專利名稱：一種改進(jìn)的酶法制備阿莫西林的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種阿莫西林的制備方法，具體涉及一種改進(jìn)的酶法制備阿莫西林的方法。
背景技術(shù)：
阿莫西林，化學(xué)名為(2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-[(R)-(-)-2-氨基-2-(4-羥基氮基)乙酸氨基]-7-氧代-4-硫雜-I-氮雜雙環(huán)[3, 2,0]庚燒-2-甲酸二水合物,它是一種常用的青霉素類廣譜β_內(nèi)酰胺類抗生素。阿莫西林殺菌作用、穿透細(xì)胞壁的能力很強(qiáng)，是目前應(yīng)用較為廣泛的口服青霉素之一。阿莫西林的制備有化學(xué)合成法和酶法制備法，申請?zhí)枮镃N00100579.0、CN02100123. 5、CN200410043624. 8 和 CN201110162540. 6 的發(fā)明專利申請公開了阿莫西林 的化學(xué)合成方法?；瘜W(xué)合成法相對來說，合成路線長(例如，對羥基苯甘氨酸鄧鉀鹽與特戊酰氯混合后經(jīng)混酐、縮合、水解、結(jié)晶、過濾洗滌、干燥等工序)，且生產(chǎn)過程用到大量的溶媒，例如特戊酰氯、吡啶、三乙胺、二氯甲烷等毒性較大的物質(zhì)，不僅對操作人員毒害大，對環(huán)境也造成較大污染；而且化學(xué)法合成的阿莫西林具有晶型細(xì)小、流動(dòng)性差、松密度小、分裝困難的缺陷。相對于化學(xué)合成法，酶法制備阿莫西林的工藝相對流程較短(如對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽與6-ΑΡΑ混合后，加酶催化即得到阿莫西林)，工藝簡單，雜質(zhì)的帶入及產(chǎn)生較少，且制備過程中無溶媒及有毒害的試劑的特點(diǎn)；而且酶法所得產(chǎn)品的晶型較大、完整且規(guī)貝U，流動(dòng)性好，操作時(shí)粉塵少、松密度大、分裝收率高，有利于制劑的生產(chǎn)。其中、GoncalvesL R B, Giordan R L C, Giordano R C. Mathematical modelingof batch and semibatch reactors for the enzymic synthesis of amoxicillin[J].Proc Biochem, 2005,40 (I) :247-256);酶法制備阿莫西林的工藝優(yōu)化研究(中國抗生素雜志2011年I月第36卷第I期第44-47頁);酶法阿莫西林質(zhì)量研究(河北化工，2008年4月第31卷第4期30-31頁)分別介紹了酶法制備阿莫西林的方法，并將所獲得的阿莫西林產(chǎn)品與化學(xué)法獲得的產(chǎn)品進(jìn)行了質(zhì)量對比研究。從上述公開的內(nèi)容可以看出，化學(xué)合成法獲得的阿莫西林產(chǎn)品中，阿莫西林含量的最高為99. 37%、總雜含量最低為0. 77%、單雜含量最低為0. 17% ;而上述酶法獲得的阿莫西林產(chǎn)品中，阿莫西林含量的最高為99. 40%、總雜含量最低為0. 61 %、單雜含量最低為0.21% ;無論從產(chǎn)品的含量、總雜、單雜含量上，目前酶法制備工藝制得的阿莫西林的產(chǎn)品質(zhì)量與化學(xué)合成制得的產(chǎn)品質(zhì)量相當(dāng)。然而對于藥品而言，產(chǎn)品的質(zhì)量直接關(guān)系到患者的用藥安全，國家一直倡導(dǎo)提高藥品的質(zhì)量，確保用藥安全，而提高藥品的質(zhì)量也一直是本領(lǐng)域技術(shù)人員不斷追求的目標(biāo)。因此，有必要進(jìn)一步改進(jìn)酶法制備阿莫西林的工藝，以大幅地提高阿莫西林的產(chǎn)品質(zhì)量
發(fā)明內(nèi)容
針對以上技術(shù)缺陷，本發(fā)明提供了一種改進(jìn)的酶法制備阿莫西林的方法。所述方法包括以下步驟I)在10°C 20°C下，用pH值7. O 8. O的水或/和氨水溶液溶解6-APA，加入對
羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G酰基轉(zhuǎn)移酶；2)將步驟I)所得溶液用氨水調(diào)pH值至6. O 6. 5、在21 °C 30°C下進(jìn)行反應(yīng)直至6-APA的殘留量低于5mg/ml ;得含有阿莫西林產(chǎn)物的溶液；3)將含阿莫西林產(chǎn)物的溶液分離出青霉素G?；D(zhuǎn)移酶，用鹽酸調(diào)pH值到O. 5
2.O以至溶液澄清；然后加入用氨水溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 5 6. 5，并于O 5°C下結(jié)晶，即得。本發(fā)明的所述步驟I)中，作為實(shí)施方式之一，所述pH值7. O 8. O水或氨水溶液，pH值范圍包括但不限于7. O 7. 9,7. O 7. 8,7. O 7. 7,7. O 7. 6,7. O 7. 5,7. O 7. 4,7. O 7. 3,7. O 7. 2 ;7. I 8. 0,7. I 7. 9,7. I 7. 8,7. I 7. 7,7. I 7. 6,7. I 7. 5,7. I 7. 4、7. I 7. 3,7. I 7. 2 ;7. 2 8. 0,7. 2 7. 9,7. 2 7. 8,7. 2 7. 7,7. 2 7. 6,7. 2 7. 5,7. 2 7. 4、
7.2 7. 3 ;7. 3 8. 0,7. 3 7. 9,7. 3 7. 8,7. 3 7. 7,7. 3 7. 6,7. 3 7. 5,7. 3 7. 4 ;7. 4 8. 0,7. 4 7. 9,7. 4 7. 8,7. 4 7. 7,7. 4 7. 6,7. 4 7. 5 ;7. 5 8. 0,7. 5 7. 9,7. 5 7. 8,7. 5 7. 7,7. 5 7. 6 ;7. 6 8. 0、7· 6 7. 9、7· 6 7. 8、7· 6 7. 7 ;7. 7 8. 0、7· 7 7. 9、7· 7 7. 8 ;7. 8 8. 0、7· 8 7. 9 ;或7. 9 8. O ;同樣pH值可以為 7. 0,7. 1,7. 2,7. 3,7. 4,7. 5,7. 6,7. 7,7. 8、7. 9 或8. O
的水或氨水溶液。作為本發(fā)明的實(shí)施方式之一，所述氨水溶液進(jìn)一步優(yōu)選為pH值7. 5±0. I氨水溶液；所述PH值7. 5±0. I氨水溶液可以采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法進(jìn)行制備；既可以采用配制好的pH值7. 5 ± O. I的氨水溶液直接溶解6-APA，也可以先用水溶解6-APA，然后加入一定濃度的氨水調(diào)節(jié)pH值至7. 5±0. I ;其中所述氨水的濃度可以是本領(lǐng)域常規(guī)的濃度，本發(fā)明優(yōu)選為3mol/L濃度的氨水溶液；本發(fā)明步驟I)中，更進(jìn)一步優(yōu)選為先用適量的水溶解6-APA，然后用3mol/L濃度的氨水調(diào)節(jié)PH值至7.5±0. I ;再加入對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G酰基轉(zhuǎn)移酶；作為本發(fā)明的實(shí)施方式之一，本發(fā)明所述步驟I)中10°C 20°C溫度范圍包括但不限于11°C 20°C、12°C 20°C、13°C 20°C、14°C 20°C、15°C 20°C、16°C 20°C、17V 20°C、18°C 20°C、19°C 20°C ；1(TC 19°C、irC 19 、12 19 、13 19 、14 19 、15 19°C、16。。 19。。、17。。 19。。、18。。 19。。；10°C 18°c、irc 18°C、12°C 18°C、13°C 18°C、14°C 18°C、15°C 18°C、16°C 18°C、17°C 18°C ；
1(TC 17°C、irC 17°C、12°C 17°C、13°C 17°C、14°C 17°C、15°C 17°C、16。。 17。。；10°C 16°C、11°C 16°C、12°C 16°C、13°C 16°C、14°C 16°C、15°C 16°C ；10°C 15°C、11°C 15°C、12°C 15°C、13°C 15°C、14°C 15°C ；1(TC 14°C、、11°C 14°C、12°C 14°C、13°C 14°C ；10°C 13°C、11°C 13°C、12°C 13°C ；1(TC 12°C、或 ire 12°C ；也可以是在10°C、11°C、12°C、13°C、14°C、15°C、16°C、17°C、18°C、19°C或 20°C ;本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選為14°C 16°C，最佳為15°C ；作為本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式之一，所述步驟I)中，在14°C 16°C、優(yōu)選15°C，用水溶解6-APA,并用3. Omol/L的氨水調(diào)pH值至7. 5±0. I,然后加入對輕基苯甘氨酸甲酯鹽酸
鹽和青霉素G?；D(zhuǎn)移酶。作為本發(fā)明實(shí)施方式之一，所述步驟I)中，6-APA與對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽的重比為I : I. 3 I. 6，優(yōu)選I. 3 1.4;作為本發(fā)明實(shí)施方式之一，所述步驟I)中，青霉素G?；D(zhuǎn)移酶的用量為2. 0-2. 5UK/L ；作為實(shí)施方式之一，本發(fā)明的所述6-APA、D-對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽、青霉素G?；D(zhuǎn)移酶和/或水均為本領(lǐng)域常規(guī)的原料，符合本領(lǐng)域常規(guī)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，優(yōu)選符合如下標(biāo)準(zhǔn)的、任意來源(市上購買或制備)的原料或更高標(biāo)準(zhǔn)的原料)
權(quán)利要求
1.一種酶法制備阿莫西林的方法，所述方法包括 1)在10°C 20°C下，用pH值7.O 8. O的水或/和氨水溶液溶解6-APA’加入對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G?；D(zhuǎn)移酶； 2)將步驟I)所得溶液用氨水調(diào)pH值至6.O 6.5、在21°C 30°C下進(jìn)行反應(yīng)，直至6-APA的殘留量低于5mg/ml ;得含有阿莫西林產(chǎn)物的溶液； 3)將含阿莫西林產(chǎn)物的溶液分離出青霉素G?；D(zhuǎn)移酶，用鹽酸調(diào)pH值到O.5 2. O，以至溶液澄清；然后加入氨水溶液，調(diào)節(jié)PH值至5. 5 6. 5，并于0°C 5°C下結(jié)晶，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟I)中，6-APA與對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽的重量比為I : I. 3 I. 6，優(yōu)選I. 3 1.4;和/或青霉素G?；D(zhuǎn)移酶的用量為 2. 0-2. 5UK/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟I)中，在14°C 16°C、優(yōu)選15°C，用水溶解6-APA，并用氨水調(diào)pH值至7. 5±O. I。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中，在21°C 24°C，優(yōu)選22°C 23 °C下進(jìn)行反應(yīng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中還包括，析出晶體后，先后分別用水和/或80% 95%的甲醇、乙醇或異丙醇、或90-98%的丙酮的有機(jī)溶劑洗滌，干燥，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中，水或有機(jī)溶劑與阿莫西林的重量比為2 3 I。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中，干燥條件為-0. 06Mpa -O. 09Mpa、50°C 60°C下干燥。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟I)或步驟2)中氨水溶液的濃度為3mol/L ;和/或步驟3)中氨水溶液的濃度為6mol/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述方法包括 1)6-APA的投料比及溶解 在14°C 16°C條件下將6-APA加入水中，用3mol/L氨水調(diào)節(jié)pH值7. 5±0. 1，然后加入D-對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G?；D(zhuǎn)移酶，其中，6-APA與D-對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽的重量比I : I. 3 I. 4，青霉素G?；D(zhuǎn)移酶的量為2. 0KU/L 2. 5KU/L ； 2)反應(yīng)過程 用3mol/L的氨水調(diào)節(jié)步驟I)所得溶液的pH值在6. O 6. 5之間，在22°C -23°C下進(jìn)行反應(yīng)，用HPLC檢測6-APA的轉(zhuǎn)化率，當(dāng)6-APA的含量低于5mg/ml時(shí)，結(jié)束反應(yīng)，得到含阿莫西林產(chǎn)物的溶液； 3)分離、精制 過濾步驟2)所得溶液，以除去青霉素G?；D(zhuǎn)移酶，然后加入與阿莫西林的重量比為2/20 3/20的水，用6mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值O. 5 2. 0，至溶液澄清透明，用O. 22微米濾芯過濾； 然后用6mol/L的氨水調(diào)節(jié)pH值為5. 5 6. 5之間，降溫O 5°C，養(yǎng)晶； 過濾，晶體先后分別用水和/或80% 95%濃度的甲醇、乙醇或異丙醇，或90 98%濃度的丙酮有機(jī)溶劑洗滌，其中，水或有機(jī)溶劑與阿莫西林重量比為2 3 I。然后在50°C 60°C，真空度-O. 06Mpa -O. 09Mpa下干燥，直至水份低于14. 5%以下，即得。
10.一種權(quán)利要求1-9任一所述的方法獲得的阿莫西林產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品的阿莫西林含量大于或等于100. 7%;總雜的含量小于或等于為O. 15%;單雜的含量小于或等于 O. 10%。
全文摘要
本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，提供了一種改進(jìn)的酶法制備阿莫西林的方法以及該方法獲得的產(chǎn)品，其包括1)在10℃～20℃下，用pH值7.0～8.0的水或/和氨水溶液溶解6-APA，加入對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽和青霉素G?；D(zhuǎn)移酶；2)將步驟1)所得溶液調(diào)pH值至6.0～6.5、在21℃～30℃下進(jìn)行反應(yīng)，直至6-APA的殘留量低于5mg/ml；得含有阿莫西林產(chǎn)物的溶液；3)將含阿莫西林產(chǎn)物的溶液分離出青霉素G酰基轉(zhuǎn)移酶，用鹽酸調(diào)至溶液澄清；然后加入氨水溶液，調(diào)節(jié)pH值為5.5～6.5，0～5℃下結(jié)晶，即得。本發(fā)明大幅地提升了阿莫西林產(chǎn)品的質(zhì)量，進(jìn)一步提升了阿莫西林產(chǎn)品的用藥安全。
文檔編號C12P37/04GK102660621SQ201210135310
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月4日
發(fā)明者劉紅池 申請人:聯(lián)邦制藥(內(nèi)蒙古)有限公司