一種含氮雜環(huán)六肽前體的組合物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于醫(yī)藥制備和藥物分析領(lǐng)域，涉及一種卡泊芬凈前體化合物紐莫康定B0 與結(jié)構(gòu)類(lèi)似物的組合物及其制備方法，以及利用該組合物制備卡泊芬凈的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紐莫康定B0，如式I所示，是由微生物發(fā)酵產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有環(huán)狀的六肽 結(jié)構(gòu)，一般用于作為合成卡泊芬凈(式m所示）的原料，其制備方法公開(kāi)于若干文獻(xiàn)中，如美 國(guó)專(zhuān)利 US5194377、US5202309 和 US6610822。
[0003]
[0004]
[0005] 按照紐莫康定結(jié)構(gòu)中脯氨酸上取代基的不同，主要分為三類(lèi):Α0、Β0、和C0』0蘇氨 酸上取代基的不同，又會(huì)形成與其結(jié)構(gòu)極為相似的絲氨酸類(lèi)似物，式II化合物。
[0006]
[0007] 在發(fā)酵制備式I化合物過(guò)程中，相應(yīng)會(huì)產(chǎn)生紐莫康定A0、C0和絲氨酸類(lèi)似物(結(jié)構(gòu) 如式Π 所示)等一些雜質(zhì)。紐莫康定A0、C0通過(guò)萃取、沉淀、大孔吸附樹(shù)脂層析、制備型正相 色譜等方法進(jìn)行分離純化，其專(zhuān)利冊(cè)200404235(^2，10022061841，10 200506632341等對(duì)分 離純化方法進(jìn)行了描述。
[0008] W00008197A1和美國(guó)專(zhuān)利US5378804對(duì)式Π 化合物及其分離方法進(jìn)行了描述。
[0009]式II化合物通過(guò)現(xiàn)有的分離純化方法能夠得到一定程度的去除，例如利用制備型 正相色譜，但是效果并不很理想，最終獲得的產(chǎn)物中式II化合物的含量依然很高U 2.5 % )。而且此方法有機(jī)溶劑使用量大，對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重，生產(chǎn)成本高，生產(chǎn)效率低，很難實(shí) 現(xiàn)工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
[0010] 工業(yè)微生物和生物技術(shù)期刊（Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology)第26期第216-211頁(yè)(2001)描述了紐莫康定B0中含有的絲氨酸類(lèi)似物式II 雜質(zhì)在后續(xù)的制備過(guò)程中會(huì)轉(zhuǎn)化為卡泊芬凈絲氨酸類(lèi)似物雜質(zhì)，從而導(dǎo)致終產(chǎn)物卡泊芬凈 的純度降低。
[0011] 在合成式III化合物的過(guò)程中，紐莫康定B0中所含的式II化合物可以通過(guò)例如下 面反應(yīng)轉(zhuǎn)化為卡泊芬凈絲氨酸類(lèi)似物(式IV所示）：
[0013] J.0rg.Chem.2007,72,2335-2343 233中也有相關(guān)描述。
[0014]
[0015] CN102076707A中描述了利用中高壓反相制備層析柱分離純化含有式IV化合物的 醋酸卡泊芬凈，其中描述使用RP C18為填料，乙腈/醋酸溶液為流動(dòng)相制備式IV化合物(絲 氨酸類(lèi)似物醋酸卡泊芬凈)含量低的醋酸卡泊芬凈。此工藝使用大量有毒有害的乙腈，生產(chǎn) 成本昂貴，無(wú)法用于規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。
[0016] CN102947327A中記載了在卡泊芬凈中間體階段利用正相硅膠制備層析柱分離去 除中間體中含有的絲氨酸類(lèi)似物。此純化工藝需要使用大量溶劑、生產(chǎn)成本高，基本上不具 備工業(yè)化生產(chǎn)價(jià)值。
[0017] 雜質(zhì)是指在任何活性藥物成分（也稱(chēng)原料藥，API)中不需要的，并且在極端情況 下，甚至可能對(duì)正在接收含API的劑型治療的患者有害的成分。
[0018] 最終生產(chǎn)的API的純度是其能否實(shí)現(xiàn)商品化的關(guān)鍵。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局 (Π )Α)明確要求API生產(chǎn)過(guò)程雜質(zhì)必須控制在規(guī)定界限以下。在ICH Q7A指南中，F(xiàn)DA指定了 可使用的原材料的質(zhì)量，以及可接受的工藝條件例如溫度、壓力、時(shí)間和化學(xué)計(jì)量比，包括 純化步驟例如結(jié)晶、蒸餾和液-液萃取。（參見(jiàn)ICH關(guān)于活性藥物成分的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī) 范ICH Good Manufacturing Practice Guide for Active Pharmaceutial Ingredients， Q7A)。化學(xué)反應(yīng)的產(chǎn)物很少為具有足夠純度而符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的單一化合物，反應(yīng)的副產(chǎn)物 和副產(chǎn)品以及用于反應(yīng)的輔助劑在大多數(shù)情況下也將存在于產(chǎn)物中。在加工API期間的某 些階段中，必須分析其純度，通常通過(guò)高效液相色譜法或薄層色譜法，以確定其是否適于繼 續(xù)加工，并最終用于藥物產(chǎn)品中。FDA要求API盡可能無(wú)雜質(zhì)，使得其在臨床應(yīng)用時(shí)盡可能地 安全。例如，F(xiàn)DA推薦某些雜質(zhì)的量限制在少于0.1個(gè)百分比，（參見(jiàn)ICH關(guān)于活性藥物成分的 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范，Q7A)。
[0019] 根據(jù)上述對(duì)于API中雜質(zhì)限量的嚴(yán)格要求，如何盡可能的提高API的純度，降低雜 質(zhì)的含量成為工藝開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵。如果最終藥物產(chǎn)品的純化難度太高，通?？梢钥紤]通過(guò)提 高其藥物中間體的純度來(lái)提高其純度。因此，在式III化合物的制備工藝中，作為中間體的 式I化合物純度越高，經(jīng)化學(xué)修飾得到的式m化合物純度也會(huì)越高。如果經(jīng)化學(xué)修飾得到的 式m化合物純度高，那么就可以極大程度地減輕式m化合物純化步驟的工藝壓力，利用簡(jiǎn) 便的純化工藝得到高純度的最終藥物產(chǎn)品。因此，就要求式II化合物的含量盡可能低。
[0020] 因此發(fā)明人急切的希望在紐莫康定bo階段，利用特定的純化手段，獲得式II化合 物含量極低的紐莫康定B0。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0021] 最初，發(fā)明人試圖采用常規(guī)的結(jié)晶方法，即希望通過(guò)獲得式I化合物的晶體將式II 化合物雜質(zhì)去除。然而在經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)采用常規(guī)的結(jié)晶手段，加入反溶劑通過(guò)過(guò)飽 和度的方式使式I化合物析出，獲得式I化合物晶體中，式II化合物的含量并沒(méi)有降低，換言 之，常規(guī)的結(jié)晶析出過(guò)程對(duì)式II化合物沒(méi)有任何去除效果。
[0022] 發(fā)明人在整理大量結(jié)晶實(shí)驗(yàn)過(guò)程時(shí)卻意外發(fā)現(xiàn)，在一些實(shí)驗(yàn)中，加入有機(jī)溶劑后 溶液會(huì)發(fā)生渾濁，明顯有固體顆粒析出，但與結(jié)晶不同，固體顆粒并不沉淀下來(lái)，而是懸浮 在混合液中。發(fā)明人將固體顆粒從混合液中分離出來(lái)，進(jìn)一步分析后，驚喜地發(fā)現(xiàn)，固體顆 粒為非結(jié)晶態(tài)的式I化合物，而且雜質(zhì)式II化合物的含量非常低，經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)反復(fù)證實(shí)了 上述結(jié)果，由此得出結(jié)論，通過(guò)得到上述懸浮狀態(tài)的體系，可以有效去除雜質(zhì)式II化合物。 發(fā)明人在進(jìn)一步研究上述體系后明確:上述懸浮液實(shí)際是式I化合物與水、溶劑形成了一種 粗分散體系的懸浮液(參考《膠體與界面化學(xué)》書(shū)籍，高等教育出版社），即式I化合物與水、 溶劑形成一種特殊的狀態(tài)，粒子直徑大于o.lum，在此狀態(tài)下，式I化合物既沒(méi)有溶于溶劑中 形成溶液，也沒(méi)有以沉淀或晶體的形式析出，而是以一種顆粒的狀態(tài)懸浮于溶劑中。而式II 化合物卻大量溶解于溶劑中，通過(guò)過(guò)濾或離心分離的方式，將固體顆粒和溶劑分離，就獲得 了純度更高的式I化合物，而大量的式II化合物卻留在了溶劑里，因此可以非常有效地去除 式I化合物中的雜質(zhì)式π化合物。
[0023] 為了確定獲得上述粗分散體系的懸浮液的方法，發(fā)明人又開(kāi)展了大量實(shí)驗(yàn)研究， 最終發(fā)現(xiàn)：當(dāng)控制溶劑體系中水分含量在8%_30%體積百分比時(shí)，可以獲得粗分散體系的 懸浮液。當(dāng)水分含量大于30%時(shí)，由于水分含量過(guò)高，在加入非極性的反溶劑時(shí)，通常會(huì)使 反溶劑使用量過(guò)大或者使得整個(gè)體系分相，最終無(wú)法獲得所述的粗分散體系的懸浮液。
[0024] 此外，根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，每進(jìn)行一遍上述操作，雜質(zhì)式II化合物的含量可以降低 40%至60%，而式I化合物的損失僅2%以下。通過(guò)重復(fù)上述方法，可以確保將式I化合物中 雜質(zhì)式II化合物的含量降到2.0%，優(yōu)選0.49%以下;更優(yōu)為0.2%以下;最優(yōu)為0.1%以下。
[0025] 進(jìn)一步地，通過(guò)將雜質(zhì)式II化合物含量極低的式I化合物作為制備卡泊芬凈的原 料合成卡泊芬凈中間體或醋酸卡泊芬凈，通常情況下，所獲得的卡泊芬凈(式III化合物)產(chǎn) 品中卡泊芬凈絲氨酸類(lèi)似物雜質(zhì)（式IV化合物)可以控制在0.1%下?？梢源蟠鬁p輕卡泊芬 凈產(chǎn)品純化階段的工藝壓力。
[0026] 制備含有式I和式II所示化合物的組合物的方法及用該方法制備獲得的組合物A 和B
[0027] 本發(fā)明提供了一種制備含有式I和式II所示化合物的組合物的方法，所述的方法 包括步驟：
[0028] (a)將式I化合物粗品溶解在有機(jī)溶劑(i)的水性溶液中；
[0029] (b)通過(guò)降溫和/或添加有機(jī)溶劑（?? )，使固體從溶解液中析出，得到含式I化合物 的懸浮液；
[0030] (c)通過(guò)離心或過(guò)濾，得到含有式I和式II所示化合物的組合物A。
[0031]
[0032] 在另一優(yōu)選例中，步驟(a)中，所述有機(jī)溶劑（i)的水性溶液中，水的體積百分比 為8%-30%，優(yōu)選10%-25%，更優(yōu)選12%-22%，最優(yōu)選16%-22%。。
[0033]在另一優(yōu)選例中，步驟(a)中，所述有機(jī)溶劑(i)選自：甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、 異丁醇、正丁醇、丙酮中的一種或多種的混合物。
[0034]在另一優(yōu)選例中，步驟(b)中，所述有機(jī)溶劑（??)選自：C3--7酯、己烷、正庚烷、正戊 烷、二氯甲烷中的一種或多種的混合物;優(yōu)選自：乙酸乙酯、乙酸異丙脂、正己烷中的一種或 多種的混合物。
[0035] 在另一優(yōu)選例中，所述步驟(a)-(c)可以重復(fù)一次或一次以上。
[0036] 本發(fā)明還提供了一種由上述的制備方法所獲得的含有式I化合物的懸浮液，所述 懸浮液中固體顆粒直徑大于等于〇. lum