或者由相同或不同且側(cè)鏈可被取代的1-25個(gè)氨基酸組成的氨基酸殘基或肽鏈，Q2表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基、側(cè)鏈可被取代的芳香族氨基酸殘基或側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，Q3表示結(jié)合鍵或側(cè)鏈可被取代的中性或芳香族氨基酸殘基，Q4表示①側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基或者其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；陌被嵫苌铮诹u基或③側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基和側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌?，Q5表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基，式-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-中的每個(gè)氨基酸殘基的側(cè)鏈均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其鹽；(8)根據(jù)(7)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中Q1為氫原子、pGlu或Arg-Arg-Gln；(9)根據(jù)(7)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中Q2為可被取代的Arg或可被取代的Lys；(10)根據(jù)(7)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中-Q3-Q4為-OH、-Met、-Met-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Pro-Phe、-Cha-Pro-Phe(Cl)、-Ala-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Phe(Cl)或-Cha；(11)根據(jù)(7)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中Q5為可被取代的Pro、可被取代的Gly或可被取代的Ala；(12)如下表示的根據(jù)(7)中所述的肽(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(ii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(iii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、(iv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(v)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha、(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(vii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(viii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(ix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro、(x)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(xiii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xiv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Ala-Pro-Phe(Cl)、(xv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Met-Pro-Phe(Cl)、(xvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe-Ala-Met-Pro-Phe(Cl)、(xvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pyn、(xviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Pyn、(xix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Cha、或者(xx)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys(Me)2-Gly-Pro-Met-Pro-Phe，或其酯或其酰胺或其鹽；(13)以式(III)R1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-R2-Pro-R3[式中、R1表示氫原子或者由相同或不同且側(cè)鏈可被取代的1-25個(gè)氨基酸組成的氨基酸殘基或肽鏈，R2表示可被取代的Cha、可被取代的Met或可被取代的Nle，R3表示可被取代的Phe(Cl)、可被取代的Phe、可被取代的Nal(2)、可被取代的Cha或可被取代的Tyr，式-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro或-Pro-中的每個(gè)氨基酸殘基的側(cè)鏈均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其鹽；(14)根據(jù)(13)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中R1為氫原子、pGlu或Arg-Arg-Gln；(15)如下表示的根據(jù)(13)中所述的肽①Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、②Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、③Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、④pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、⑤pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、⑥Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr、⑦Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、或者⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Cha，或其酯或其酰胺或其鹽；(16)一種如下所示的肽(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met(O)、(ii)Arg-Arg-Lys(Arg-Arg)-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(iii)Arg-Arg-Arg-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(iv)Arg-Arg-Lys-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(v)Arg-Arg-Ala-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(vii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(viii)Arg-Arg-Phe-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(ix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(x)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(xi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(xii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Leu-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xiii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(xiv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Phe-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xvi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(xvii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(xviii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Phe-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Leu-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xx)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2、(xxi)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor、(xxii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Ala-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxiii)Arg-Pro-Arg-Ala-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxiv)Arg-Pro-Lys(Me)2-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xxv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)c-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、或者(xxix)Arg-Pro-Ala-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)，或其酯或其酰胺或其鹽；(17)一種含有(1)、(7)、(13)或(16)中所述的肽或其酯或其酰胺或其鹽的藥物；(18)根據(jù)(17)中所述的藥物，其為中樞神經(jīng)功能調(diào)節(jié)劑、循環(huán)功能調(diào)節(jié)劑、心臟功能調(diào)節(jié)劑、免疫功能調(diào)節(jié)劑、消化系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)劑、代謝功能調(diào)節(jié)劑或生殖系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)劑；(19)根據(jù)(17)中所述的藥物，其為預(yù)防或治療HIV感染或AIDS的藥物；(20)根據(jù)(17)中所述的藥物，其為含有SEQ ID NO19所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)或其鹽的作用劑；(21)一種如(1)、(7)、(13)或(16)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽在制備含有如(1)、(7)、(13)或(16)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽的藥物中的用途；以及(22)提供一種預(yù)防或治療HIV感染或AIDS的方法，其特征在于，將(1)、(7)、(13)或(16)中所述肽或其酯或其酰胺或其鹽投藥于哺乳動(dòng)物。
本發(fā)明又進(jìn)一步提供，(23)一種如(17)中所述的藥物，該藥物為預(yù)防或治療如下疾病癡呆、憂郁癥、多動(dòng)(微細(xì)腦障礙)綜合征、認(rèn)知障礙、不穩(wěn)定障礙、精神分裂癥、恐怖癥、生長(zhǎng)激素分泌缺陷、過(guò)食癥、貪食癥、高膽固醇血脂癥、高甘油酯血脂癥、高血脂癥、高催乳激素血脂癥、糖尿病、癌、胰腺炎、腎疾病、特納氏綜合征、神經(jīng)癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、脊髓損傷、暫時(shí)性腦缺血發(fā)作、肌肉萎縮性側(cè)索硬化癥、急性心肌梗塞、脊髓小腦變性癥、骨折、創(chuàng)傷、特應(yīng)性皮炎、骨質(zhì)疏松、哮喘、癲癇、不孕癥、動(dòng)脈硬化、肺氣腫、肺水腫、乳汁分泌不全等。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明中所說(shuō)的氨基酸殘基，就是指氨基酸失去水分子形成肽鍵，在蛋白質(zhì)或肽中的氨基酸殘基不包括N末端或C末端部分的構(gòu)造。例如，所說(shuō)α-氨基酸殘基是指，α-氨基酸(H2NC(R0)(R1)COOHR0及R1各自相同或不同，顯示任意的取代基)失去水分子形成肽鍵，在蛋白質(zhì)或肽中不包括N末端或C末端部分的-NHC(R0)(R1)CO-的構(gòu)造。另一方面，N末端的氨基酸殘基以H2NC(R0)(R1)CO-、C末端的氨基酸殘基以-NHC(R0)(R1)COOH表示。還有，所說(shuō)β-氨基酸是指(H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)COOHR0、R1、R2及R3表示各自相同或不同的任意取代基)失去水分子形成肽鍵，在蛋白質(zhì)或肽中不包括N末端或C末端部分的-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)CO-的構(gòu)造。另一方面，N末端的氨基酸殘基以H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)CO-表示、C末端的氨基酸殘基以-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)COOH表示。還有，所說(shuō)γ-氨基酸(H2NC(RO)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)COOHR0、R1、R2、R3、R4及R5各自相同或不同，表示任意的取代基)是指失去水分子形成肽鍵，在蛋白質(zhì)或肽中不包括N末端或C末端部分的-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)CO-的構(gòu)造。另一方面，N末端的氨基酸殘基以H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)CO-表示，C末端的氨基酸殘基以-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)COOH表示。更進(jìn)一步，所說(shuō)ε-氨基酸(H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)C(R6)(R7)C(R8)(R9)COOHR0、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8及R9各自相同或不同，表示任意的取代基)失去水分子形成肽鍵，在蛋白質(zhì)或肽中不包括N末端或C末端部分的-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)C(R6)(R7)C(R8)(R9)CO-的構(gòu)造。另一方面、N末端的氨基酸殘基表示H2NC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)C(R6)(R7)C(R8)(R9)CO-，C末端的氨基酸殘基表示-NHC(R0)(R1)C(R2)(R3)C(R4)(R5)C(R6)(R7)C(R8)(R9)COOH。
在本說(shuō)明書中，作為氨基酸有天然氨基酸或非天然氨基酸，D-構(gòu)型的氨基酸或L-構(gòu)型的氨基酸，也可有α-、β-、γ-、ε-型的氨基酸。
所述形成α-氨基酸、β-氨基酸、γ-氨基酸、ε-氨基酸側(cè)鏈的基團(tuán)，例如(1)C1-6烷基(如甲基、乙基、n-丙基、異丙基、n-丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、n-戊基等，但優(yōu)選C1-3烷基等)、(2)氰基、(3)鹵素(如氟、氯、溴、碘等)、(4)羥基-C1-6烷基(如羥甲基、羥乙基等)、(5)C1-6烷氧基(如甲氧基、乙氧基、n-丙氧基、異丙氧基、n-丁氧基、叔丁氧基等、優(yōu)選C1-3烷氧基等)、(6)C1-6烷氧基-羰基(如甲氧基羰基、乙氧基羰基、異丙氧基羰基、叔丁氧基羰基等，優(yōu)選C1-3烷氧基-羰基等)、(7)C1-4?；?如甲?；⒁阴；⒈；?、丁酰基等的甲?；约癈2-4烷酰等)、(8)羥基、(9)用式-S(O)a-R21(式中，a為0～2的整數(shù)，R21為C1-6烷基(具體可舉出與上述相同的例子))表示的基團(tuán)(如甲硫基、甲基亞磺酰、甲磺酰、乙硫基、乙基亞磺酰、乙磺酰等)、(10)芐氧羰基、(11)對(duì)甲苯磺?；?、(12)氨基甲基、(13)巰基、(14)氨基、(15)磺基、(16)膦?；?、(17)二氧磷基、(18)羧基、(19)四唑基、(20)氨基-C1-6烷基(如氨基甲基、氨基乙基等)、(21)氨基烯丙基、(22)噻唑啉基、(23)噻吩基、(24)噁唑基、(25)呋喃甲酰基、(26)吡喃基、(27)吡啶基、(28)pyrazyl基、(29)吡嗪基、(30)嘧啶基、(31)噠嗪基、(32)吲哚基、(33)indozinyl基、(34)異吲哚基、(35)吡咯基、(36)咪唑基、(37)異噻唑啉基、(38)吡唑基、(39)苯并吡喃基、(40)嘌呤基、(41)喹嗪基、(42)喹啉基、(43)異喹啉基、(44)喹唑啉基、(45)喹喔啉基、(46)噌啉基、(47)嗎啉基、(48)苯酰噻吩基、(49)苯并呋喃基、(50)苯并咪唑、(51)苯并咪唑基、(52)C3-8環(huán)烷基、(53)從上述(2)、(3)、(5)，從(17)、(20)中用(52)所述的取代基取代的C1-4烷基、(54)從上述(2)、(3)、(5)，從上述(17)、(20)中，用(52)所述的取代基取代的C1-4酰基如甲?；2-4烷酰等的、(55)從上述(1)中，用(52)所述的取代基取代的C6-10芳基如苯基等(基、甲苯基、二甲苯基、苯乙烯基等)、(56)從上述(1)中，用(52)所述的取代基取代的C7-15芳烷基如芐基等(甲基芐基、對(duì)甲氧基芐基等)、(57)C7-15芳烷基(芐基、苯乙基、二苯甲基、萘甲基等)、(58)C6-10芳基(苯基、萘基、茚基等)、以及(59)氫原子等。
又，氨基酸殘基的側(cè)鏈和氮原子的結(jié)合也可以形成環(huán)(如脯氨酸等)、也可以由2個(gè)側(cè)鏈結(jié)合形成環(huán)(如3-氨基降冰片烯羧酸等)。
作為α-氨基酸的例子有，例如，甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、組氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、脯氨酸、哌啶酸、己氨酸，γ-甲基亮氨酸，tert-亮氨酸，正纈氨酸，高精氨酸，高絲氨酸，α-氨基異丁酸，α-氨基丁酸，鳥氨酸、α-氨基己二酸、苯甘氨酸、噻吩甘氨酸、環(huán)己甘氨酸、環(huán)己丙氨酸、噻吩丙氨酸、萘基丙氨酸、聯(lián)苯丙氨酸、p-磷甲基苯丙氨酸、八羥基吲哚-2-羧酸、O-磷酪氨酸、金剛烷丙氨酸、苯基噻吩丙氨酸、吡啶丙氨酸、吡哌丙氨酸、吡嗪丙氨酸、喹啉丙氨酸、噻唑丙氨酸、同型半胱氨酸、同型苯丙氨酸、瓜氨酸、同型瓜氨酸、羥基脯氨酸(hydroxyproline)、α，β-二氨基丙酸、α，γ-二氨基丁酸、氨基丙二酸、1，2，3，4-四羥基異喹啉-3-羧酸、3-巰基纈氨酸、環(huán)亮氨酸、2-氨基-4-戊酸等。
所述β-氨基酸的例子有，例如β-丙氨酸、β-氨基丁酸、異天冬酰胺、3-氨基己二酸、3-氨基苯丙酸、3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸、3-氨基降冰片羧酸、3-氨基二環(huán)庚烷基羧酸等。
所述γ-氨基酸的例子有，例如γ-氨基丁酸、異谷氨酰胺、Statine、4-氨基-3-羥基-5-環(huán)己戊烷酸、4-氨基-3-羥基-5-苯基戊烷酸、6-氨基青霉烷酸、3-氨基金剛烷-1-羧酸等。
所述ε-氨基酸的示例有，例如、ε-氨基己酸、4-氨基甲基-環(huán)己羧酸等。
作為該天然氨基酸有，甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、組氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、脯氨酸、鳥氨酸、瓜氨酸等。
作為非天然氨基酸有，例如己氨酸、γ-甲基亮氨酸、tert-亮氨酸、正纈氨酸、高精氨酸、高絲氨酸、氨基異丁酸、氨基己二酸(如α-氨基己二酸)、苯基甘氨酸、噻吩甘氨酸、環(huán)己甘氨酸、氨基丁酸、β-丙氨酸、環(huán)己丙氨酸、噻吩丙氨酸、萘基丙氨酸、金剛烷丙氨酸、苯基噻吩丙氨酸、吡啶丙氨酸、哌啶丙氨酸、吡嗪丙氨酸、喹啉丙氨酸、噻唑丙氨酸、異天冬酰胺、異谷氨酰胺、同型半胱氨酸、同型苯丙氨酸、同型瓜氨酸、羥基脯氨酸(hydroxyproline)、二氨基丙酸、二氨基丁酸、氨基苯甲酸、所述天然氨基酸、非天然氨基酸的N-甲基化物等。
被取代為上述那些氨基酸殘基(的側(cè)鏈)的取代基有，(1)C1-6烷基(如甲基、乙基、n-丙基、異丙基、n-丁基、異丁基、sec-丁基、tert-丁基、n-戊烷基等，但優(yōu)選C1-3烷基等)、(2)氰基、(3)鹵素(如氟、氯、溴、碘等)、(4)羥基-C1-6烷基(如羥甲基、羥乙基等)、(5)C1-6烷氧基(如甲氧基、乙氧基、n-丙氧基、異丙氧基、n-丁氧基、tert-丁氧基等，優(yōu)選C1-3烷氧基等)、(6)C1-6烷氧基-羰基(如甲氧基羰基、乙氧基羰基、異丙氧基羰基、tert-丁氧基羰基等，優(yōu)選C1-3烷氧基-羰基等)、(7)C1-4?；?如甲?；?、乙酰基、丙酰基、丁酰基等的甲?；癈2-4烷酰等)、(8)羥基、(9)用式-S(O)a-R21(式中，a為0～2的整數(shù)，R21用C1-6烷基(具體可舉出與上述相同的例子)表示的基團(tuán)(如甲硫基、甲基亞磺酰、甲磺酰、乙硫基、乙基亞磺酰、乙磺酰等)、(10)芐氧羰基、(11)對(duì)甲苯磺?；?、(12)氨基甲基、(13)巰基、(14)氨基、(15)磺基、(16)膦?；?17)二氧磷基、(18)羧基、(19)四唑基、(20)氨基-C1-6烷基(如氨基甲基、氨基乙基等)、(21)氨基烯丙基、(22)噻唑啉基、(23)噻吩基、(24)噁唑基、(25)呋喃基、(26)吡喃基、(27)吡啶基、(28)pyrazyl基、(29)吡嗪基、(30)嘧啶基、(31)噠嗪基、(32)吲哚基、(33)indozinyl基、(34)異吲哚基、(35)吡咯基、(36)咪唑基、(37)異噻唑啉基、(38)吡唑基、(39)苯并吡喃基、(40)嘌呤基、(41)喹嗪基、(42)喹啉基、(43)異喹啉基、(44)喹唑啉基、(45)喹喔啉基、(46)噌啉基、(47)嗎啉基、(48)苯酰噻吩基、(49)苯并呋喃基、(50)苯并咪唑、(51)苯并咪唑基、(52)C3-8環(huán)烷基、(53)氧代基、(54)從上述(2)、(3)、(5)中，從(19)、(22)中用(52)所述的取代基取代的C1-4烷基、(55)從上述(2)、(3)、(5)，上述(19)、(22)中用(52)所述的取代基取代的的C1-4?；缂柞；?、C2-4烷酰等、(56)從上述(1)中，用(52)所述取代基取代的C6-10芳基如苯基等(基、甲苯基、二甲苯基、苯乙烯基等)、(57)從上述(1)中，用(52)所述的取代基取代的C7-15芳烷基如芐基等(甲基芐基、對(duì)甲氧基芐基等)、(58)C7-15芳烷基(芐基、苯乙基、二苯甲基、萘甲基等)、(59)C6-10芳基(苯基、萘基、茚基等)、(60)精氨?；?61)組氨?；约?62)精氨酰-精氨?；取?br> 所述中性取代基有，(1)C1-6烷基(如、甲基、乙基、n-丙基、異丙基、n-丁基、異丁基、sec-丁基、tert-丁基、n-戊烷基等，但優(yōu)選C1-3烷基等)、(2)氰基、(3)鹵素(如、氟、氯、溴、碘等)、(4)羥基-C1-6烷基(如、羥甲基、羥乙基等)、(5)羥基、(6)氨基甲?；?7)巰基、(8)用式-S(O)a-R21(式中符號(hào)所表示的意義同前)表示的基團(tuán)、(9)C6-10芳基(如苯基、萘基、茚基等)、(10)噻吩基、(11)噁唑基、(12)呋喃基、(13)吲哚基、(14)indozniyl基、(15)異吲哚基、(16)C3-8環(huán)烷基、(17)氧代基、(18)從上述(2)，(3)，(5)中，用(16)所述的取代基取代而來(lái)的C1-6烷基、(19)從上述(1)中，用(16)所述的取代基取代的C6-10芳基如苯基、萘基等(基、甲苯基、二甲苯基、苯乙烯基等)、(20)從上述(1)中，用(16)所述的取代基取代的C7-15芳烷基如芐基等(甲芐基、甲氧芐基等)。
所述酸性取代基，可列舉以下各種基團(tuán)分別用羧基、磺基、四唑基等取代的C1-4烷基、苯基、萘基等的C6-10芳基或芐基等的C7-15芳烷基、羧基。
所述堿性取代基包括，(1)氨基-C1-6烷基(氨基甲基、氨基乙基等)、(2)氨基丙烯基、(3)吡啶基、(4)pyrazyl基、(5)吡嗪基、(6)噠嗪基、(7)咪唑基、(8)吡唑基、(9)吡唑基、(10)嗎啉基、(11)氨基、(12)從上述(3)中用(10)所述的取代基取代的C1-4烷基、(13)從上述(1)中用(11)所述的取代基取代的C7-15芳烷基如芐基等、(14)從上述(1)中用(11)所述的取代基取代的C6-10芳基如苯基、萘基等、(15)精氨?；?、(16)組氨?；?17)精氨酰-精氨?；?。
在本說(shuō)明書中，作為酸性氨基酸(殘基)其氨基酸具體舉例為，例如，在側(cè)鏈上有羧基、磺基、四唑基之類的酸性基。作為其具體示例為谷氨酸、焦谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、3-(5-四唑基)丙氨酸、2-氨基-4-(5-四唑基)丁酸等。
在本說(shuō)明書中，作為堿性氨基酸(殘基)其氨基酸具體舉例為，例如，組氨酸、精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、二氨基丙酸、二氨基丁酸、高精氨酸等。作為側(cè)鏈被取代的堿性氨基酸(殘基)其具體地有，例如Nα-乙?；彼?、Nε-甲苯磺酰基精氨酸、Nε-乙?；嚢彼帷ε-甲基賴氨酸、Nε-甲苯磺酰基賴氨酸等。
在本說(shuō)明書中，作為中性氨基酸(殘基)其氨基酸具體舉例為，例如，丙氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、別異亮氨酸、己氨酸、T-亮氨酸、γ-甲基亮氨酸、脯氨酸、苯基甘氨酸、苯基丙氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、羥基脯氨酸(hydroxyproline)、環(huán)己丙氨酸、萘基丙氨酸等。
在本說(shuō)明書中，作為在側(cè)鏈上有芳香族性氨基酸(殘基)其氨基酸具體舉例為，例如，色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-噻吩丙氨酸、組氨酸、吡啶丙氨酸(2-吡啶丙氨酸)、O-甲基酪氨酸等。作為在側(cè)鏈上有側(cè)鏈被取代的芳香族性氨基酸(殘基)，其氨基酸的具體示列有，例如3-碘酪氨酸、p-磷甲基苯丙氨酸、O-磷酪氨酸等。
在本說(shuō)明書中，作為在側(cè)鏈上有羥基的氨基酸(殘基)有，例如絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、羥基脯氨酸(hydroxyproline)等。
本發(fā)明中的肽以及肽鏈，按照慣例肽的標(biāo)記描述，左端為N末端(氨基端)，右端為C末端(羧基端)。本發(fā)明的肽以及肽鏈其C末端通常為羧基(-COOH)或羧酸根(-COO-)，但是C末端也可以為酰胺(-CONH2)或酯化(-CO或)。其中所示酯中的R有，例如，C1-6烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、或正丁基等；C3-8環(huán)烷基包括環(huán)戊基和環(huán)己基等；C6-12芳基包括苯基和a-萘基等；C7-14芳烷基如苯基-C1-2烷基(如苯甲基、苯乙基、二苯甲基等)或a-萘基C1-2烷基(如a-萘甲基等)，此外還有通常適用于口服給藥的酯如三甲基乙酰氧甲基。
當(dāng)本發(fā)明的肽除了C末端以外還有羧基或羧酸根的時(shí)候，可被酰胺化或酯化，這些基團(tuán)也包括在本發(fā)明的多肽之內(nèi)。此時(shí)的酯可使用上述列出的C末端的酯等。
另外，在本發(fā)明的肽或肽鏈上也包括N末端氨基酸殘基的氨基用取代基(①C2-6烷酰基如甲?；?、乙酰基等、C1-8?；珉一阴；?、噻吩丙烯?；?、吡啶乙?；龋虎贑1-6烷基如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、sec-丁基、tert-丁基、戊基、己基等；③C6-10芳基如苯基、萘基等或C7-16芳烷基如芐基、苯乙基等；④甲苯磺?；?、⑤芐基氧基羰基、⑥以式-S(O)a-R22(式中，aは表示0～2的整數(shù)，R22表示C1-6烷基(具體示例包括與上述相同的基團(tuán)))表示的基(如，甲硫基、甲磺苯基、甲磺?；⒁伊蚧?、乙磺苯基、乙磺?；?、⑦t-丁氧基羰基、⑧N-9-芴基甲氧基羰基等)取代的衍生物；所述N末端在體內(nèi)切割，形成的谷氨?；构劝彼峄?；分子內(nèi)的氨基酸側(cè)鏈上的取代基(如-OH、-SH、氨基、咪唑基、吲哚基、胍基等)受適當(dāng)基團(tuán)(C1-6烷?；鏑1-6酰基，如甲酰基、乙酰基等)保護(hù)，或?yàn)榻Y(jié)合蛋白質(zhì)如通過(guò)糖鏈連接的糖蛋白質(zhì)等。
在上面所述的式(I)P1-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-P2-P3-Gly-Pro-P4-P5、式(II)Q1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Q2-Gly-Q5-Q3-Q4、及式(III)R1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-R2-Pro-R3中每個(gè)氨基酸殘基(側(cè)鏈)均可被取代，作為取代基，包括上面敘述過(guò)的取代基等。
在本說(shuō)明書中，P1、Q1及R1表示「氫原子或者各自相同或不同且側(cè)鏈可被取代的由1至25個(gè)氨基酸構(gòu)成的氨基酸殘基或肽鏈」。
所述在該「?jìng)?cè)鏈可被取代的1至25個(gè)氨基酸」中的取代基，包括與上述的「在氨基酸殘基的側(cè)鏈上可被取代的取代基」相同的取代基等。
當(dāng)P1、Q1以及R1表示「?jìng)?cè)鏈可被取代的氨基酸殘基」時(shí)，其優(yōu)選可被取代的焦谷氨酸或側(cè)鏈可被取代的谷氨酰胺，更優(yōu)選焦谷氨酸或谷氨酰胺等。
所述在這種「?jìng)?cè)鏈可被取代的氨基酸殘基」、「可被取代的焦谷氨酸」、「?jìng)?cè)鏈可被取代的谷氨酰胺」中的氨基酸殘基的取代基，包括與上述的「可被取代為氨基酸殘基的側(cè)鏈的取代基」相同的取代基等。
又，所述「可被取代的焦谷氨酸」其中優(yōu)選的取代基有，芐氧基羰基等。
P1、Q1及R1表示「各自相同或不同且側(cè)鏈可被取代的由2至25個(gè)氨基酸構(gòu)成的肽鏈」的時(shí)候，具體例子為，用式Y(jié)1-Y2(式中，Y1表示各自相同或不同且側(cè)鏈可被取代的由1至17個(gè)氨基酸構(gòu)成的氨基酸殘基或肽鏈，Y2表示各自相同或不同且側(cè)鏈可被取代的由1至8個(gè)氨基酸構(gòu)成的氨基酸殘基或肽鏈)表示的肽等。
用所述Y1及Y2表示的氨基酸殘基或肽鏈中的氨基酸殘基之側(cè)鏈的取代基，包括與上述的「在氨基酸殘基的側(cè)鏈上可被取代的取代基」相同的取代基等。
上述Y1的具體例子為，例如用(a)式A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中A1-A17表示各自相同或不同，其側(cè)鏈表示可被取代的氨基酸殘基)，(b)式A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(c)式A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(d)式A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(e)式A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A1 5-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(f)式A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(g)式A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(h)式A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(i)式A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(j)式A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(k)式A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(l)式A12-A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(m)式A13-A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(n)式A14-A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(O)式A15-A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)，(p)式A16-A17(式中符號(hào)表示的意義同上)或者(q)A17(A17表示的意義同上)表示的氨基酸殘基或肽鏈等。
上述A1は表示其側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選有芳香族側(cè)鏈的氨基酸殘基，更優(yōu)選有芳香族側(cè)鏈的L-氨基酸殘基，再優(yōu)選L-酪氨酸等。
上述A2及A3分別表示相同或不同，并且其側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選使用側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基，更優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的L-中性氨基酸殘基，再優(yōu)選A2為L(zhǎng)-酪氨酸等，A3為L(zhǎng)-纈氨酸等。
上述A4表示其側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的中性或堿性氨基酸殘基，更優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的L-中性或L-堿性氨基酸殘基，再優(yōu)選L-賴氨酸或Nε-乙酰賴氨酸等。
上述A5表示側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基，更優(yōu)選可被取代的L-脯氨酸，再優(yōu)選L-脯氨酸。
上述A6及A9分別表示相同或不同，并且其側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，更優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的L-堿性氨基酸殘基，再優(yōu)選L-精氨酸等。
上述A7及A10分別表示相同或不同，并且其側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選在側(cè)鏈上有羥基氨基酸殘基或側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基等。
所述A7優(yōu)選使用可被取代的甘氨酸，尤其優(yōu)選使用甘氨酸等。
上述A8表示側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選L-脯氨酸和在側(cè)鏈上有羥基的氨基酸殘基，更優(yōu)選L-絲氨酸、L-脯氨酸或羥基脯氨酸(hydroxyproline)。
作為上述A10優(yōu)選在側(cè)鏈上有羥基的氨基酸殘基側(cè)鏈或可被取代的中性氨基酸殘基，更優(yōu)選絲氨酸、蘇氨酸、天冬酰胺等。
上述A11至A14分別表示相同或不同并且側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選可被取代的中性氨基酸殘基，更優(yōu)選A11為甘氨酸，A12為L(zhǎng)-脯氨酸，A13為甘氨酸，A14為L(zhǎng)-丙氨酸，L-脯氨酸等。
上述A15表示側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選有芳香族性側(cè)鏈的氨基酸殘基，更優(yōu)選有芳香族性側(cè)鏈的L-氨基酸殘基，再優(yōu)選L-色氨酸等。
上述A16表示側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基，更優(yōu)選具有氨基甲?；闹行訪-氨基酸殘基，進(jìn)一步優(yōu)選L-谷氨酰胺。
所述具有氨基甲酰基的中性L-氨基酸殘基，例如L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺等。
A17表示側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基，更優(yōu)選甘氨酸等。
作為上述Y2的具體示例使用以下所示的氨基酸殘基或肽鏈等，例如①式B1-B2-B3-B4-B5-B6-B7-B8(式中B1至B8各自表示相同或不同并且側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基)，②式B2-B3-B4-B5-B6-B7-B8(式中各符號(hào)表示的意義同上)；③式B3-B4-B5-B6-B7-B8(式中各符號(hào)表示的意義同上)；④式B4-B5-B6-B7-B8(式中各符號(hào)表示的意義同上)；⑤式B5-B6-B7-B8(式中各符號(hào)表示的意義同上)；⑥式B6-B7-B8(式中各符號(hào)表示的意義同上)；⑦式B7-B8(式中各符號(hào)表示的意義同上)或⑧式B8(B8與上述表示的意義同上)。
上述B1は表示側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基，更優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的中性L-氨基酸殘基，進(jìn)一步優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的甘氨酸，最優(yōu)選甘氨酸等。
上述B2至B4表示各自相同或不同且側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，更優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的堿性L-氨基酸殘基，進(jìn)一步優(yōu)選B2為L(zhǎng)-精氨酸，B3為L(zhǎng)-精氨酸，B4為L(zhǎng)-賴氨酸等。
上述B5表示側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選有芳香族性側(cè)鏈的氨基酸殘基，更優(yōu)選有芳香族性側(cè)鏈的L-氨基酸殘基，進(jìn)一步優(yōu)選L-苯丙氨酸等。
上述B6及B7表示各自相同或不同且側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，更優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的堿性L-氨基酸殘基，進(jìn)一步優(yōu)選L-精氨酸等。
上述B8表示側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的谷氨酰胺，更優(yōu)選L-谷氨酰胺等。
作為Y1和Y2的組合為用上述式(a)+上述式①表示的時(shí)候(即，x1用A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-B1-B2-B3-B4-B5-B6-B7-B8表示的時(shí)候，省略下面組合的說(shuō)明)，可以舉出以下情形用上述式(a)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(a)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(a)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(a)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(a)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(a)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(a)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(b)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(b)+上述式②表示的時(shí)候，
用上述式(b)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(b)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(b)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(b)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(b)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(b)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(c)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(c)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(c)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(c)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(c)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(c)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(c)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(c)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(d)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(d)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(d)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(d)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(d)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(d)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(d)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(d)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(e)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(e)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(e)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(e)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(e)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(e)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(e)+上述式⑦表示的時(shí)候，
用上述式(e)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(f)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(f)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(f)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(f)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(f)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(f)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(f)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(f)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(g)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(g)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(g)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(g)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(g)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(g)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(g)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(g)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(h)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(h)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(h)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(h)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(h)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(h)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(h)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(h)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(i)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(i)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(i)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(i)+上述式④表示的時(shí)候，
用上述式(i)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(i)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(i)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(i)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(j)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(j)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(j)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(j)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(j)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(j)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(j)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(j)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(k)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(k)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(k)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(k)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(k)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(k)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(k)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(k)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(l)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(l)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(l)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(l)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(l)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(l)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(l)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(l)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(m)+上述式①表示的時(shí)候，
用上述式(m)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(m)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(m)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(m)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(m)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(m)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(m)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(n)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(n)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(n)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(n)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(n)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(n)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(n)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(n)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(o)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(o)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(o)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(o)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(o)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(o)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(o)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(o)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(p)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(p)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(p)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(p)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(p)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(p)+上述式⑥表示的時(shí)候，
用上述式(p)+上述式⑦表示的時(shí)候，用上述式(p)+上述式⑧表示的時(shí)候，用上述式(q)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(q)+上述式②表示的時(shí)候，用上述式(q)+上述式③表示的時(shí)候，用上述式(q)+上述式④表示的時(shí)候，用上述式(q)+上述式⑤表示的時(shí)候，用上述式(q)+上述式⑥表示的時(shí)候，用上述式(q)+上述式⑦表示的時(shí)候，及用上述式(q)+上述式⑧表示的時(shí)候，其中，優(yōu)選用上述式(a)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(b)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(c)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(d)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(e)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(f)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(g)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(h)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(i)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(j)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(k)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(l)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(m)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(n)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(o)+上述式①表示的時(shí)候，用上述式(p)+上述式①表示的時(shí)候，及用上述式(q)+上述式①表示的時(shí)候。
其中更優(yōu)選的例子有，用上述式(a)+上述式①表示的時(shí)候以及用上述式(b)+上述式①表示的時(shí)候。
用上述式(a)+上述式①表示的時(shí)候以及用上述式(b)+上述式①表示的時(shí)候，再優(yōu)選的例子有，如下所示。
所說(shuō)用上述式(b)+上述式①表示的時(shí)候，是指P1、Q1和/或R1用式A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-B1-B2-B3-B4-B5-B6-B7-B8(式中，A2至A17及B1至B8表示的意義同上)表示的情形，此時(shí)優(yōu)選的具體示例有時(shí)為A2及A3為各自相同或不同，側(cè)鏈可被取代的L-中性氨基酸殘基，優(yōu)選A2為L(zhǎng)-亮氨酸等，A3為L(zhǎng)-纈氨酸等，A4為側(cè)鏈可被取代的L-中性或L-堿性氨基酸殘基，優(yōu)選L-谷氨酰胺、L-賴氨酸或Nε-乙酰賴氨酸等，A5為側(cè)鏈可被取代的L-脯氨酸，優(yōu)選L-脯氨酸等，A6及A9為各自相同或不同，側(cè)鏈可被取代的L-堿性氨基酸殘基，優(yōu)選L-精氨酸等，A7為可被取代的甘氨酸，優(yōu)選甘氨酸等，A8為L(zhǎng)-脯氨酸或在側(cè)鏈上有羥基的氨基酸殘基，優(yōu)選L-絲氨酸、L-脯氨酸或羥脯氨酸(hydroxyproline)等，A10為在側(cè)鏈上有羥基的氨基酸殘基或側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基，優(yōu)選L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-天冬酰胺等，A11為甘氨酸，A12為L(zhǎng)-脯氨酸，A13為甘氨酸，A14為L(zhǎng)-丙氨酸或L-脯氨酸等，A15為具有芳香族側(cè)鏈的L-氨基酸殘基，優(yōu)選L-色氨酸等，A16為具有氨基甲酰的中性L-氨基酸殘基，優(yōu)選L-谷氨酰胺、A17為中性氨基酸殘基，優(yōu)選甘氨酸等，B1為其側(cè)鏈可被取代的中性L-氨基酸殘基，優(yōu)選可被取代的甘氨酸，更優(yōu)選甘氨酸等、B2至B4為各自相同或不同且側(cè)鏈可被取代的堿性L-氨基酸殘基，優(yōu)選B2為L(zhǎng)-精氨酸，B3為L(zhǎng)-精氨酸，B4為L(zhǎng)-賴氨酸等，
B5為具有芳香族側(cè)鏈的L-氨基酸殘基，優(yōu)選L-苯丙氨酸等，B6及B7為各自相同或不同且側(cè)鏈可被取代的堿性L-氨基酸殘基，優(yōu)選L-精氨酸等，B8為側(cè)鏈可被取代的谷氨酰胺，優(yōu)選L-谷氨酰胺、L-焦谷氨酸等。
作為P1、Q1及R1，優(yōu)選使用(1)氫原子、(2)Arg-Gln、(3)Arg、(4)Gln、(5)pGlu、或(6)Arg-Arg-Gln等。
進(jìn)一步，所述P1更優(yōu)選氫原子、pGlu或Arg-Arg-Gln，所述Q1更優(yōu)選氫原子、pGlu或ARg-Arg-Gln，所述R1更優(yōu)選氫原子、pGlu或Arg-Arg-Gln(再進(jìn)一步優(yōu)選氫原子或Arg-Arg-Gln)。
在本說(shuō)明書中，P2表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基或側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，但優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的L-丙氨酸、L-組氨酸等。
在本說(shuō)明書中，P3和Q2表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基、側(cè)鏈可被取代的芳香族氨基酸殘基或者側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基。所述對(duì)堿性氨基酸殘基側(cè)鏈的取代，包括有，C1-4?；?、甲苯磺?；?、C1-6烷基等。
所述C1-4?；?，例如有，甲?；⒁阴；?、丙?；?、丁?；纫约癈2-4烷酰等。
所述C1-6烷基，例如有甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、sec-丁基、tert-丁基、戊基、己基等。
所述P3和Q2，優(yōu)選側(cè)鏈可被取代的L-賴氨酸、側(cè)鏈可被取代的L-己氨酸、或側(cè)鏈可取代的L-精氨酸等，更優(yōu)選側(cè)鏈為C1-4?；?例如甲酰基、乙?；⒈；⒍□；鹊囊约癈2-4烷酰等)、C1-6烷基(例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、sec-丁基、tert-丁基、戊基、己基等)或用甲苯磺?；〈腖-賴氨酸、L-己氨酸或L-精氨酸等，更優(yōu)選L-賴氨酸、L-己氨酸、L-精氨酸、Nε-乙?；嚢彼?、Nε-甲酰基賴氨酸、Nε-甲苯磺?；嚢彼帷g-甲苯磺?；彼岬?。
進(jìn)一步，所述P3和Q2，優(yōu)選可被取代的L-精氨酸或可被取代的L-賴氨酸。
在本說(shuō)明書中，P4及Q3表示結(jié)合鍵或側(cè)鏈可被取代的中性或側(cè)鏈可被取代的芳香族氨基酸殘基。所述P4和Q3優(yōu)選結(jié)合鍵，側(cè)鏈可被取代的L-己氨酸、側(cè)鏈可被取代的L-甲硫氨酸、側(cè)鏈可被取代的L-甲硫氨酸硫氧化物或側(cè)鏈可被取代的L-丙氨酸等，更優(yōu)選包括結(jié)合鍵、L-己氨酸、L-甲硫氨酸、L-甲硫氨酸硫氧化物或者L-環(huán)己基丙氨酸等。
作為P4，特別優(yōu)選L-己氨酸、L-甲硫氨酸或L-環(huán)己基丙氨酸等。作為Q3特別優(yōu)選結(jié)合鍵、L-甲硫氨酸或L-環(huán)己基丙氨酸等。
在本說(shuō)明書中，P5及Q4表示①側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；陌被嵫苌?；②羥基或③側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基和側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌?。
所述P5及Q4優(yōu)選①側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；陌被嵫苌?；②羥基或③側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基和側(cè)鏈可被取代的具有芳香族側(cè)鏈的氨基酸殘基結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌锏?。
所述P5及Q4進(jìn)一步優(yōu)選①側(cè)鏈可被取代的L-脯氨酸或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；②側(cè)鏈可被取代的4-氯苯丙氨酸或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；③側(cè)鏈可被取代的2-萘基丙氨酸或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；陌被嵫苌?；④側(cè)鏈可被取代的環(huán)己丙氨酸或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；陌被嵫苌?；⑤羥基或⑥可被取代的L-脯氨酸和以下情形的氨基酸(a)側(cè)鏈可被取代的L-苯丙氨酸；(b)側(cè)鏈可被取代的L-酪氨酸；(c)側(cè)鏈可被取代的L-2-噻吩丙氨酸；(d)側(cè)鏈可被取代的L-苯基甘氨酸或(e)由側(cè)鏈可被取代的L-2-吡啶丙氨酸結(jié)合形成的二肽鏈，或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲酰基的肽衍生物等。
所述P5及Q4進(jìn)一步優(yōu)選如，(1)L-脯氨酸或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；(2)4-氯苯丙氨酸或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；(3)2-萘基丙氨酸或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；陌被嵫苌?；(4)環(huán)己丙氨酸或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲酰基的氨基酸衍生物；(5)羥基；(6)L-脯氨酸和L-苯丙氨酸結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌?；(7)由L-脯氨酸和L-酪氨酸結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌?；(8)L-脯氨酸和L-2-噻吩丙氨酸結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲酰基的肽衍生物；(9)L-脯氨酸和L-苯基甘氨酸結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌?；(10)L-脯氨酸和4-氯苯丙氨酸結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌?；(11)L-脯氨酸和2-萘基丙氨酸結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌?；(12)L-脯氨酸和3-碘酪氨氨酸結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌?；(13)L-脯氨酸和O-甲基酪氨酸結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲酰基的肽衍生物；或(14)L-脯氨酸和L-2-吡啶丙氨酸結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；碾难苌锏?。
所述「-P4-P5」及「-Q3-Q4」，特別優(yōu)選(1)-Nle-Pro-Phe、(2)-Nle-Pro-Tyr、(3)-Nle-Pro、(4)-Nle、(5)-Met-Pro-Phe、(6)-Nle-Pro-Thi、(7)-Nle-Pro-Phg、(8)-Nle-Pro-Pya(2)、(9)-Met(O)、(10)-Met-Phe(Cl)、(11)-Met-Pro-Phe(Cl)、(12)-Met-Pro-Nal(2)、(13)-Met-Nal(2)、(14)-Met-Cha、(15)-Cha-Pro-Phe、(16)-Cha、(17)-Met-Pro-Tyr(I)、(18)-Cha-Pro-Phe(Cl)、(19)-Cha-Phe(Cl)、(20)-Nle-Pro-Tyr(I)、(21)-Nle-Phe(Cl)、(22)-Cha-Pro-Tyr(I)、(23)-Cha-Tyr(I)、(24)-Cha-Phe、(25)-Met-Phe、(26)-Met-Pro-Tyr(Me)、(27)-OH、(28)-Met、(29)-Met-Pro-Phe、以及(30)-Ala-Pro-Phe(Cl)等。
另外，所述「-P4-P5」，優(yōu)選(1)-Cha-Pro-Phe(Cl)、(2)-Cha-Pro-Phe、(3)-Met-Pro-Phe(Cl)、(4)-Met-Pro-Phe(5)-Cha-Phe、以及(6)-Met-Phe，特別優(yōu)選(1)-Cha-Pro-Phe(Cl)、(2)-Cha-Pro-Phe、(3)-Met-Pro-Phe(Cl)、以及(4)-Met-Pro-Phe。再有，所述「-Q3-Q4」，特別優(yōu)選(1)-Met-Pro-Phe(Cl)、(2)-Cha-Phe(Cl)、(3)-Cha-Pro-Phe(Cl)、(4)-Cha、(5)-Cha-Pro-Phe、(6)-OH、(7)-Met、(8)-Met-Pro-Phe、以及(9)-Ala-Pro-Phe(Cl)。
在該說(shuō)明書中，Q5表示其側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基，優(yōu)選可被取代的L-脯氨酸，優(yōu)選可被取代的L-甘氨酸或可被取代的L-丙氨酸。
Q5特別優(yōu)選L-脯氨酸，L-甘氨酸或L-丙氨酸。
在說(shuō)明書中，R2表示可被取代的L-環(huán)己丙氨酸，優(yōu)選L-環(huán)己丙氨酸。
在本說(shuō)明書中，R3表示可被取代的L-苯丙氨酸，可被取代的L-2-萘基丙氨酸，可被取代的L-環(huán)己丙氨酸或可被取代的酪氨酸，優(yōu)選L-4-氯苯丙氨酸、L-2-萘基丙氨酸、L-環(huán)己丙氨酸、L-苯丙氨酸或L-酪氨酸。
本發(fā)明肽的具體示例包括(1)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(2)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(3)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(4)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、(5)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(6)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha、(7)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(8)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(9)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(10)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(11)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(12)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(13)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(14)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr、(15)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(16)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(17)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(18)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(19)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro、(20)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met(O)、(21)Arg-Arg-Lys(Arg-Arg)-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(22)Arg-Arg-Arg-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(23)Arg-Arg-Lys-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(24)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(25)Arg-Arg-Ala-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(26)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(27)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(28)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(29)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(30)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(31)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(32)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、(33)Arg-Arg-Phe-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(34)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(35)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(36)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(37)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、(38)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Leu-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(39)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、(40)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(41)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(42)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(43)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Phe-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(44)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(45)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(46)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(47)Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Phe、(48)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Phe-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(49)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Cha、(50)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Leu-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(51)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2、(52)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor、(53)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Ala-Pro-Phe(Cl)、(54)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Met-Pro-Phe(Cl)、(55)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-N-MeAla-Met-Pro-Phe(Cl)、(56)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Ala-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(57)Arg-Pro-Arg-Ala-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(58)Arg-Pro-Ala-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(59)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)-NH2、(60)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pyn、(61)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Pyn、(62)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Cha、(63)Arg-Pro-Lys(Me)2-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(64)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys(Me)2-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(65)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(66)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(67)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、以及(68)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)等。
所述用上述式(I)P1-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-P2-P3-Gly-Pro-P4-P5表示肽或其酯或其鹽的具體示例包括①Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、②Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、③Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、④Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、⑤Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑥Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、⑦pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Phe。
所述用上述式(II)Q1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Q2-G1y-Q5-Q3-Q4表示肽或其酯或其鹽的具體示例包括(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(ii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、(iii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)、(iv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(v)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha、(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、(vii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(viii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(ix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro、(x)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met、(xiii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xiv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Ala-Pro-Phe(Cl)、(xv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Met-Pro-Phe(Cl)、(xvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe-Ala-Met-Pro-Phe(Cl)、(xvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pyn、(xviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Pyn、(xix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Cha、或(xx)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys(Me)2-Gly-Pro-Met-Pro-Phe。
所述用上述式(III)R1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-R2-Pro-R3(III)表示肽或其酯或其鹽的具體示例包括①Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、②Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、③Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、④pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe、⑤pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)、⑥Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr、⑦Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)、⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Cha。
進(jìn)一步，本發(fā)明還涉及下列所示的肽或其酯或其鹽(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met(O)、(ii)Arg-Arg-Lys(Arg-Arg)-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(iii)Arg-Arg-Arg-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(iv)Arg-Arg-Lys-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(v)Arg-Arg-Ala-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(vii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(viii)Arg-Arg-Phe-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(ix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(x)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)、(xi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(xii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Leu-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xiii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(xiv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Phe-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xvi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha、(xvii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)、(xviii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Phe-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Leu-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xx)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2、(xxi)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor、(xxii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Ala-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxiii)Arg-Pro-Arg-Ala-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxiv)Arg-Pro-Lys(Me)2-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe、(xxv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)c-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、(xxviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)、或(xxix)Arg-Pro-Ala-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)。
作為本發(fā)明肽鹽可以使用與生理上可接受的堿(如堿金屬等)或酸(無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸)形成的鹽，優(yōu)選生理上可接受的酸加成鹽。這類的鹽有，與無(wú)機(jī)酸(例如，鹽酸、磷酸、氫溴酸、硫酸)形成的鹽，或與有機(jī)酸(例如，乙酸、甲酸、丙酸、延胡索酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、草酸、苯甲酸、甲磺酸、苯磺酸)形成的鹽等。
本發(fā)明制備的肽方法，可從人或溫血?jiǎng)游锏慕M織或細(xì)胞中將肽純化得到天然型配體之后，按照后述的肽合成法加以適當(dāng)?shù)男揎椂?，也可不以天然型配體作為原材料按照后述的肽合成法制備得到。
另外，當(dāng)從人或溫血?jiǎng)游锝M織或細(xì)胞中制備天然型配體時(shí)，首先將人或溫血?jiǎng)游锝M織或細(xì)胞勻漿，然后用酸等抽提，通過(guò)鹽析、透析凝膠過(guò)濾、反向?qū)游觥㈦x子交換層析、親和層析法等多種層析技術(shù)的聯(lián)用來(lái)分離純化該抽提物。
天然型配體的獲得方法可以按照，如，WO 99/33976號(hào)(特願(yuàn)平10-220853號(hào))描述的方法制備而得。
本發(fā)明的肽可用公知的肽合成方法制備。其肽的合成法，例如可以用固相合成法和液相合成法中的任意一種。即，當(dāng)能夠構(gòu)成肽的那部分肽或氨基酸與其殘余部分縮合，其產(chǎn)物有保護(hù)基時(shí)，通過(guò)除去保護(hù)基團(tuán)可以制備目的肽。此時(shí)的公知縮合方法或除去保護(hù)基團(tuán)方法例如在下列1)-5)中均有描述1)M.Bodanszly和M.A.Ondetti肽的合成，Interscience Publishers，紐約(1966)2)Schroeder和Luebke肽，Academic Press，紐約(1965)3)泉屋信夫等多肽合成的基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)，丸善公司(1975)4)矢島治明和榊原俊平生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教材1，蛋白質(zhì)化學(xué)IV，205(1977)5)矢島治明主編藥物開發(fā)續(xù)篇，卷14，肽合成，廣川書店反應(yīng)完成后，可將常規(guī)純化方法如溶劑提取、蒸餾、柱層析、液相層析以及重結(jié)晶等進(jìn)行組合以純化分離本發(fā)明肽。當(dāng)用上述方法獲得的肽為游離形式時(shí)，可以用公知的方法或其改良方法將所述肽轉(zhuǎn)化為相應(yīng)鹽；當(dāng)所述肽以鹽形式獲得時(shí)，可以用公知的方法或改良方法將其轉(zhuǎn)化為游離形式。
關(guān)于受保護(hù)的氨基酸或者肽的縮合反應(yīng)，可以使用可用于肽合成的各種活性試劑，但尤其優(yōu)選，三磷鎓類、四甲基脲類、碳二亞胺類等。所述三磷鎓類，有苯并三唑-1-基氧三螺旋吡咯烷基磷鎓六氟磷酸鹽(PyBOP)、溴三螺旋吡咯烷基磷鎓六氟磷酸鹽(PyBroP)、所述四甲基脲類，有2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，l，3，3-四甲基脲四氟硼酸酯、2-(5-降冰片烯-2，3-碳二亞胺)-1，1，3，3-四甲基脲四甲基硼酸酯、O-(N-琥珀酰胺基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸酯、所述碳二亞胺類，有DCC、N，N′-二異丙基碳二亞胺、N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙酯)碳二亞胺等。在這些縮合當(dāng)中，優(yōu)選添加外消旋抑制劑(例如，HONB、HOBt、HOOBt等)。縮合反應(yīng)的溶劑選自已知可用于肽縮合反應(yīng)的溶劑。這樣的溶劑有酰胺類如無(wú)水或含水的N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺以及N-甲基吡咯烷酮等；鹵化烴類如二氯甲烷和氯仿等；醇類如三氟乙醇等；亞砜類如二甲亞砜等；叔胺類如吡啶等、醚類如二噁烷和四氫呋喃等；腈類如乙腈和丙腈等；酯類如乙酸甲酯和乙酸乙酯等；以及這些溶劑的適當(dāng)混合物。反應(yīng)溫度從已知適用于肽成鍵反應(yīng)的范圍中選取，通常選約-20℃-50℃。活化的氨基酸衍生物通常以過(guò)量1.5～4倍的量使用。用茚三酮反應(yīng)檢驗(yàn)所述縮合反應(yīng)程度；當(dāng)所述縮合不充分時(shí)，可通過(guò)不除去保護(hù)基團(tuán)而重復(fù)縮合反應(yīng)來(lái)完成。當(dāng)即使重復(fù)反應(yīng)后仍未充分縮合時(shí)，用乙酸酐或乙酰咪唑?qū)⑽捶磻?yīng)的氨基酸乙?；韵龑?duì)后續(xù)反應(yīng)的可能負(fù)影響。
用于該肽合成時(shí)保護(hù)初始氨基的保護(hù)基團(tuán)有，例如Z、Boc、叔戊氧基羰基、異冰片基氧羰基、4-甲氧芐氧羰基、Cl-Z、Br-Z、金剛烷(adamantyl)氧基羰基，三氟乙?；⑧彵蕉柞；?、甲?；?、2-硝基苯基亞硫?；?、二苯硫膦基，以及Fmoc等。其羧基的保護(hù)基團(tuán)有，例如R除了所述的C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C7-14芳烷基外，還有2-金剛烷基、4-硝基芐基、4-甲氧芐基、4-氯芐基、苯甲酰甲基，芐氧羰基酰肼基、叔丁氧羰基酰肼基以及三苯甲基酰肼基等。
絲氨酸以及蘇氨酸的羥基可以通過(guò)例如酯化作用或醚化作用來(lái)保護(hù)。適于酯化作用的基團(tuán)有低級(jí)C2～4烷?；缫阴；?，芳?；绫郊柞；?，以及來(lái)自有機(jī)酸的基團(tuán)如芐氧羰基和乙氧羰基。適于醚化的基團(tuán)有苯甲基、四氫吡喃基和叔丁基、三苯甲基(Trt)等。
適于保護(hù)酪氨酸中酚羥基的基團(tuán)有，例如Bzl、Cl2-Bzl、2-硝基芐基、Br-Z和叔丁基等。
適于保護(hù)組氨酸中咪唑基的基團(tuán)有，Tos、4-甲氧-2，3，6-三甲基苯磺?；?Mtr)、DNP、Bom、Bum、Boc、Trt和Fmoc等。
作為精氨酸的胍基保護(hù)基，有Tos，Z，4-甲氧基-2，3，6-三甲苯磺?；?Mtr)，p-甲氧苯磺酰基(MBS)，2，2，5，7，8-五甲基色滿-6-磺?；?Pmc)，均三甲苯-2-磺?；?Mts)、2，2，4，6，7-五甲基二羥基苯基呋喃-5-磺?；?Pbf)、Boc、Z、NO2等。
作為賴氨酸側(cè)鏈上氨基的保護(hù)基，有Z，Cl-Z，三氟乙酰、Boc、Fmoc、Trt、Mtr、4，4-二甲基-2，6-二氧環(huán)亞己基(dioxocyclohexylideneale)(Dde)等。
作為色氨酸的吲哚保護(hù)基，有甲?；?For)、Z，Boc、Mts、Mtr等。
作為天冬酰胺、谷氨酰胺的保護(hù)基，Trt，呫噸基(Xan)、4，4’-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、2，4，6-三甲氧芐基(Tmob)等。
初始氨基酸中的活化羧基有相應(yīng)的酸酐、疊氮化物、活化酯(帶有醇的酯(如五氯苯酚、2，4，5-三氯苯酚、2，4-二硝基酚、氰甲基醇、對(duì)硝基苯酚、HONB，N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基鄰苯二甲酰亞胺、HOBt)。將初始物質(zhì)中待活化氨基酸的氨基活化時(shí)，可以使用其相應(yīng)磷酰胺。
為了除去(脫離)保護(hù)基，在氫氣流下用Pd-黑或Pd-碳等催化劑進(jìn)行催化還原；用氫氟酸酐、甲磺酸、三氟甲磺酸、三氟醋酸、溴化三甲磺酰硅烷(TMSBr)、三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯、四氟硼酸、三(三氟)硼、三溴化硼或這些酸的混合液進(jìn)行酸處理；用二異丙基乙胺、三乙胺、哌啶或哌嗪等堿進(jìn)行堿處理；以及用液態(tài)氨中的鈉還原等。用上述酸處理除去所述保護(hù)基團(tuán)的反應(yīng)通常在約-20℃～40℃進(jìn)行。在酸處理中，添加陽(yáng)離子清除劑以使反應(yīng)有效進(jìn)行，例如使用甲氧基苯、苯酚、硫代甲氧基苯、間甲酚、對(duì)甲酚或二甲基硫化物、1，4-丁二硫醇或1，2-乙二硫醇。此外，用苯硫酚處理以除去已知可作為組氨酸中咪唑的保護(hù)基團(tuán)的2，4-二硝基苯基。用作色氨酸中吲哚的保護(hù)基團(tuán)的甲?；孟率龇椒ㄈコ?，2-乙二硫醇或1，4-丁二硫醇存在時(shí)用上述酸進(jìn)行處理，以及用氫氧化鈉稀溶液和稀氨水等堿進(jìn)行處理。
與起始物質(zhì)之反應(yīng)無(wú)關(guān)的官能團(tuán)的保護(hù)、保護(hù)基的選擇、該保護(hù)基的消除、以及與上述反應(yīng)有關(guān)的官能團(tuán)的活化，從公知的基團(tuán)和公知的方法中適當(dāng)選擇。
獲得目標(biāo)肽的酰胺體的其它方法有，如使用酰胺物合成樹脂合成固相或?qū)Ⅳ然┒税被岬摩?羧基酰胺化加以保護(hù)；然后，將肽鏈從氨基側(cè)延伸至預(yù)期長(zhǎng)度。然后，制備只將其中N-末端α-氨基的保護(hù)基團(tuán)除去的肽以及只將其中C-末端羧基的保護(hù)基團(tuán)除去的肽(或氨基酸)。將這兩種肽濃縮在上述溶劑的混合液中。濃縮反應(yīng)的細(xì)節(jié)同上。對(duì)濃縮所得被保護(hù)肽進(jìn)行純化后，通過(guò)上述方法除去所有的保護(hù)基團(tuán)，獲得所需粗制肽。該粗制肽可用各種已知的純化方法進(jìn)行純化。凍干主要級(jí)分獲得所需肽的酰胺物。
為了得到肽的酯物將羧基末端氨基酸的α-羧基與所要的乙醇類縮合，形成氨基酸酯以后，與肽酰胺物相同可以得到所要的肽酯物。
本發(fā)明肽也可進(jìn)一步與功能或性質(zhì)眾所周知的蛋白質(zhì)相結(jié)合形成的結(jié)合蛋白。
本發(fā)明中的肽可以用于；①探索本發(fā)明肽所具有的生理作用；②利用重組型受體蛋白的表達(dá)系統(tǒng)而進(jìn)行受體結(jié)合分析系統(tǒng)的開發(fā)和篩選藥物制品增補(bǔ)化合物；③開發(fā)新藥，例如中樞神經(jīng)功能調(diào)節(jié)劑、循環(huán)功能調(diào)節(jié)劑、心臟功能調(diào)節(jié)劑、免疫功能調(diào)節(jié)劑、消化系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑、代謝功能調(diào)節(jié)劑或者生殖系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)劑等。
尤其是通過(guò)使用后述的重組型G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的表達(dá)系統(tǒng)而結(jié)合受體分析系，可以篩選人等溫血?jiǎng)游锾禺惖腉蛋白偶聯(lián)型受體-激動(dòng)劑或拮抗劑，該激動(dòng)劑或拮抗劑可用作治療或預(yù)防各種疾病的藥物。
再者，關(guān)于上述③，本發(fā)明的肽就是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、心臟、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、代謝系統(tǒng)或生殖系統(tǒng)等中由表達(dá)的G蛋白質(zhì)偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)作為配體進(jìn)行識(shí)別，因此安全、低毒性可用作藥物。本發(fā)明肽涉及中樞神經(jīng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、循環(huán)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、心臟機(jī)能調(diào)節(jié)作用、免疫機(jī)能調(diào)節(jié)作用、消化系統(tǒng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、代謝機(jī)能調(diào)節(jié)作用或生殖系統(tǒng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用等，所以將上述激動(dòng)劑或拮抗劑可以用作治療或預(yù)防以下疾病的藥物，例如疾病包括老年性癡呆、腦血管性癡呆、起因于系統(tǒng)變性型的變性疾病(diseases of system degenerative type)(如阿耳茨海默病、巴金和森氏病、皮克病、亨廷頓病等)的癡呆、起因于感染性疾病(如克-雅病等的遲發(fā)性病毒感染癥等)的癡呆、起因于內(nèi)分泌性·代謝性·中毒性疾病(如甲狀腺機(jī)能低下癥、維生素B12缺乏癥、酒精中毒、各種藥物中毒·金屬中毒·有機(jī)化合物中毒等)的癡呆、起因于腫瘤性疾病(如腦腫瘤等)的癡呆、起因于外傷性疾病(如慢性硬膜下血腫等)的癡呆病、憂郁癥、多動(dòng)(微細(xì)腦障礙)綜合征、認(rèn)識(shí)障礙、不安障礙、精神分裂癥、恐怖癥、生長(zhǎng)激素分泌障礙(如巨人癥、末端肥大癥等)、過(guò)食癥、貪食癥、高膽固醇血癥、高甘油酯血癥、高脂血癥、高催乳激素血癥、糖尿病(如糖尿病性并發(fā)癥、糖尿病性腎病、糖尿病性神經(jīng)障礙、糖尿病性視網(wǎng)膜病等)、癌癥(如乳癌、淋巴性白血病、肺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌等)、胰腺炎、腎病(如慢性腎減退、腎炎等)、特納氏綜合征、神經(jīng)癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、脊髓損傷、暫時(shí)性腦缺血發(fā)作、肌肉萎縮性側(cè)索硬化、急性心肌梗塞、脊髓小腦變性、骨折、創(chuàng)傷、特應(yīng)性皮炎、骨質(zhì)疏松、哮喘、癲癇、不孕癥、動(dòng)脈硬化、肺氣腫、肺水腫或乳汁分泌減弱等疾病。本發(fā)明肽還可進(jìn)一步用作改善術(shù)后營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的藥物、升壓藥等。
除此之外，還可用作治療或預(yù)防HIV感染、AIDS(Acquired ImmuneDeficiency Syndrome后天性免疫低下綜合征)等的藥物。
當(dāng)本發(fā)明用作上述的藥物時(shí)，可以按照常規(guī)方法進(jìn)行實(shí)施。例如，必要時(shí)加糖衣或腸溶性膜制成片劑、膠囊、酏劑、微膠囊等劑型口服，或以可注射型制劑如與水或其它可藥用液體組合的無(wú)菌溶液或懸浮液形式經(jīng)非胃腸道給藥。例如，該化合物或其鹽與生理學(xué)上可接受的已知載體、調(diào)味劑、賦形劑、載色劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、粘合劑等制成藥劑常用的單位劑型。控制制劑中的活性成分使得在給定范圍內(nèi)獲得合適劑量。
可與片劑、膠囊等混合的添加劑包括，粘和劑如明膠、玉米淀粉、西黃耆膠和金合歡膠；賦形劑如結(jié)晶纖維素；膨脹劑如玉米淀粉、明膠和藻酸；潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂；甜味劑如蔗糖、乳糖和糖精；加味劑如薄荷、akamono oil和櫻桃。當(dāng)單位劑型為膠囊形式時(shí)，可進(jìn)一步將液體載體如油和脂肪同上述添加劑一起使用。可根據(jù)常規(guī)制藥方法制備注射用無(wú)菌組合物，例如將活性成分與天然植物油如芝麻油和椰子油等溶解或懸浮在載體，如注射用的水溶液來(lái)制備藥物。
用于注射的液體介質(zhì)的例子包括，生理鹽水、含有葡萄糖和其它輔助制劑(如D-山梨醇、D-甘露醇和氯化鈉等)的等滲溶液，并可以進(jìn)一步同合適的助溶劑如醇(如乙醇等)、聚醇(如丙二醇和聚乙二醇等)、非離子表面活性劑(如聚山梨酸酯80(TM)和HCO-50等)等結(jié)合使用。油性介質(zhì)有芝麻油和豆油，它們可與助溶劑如苯甲酸芐酯和苯甲醇結(jié)合使用。
此外，上述的治療/預(yù)防制劑可進(jìn)一步與緩沖液(例如，磷酸鹽緩沖液和乙酸鈉緩沖液等)、鎮(zhèn)靜劑(例如苯扎氯胺和鹽酸普魯卡因等)、穩(wěn)定劑(如人血清白蛋白、聚乙二醇等)、防腐劑(例如苯甲醇、酚等)、抗氧化劑等結(jié)合使用。由此制備的注射液一般裝在合適的無(wú)菌的安瓿中。如此所獲制劑安全、低毒，因此可投藥于哺乳動(dòng)物(例如，人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、綿羊、豬、牛、貓、狗、猴、黑猩猩等、)。
本發(fā)明肽的劑量依賴于癥狀等而異，一般來(lái)說(shuō)，在對(duì)成人HIV感染癥患者(體重60kg)口服給藥時(shí)，正常劑量為大約0.1-100mg/天，優(yōu)選大約1.0-50mg/天，更優(yōu)選大約1.0-20mg/天；在對(duì)成人HIV感染癥患者(體重60kg)非胃腸道給藥時(shí)，單位劑量依賴于給藥對(duì)象、靶器官、癥狀和給藥方法等而變，但優(yōu)選活性成分靜脈注射，劑量為大約0.01-30mg/天，優(yōu)選大約0.1-20mg/天，更優(yōu)選大約0.1-10mg/天。對(duì)于其它動(dòng)物種類，可以按每60kg體重?fù)Q算相應(yīng)給藥劑量。
作為上述本發(fā)明肽的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白，包括來(lái)自人或溫血?jiǎng)游?如哺乳溫血?jiǎng)游?兔子、綿羊、山羊、大鼠、小鼠、豚鼠、牛、馬、豬)，鳥類(如雞、鴿、鴨、鵝、鵪鶉)等)的所有組織(例如垂體、胰腺、腦、腎臟、肝臟、生殖腺、甲狀腺、膽囊、骨髓、腎上腺、皮膚、肌肉、肺、消化道、血管、心臟等)或細(xì)胞等的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白，例如，只要含有與SEQ ID NO19表示的氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列即可。即，作為G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白，除了本說(shuō)明書中的SEQ ID NO19表示的含有氨基酸序列的蛋白質(zhì)等以外，可舉出以下蛋白質(zhì)等具有與本說(shuō)明書中的SEQ ID NO19表示的氨基酸序列同源性約有90～99.9％的氨基酸序列，并且與本說(shuō)明書中的SEQ ID NO19表示的具有氨基酸序列的蛋白質(zhì)活性實(shí)質(zhì)相同的蛋白質(zhì)。
所述蛋白質(zhì)的活性，有配體結(jié)合活性、信號(hào)傳遞活性等。所說(shuō)基本上相同是指配體結(jié)合活性等性質(zhì)相同。因此，配體結(jié)合活性的強(qiáng)弱，受體蛋白的分子量等其量的要素可以不同。
進(jìn)一步，對(duì)于G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白來(lái)說(shuō)，包括N末端Met的保護(hù)基團(tuán)使用(例如C1-6?；鹊腃2-6烷酰基等，烷?；柞；?、乙?；?保護(hù)的；Gln的N端部在機(jī)體內(nèi)切割，被焦谷氨酸化的；分子內(nèi)的氨基酸殘基的側(cè)鏈用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)(例如C1-6?；鹊募柞；?、乙?；?保護(hù)進(jìn)行，還包括結(jié)合蛋白該蛋白由糖鏈結(jié)合形成的所謂糖蛋白等。
作為G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的鹽，有與上述相同的肽鹽。
G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白或其鹽或其部分肽，可以從人或溫血?jiǎng)游锏慕M織或細(xì)胞根據(jù)本領(lǐng)域公知的蛋白質(zhì)純化方法制造，也可以按照前面敘述的肽合成法制造。
所述G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的部分肽，在G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白分子中，可使用露出細(xì)胞膜外的部分等。也就是說(shuō)，包含在分析G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白疏水端中細(xì)胞外區(qū)域(親水性(Hydrophilic)部位)的部分肽。另外，也可用含有該疏水性(Hydrophobic)部位的含有部分肽?？墒褂妹總€(gè)結(jié)構(gòu)域分別包含在每個(gè)肽中的肽，但也可是同時(shí)包含多個(gè)結(jié)構(gòu)域的部分肽。
所述G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的部分肽之鹽，可使用與上述相同的肽之鹽。
所述編碼G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的DNA，只要在本說(shuō)明書中含有與SEQ ID NO19氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列并含有編碼G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的堿基序列均可。它們可以是基因組DNA、基因組DNA文庫(kù)、來(lái)自組織·細(xì)胞的cDNA、來(lái)自組織·細(xì)胞的cDNA文庫(kù)、合成DNA。用于文庫(kù)的載體可以是噬菌體、質(zhì)粒、粘粒、噬粒等。另外，使用依組織·細(xì)胞制得的RNA級(jí)分直接根據(jù)公知的RT-PCR法進(jìn)行擴(kuò)增。
具體地說(shuō)，作為含有本說(shuō)明中以SEQ ID NO19所示的氨基酸序列而編碼G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的DNA，可以使用本說(shuō)明書中含有以SEQID NO20所示的堿基序列DNA等。
關(guān)于本發(fā)明肽或其鹽(以下，簡(jiǎn)稱為本發(fā)明肽等)等的用途，如下詳細(xì)說(shuō)明。(1)配體肽缺陷癥的預(yù)防藥物或治療藥物針對(duì)G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的本發(fā)明肽等所具有的作用來(lái)說(shuō)，將本發(fā)明肽等可以用于治療或預(yù)防配體肽或G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)缺陷癥的藥物。
例如，當(dāng)有的患者在機(jī)體內(nèi)，由于G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)減少，配體的生理作用(中樞神經(jīng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用，循環(huán)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、心臟機(jī)能調(diào)節(jié)作用、免疫機(jī)能調(diào)節(jié)作用、消化系統(tǒng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、代謝機(jī)能調(diào)節(jié)作用或者生殖系統(tǒng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用等)無(wú)法進(jìn)行的時(shí)候，通過(guò)本發(fā)明肽等投藥于該患者，促使該患者的體內(nèi)的配體肽量的增加，可以充分發(fā)揮配體肽的作用。因此，本發(fā)明肽安全低毒，可以用作配體肽缺陷癥的預(yù)防或治療藥物等。(2)針對(duì)G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)配體肽的定量法本發(fā)明肽等針對(duì)G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或其鹽以及該受體蛋白的部分肽或其鹽具有結(jié)合性，因此，可以在體內(nèi)將G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或其鹽或該受體蛋白的部分肽或其酰胺或其酯或其鹽定量為合適的敏感濃度。
所述該G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的部分肽，可使用在G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)分子中，露出細(xì)胞膜外的部位等。也就是說(shuō)，包含在分析G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白疏水端中細(xì)胞外區(qū)域(親水性(Hydrophilic)部位)的部分肽。另外，也可用該疏水性(Hydrophobic)部位的含有部分肽。也可使用每個(gè)結(jié)構(gòu)域分別包含在每個(gè)肽中的肽，但也可是同時(shí)包含多數(shù)結(jié)構(gòu)域的部分肽。
G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)部分肽的酰胺、酯獲得方法與上述本發(fā)明肽的酰胺或酯的獲得方法相同。另外，所述G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)部分肽之鹽，可以使用與上述本發(fā)明肽的鹽相同。
本定量法，也可與競(jìng)爭(zhēng)法結(jié)合起來(lái)一起使用。
也就是說(shuō)，使被檢體與本發(fā)明肽等接觸，從而測(cè)定被檢體中的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或其鹽，或者G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的部分肽或其酰胺、其酯或其鹽的濃度。更具體地說(shuō)，可以按照如下①或②等所描述的本領(lǐng)域公知的方法或其改良的方法。①入江寬編「放射免疫分析」(講談社、昭和49年發(fā)行)②入江寬編「放射免疫分析」續(xù)編(講談社、昭和54年發(fā)行)(3)改變G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)和本發(fā)明肽等結(jié)合特性的化合物的篩選方法使用G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或其鹽，或者使用該部分肽或其酰胺或其酯或其鹽，或者利用由重組型構(gòu)建G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的表達(dá)系通過(guò)利用該表達(dá)系的受體結(jié)合分析系統(tǒng)，可以篩選使本發(fā)明肽和G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)之間的結(jié)合特性發(fā)生變化的化合物(如，肽、蛋白質(zhì)、非肽性化合物、合成化合物、發(fā)酵產(chǎn)物等)或其鹽。這種化合物包括，具有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)介導(dǎo)的細(xì)胞刺激活性(例如，促進(jìn)或抑制花生四烯酸釋放、乙酰膽堿釋放、細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放、細(xì)胞內(nèi)cAMP產(chǎn)生、細(xì)胞內(nèi)cGMP產(chǎn)生、磷酸肌醇的產(chǎn)生、細(xì)胞膜電位變化、細(xì)胞內(nèi)蛋白磷酸化、c-fos的激活和pH的降低等的活性)的化合物(G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)激動(dòng)劑)；和不具有該細(xì)胞刺激活性的化合物(即G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)拮抗劑)。所謂[能使結(jié)合特性發(fā)生變化]包含兩種情況，一種情況是抑制與本發(fā)明肽之間的結(jié)合，另一種情況是促進(jìn)與本發(fā)明肽之間的結(jié)合。
也就是說(shuō)，本發(fā)明提供一種篩選化合物或其鹽的方法，該化合物或其鹽改變G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)和本發(fā)明肽等結(jié)合特性，其特征在于，比較以下兩種情形(i)使本發(fā)明肽等與G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或其鹽或該受體蛋白的部分肽或其鹽接觸；(ii)使本發(fā)明肽等及待測(cè)化合物與上述G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或其鹽或該受體蛋白的部分肽或其酰胺、其酯或其鹽接觸。
在本發(fā)明的篩選方法中，當(dāng)以下兩種情形存在時(shí)，即(i)使本發(fā)明肽等與上述的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或該受體蛋白的部分肽接觸；(ii)使本發(fā)明肽等及待測(cè)化合物與上述G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或該受體蛋白的部分肽接觸，針對(duì)該G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或該受體蛋白的部分肽與本發(fā)明肽等結(jié)合時(shí)測(cè)定并比較其結(jié)合量、細(xì)胞刺激活性等。
更具體地，本發(fā)明提供了①一種篩選方法，該方法是篩選一種化合物或其鹽，該化合物或其鹽能使本發(fā)明肽等和G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)結(jié)合性發(fā)生變化，其特征為，使一標(biāo)記的本發(fā)明肽等與上述G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或其鹽或G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的部分肽或其酰胺、其酯或其鹽接觸的時(shí)候，和使標(biāo)記的本發(fā)明肽等及待測(cè)化合與G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)其鹽或G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的部分肽或其酰胺、其酯或其鹽接觸的時(shí)候，測(cè)定并比較針對(duì)標(biāo)記的本発明肽等的該G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或其鹽或該部分肽或其酰胺、其酯或其鹽的結(jié)合量；②一種篩選方法，該方法是篩選一種化合物或其鹽，該化合物或其鹽能使本發(fā)明肽等和G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)之間的結(jié)合特性發(fā)生變化，其中包括，使一標(biāo)記的本發(fā)明肽同含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的細(xì)胞或該細(xì)胞的膜級(jí)分接觸時(shí)，和使一標(biāo)記的本發(fā)明肽等及待測(cè)化合物與含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的細(xì)胞或該細(xì)胞的膜級(jí)分接觸時(shí)，測(cè)定并比較同該細(xì)胞或該細(xì)胞膜級(jí)分結(jié)合的標(biāo)記本發(fā)明肽等的量；③一種篩選方法，該方法是篩選一種化合物或其鹽，該化合物或其鹽能使本発明肽等和G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)之間的結(jié)合特性發(fā)生變化，其中包括，使一標(biāo)記的本發(fā)明肽，與通過(guò)培養(yǎng)含有編碼G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的DNA的轉(zhuǎn)化體而表達(dá)在細(xì)胞膜上的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)接觸時(shí)，和使一標(biāo)記的本發(fā)明肽等及待測(cè)化合物，與通過(guò)培養(yǎng)含有編碼G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的DNA的轉(zhuǎn)化體而表達(dá)在細(xì)胞膜上的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)接觸時(shí)，測(cè)定并比較同該G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)結(jié)合的標(biāo)記本發(fā)明肽等的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)量；④一種篩選方法，該方法是篩選一種化合物或其鹽，該化合物或其鹽能使本發(fā)明肽等和G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)之間的結(jié)合特性發(fā)生變化，其中包括，使能活化G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的化合物(例如，本發(fā)明肽)同含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的細(xì)胞接觸時(shí)，和能使活化G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的化合物及待測(cè)化合物與含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的細(xì)胞接觸時(shí)，測(cè)定并比較G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)介導(dǎo)的細(xì)胞刺激活性(例如，促進(jìn)或抑制花生四烯酸釋放、乙酰膽堿釋放、細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放、細(xì)胞內(nèi)cAMP產(chǎn)生、細(xì)胞內(nèi)cGMP產(chǎn)生、磷酸肌醇的產(chǎn)生、細(xì)胞膜電位變化、細(xì)胞內(nèi)蛋白磷酸化、c-fos的激活和pH的降低等的活性)；及⑤一種篩選方法，該方法是篩選一種化合物或其鹽，該化合物或其鹽能使本發(fā)明肽等和G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)結(jié)合性發(fā)生改變的化合物或其鹽方法，其中包括，使一激活G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的化合物(如本發(fā)明肽等)與通過(guò)培養(yǎng)含有編碼G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)DNA的轉(zhuǎn)化體而表達(dá)在細(xì)胞膜上的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)接觸，和使一激活G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的化合物以及待測(cè)化合物與通過(guò)培養(yǎng)含有編碼G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)DNA的轉(zhuǎn)化體而表達(dá)在細(xì)胞膜上的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)接觸時(shí)，測(cè)定并比較G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞刺激活性(例如，促進(jìn)或抑制花生四烯酸釋放、乙酰膽堿釋放、細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放、細(xì)胞內(nèi)cAMP產(chǎn)生、細(xì)胞內(nèi)cGMP產(chǎn)生、磷酸肌醇的產(chǎn)生、細(xì)胞膜電位變化、細(xì)胞內(nèi)蛋白的磷酸化、c-fos的激活和pH的降低等的活性)。
下面進(jìn)一步說(shuō)明所述篩選方法。
首先，作為用于本發(fā)明篩選方法的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)，只要其含有所述G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)或G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的部分肽即可，但是優(yōu)選含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)等的人、溫血?jiǎng)游锱K器的細(xì)胞膜級(jí)分。然而人的臟器最難獲得，因此用于本發(fā)明篩選的通過(guò)重組體才適用于能大量表達(dá)G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)等。
在本發(fā)明篩選方法中，當(dāng)使用含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的細(xì)胞或該細(xì)胞膜級(jí)分時(shí)，可以按照隨后所述方法。
在使用含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的細(xì)胞時(shí)，該細(xì)胞可用戊二醛、福爾馬林等固定。固定方法可以按照公知的方法實(shí)施。
可以使用的宿主的實(shí)例有，公知的大腸桿菌屬的細(xì)菌、枯草桿菌屬的細(xì)菌、酵母、昆蟲或昆蟲細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞等。
大腸桿菌屬的細(xì)菌有，大腸桿菌(Escherichia coli)K12 DH1(美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，60，160(1968))、JM103(核酸研究，9，309(1981))、JA221(分子生物學(xué)雜志，120，517(1978))、HB101(分子生物學(xué)雜志，41，459(1969))、C600(遺傳學(xué)，39，440(1954))等。
枯草桿菌屬的細(xì)菌有，枯草桿菌M1114(基因，24，255(1983))、207-21(生物化學(xué)雜志，95，87(1984))等。
酵母有，釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)AH22、AH22R、NA87-11A、DKD-5D、20B-12等。
昆蟲的例子，可以使用家蠶的幼蟲(前田等，自然，315，592(1985))。
就昆蟲細(xì)胞而言，病毒為AcNPV時(shí)有草地夜蛾(Spodopterafrugiperda，Sf)的細(xì)胞、粉紋夜蛾(Trichoplusia ni)中腸的MG1細(xì)胞、粉紋夜蛾卵的High FiveTM細(xì)胞、甘藍(lán)夜蛾(Mamesatra brassicae)的細(xì)胞、Estigment a crea的細(xì)胞等；病毒為BmNPV時(shí)有家蠶(Bombyx mori)的N細(xì)胞(BmN細(xì)胞)等。可用的Sf細(xì)胞有Sf9細(xì)胞(ATCC CRL1711)和Sf21細(xì)胞(這兩種細(xì)胞均由Vaughn，J.L.等在In Vivo，13，213-217(1977)中描述)。
動(dòng)物細(xì)胞包括猴COS-7細(xì)胞、Vero、中華倉(cāng)鼠細(xì)胞CHO、dhfr基因缺陷的中華倉(cāng)鼠細(xì)胞CHO(以下，簡(jiǎn)稱CHO(dhfr-)細(xì)胞)、小鼠L細(xì)胞、小鼠3T3細(xì)胞、小鼠骨髓瘤細(xì)胞、人HEK293細(xì)胞、人FL細(xì)胞、293細(xì)胞、C127細(xì)胞、BALB3T3細(xì)胞、Sp-2/O細(xì)胞。
細(xì)胞膜級(jí)分是指，用眾所周知的方法破裂細(xì)胞并進(jìn)行分級(jí)分離而制備的含有大量細(xì)胞膜的級(jí)分。細(xì)胞破裂的有效方法包括用Potter-Elvehjem勻漿器擠壓、用Waring blender或Polytron(Kinematica)破裂、超聲破裂、用French press加壓使細(xì)胞通過(guò)細(xì)嘴噴射而破裂。細(xì)胞膜組分分離主要通過(guò)離心力來(lái)實(shí)現(xiàn)，如分級(jí)離心和密度梯度離心。例如，細(xì)胞破碎液在低速(500-3000rpm)離心一小段時(shí)間(通常為1-10分鐘)，得到的上清，高速(15000-30000rpm)通常離心0.5-2小時(shí)。由此獲得的沉淀部分用作細(xì)胞膜級(jí)分。細(xì)胞膜級(jí)分富含表達(dá)的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白以及膜成分如細(xì)胞來(lái)源的磷脂和膜蛋白。
在含有該G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白等的細(xì)胞和細(xì)胞膜級(jí)分中，G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的含量?jī)?yōu)選103-108分子/細(xì)胞，更優(yōu)選105-107分子/細(xì)胞。隨著表達(dá)量的增加，單位細(xì)胞膜級(jí)分的配體結(jié)合活性(比活)增加，因而不但可以構(gòu)建高敏感篩選體系，而且可以在同一批獲得大量的樣品。
為了實(shí)施所述的①-③也就是篩選使本發(fā)明肽等與G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白之間的結(jié)合特性發(fā)生變化的化合物，通常使用合適的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白級(jí)分和標(biāo)記的本發(fā)明的肽等。所述G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白級(jí)分，優(yōu)選天然型的G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白級(jí)分，或與其具有同等活性的重組型G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白級(jí)分。此處術(shù)語(yǔ)“同等活性”是指在配體結(jié)合活性等同。作為標(biāo)記的配體，有標(biāo)記的配體、標(biāo)記的配體類似化合物等。例如它們用[3H]、[125I]、[14C]或[35S]等標(biāo)記。
具體地說(shuō)，為了篩選使本發(fā)明肽等與G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白之間的結(jié)合特性發(fā)生變化的化合物，首先，將含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的細(xì)胞或其膜級(jí)分懸浮于本方法的相應(yīng)的緩沖液中，制備受體標(biāo)樣?？梢允褂镁彌_液，只要它不干擾配體-受體結(jié)合。此類緩沖液有pH值約4-10(優(yōu)選6-8)的磷酸緩沖液或Tris-HCl緩沖液。為了降低非特異結(jié)合，可任選在緩沖液中加入表面活性劑如CHAPS、Tween-80TM(Kao-Atlas公司)、毛地黃皂甘或脫氧膽酸等。為了抑制蛋白酶對(duì)受體或本發(fā)明肽的降解，可加入蛋白酶抑制劑如PMSF、亮抑蛋白酶肽、E-64(Peptide Institute)和胃蛋白酶抑制劑。將一定量(5000-500000cpm)的標(biāo)記的本發(fā)明肽加入到0.01-10ml的受體溶液中，同時(shí)還存在有10-4M-10-10M的待測(cè)化合物。為了測(cè)定非特異性結(jié)合(NSB)，需提供一個(gè)含有過(guò)量未標(biāo)記的本發(fā)明肽的反應(yīng)管。在約0-50℃(優(yōu)選約4-37℃)反應(yīng)20分鐘-24小時(shí)(優(yōu)選30分鐘-3小時(shí))。在反應(yīng)完成后，反應(yīng)混合物用玻璃纖維濾紙等過(guò)濾，用適量的相同緩沖液洗滌。然后用液閃儀或λ-計(jì)數(shù)儀測(cè)定在玻璃纖維濾紙中的殘留放射活性。在不存在拮抗物時(shí)，從其值(B0)中減去非特異結(jié)合值(NSB)而得到的(B0-NSB)，再乘以100％，此時(shí)，特異的結(jié)合量(B-NSB)，可以以有抑制拮抗能力的增補(bǔ)物質(zhì)進(jìn)行選擇，例如，抑制低于50％的待測(cè)化合物。
上述為了實(shí)施用于篩選使本發(fā)明肽等和G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)之間的結(jié)合特性發(fā)生變化的化合物的方法可按照下述進(jìn)行。用眾所周知的方法或商品化的分析試劑盒來(lái)測(cè)定G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞刺激活性(例如促進(jìn)或抑制花生四烯酸釋放、乙酰膽堿釋放、細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放、細(xì)胞內(nèi)cAMP產(chǎn)生、細(xì)胞內(nèi)cGMP產(chǎn)生、磷酸肌醇的產(chǎn)生、細(xì)胞膜電位變化、細(xì)胞內(nèi)蛋白的磷酸化、c-fos的激活和pH的降低的活性)。詳細(xì)地說(shuō)，首先，將含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的細(xì)胞在多孔平板上培養(yǎng)。在篩選之前，先置換新鮮培養(yǎng)基或?qū)?xì)胞無(wú)毒的緩沖液，加入待測(cè)化合物并保溫一定時(shí)間，然后提取細(xì)胞或回收上清將反應(yīng)產(chǎn)物用各種方法進(jìn)行定量。當(dāng)利用細(xì)胞內(nèi)的分解代謝酶測(cè)定作為細(xì)胞刺激活性指示劑的物質(zhì)(例如花生四烯酸)的產(chǎn)生有困難時(shí)，可加入該分解代謝酶的抑制劑進(jìn)行測(cè)定?？梢詸z測(cè)cAMP產(chǎn)生的抑制等活性，作為細(xì)胞抑制活性，所述細(xì)胞受毛喉素等刺激而導(dǎo)致基本生產(chǎn)量增加。
測(cè)定細(xì)胞刺激活性而進(jìn)行篩選時(shí)，需要合適的能表達(dá)G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的細(xì)胞。其細(xì)胞優(yōu)選具有天然型本發(fā)明G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的細(xì)胞系、能夠表達(dá)所述重組型G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的細(xì)胞系等。
其中待測(cè)化合物包括，例如肽、蛋白質(zhì)、非肽性化合物、合成化合物、發(fā)酵產(chǎn)物、細(xì)胞提取液、植物提取液、動(dòng)物組織提取液等，這些化合物可為新的或已知的化合物。
用于篩選使本發(fā)明肽等和G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)之間的結(jié)合特性發(fā)生變化的化合物或其鹽的試劑盒中包含G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白或其鹽、G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的部分肽或其酰胺或其酯或其鹽、含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的細(xì)胞、或含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白的細(xì)胞膜級(jí)分、以及本發(fā)明的肽等。
本發(fā)明篩選試劑盒包括如下1.用于篩選的試劑(1)用于分析和沖洗的緩沖液加有0.05％牛血清白蛋白(Sigma)的Hanks’平衡鹽溶液(Gibco)。
溶液用0.45μm孔徑濾膜過(guò)濾除菌并在4℃貯存?；蚩梢栽谂R用時(shí)配制。
(2)G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)標(biāo)樣將表達(dá)G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的CHO細(xì)胞在12孔板上傳代培養(yǎng)，每孔5×105細(xì)胞，37℃，5％CO2和95％空氣保溫培養(yǎng)兩天。
(3)標(biāo)記的本發(fā)明肽等用[3H]、[125I]、[14C]或[35S]標(biāo)記的本發(fā)明肽溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┗蚓彌_液中，并貯存在4℃或-20℃。溶液在使用時(shí)用分析緩沖液稀釋到1μM。
(4)本發(fā)明肽等的標(biāo)準(zhǔn)液將本發(fā)明肽等溶解于含有0.1％牛血清白蛋白(Sigma)的PBS使之濃度為1mM，-20℃保存。
2分析方法(1)用于表達(dá)本發(fā)明受體蛋白(APJ)的細(xì)胞在12孔板上進(jìn)行培養(yǎng)。在用1ml的用于分析的緩沖液洗滌2次后，每孔加入490μl該緩沖液。
(2)加5μl的10-4M-10-10M的待測(cè)化合物溶液，向所述系統(tǒng)中加5μl的標(biāo)記本發(fā)明肽等，得到的混合液在室溫保溫1小時(shí)。為了測(cè)定非特異結(jié)合，在所述系統(tǒng)中加5μl的10-3M的配體而不是待測(cè)化合物。
③去除孔中的反應(yīng)混合液，將培養(yǎng)孔洗滌3遍，每次均用1ml的洗滌液。用0.2N NaOH-1％SDS溶解與細(xì)胞結(jié)合的標(biāo)記本發(fā)明肽等，然后與4ml的液閃劑A(和光純藥)混合。
④用液閃計(jì)數(shù)儀(Beckman)測(cè)定放射性。其最大結(jié)合量用下式求得PMB＝[(B-NSB)/(B0-NSB)]×100PMB最大結(jié)合百分率B加樣時(shí)的值NSB非特異結(jié)合量B0最大結(jié)合量利用本發(fā)明篩選方法或篩選用試劑盒而得到的化合物或其鹽是，一種改變本發(fā)明肽等和G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)之間的結(jié)合(抑制結(jié)合或促進(jìn)結(jié)合)的化合物，更詳細(xì)地說(shuō)，既是G蛋白偶聯(lián)型受體介導(dǎo)的具有細(xì)胞刺激活性的化合物或其鹽(所謂的G蛋白偶聯(lián)型受體激動(dòng)劑)、或者不具有該刺激活性的化合物(所謂的G蛋白偶聯(lián)型受體拮抗劑)。所述化合物包括，例如肽、蛋白質(zhì)、非肽性化合物、合成化合物、發(fā)酵產(chǎn)物、細(xì)胞提取液、植物提取液、動(dòng)物組織提取液等，這些化合物可為新的或已知的化合物。
可以按照以下(i)或(ii)的方法對(duì)上述G蛋白偶聯(lián)型受體激動(dòng)劑或拮抗劑進(jìn)行評(píng)價(jià)。(i)對(duì)前面談到的篩選方法①～③的結(jié)合測(cè)定進(jìn)行分析，得到使本發(fā)明肽等和G蛋白偶聯(lián)型受體(APJ)之間的結(jié)合性發(fā)生改變的(尤其是，抑制結(jié)合的)化合物之后，測(cè)定該化合物是否具有上述G蛋白偶聯(lián)型受體(APJ)介導(dǎo)的細(xì)胞刺激活性。具有細(xì)胞刺激活性的化合物或其鹽是G蛋白偶聯(lián)型受體激動(dòng)劑，不具有該活性的化合物或其鹽就是G蛋白偶聯(lián)型受體抑制劑。(ii)(a)使待測(cè)化合物與含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的細(xì)胞接觸，測(cè)定上述G蛋白偶聯(lián)型受體(APJ)介導(dǎo)的細(xì)胞刺激活性。具有細(xì)胞刺激活性的化合物或其鹽就是G蛋白偶聯(lián)型受體的激動(dòng)劑。(b)使G蛋白偶聯(lián)型受體激活的化合物(例如，本發(fā)明肽等或G蛋白偶聯(lián)型受體激動(dòng)劑等)與含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的細(xì)胞接觸時(shí)，與使G蛋白偶聯(lián)型受體G(APJ)激活的化合物及待測(cè)化合物與含有G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的細(xì)胞接觸時(shí)，測(cè)定并比較G蛋白偶聯(lián)型受體(APJ)介導(dǎo)的細(xì)胞刺激活性。激活G蛋白偶聯(lián)型受體(APJ)的化合物而降低細(xì)胞刺激活性的化合物或其鹽就是G蛋白偶聯(lián)型受體抑制劑。
由于該G蛋白偶聯(lián)型受體激動(dòng)劑具有針對(duì)G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的與本發(fā)明肽等所具有的生理活性相同的作用，因此與本發(fā)明肽等一樣可以用作既安全又低毒的醫(yī)藥組合物。
相反，由于G蛋白偶聯(lián)型受體拮抗劑能夠抑制針對(duì)G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白(APJ)的本發(fā)明肽等所具有的生理活性，所以作為抑制該受體活性既安全又低毒的醫(yī)藥組合物是有益的。
因?yàn)楸景l(fā)明肽等涉及中樞神經(jīng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、循環(huán)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、心臟機(jī)能調(diào)節(jié)作用、免疫機(jī)能調(diào)節(jié)作用、消化系統(tǒng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、代謝機(jī)能調(diào)節(jié)作用或生殖系統(tǒng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用等，所以將上述激動(dòng)劑或拮抗劑可以用作治療或預(yù)防以下疾病的藥物，例如疾病為，老年性癡呆、腦血管性癡呆、起因于系統(tǒng)變性型的變性疾病(diseases of system degenerative tvpe)(如阿耳茨海默病、巴金和森氏病、皮克病、亨廷頓病等)的癡呆、起因于感染性疾病(如克-雅病等的遲發(fā)性病毒感染癥等)的癡呆、起因于內(nèi)分泌性·代謝性·中毒性疾病(如甲狀腺機(jī)能低下癥、維生素B12缺乏癥、酒精中毒、各種藥物中毒·金屬中毒·有機(jī)化合物中毒等)的癡呆、起因于腫瘤性疾病(如腦腫瘤等)的癡呆、起因于外傷性疾病(如慢性硬膜下血腫等)的癡呆等的癡呆病、憂郁癥、多動(dòng)(微細(xì)腦障礙)綜合征、認(rèn)知障礙、不穩(wěn)定障礙、精神分裂癥、恐怖癥、生長(zhǎng)激素分泌缺陷、過(guò)食癥、貪食癥、高膽固醇血脂癥、高甘油酯血脂癥、高血脂癥、高催乳激素血脂癥、糖尿病、癌、胰腺炎、腎疾病、特納氏綜合征、神經(jīng)癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、脊髓損傷、暫時(shí)性腦缺血發(fā)作、肌肉萎縮性側(cè)索硬化癥、急性心肌梗塞、脊髓小腦變性癥、骨折、創(chuàng)傷、特應(yīng)性皮炎、骨質(zhì)疏松癥、哮喘、癲癇、不孕癥、動(dòng)脈硬化、肺氣腫、肺水腫、乳汁分泌降低等疾病。本發(fā)明肽等還可進(jìn)一步用作催眠鎮(zhèn)靜劑、改善術(shù)后營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的藥物、升壓藥、降壓藥等。
除此以外，還可用于治療或預(yù)防HIV感染、AIDS(Acquired ImmuneDeficiency Syndrome后天性免疫缺陷綜合癥)等的藥物。
利用上述的篩選法或篩選用試劑盒而得到的化合物或其鹽，例如，可以使用與生理上可接受的鹽。如與無(wú)機(jī)堿形成的鹽、有機(jī)堿形成的鹽、無(wú)機(jī)酸形成的鹽、有機(jī)酸形成的鹽、與堿性或酸性氨基酸形成的鹽等。
作為與無(wú)機(jī)堿形成的鹽有，堿金屬鹽如鈉鹽、鉀鹽等；堿土類金屬鹽如鈣鹽、鎂鹽等；以及鋁鹽、銨鹽等。
與有機(jī)堿形成的鹽有，例如，三甲基胺、三乙基胺、吡啶、甲基吡啶、2，6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、環(huán)己胺、二環(huán)己胺、N，N’-二苯乙烯二胺等形成的鹽。
與無(wú)機(jī)酸形成的鹽有，例如，與鹽酸、磷酸、氫溴酸、硫酸形成的鹽。
與有機(jī)酸形成的鹽有，例如，與乙酸、甲酸、丙酸、延胡索酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、草酸、苯甲酸、甲磺酸、苯磺酸形成的鹽等。
與堿性氨基酸形成的鹽有，例如精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸等形成的鹽，與酸性氨基酸形成的鹽有，如天冬氨酸、谷氨酸等形成的鹽。
利用上述的篩選法或篩選用試劑盒而得到的化合物或其鹽，當(dāng)它們用作上述的藥物時(shí)，可以同將所述本發(fā)明肽等用作藥物實(shí)施的方法是一樣的。
在說(shuō)明書和附圖
中，堿基和氨基酸的代碼使用IUPAC-IUB生化命名委員會(huì)規(guī)定的或本領(lǐng)域通用的代碼，如下例所示。對(duì)于有光學(xué)異構(gòu)體的氨基酸，除非特別說(shuō)明，均指L形式。
DNA 脫氧核糖核酸cDNA 互補(bǔ)的脫氧核糖核酸A 腺嘌呤T 胸腺嘧啶
G 鳥嘌呤C 胞嘧啶Y 胸腺嘧啶或胞嘧啶N 胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤或鳥嘌呤R 腺嘌呤或鳥嘌呤M 胞嘧啶或腺嘌呤W 胸腺嘧啶或腺嘌呤S 胞嘧啶或鳥嘌呤RNA 核糖核酸mRNA 信使核糖核酸dATP 脫氧腺苷三磷酸dTTP 脫氧胸腺嘧啶三磷酸dGTP 脫氧鳥苷三磷酸dCTP 脫氧胞嘧啶三磷酸ATP 腺苷三磷酸EDTA 乙二胺四乙酸SDS 十二烷基硫酸鈉EIA 酶免疫測(cè)定Gly或G甘氨酸Ala或A丙氨酸Val或V纈氨酸Leu或L亮氨酸Ile或I異亮氨酸Ser或S氨酸Thr或T蘇氨酸Cys或C半胱氨酸Met或M蛋氨酸Glu或E谷氨酸Asp或D天冬氨酸
Lys或K賴氨酸Arg或R精氨酸His或H組氨酸Phe或F苯丙氨酸Tyr或Y酪氨酸Trp或W色氨酸Pro或P脯氨酸Asn或N天冬酰胺Gln或Q谷氨酰胺pGlu 焦谷氨酸Me甲基Et乙基Bu丁基Ph苯基Nle 己氨酸Thi 2-噻吩基丙氨酸Phg 苯基甘氨酸Pya(2)2-吡啶丙氨酸Adi(NH2) 2-氨基己二酸-6胺HyP 羥基脯氨酸(hydroxyproline)Ac-ArgNα-乙酰精氨酸Lys(Ac) Nε-乙酰賴氨酸Lys(Me) Nε-甲基賴氨酸Lys(Tos) Nε-甲苯磺?；嚢彼酇rg(Tos) Nε-甲苯磺?；彼酨he(Cl) 4-氯苯丙氨酸Nal(2)2-萘基丙氨酸Cha 環(huán)己丙氨酸Met(O)甲硫氨酸亞砜
Tyr(Me)O-甲基酪氨酸Tyr(I) 3-碘酪氨酸又，在本說(shuō)明書中頻繁使用的取代基、保護(hù)基以及試劑均用下列符號(hào)表示。
Tosp-甲苯磺酰基HONB N-羥基-5-降冰片烯基-2，3-二羧酰亞胺Bzl芐基Z 芐氧羰基Br-Z 2-溴芐氧羰基Cl-Z 2-氯芐氧羰基Boct-丁氧基羰基HOBt 1-羥基苯并三唑DCCN、N’-二環(huán)己基碳二亞胺TFA三氟乙酸Fmoc N-9-芴基甲氧基羰基DNP二硝基苯酚Bum叔丁氧甲基Trt三苯甲基Pbf2，2，4，6，7-五甲基二苯并呋喃-5-磺?；鵋OOB 3-羥基-4-氧基-3，4-二羥基-1，2，3-苯并三嗪TFE三氟乙醇HOAt 1-羥基-7-氮雜苯并三唑PyBrop 溴吡咯烷基磷鎓六氟磷酸TMS-Br 溴化三甲基甲硅烷基TC 三唑烷-4(R)-酰胺基Bom芐氧甲基NMPN-甲基吡咯烷酮PAM苯乙酰胺甲基
DCM二氯甲烷DMFN，N-二甲基甲酰胺DIEA N，N-二異丙基乙胺Clt2-氯三苯甲基For甲?；鵏ys(Arg-Arg) Nε-精氨酸-精氨酸-賴氨酸AM 氨基甲基Pyn1-芘基丙氨酸Mor嗎啉N-MeAlaN-甲基丙氨酸Lys(Me)2Nε-二甲基賴氨酸Dap二氨基丙酸Mmt4-甲氧基三苯甲基Adi乙二酰基Dap(C6) Nβ-己酰二氨基丙酸DIPCDI N，N’ -二異丙基碳二亞胺NMe2 二甲胺Dap(Ac)Nβ-乙酰二氨基丙酸Dap(Adi) Nβ-己二酰二氨基丙酸本說(shuō)明書序列表中的編號(hào)表示如下〔SEQ ID NO1〕表示在后述實(shí)施例1中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO2〕表示在后述實(shí)施例2中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO3〕表示在后述實(shí)施例3中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO4〕表示在后述實(shí)施例4中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO5〕表示在后述實(shí)施例5中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO6〕表示在后述實(shí)施例6中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO7〕表示在后述實(shí)施例7中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO8〕表示在后述實(shí)施例8中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO9〕表示在后述實(shí)施例9中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO10〕表示在后述實(shí)施例10中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO11〕表示在后述實(shí)施例11中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO12〕表示在后述實(shí)施例12中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO13〕表示在后述實(shí)施例13中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO14〕表示在后述實(shí)施例14中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO15〕表示在后述實(shí)施例15中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO16〕表示在后述實(shí)施例16中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO17〕表示在后述參考例1中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO18〕表示在后述參考例2中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO19〕表示APJ的氨基酸序列?！睸EQ ID NO20〕表示編碼〔SEQ ID NO19〕氨基酸序列的DNA堿基序列?！睸EQ ID NO21〕表示在后述實(shí)施例17中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO22〕表示在后述實(shí)施例18中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO23〕表示在后述實(shí)施例19中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO24〕表示在后述實(shí)施例20中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO25〕表示在后述實(shí)施例21中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO26〕表示在后述實(shí)施例22中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO27〕表示在后述實(shí)施例23中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO28〕表示在后述實(shí)施例24中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO29〕表示在后述實(shí)施例25中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO30〕表示在后述實(shí)施例26中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO31〕表示在后述實(shí)施例27中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO32〕表示在后述實(shí)施例28中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO33〕表示在后述實(shí)施例29中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO34〕表示在后述實(shí)施例30中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO35〕表示在后述實(shí)施例31中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO36〕表示在后述實(shí)施例32中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO37〕表示在后述實(shí)施例33中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO38〕表示在后述實(shí)施例34中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO39〕表示在后述實(shí)施例35中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO40〕表示在后述實(shí)施例36中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO41〕表示在后述實(shí)施例37中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO42〕表示在后述實(shí)施例38中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO43〕表示在后述實(shí)施例39中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO44〕表示在后述實(shí)施例40中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO45〕表示在后述實(shí)施例41中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO46〕表示在后述實(shí)施例42中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO47〕表示在后述實(shí)施例43中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO48〕表示在后述實(shí)施例44中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO49〕表示在后述實(shí)施例45中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO50〕表示在后述實(shí)施例46中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO51〕表示在后述實(shí)施例47中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO52〕表示在后述實(shí)施例48中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO53〕表示在后述實(shí)施例49中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO54〕表示在后述實(shí)施例50中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO55〕表示在后述實(shí)施例51中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO56〕表示在后述實(shí)施例52中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO57〕表示在后述實(shí)施例53中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO58〕表示在后述實(shí)施例54中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO59〕表示在后述實(shí)施例55中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO60〕表示在后述實(shí)施例56中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO61〕表示在后述實(shí)施例57中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO62〕表示在后述實(shí)施例58中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO63〕表示在后述實(shí)施例59中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO64〕表示在后述實(shí)施例60中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO65〕表示在后述實(shí)施例61中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO66〕表示在后述實(shí)施例62中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO67〕表示在后述實(shí)施例63中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO68〕表示在后述實(shí)施例64中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO69〕表示在后述實(shí)施例65中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO70〕表示在后述實(shí)施例66中得到的肽的氨基酸序列?！睸EQ ID NO71〕表示在后述實(shí)施例67中得到的肽的氨基酸序列。〔SEQ ID NO72〕表示在后述實(shí)施例68中得到的肽的氨基酸序列。
將該樹脂200mg(39.8mmol)用3ml混合液TFA，thioanisole，m-cresol，H2O，ethanedithiol，triisopropylsilane(80∶5∶5∶5∶2.5∶2.5)室溫下，攪拌2小時(shí)，然后在反應(yīng)溶液里加入乙醚，使之析出白色粉末，離心分離后，除去上清液重復(fù)3次操作。用水抽提殘?jiān)幔瑑鼋Y(jié)干燥，得到白色粉末91.7mg。將所得粗肽52.2mg用經(jīng)過(guò)TSK GEL ODS 120T層析柱(20×300mm)制備好的的HPLC，將A液0.1％TFA-水、B液含有0.1％TFA的乙腈，按照A/B81/19～71/29進(jìn)行直線型濃度梯度析出(60分)，收集包括所要物質(zhì)在內(nèi)的級(jí)分，凍結(jié)干燥，得到15.5mg白色粉末。質(zhì)譜分析(M+H)+1858.7(計(jì)算值1859.0)HPLC析出時(shí)間19.7分析出條件層析柱YMC ODS AM-301，S-5μm，120A(4.6×100mm)分離液使用A液0.1％TFA-水、B液含有0.1％TFA的乙腈，對(duì)A/B100/0～50/50的直線型濃度梯度析出時(shí)間為25分流速1.0ml/分以下，實(shí)施例2～實(shí)施例16以及參考例1的化合物均與實(shí)施例1一樣，通過(guò)固相合成和除去保護(hù)、純化制備。每種化合物的質(zhì)譜分析(M+H)+值(測(cè)定值及計(jì)算值)及HPLC保存時(shí)間(分)于表1所示。
將該樹脂1g，于AcOH∶TFE∶DCM(1∶2∶7)20ml中室溫下，攪拌2小時(shí)，然后過(guò)濾除去樹脂，蒸餾溶劑用乙醚結(jié)晶，得到362mg的保護(hù)肽(Boc-Gln-Arg(Pbf)-Pro-Arg(Pbf)-Leu-Ser(tBu)-His(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH)。
按照順序縮合H-Tyr(Bzl)-OBzl·HClにBoc-Pro，Boc-Nle，Boc-Pro，得到217.8mg的Boc-Pro-Nle-Pro-Tyr(Bzl)-Bzl。
將Boc-Gln-Arg(Pbf)-Pro-Arg(Pbf)-Leu-Ser(tBu)-His(Trt)-Lys(Boc)-Gly-OH的100mg和HOAt 8.04mg溶于1ml的DCM∶DMF(4∶1)中，在冰水下添加62.2mg的DIEA 38.5μl，PyBrop 34.20mg，H-Pro-Nle-Pro-Tyr(Bzl)-OBzl。HCl(用4N-HCl/l，4二氧六環(huán)處理Boc-Pro-Nle-Pro-Tyr(Bzl)-OBzl并制備)62.2mg，然后，冰浴，室溫?cái)嚢?hr。將枸櫞酸結(jié)晶加入溶液內(nèi)中和之後，蒸餾溶劑，加水用氯仿萃取析出的固體。用1N鹽酸、飽和小蘇打水、飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸餾溶劑，加乙醚過(guò)濾粉末，進(jìn)一步從乙酸乙酯和乙醚中再沉淀純化，得到122.27mg的Boc-Gln-Arg(Pbf)-Pro-Arg(Pbf)-Leu-Ser(tBu)-His(Trt)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr(Bzl)-OBzl。
將該保護(hù)肽63.6mg的置于thioanisole 1089μl，m-cresol 122μl，triisopropylsilane 238.5μl，TFA 4.7ml中室溫?cái)嚢?0分鐘，然后加TMS-Br1.23ml，冰水中攪拌1個(gè)小時(shí)后，在20℃的水浴上進(jìn)一步地?cái)嚢?hr。反應(yīng)后，除去反應(yīng)溶液，給殘?jiān)右颐?，使之析出白色粉末，離心分離，然后除去上清液重復(fù)3次操作。用水抽提殘?jiān)?，再凍結(jié)干燥，通過(guò)采用了50％醋酸水溶液的SephadexG-25凝膠過(guò)濾柱過(guò)樣，將主要的級(jí)分于80％AcOH中，70℃加熱2hr，然后用水稀釋溶液，凍結(jié)干燥。將得到的粗肽再用經(jīng)過(guò)TSK GELODS 120T柱(20×300mm)制備好的HPLC，對(duì)A液0.1％TFA-水、B液含有0.1％TFA的乙腈A/B85/15～75/25進(jìn)行直線型濃度梯度析出(60分)，收集包括所要物質(zhì)在內(nèi)的級(jí)分，凍結(jié)干燥，得到白色粉末29.18mg。質(zhì)譜分析(M+H)+1532.0(計(jì)算值1531.9)HPLC析出時(shí)間14.6分溶出條件層析柱Wakosil 5C18T(4.6×100mm)分離液使用A液0.1％TFA-水、B液含有0.1％TFA的乙腈，對(duì)A/B95/5～45/55進(jìn)行直線型濃度梯度析出(25分)流速1.0ml/分實(shí)施例51 Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2(SEQID NO55)的制造將市售的4-sulfamylbutyryl AM resin(1.09mmol/g)lg與DMF中Fmoc-Gly-OH 356mg(1.199mmol)，PyBOP 567mg(1.09mmol)，DIEA 0.417ml(2.398mmol)室溫下反應(yīng)30min。過(guò)濾后，用DMF洗滌樹脂，在DMF中Ac2O1.03ml(10.9mmol)，pyridine 0.882ml(10.9mmol)室溫下反應(yīng)2hr。用DMF和MeOH洗滌樹脂，干燥后，用piperidine處理樹脂，測(cè)定游離的Fmoc基吸光數(shù)值，得到1.0496g(Fmoc-Gly含量0.295mmol/g)的Fmoc-Gly-4-sulfamylbutyryl AM resin。
用Fmoc-Gly-4-sulfamylbutyryl AM resin與實(shí)施例1做法相同進(jìn)行固相合成，加入最后的Arg，用Boc基取代Fmoc基。在NMP中用ICH2CN和DIEA活化該樹脂之后，再用50％-NHMe2水溶液處理，取出保護(hù)肽。與實(shí)施例1相同，用TFA，thioanisole，m-cresol，H2O，ethanedithiol，triisopropylsilane(80∶5∶5∶5∶2.5∶2.5)處理該肽，進(jìn)一步純化HPLC，得到所要的目的物。實(shí)施例52Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor(SEQ IDNO56)的制造用嗎啉替代實(shí)施例51的50％-NHMe2水溶液，進(jìn)行同樣處理，純化得到所要的目的物。
同實(shí)施例1一樣進(jìn)行固相合成和除去保護(hù)、純化，得到實(shí)施例53～64的化合物。
通過(guò)Mmt將市售的Wang resin和側(cè)鏈氨基進(jìn)行保護(hù)而形成的Fmoc-Dap(Mmt)，與實(shí)施例1的做法相同進(jìn)行固相合成。將得到的樹脂與實(shí)施例1處理相同純化該樹脂，得到所需的目的物。實(shí)施例66Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)(SEQ ID NO69)的制造用1％TFA/5％triisopropylsilane/94％DCM處理在實(shí)施例65中得到的樹脂，僅僅除去Dap側(cè)鏈的保護(hù)基Mmt，用醋酸酐進(jìn)行乙?；?，與實(shí)施例65的處理方法相同進(jìn)行純化，獲得所要的目的物。實(shí)施例67Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)(SEQ ID NO70)的制造取代實(shí)施例66的醋酸酐，用己酸和DIPCDI修飾氨基，同理得到所要的目的物。實(shí)施例68Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)SEQ ID NO71)的制造用己二酸替代實(shí)施例67的己酸，得到所需的目的物。
上述實(shí)施例51～68的化合物的質(zhì)譜分析值(M+H)+(測(cè)定值及計(jì)算值)以及HPLC保存時(shí)間(分)如表3所示。表3


(實(shí)施例60及實(shí)施例61的HPLC條件為C0-90％，AcCN/45min，F(xiàn)low1ml/min，YMC ODS AM-301，S-5μm，120A(4.6×100mm)。)實(shí)驗(yàn)例1毛喉素刺激抑制產(chǎn)生cAMP活性的測(cè)定在24-well組織培養(yǎng)平板上以3×10cells/well密度接種了WO 99/33976號(hào)(特願(yuàn)平10-220853號(hào))實(shí)施例7所描述的CHO-A10clone 6細(xì)胞，過(guò)夜培養(yǎng)。0.2mM 3-isobutyl-1-methylxantine(IBMX)、含有0.05％牛血清白蛋白的Hanks′balanced salt solution(HBSS)作為分析緩沖液，在每個(gè)孔內(nèi)用500μl的分析緩沖液洗滌2次之后，37℃保溫30分鐘。再用500μl的分析緩沖液洗滌1次之后，各孔分別添加500μl的標(biāo)樣，該標(biāo)樣溶解于添加有1μM毛喉素的分析緩沖液，37℃保溫30分鐘。準(zhǔn)備2種保溫孔，一種為用于確定作為細(xì)胞產(chǎn)生cAMP的基本量(basal level)，用不加毛喉素的分析緩沖液進(jìn)行保溫，另一種為用于確定由于毛喉素刺激產(chǎn)生cAMP的最大量(maximum level)，用含有毛喉素的分析緩沖液保溫。保溫結(jié)束后，用500μl的分析緩沖液洗滌每個(gè)小孔，然后在各小孔內(nèi)加入Amersham公司的cAMP EIA system配有的lysis buffer 1B 500μl，提取cAMP。按照試劑盒的說(shuō)明要求，在每個(gè)提取液(100μl)中進(jìn)行cAMP量的測(cè)定。cAMP產(chǎn)生的抑制活性，根據(jù)maximum level和加有標(biāo)樣的well內(nèi)cAMP量之差(cAMP產(chǎn)生的抑制量)求得，再進(jìn)一步求出針對(duì)由于毛喉素的刺激產(chǎn)生cAMP增大量(maximum level和basal level之差)的百分率，從其用量反應(yīng)曲線中求出EC50的數(shù)值。表4表根據(jù)實(shí)驗(yàn)例1的方法測(cè)定的實(shí)施例1～16的化合物活性，表5表示根據(jù)實(shí)驗(yàn)例1的方法測(cè)定的實(shí)施例17～50的化合物活性，表6表示根據(jù)實(shí)驗(yàn)例1的方法測(cè)定的實(shí)施例51～68的化合物活性。表4

表5


表6


實(shí)驗(yàn)例2受體結(jié)合分析-1根據(jù)乳酸過(guò)氧化酶法，用參考例1化合物按照以下操作制備125I標(biāo)記物。對(duì)20μl肽的0.1mM水溶液，在0.1M HEPES-NaOH/pH7.0里，加入20μl濃度為10μg/ml的乳酸過(guò)氧化酶(Sigma)、20μl的Iodine-125(Amersham、IMS-30、74MBq)、20μl的稀釋了6000倍30％過(guò)氧化氫(和光純藥)水溶液，通過(guò)渦流式混合儀混合之后，室溫下保溫10分鐘。加入600μl的含有0.1％TFA的蒸留水停止反應(yīng)，然后通過(guò)TSKgel ODS-80TM CTR 4.6×100mm層析柱的反相HPLC分離，分別取出反應(yīng)生成的標(biāo)記物最多部分。等量的、與分析緩沖液(50mM Tris-HCl/pH7.5，5mM EDTA，0.5mM PMSF，20μg/ml leupeptin，0.1μg/ml pepstatin A，4μg/ml E-64(肽研究所)，0.1％牛血清白蛋白)混合，-30℃保存直至使用為止。
培養(yǎng)CHO-A10細(xì)胞，用含有5mM EDTA的PBS從培養(yǎng)箱中回收細(xì)胞之后，懸浮于不含牛血清白蛋白的所述分析緩沖液。使用Polytron勻漿器(Kinematica)，在12,000rpm，15秒勻漿3次，離心(1000×g、4℃、10分鐘)之后，回收上清液。對(duì)于沈殿的，再次進(jìn)行同樣操作，每次收集上清液，然后進(jìn)行100,000×g、4℃，1小時(shí)離心，回收沈殿部分(膜級(jí)分)。將膜級(jí)分再懸浮于少量的緩沖液中，用聚四氟乙烯勻漿器勻漿化，-80℃保存直到使用為止。
結(jié)合分析按照以下的條件進(jìn)行實(shí)施。在聚丙烯性質(zhì)的96孔平板上制備100μl溶液，其中包括0.25μg膜級(jí)分終濃度為100pM的125I標(biāo)記化合物、被檢物、分析緩沖液，室溫下保溫1.5個(gè)小時(shí)。在孔里加有代替被檢物的1μM非標(biāo)記化合物進(jìn)行非特異結(jié)合量的測(cè)定。保溫結(jié)束后使用96孔對(duì)應(yīng)的細(xì)胞收集器(Packard)及過(guò)濾元件(GF/C、Packard)進(jìn)行分離，在濾器上收集膜級(jí)分。使濾器充分干燥之后，加入Microcinti O(Packard)，用TOP記數(shù)儀(Packard)，測(cè)定濾器上與膜級(jí)分共同被收集的標(biāo)記物的量。從它們各自的測(cè)定值減去非特異結(jié)合量，然后，針對(duì)沒(méi)有添加檢測(cè)物的孔(結(jié)合總量)通過(guò)檢測(cè)物的添加求出減少了的結(jié)合量的比例(抑制率)，再進(jìn)一步從每個(gè)檢測(cè)物的用量-抑制曲線中求出IC50值(表7～表9)。表7

表8


表9

實(shí)驗(yàn)例3受體結(jié)合分析-2與實(shí)驗(yàn)例2的做法相同，利用參考例2化合物根據(jù)每個(gè)被檢物的用量-抑制曲線求出IC50值(表10～表12)。
表10


表11


表12


工業(yè)上的利用因?yàn)楸景l(fā)明肽衍生物涉及中樞神經(jīng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、循環(huán)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、心臟機(jī)能調(diào)節(jié)作用、免疫機(jī)能調(diào)節(jié)作用、消化系統(tǒng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用、代謝機(jī)能調(diào)節(jié)作用或生殖系統(tǒng)機(jī)能調(diào)節(jié)作用等，所以將上述激動(dòng)劑或拮抗劑可以用作治療或預(yù)防以下疾病的藥物，例如疾病為，老年性癡呆、腦血管性癡呆、起因于系統(tǒng)變性型的變性疾病(diseases of system degenerative type)(如阿耳茨海默病、巴金和森氏病、皮克病、亨廷頓病等)的癡呆、起因于感染性疾病(如克-雅病等的遲發(fā)性病毒感染癥等)的癡呆、起因于內(nèi)分泌性·代謝性·中毒性疾病(如甲狀腺機(jī)能低下癥、維生素B12缺乏癥、酒精中毒、各種藥物中毒·金屬中毒·有機(jī)化合物中毒等)的癡呆、起因于腫瘤性疾病(如腦腫瘤等)的癡呆、起因于外傷性疾病(如慢性硬膜下血腫等)的癡呆等的癡呆病、憂郁癥、多動(dòng)(微細(xì)腦障礙)綜合征、認(rèn)識(shí)障礙、不安障礙、精神分裂癥、恐怖癥、生長(zhǎng)激素分泌障礙(如巨人癥、末端肥大癥等)、過(guò)食癥、貪食癥、高膽固醇血癥、高甘油酯血癥、高脂血癥、高催乳激素血癥、低血糖癥、垂體功能低下、垂體性幼稚型、糖尿病(如糖尿病性并發(fā)癥、糖尿病性腎病、糖尿病性神經(jīng)障礙、糖尿病性視網(wǎng)膜病等)、癌癥(如乳癌、淋巴性白血病、肺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌等)、胰腺炎、腎病(如慢性腎減退、腎炎等)、特納氏綜合征、神經(jīng)癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、脊髓損傷、暫時(shí)性腦缺血發(fā)作、肌肉萎縮性側(cè)索硬化、急性心肌梗塞、脊髓小腦變性、骨折、創(chuàng)傷、特應(yīng)性皮炎、骨質(zhì)疏松、哮喘、癲癇、不孕癥、動(dòng)脈硬化、肺氣腫、肺水腫或乳汁分泌減弱等疾病。本發(fā)明肽衍生物還可進(jìn)一步用作催眠鎮(zhèn)靜劑、改善術(shù)后營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的藥物、升壓藥、降壓藥等。
除此之外，還可用作治療或預(yù)防HIV感染、AIDS(Acquired ImmuneDeficiency Syndrome后天性免疫低下綜合征)等的藥物。
序列表<110>武田藥品工業(yè)株式會(huì)社(Takeda Chemical Industries.Ltd.)<120>肽衍生物<130>2702WOOP<150>JP 12-87114<151>2000-03-23<150>JP 12-28889l<151>2000-09-19<160>72<210>1<211>15<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>1Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10 15<210>2<211>15<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十三個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十五個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>2Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Cha Pro Xaa1 5 10 15<210>3<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>3Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Xaa15 10<210>4<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十一個(gè)位置上代表Phe(Cl).<400>4Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Xaa15 10<210>5<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl).<400>5Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa15 10<210>6<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha.<400>6Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Cha1 5 10<210>7<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl).<400>7Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10<210>8<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl).<400>8Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10<210>9<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一個(gè)位置上代表pGlu，Xaa在第十一個(gè)位置上代表Cha.<400>9Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Phe1 5 10<210>10<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一個(gè)位置上代表pGlu，Xaa在第十三個(gè)位置上代表Phe(Cl).<400>10Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10<210>11<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha.<400>11Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Pro Phe1 5 10<210>12<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl).<400>12Arg Pro Arg Leu Phe Ala Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10<210>13<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl).<400>13Arg Pro Arg Leu Phe His Lys Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10<210>14<211>15<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Nle.<400>14Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Tyr1 5 10 15<210>15<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha.<400>15Arg Pro Arg Leu Phe His Lys Gly Pro Xaa Pro Phe1 5 10<210>16<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl).<400>16Arg Pro Arg Leu Phe Hi s Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 510<210>17<211>36<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Nle.<400>17Leu Val Gln Pro Arg Gly Ser Arg Asn Gly Pro Gly Pro Trp Gln Gly1 5 10 15Gly Arg Arg Lys Phe Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly20 25 30Pro Xaa Pro Tyr35<210>18<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一個(gè)位置上代表pGlu，Xaa在第十一個(gè)位置上代表Nle.<400>18Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Tyr1 5 10<210>19<211>380<212>PRT<213>未知<220><223><400>19Met Glu Glu Gly Gly Asp Phe Asp Asn Tyr Tyr Gly Ala Asp Asn Gln1 5 10 15Ser Glu Cys Glu Tyr Thr Asp Trp Lys Ser Ser Gly Ala Leu Ile Pro20 25 30Ala Ile Tyr Met Leu Val Phe Leu Leu Gly Thr Thr Gly Ash Gly Leu35 40 45Val Leu Trp Thr Val Phe Arg Ser Ser Arg Glu Lys Arg Arg Ser Ala50 55 60Asp Ile Phe Ile Ala Ser Leu Ala Val Ala Asp Leu Thr Phe Val Val65 70 75 80Thr Leu Pro Leu Trp Ala Thr Tyr Thr Tyr Arg Asp Tyr Asp Trp Pro85 90 95Phe Gly Thr Phe Phe Cys Lys Leu Ser Ser Tyr Leu Ile Phe Val Asn100 105 110Met Tyr Ala Ser Val Phe Cys Leu Thr Gly Leu Ser Phe Asp Arg Tyr115 120 125Leu Ala lle Val Arg Pro Val Ala Asn Ala Arg Leu Arg Leu Arg Val130 135 140Ser Gly Ala Val Ala Thr Ala Val Leu Trp Val Leu Ala Ala Leu Leu145 150 155 160Ala Met Pro Val Met Val Leu Arg Thr Thr Gly Asp Leu Glu Asn Thr165 170 175Thr Lys Val Gln Cys Tyr Met Asp Tyr Ser Met Val Ala Thr Val Ser180 185 190Ser Glu Trp Ala Trp Glu Val Gly Leu Gly Val Ser Ser Thr Thr Val195 200 205Gly Phe Val Val Pro Phe Thr Ile Met Leu Thr Cys Tyr Phe Phe Ile210 215 220Ala Gln Thr Ile Ala Gly His Phe Arg Lys Glu Arg Ile Glu Gly Leu225 230 235 240Arg Lys Arg Arg Arg Leu Leu Ser Ile Ile ValVal Leu Val Val Thr245 250255Phe Ala Leu Cys Trp Met Pro Tyr His Leu Val Lys Thr Leu Tyr Met260 265 270Leu Gly Ser Leu Leu His Trp Pro Cys Asp Phe Asp Leu Phe Leu Met275 280 285Asn Ile Phe Pro Tyr Cys Thr Cys Ile Ser Tyr Val Asn Ser Cys Leu290 295 300Asn Pro Phe Leu Tyr Ala Phe Phe Asp Pro Arg Phe Arg Gln Ala Cys305 310 315 320Thr Ser Met Leu Cys Cys Gly Gln Ser Arg Cys Ala Gly Thr Ser His325 330 335Ser Ser Ser Gly Glu Lys Ser Ala Ser Tyr Ser Ser Gly His Ser Gln340 345 350Gly Pro Gly Pro Asn Met Gly Lys Gly Gly Glu Gln Met His Glu Lys355 360 365Ser Ile Pro Tyr Ser Gln Glu Thr Leu Val Val Asp370 375 380<210>20<211>1140<212>DNA<213>未知<220><223><400>20ATGGAGGAAG GTGGTGATTT TGACAACTAC TATGGGGCAG ACAACCAGTC TGAGTGTGAG 60TACACAGACT GGAAATCCTC GGGGGCCCTC ATCCCTGCCA TCTACATGTT GGTCTTCCTC120CTGGGCACCA CGGGAAACGG TCTGGTGCTC TGGACCGTGT TTCGGAGCAG CCGGGAGAAG180AGGCGCTCAG CTGATATCTT CATTGCTAGC CTGGCGGTGG CTGACCTGAC CTTCGTGGTG240ACGCTGCCCC TGTGGGCTAC CTACACGTAC CGGGACTATG ACTGGCCCTT TGGGACCTTC300TTCTGCAAGC TCAGCAGCTA CCTCATCTTC GTCAACATGT ACGCCAGCGT CTTCTGCCTC360ACCGGCCTCA GCTTCGACCG CTACCTGGCC ATCGTGAGGC CAGTGGCCAA TGCTCGGCTG420AGGCTGCGGG TCAGCGGGGC CGTGGCCACG GCAGTTCTTT GGGTGCTGGC CGCCCTCCTG480GCCATGCCTG TCATGGTGTT ACGCACCACC GGGGACTTGG AGAACACCAC TAAGGTGCAG540TGCTACATGG ACTACTCCAT GGTGGCCACT GTGAGCTCAG AGTGGGCCTG GGAGGTGGGC600CTTGGGGTCT CGTCCACCAC CGTGGGCTTT GTGGTGCCCT TCACCATCAT GCTGACCTGT660TACTTCTTCA TCGCCCAAAC CATCGCTGGC CACTTCCGCA AGGAACGCAT CGAGGGCCTG720CGGAAGCGGC GCCGGCTGCT CAGCATCATC GTGGTGCTGG TGGTGACCTT TGCCCTGTGC780TGGATGCCCT ACCACCTGGT GAAGACGCTG TACATGCTGG GCAGCCTGCT GCACTGGCCC840TGTGACTTTG ACCTCTTCCT CATGAACATC TTCCCCTACT GCACCTGCAT CAGCTACGTC900AACAGCTGCC TCAACCCCTT CCTCTATGCC TTTTTCGACC CCCGCTTCCG CCAGGCCTGC960ACCTCCATGC TCTGCTGTGG CCAGAGCAGG TGCGCAGGCA CCTCCCACAG CAGCAGTGGG 1020GAGAAGTCAG CCAGCTACTC TTCGGGGCAC AGCCAGGGGC CCGGCCCCAA CATGGGCAAG 1080GGTGGAGAAC AGATGCACGA GAAATCCATC CCCTACAGCC AGGAGACCCT TGTGGTTGAC 1140<210>21<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>21Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>22<211>13<212>PRT<213>人工序列<223><400>22Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Metl 5 10 13<210>23<211>12<212>PRT<213>人工序列<223><400>23Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro1 5 10 12<210>24<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Met(O)<400>24Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa1 5 10 13<210>25<211>15<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Lys(Arg-Arg)<400>25Arg Arg Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>26<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>26Arg Arg Arg Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>27<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>27Arg Arg Lys Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>28<211>12<212>PRT<213>人工序列<223><400>28Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe15 10 12<210>29<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>29Arg Arg Ala Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe15 10 15<210>30<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>30Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>31<211>10<212>PRT<213>人工序列<223><400>31Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met1 5 10<210>32<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>32Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 11<210>33<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>33Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Ala Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>34<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>34Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Arg Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>35<211>12<212>PRT<213>人工序列<223><400>35Arg Pro Arg Leu Phe Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 12<210>36<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Nal(2)<400>36Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10 12<210>37<211>15<212>PRT<213>人工序列<223><400>37Arg Arg Phe Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 15<210>38<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>38Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Arg Gly Pro Met Pro Phe15 10 13<210>39<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一個(gè)位置上代表pGlu，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>39Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 12<210>40<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha<400>40Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 11<210>41<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十一個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>41Arg Pro Arg Leu Phe His Lys Gly Pro Xaa Xaa1 5 10 11<210>42<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>42Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Leu Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>43<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一個(gè)位置上代表pGlu，Xaa在第十三個(gè)位置上代表Nal(2)<400>43Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10 13<210>44<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Nal(2)<400>44Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 11<210>45<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>45Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Arg Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>46<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>46Xaa Arg Pro Arg Leu Phe Arg Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>47<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>47Xaa Arg Pro Arg Leu Ser Phe Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>48<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>48Xaa Arg Pro Arg Leu Phe His Lys Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 l3<210>49<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一個(gè)位置上代表pGlu，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Cha<400>49Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 12<210>50<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第一個(gè)位置上代表pGlu，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Nal(2)<400>50Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Xaa1 5 10 12<210>51<211>11<212>PRT<213>人工序列<223><400>51Arg Pro Arg Leu Phe Ala Arg Gly Pro Met Phe1 5 10 11<210>52<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>52Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Phe Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>53<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Cha<400>53Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Xaa1 5 10 12<210>54<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表pGlu<400>54Xaa Arg Pro Arg Leu Ser His Leu Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 13<210>55<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表NMe2<400>55Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Xaa1 5 10 12<210>56<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Mor<400>56Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Xaa1 5 10 12<210>57<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>57Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Ala Pro Xaa1 5 10 12<210>58<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa代表Phe(Cl)<400>58Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Gly Met Pro Xaa1 5 10 12<210>59<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第九個(gè)位置上代表N-MeAla，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>59Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Xaa Met Pro Xaa1 5 10 12<210>60<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>60Arg Pro Arg Leu Ser His Ala Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>61<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>61Arg Pro Arg Ala Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>62<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>62Arg Pro Ala Leu Ser His Lys Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>63<211>11<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十一個(gè)位置上代表Pyn<400>63Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Xaa1 5 10 11<210>64<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Pyn<400>64Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>65<211>13<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第十三個(gè)位置上代表Cha<400>65Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser Ala Arg Gly Gly Xaa1 5 10 13<210>66<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第三個(gè)位置上代表Lys(Me)2<400>66Arg Pro Xaa Leu Ser Ala Arg Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 12<210>67<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第七個(gè)位置上代表Lys(Me)2<400>67Arg Pro Arg Leu Ser Ala Xaa Gly Pro Met Pro Phe1 5 10 12<210>68<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第六個(gè)位置上代表Dap，Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>68Arg Pro Arg Leu Ser Xaa Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>69<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第六個(gè)位置上代表Dap(Ac)，Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>69Arg Pro Arg Leu Ser Xaa Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>70<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第六個(gè)位置上代表Dap(C6)，Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>70Arg Pro Arg Leu Ser Xaa Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 12<210>71<211>12<212>PRT<213>人工序列<223>Xaa在第六個(gè)位置上代表Dap(Adi)，Xaa在第十個(gè)位置上代表Cha，Xaa在第十二個(gè)位置上代表Phe(Cl)<400>71Arg Pro Arg Leu Ser Xaa Arg Gly Pro Xaa Pro Xaa1 5 10 1權(quán)利要求
1.一種以式(I)P1-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-P2-P3-Gly-Pro-P4-P5[式中，P1表示氫原子或者由相同或不同且側(cè)鏈可被取代的1-25個(gè)氨基酸組成的氨基酸殘基或肽鏈，P2表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基或側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，P3表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基、側(cè)鏈可被取代的芳香族氨基酸殘基或側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，P4表示結(jié)合鍵或側(cè)鏈可被取代的中性或芳香族氨基酸殘基，P5表示①側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基或者其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；陌被嵫苌?，②羥基或③側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基和側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基可被還原為羥甲基或甲?；碾难苌铮?Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-或-Gly-Pro-中的每個(gè)氨基酸殘基的側(cè)鏈均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中P1為氫原子、pGlu或Arg-Arg-Gln。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中P2為可被取代的His或可被取代的Ala。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中P3為可被取代的Arg或可被取代的Lys。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中-P4-P5為-Cha-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Phe或-Met-Phe。
6.如下表示的根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽①Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；②Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；③Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe；④Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；⑤Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；⑥Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)；⑦pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe或⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Phe-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Phe，或其酯或其酰胺或其鹽。
7.一種以式(II)Q1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Q2-Gly-Q5-Q3-Q4[式中，Q1表示氫原子或者由相同或不同且側(cè)鏈可被取代的1-25個(gè)氨基酸組成的氨基酸殘基或肽鏈，Q2表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基、側(cè)鏈可被取代的芳香族氨基酸殘基或側(cè)鏈可被取代的堿性氨基酸殘基，Q3表示結(jié)合鍵或側(cè)鏈可被取代的中性或芳香族氨基酸殘基，Q4表示①側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基或者其C末端羧基被還原為羥甲基或甲?；陌被嵫苌?，②羥基或③側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基和側(cè)鏈可被取代的氨基酸殘基結(jié)合形成的二肽鏈或其C末端羧基被還原為羥甲基或甲酰基的肽衍生物，Q5表示側(cè)鏈可被取代的中性氨基酸殘基，式-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-中的每個(gè)氨基酸殘基的側(cè)鏈均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中Q1為氫原子、pGlu或Arg-Arg-Gln。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中Q2為可被取代的Arg或可被取代的Lys。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中-Q3-Q4為-OH、-Met、-Met-Pro-Phe、-Met-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Pro-Phe、-Cha-Pro-Phe(Cl)、-Ala-Pro-Phe(Cl)、-Cha-Phe(Cl)或-Cha。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中Q5為可被取代的Pro、可被取代的Gly或可被取代的Ala。
12.如下表示的根據(jù)權(quán)利要求7所述的肽(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；(ii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；(iii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Phe(Cl)；(iv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(v)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha；(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe；(vii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(viii)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met；(ix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro；(x)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met；(xiii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xiv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Ala-Pro-Phe(Cl)；(xv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Met-Pro-Phe(Cl)；(xvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe-Ala-Met-Pro-Phe(Cl)；(xvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pyn；(xviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Pyn；(xix)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Gly-Cha；或者(xx)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Lys(Me)2-Gly-Pro-Met-Pro-Phe，或其酯或其酰胺或其鹽。
13.一種以式(III)R1-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-R2-Pro-R3[式中，R1表示氫原子或者由相同或不同且側(cè)鏈可被取代的1-25個(gè)氨基酸組成的氨基酸殘基或肽鏈，R2表示可被取代的Cha、可被取代的Met或可被取代的Nle，R3表示可被取代的Phe(Cl)、可被取代的Phe、可被取代的Nal(2)、可被取代的Cha或可被取代的Tyr，式中-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro或-Pro-的每個(gè)氨基酸殘基的側(cè)鏈均可被取代。]表示的肽或其酯或其酰胺或其鹽。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述肽或其酯或其酰胺或其鹽，其中R1為氫原子、pGlu或Arg-Arg-Gln。
15.如下表示的根據(jù)權(quán)利要求13所述的肽①Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；②Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；③Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；④pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe；⑤pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe(Cl)；⑥Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Tyr；⑦Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)；⑧pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Nal(2)；或者⑨Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Cha，或其酯或其酰胺或其鹽。
16.一種如下所示的肽(i)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met(O)；(ii)Arg-Arg-Lys(Arg-Arg)-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(iii)Arg-Arg-Arg-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(iv)Arg-Arg-Lys-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(v)Arg-Arg-Ala-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(vi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)；(vii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(viii)Arg-Arg-Phe-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(ix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(x)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Phe(Cl)；(xi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha；(xii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Leu-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xiii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)；(xiv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Arg-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xv)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Phe-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xvi)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Cha；(xvii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Nal(2)；(xviii)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Phe-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xix)pGlu-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Leu-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xx)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-NMe2；(xxi)Arg-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Mor；(xxii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Ala-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxiii)Arg-Pro-Arg-Ala-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxiv)Arg-Pro-Lys(Me)2-Leu-Ser-Ala-Arg-Gly-Pro-Met-Pro-Phe；(xxv)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxvi)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Ac)c-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxvii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(C6)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；(xxviii)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-Dap(Adi)-Arg-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)；或者(xxix)Arg-Pro-Ala-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Cha-Pro-Phe(Cl)，或其酯或其酰胺或其鹽。
17.一種含有權(quán)利要求1、7、13或16所述的肽或其酯或其酰胺或其鹽的藥物。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物，其為中樞神經(jīng)功能調(diào)節(jié)劑、循環(huán)功能調(diào)節(jié)劑、心臟功能調(diào)節(jié)劑、免疫功能調(diào)節(jié)劑、消化系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)劑、代謝功能調(diào)節(jié)劑或生殖系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物，其為預(yù)防或治療HIV感染或AIDS的藥物。
20.根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物，其為含有SEQ ID NO19所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)或其鹽的作用劑。
21.一種根據(jù)權(quán)利要求1、7、13或16所述肽或其酯或其酰胺或其鹽在制備包含權(quán)利要求1、7、13或16所述肽或其酯或其酰胺或其鹽的藥物中的用途。
22.一種預(yù)防或治療HIV感染或AIDS的方法，其特征在于，將權(quán)利要求1、7、13或16所述肽或其酯或其酰胺或其鹽投藥于哺乳動(dòng)物。
全文摘要
本發(fā)明涉及G蛋白偶聯(lián)型受體蛋白配體識(shí)別的一種新肽衍生物。本發(fā)明的肽衍生物可以用于①利用重組型受體蛋白表達(dá)系來(lái)開發(fā)受體結(jié)合分析系統(tǒng)和篩選藥品增補(bǔ)化合物；②開發(fā)藥物如，中樞神經(jīng)功能調(diào)節(jié)劑、循環(huán)功能調(diào)節(jié)劑、心臟功能調(diào)節(jié)劑、免疫功能調(diào)節(jié)劑、消化系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)劑、代謝功能調(diào)節(jié)劑或生殖系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)劑等。
文檔編號(hào)A61P3/00GK1419563SQ01807077
公開日2003年5月21日 申請(qǐng)日期2001年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月23日
發(fā)明者北田千惠子, 西澤直城, 日沼州司, 細(xì)谷昌樹 申請(qǐng)人:武田藥品工業(yè)株式會(huì)社