一種酶法合成阿莫西林的工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物的合成方法，具體來說是一種固定化阿莫西林合成酶的篩選 及一種酶法合成阿莫西林的工藝方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿莫西林，本名羥氨芐青霉素，是一種最常用的廣譜e-內(nèi)酰胺類抗生素，具溶菌 作用，主治易感微生物所引起的細(xì)菌性感染。阿莫西林服用方便，安全性高，療效好，不良反 應(yīng)少，價格低廉，備受醫(yī)生和患者的青睞。在抗生素類藥中，阿莫西林銷售額獨(dú)占鰲頭，大約 占世界青霉素類抗生素總銷售額的50%。
[0003] 20世紀(jì)90年代中期以來，采用酶法合成阿莫西林成為研宄重點(diǎn)。酶法相比化學(xué)法 在環(huán)保和成本上具有明顯的優(yōu)勢。酶法制備阿莫西林的工藝相對流程短，工藝簡單，雜質(zhì)的 帶入及產(chǎn)生較少，合成過程中無溶媒及有毒的試劑。
[0004] 在酶法生產(chǎn)阿莫西林的過程中，固定化阿莫西林合成酶的選擇是酶法工藝的關(guān) 鍵。固定化阿莫西林合成酶對產(chǎn)品的收率、雜質(zhì)的含量、產(chǎn)品的澄清度等起著關(guān)鍵的作用。 另外，固定化酶的穩(wěn)定性決定其使用壽命和生產(chǎn)成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對現(xiàn)有酶法合成阿莫西林工藝中，固定化酶的篩選及評價困難，生產(chǎn)工藝步驟 繁瑣、控制點(diǎn)差、反應(yīng)時間長，轉(zhuǎn)化率低等問題，本發(fā)明提供了一種固定化阿莫西林酶，及合 成阿莫西林的新工藝。
[0006] 本發(fā)明的內(nèi)容是通過以下方案通過的：
[0007] 一種酶法合成阿莫西林的工藝，具體步驟如下：
[0008] (1)采用氨基環(huán)氧型載體固定化得到固定化阿莫西林酶LK218 ;
[0009] 以戊二醛為交聯(lián)劑，將假單胞菌（Pseudomonassp.)來源的酰化酶，采用共價法固 定化，得到固定化阿莫西林酶LK218,采用固定化阿莫西林酶LK218催化合成阿莫西林，反 應(yīng)時間短，產(chǎn)品收率高，純度高。
[0010] (2)將步驟（1)所得的固定化阿莫西林酶LK218、6-氨基青霉烷酸、D-對羥基苯甘 氨酸衍生物加入至水中攪拌混合，得混合液；
[0011] 6-APA是6-氨基青霉烷酸的英文簡寫；
[0012] 所述的6-APA與D-對羥基苯甘氨酸衍生物的摩爾比為1/1. 02~1. 05,固定化阿 莫西林酶LK218在反應(yīng)體系中的濃度為5~20u/mL;
[0013] (3)用3mol/L的鹽酸溶液和lmol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)步驟2)所得的混合液 pH值為6. 2-6. 4,控制混合液溫度為10-20°C，反應(yīng)40-80min，采用HPLC進(jìn)行跟蹤檢測，直 至6-APA殘留濃度為0-2mg/mL，結(jié)束反應(yīng)；
[0014] 優(yōu)選反應(yīng)時間為50-70min，反應(yīng)過短，轉(zhuǎn)化率低，反應(yīng)不完全；但反應(yīng)時間過長， 阿莫西林開始水解。這個反應(yīng)時間是根據(jù)LK218酶考察出來的。
[0015] (4)取步驟3)所得的混合液，通過篩網(wǎng)，分離出反應(yīng)液和固定化酶；
[0016] 所述的篩網(wǎng)為80-120目，優(yōu)選90-110目；篩網(wǎng)目數(shù)過大，固定化酶就容易從篩網(wǎng) 泄露，目數(shù)過小，阿莫西林粗品從篩網(wǎng)放料就較困難；
[0017] (5)反應(yīng)液用6mol/L的鹽酸溶液溶清，再用6mol/L的氨水溶液結(jié)晶，養(yǎng)晶，洗滌， 干燥，即得產(chǎn)品阿莫西林。
[0018] 步驟（1)中所述的氨基環(huán)氧型載體是苯乙烯系大孔吸附樹脂、丙烯酸系大孔吸附 樹脂中的一種或兩種組合。
[0019] 步驟（2)中所述的D-對羥基苯甘氨酸衍生物選自D-對羥基苯甘氨酸甲酯、D-對 羥基苯甘氨酸乙酯、D-對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽、D-對羥基苯甘氨酸乙酯鹽酸鹽中的一 種或多種組合。
[0020] 步驟⑶中所述的6-APA殘留濃度為0-lmg/mL。
[0021] 步驟⑷中所述的篩網(wǎng)為80-120目。
[0022] 步驟（5)中所述的用酸溶清pH值為0. 9-1. 1，堿結(jié)晶pH為5. 0-5. 2。
[0023] 所述產(chǎn)品的阿莫西林純度99. 8%以上，澄清度小于0. 5,反應(yīng)摩爾收率92%以上。
[0024] 本發(fā)明將固定化酶投入水相中，每次反應(yīng)后僅需母液和去離子水清洗即可再用。 6-APA和D-對羥基苯甘氨酸衍生物按比例一次性加入。反應(yīng)過程中pH值比較穩(wěn)定。反應(yīng) 完后，通過篩網(wǎng)放料。整合成過程，工藝簡單，操作方便，反應(yīng)時間短、能耗低、污染少。所得 產(chǎn)品質(zhì)量好，收率高。因此，本發(fā)明是一種高效率的綠色生產(chǎn)工藝。
[0025] 關(guān)于本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)，可以通過下述方面闡述：
[0026] (1)固定化的酶可以回收重復(fù)使用，降低了成本。另外固定化的酶性能更穩(wěn)定。反 應(yīng)后，更易于分離。此外，還便于運(yùn)輸、儲存及自動化操作。
[0027] (2)LK218酶是新研發(fā)的品種，現(xiàn)有技術(shù)還未使用該產(chǎn)品。另外，與市售類似產(chǎn)品先 比，催化反應(yīng)過程中，反應(yīng)時間更短，反應(yīng)后的阿莫西林產(chǎn)品質(zhì)量更好，收率更高。
[0028] (3)1)反應(yīng)時間短，相比市售相似產(chǎn)品，平均反應(yīng)時間縮短一半；2)產(chǎn)品純度高， 能達(dá)到99. 8%以上；3)收率高，摩爾收率相比目前市售產(chǎn)品，能提高1%;4)澄清度更好，小 于0.5,而市售產(chǎn)品澄清度小于1。
【附圖說明】
[0029] 圖1為對照品酶催化時6-APA轉(zhuǎn)化率隨批次的變化關(guān)系；
[0030] 圖2為對照品酶代表衰減性能的發(fā)白時間隨批次的變化關(guān)系；
[0031] 圖3為LK218酶催化時6-APA轉(zhuǎn)化率隨批次的變化關(guān)系；
[0032] 圖4為LK218酶衰減情況隨批次的變化關(guān)系。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 本發(fā)明通過比較例和實(shí)施例來闡明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
[0034] 實(shí)施例一
[0035] 在反應(yīng)器中，將1300u的固定化阿莫西林合成酶LK218加入至130mL的去離子水 中，開啟攪拌。加入〇? 〇6mol的6-APA和0? 0612mol的D-對羥基苯甘氨酸甲酯。加入氫氧 化鈉，調(diào)反應(yīng)pH值至6. 3。保持反應(yīng)溫度為19-20°C。反應(yīng)55min。將反應(yīng)液與固定化阿莫 西林合成酶分離。所得產(chǎn)物用鹽酸調(diào)pH至0. 9-1. 1溶解，過濾，用氫氧化鈉調(diào)pH值結(jié)晶， 終點(diǎn)pH5. 0-5. 2。在0-5°C養(yǎng)晶lh后，洗滌，干燥，得阿莫西林成品。
[0036] 實(shí)施例二
[0037] 在反應(yīng)器中，將1300u的固定化阿莫西林合成酶LK218加入至130mL的去離子水 中，開啟攪拌。加入〇? 〇6mol的6-APA和0? 0618mol的D-對羥基苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽。加 入氫氧化鈉，調(diào)反應(yīng)pH值至6. 3。保持反應(yīng)溫度為14-15°C。反應(yīng)65min。將反應(yīng)液與固定 化阿莫西林合成酶分離。所得產(chǎn)物用鹽酸調(diào)pH至0. 9-1. 1溶解，過濾，用氫氧化鈉調(diào)pH值 結(jié)晶，終點(diǎn)PH5. 0-5. 2。在0-5°C養(yǎng)晶lh后，洗滌，干燥，得阿莫西林成品。