本發(fā)明屬藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類(lèi)具有吡唑環(huán)結(jié)構(gòu)的小分子化合物的合成及其用于制備抗菌藥物和抗腫瘤藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
對(duì)于由細(xì)菌等引起的感染性疾病，隨著抗生素及其他抗菌藥物的廣泛應(yīng)用甚至濫用，細(xì)菌的耐藥性問(wèn)題也越來(lái)越突出。臨床上已發(fā)現(xiàn)許多新的耐藥菌，包括嚴(yán)重危及臨床治療的耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌（mrsa）和耐萬(wàn)古霉素的腸球菌（vre），因此開(kāi)發(fā)新的高效抗感染藥具有重要意義。
雜環(huán)化合物以其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)成為新藥發(fā)現(xiàn)的重要源泉。本發(fā)明提供了新的具有吡唑環(huán)母核的化合物實(shí)體，這些化合物具有抗菌活性，還具有一定的抗腫瘤活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一在于提供2個(gè)吡唑類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供一種用于抗菌的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和藥用輔料。
具體而言，本發(fā)明所述2個(gè)吡唑類(lèi)化合物為如下所述結(jié)構(gòu)：
本發(fā)明的又一目的是提供所示化合物h15和h16除具有抗菌作用外，還具有在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的又一目的是提供一種用于抗腫瘤的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和藥用輔料。
化合物h15的分子式為c23h21n3o3，化學(xué)名稱為：4-(4,5,6,7-四氫-3-(5-甲氧基吲哚-3-基)吲唑-2-基)苯甲酸。h16的分子式為c30h22n4o2，化學(xué)名稱為：4-(3,5-二((e)-2-(吲哚-3-乙烯基)-1h-吡唑-1-基)苯甲酸。
本發(fā)明的化合物，其反應(yīng)方程式如下所示，其中化合物h15經(jīng)歷了一個(gè)由咪唑啉自發(fā)脫氫的過(guò)程：
具體實(shí)施方式
本發(fā)明在以下的實(shí)施例中進(jìn)一步說(shuō)明。這些實(shí)施例僅為了說(shuō)明的目的而非限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1.化合物的合成。
化合物h15：4-(4,5,6,7-四氫-3-(5-甲氧基吲哚-3-基)吲唑-2-基)苯甲酸。
4-(4,5,6,7-tetrahydro-3-(5-methoxy-1h-indol-3-yl)indazol-2-yl)benzoicacid。
取0.51g(2mmol)2-(3-(5-甲氧基吲哚)亞甲基)環(huán)己酮，0.31g(2mmol)對(duì)羧基苯肼和30ml甲醇于50ml干燥的圓底燒瓶中。隨后加入4ml的乙酸并攪拌，升高溫度至50℃反應(yīng)。反應(yīng)8h后，停止加熱，繼續(xù)攪拌10h。減壓蒸除甲醇和乙酸，得油狀物。將油狀物倒入攪拌的冰水中，有固體析出，抽濾，水洗后得粗產(chǎn)物。干法柱層析，得純產(chǎn)品0.50g。產(chǎn)品為白色固體，產(chǎn)率65.0%，熔點(diǎn)：250-252℃。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:12.90(s,1h),11.36(s,1h),7.80(d,j=8.6hz,2h),7.46(d,j=2.4hz,1h),7.42(d,j=8.5hz,2h),7.29(d,j=8.8hz,1h),6.68(dd,j=8.8hz,2.2hz,1h),6.26(d,j=1.7hz,1h),3.40(s,3h),2.71(t,j=5.9hz,2h),2.48-2.50(m,2h),1.82(d,j=5.1hz,2h),1.72(d,j=4.7hz,2h)。esi-ms[m+1]+(m/z:388.2)。
化合物h16：4-(3,5-二((e)-2-(吲哚-3-乙烯基)-1h-吡唑-1-基)苯甲酸。
4-(3,5-bis((e)-2-(1h-indol-3-yl)vinyl)-1h-pyrazol-1-yl)benzoicacid。
取0.35g(1.0mmol)1,7-(3-吲哚基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮和0.23g(1.5mmol)對(duì)羧基苯肼于100ml干燥的三口瓶中，隨后加入30ml甲醇到反應(yīng)瓶中。在n2保護(hù)下，加入4ml的乙酸并攪拌，升高溫度至50℃，反應(yīng)20h。反應(yīng)結(jié)束后，冷卻，減壓蒸除甲醇和乙酸，得到紅黑色油狀物。將油狀物倒入攪拌的冰水中，有固體析出，抽濾，隨后用過(guò)量的水洗滌濾餅，干燥后得粗產(chǎn)物。干法柱層析，得純產(chǎn)品0.32g。產(chǎn)品為淡黃色固體，產(chǎn)率68.0%。熔點(diǎn)：275-278℃。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:13.13(s,1h),11.48(s,1h),11.38(s,1h),8.15(d,j=8.6hz,2h),7.95(d,j=7.6hz,1h),7.71-7.77(m,5h),7.54(d,j=6.0hz,1h),7.50(d,j=6.4hz,1h),7.45(d,j=7.8hz,2h),7.10-7.20(m,5h),7.05(d,j=16.6hz,1h),6.94(d,j=16.2hz,1h)。esi-ms[m-1]-(m/z:469.2)。
實(shí)施例2.化合物的抗菌活性測(cè)定
采用抑菌圈測(cè)定法對(duì)所合成的類(lèi)似物進(jìn)行抗菌活性測(cè)定，并以黃藤素作為陽(yáng)性對(duì)照藥。選用n,n-二甲基甲酰胺(dmf)為溶劑，將黃藤素和所合成的化合物配置成濃度為2×10－3mol/l的溶液。在此濃度下來(lái)比較各化合物對(duì)大腸桿菌、枯草桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制活性。
用1ml無(wú)菌蒸餾水將已活化好的菌株洗出并稀釋搖勻，制成菌液，使其含菌數(shù)為106-107cfu/ml。在超凈工作臺(tái)中，移取1ml的菌液于已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基上，使用玻璃涂布環(huán)均勻的把菌液涂布在瓊脂平板上，倒置培養(yǎng)1h，隨后將含有10μl樣品的直徑為6mm的濾紙片放在平板上。每個(gè)平板放3個(gè)濾紙片，其中1個(gè)濾紙片為含有dmf的濾紙片，作空白對(duì)照試驗(yàn)。把平板放入恒溫培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為37℃，在濕潤(rùn)的環(huán)境下培養(yǎng)24h。培養(yǎng)孵化后，用直尺測(cè)得每個(gè)濾紙片的抑菌圈直徑，并計(jì)算樣品抑菌圈直徑的平均值。抗菌活性的大小可通過(guò)抑菌圈直徑的大小來(lái)判斷。一般判定結(jié)果為：<10mm表示輕度敏感，10-15mm表示中度敏感，>15mm表示高度敏感。最終實(shí)驗(yàn)測(cè)得的抑菌圈數(shù)據(jù)如表1所示。
表1受試化合物的抑菌作用
從表1的結(jié)果可以看出，在樣品濃度為2×10－3mol/l時(shí)，化合物h15和h16對(duì)大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)、枯草桿菌(革蘭氏陽(yáng)性菌)和金黃色葡萄球菌(革蘭氏陽(yáng)性菌)均有較顯著的抑制作用，在同等條件下對(duì)這三種試驗(yàn)菌的抑制作用均比黃藤素強(qiáng)，具有較強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值。
實(shí)施例3.化合物的抗腫瘤活性測(cè)定
采用mtt法測(cè)定。將待測(cè)的腫瘤細(xì)胞常規(guī)接種于完全培養(yǎng)基中，在37℃和5%的co2飽和濕度下，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、擴(kuò)增。細(xì)胞經(jīng)過(guò)0.25%胰蛋白酶消化后，向其中加入培養(yǎng)液將其稀釋成1×105個(gè)/ml瘤細(xì)胞懸液(胎盼藍(lán)染色，活細(xì)胞數(shù)均＞95%)，供試驗(yàn)用。
在96孔無(wú)菌培養(yǎng)板上分別設(shè)陰性對(duì)照孔、陽(yáng)性對(duì)照孔和待測(cè)物的不同濃度孔，用dmso將待測(cè)化合物配成各種不同濃度的稀液，同時(shí)每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔。在96孔無(wú)菌培養(yǎng)板上分別接種制備好的細(xì)胞懸液，培養(yǎng)24h后，向其中加入不同濃度的待測(cè)化合物及陽(yáng)性對(duì)照藥。將等量的培養(yǎng)液加入到陰性對(duì)照孔內(nèi)，隨后在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。分別于72h后取出，每孔加入mtt(四甲基偶氮唑藍(lán))20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h，取出后，將其放入離心機(jī)，然后離心，棄掉上清液。在每孔中分別加入150μl的dmso，震動(dòng)后，將紫藍(lán)色甲瓚結(jié)晶徹底溶解。用酶標(biāo)儀與562nm處測(cè)定各孔的od值，并最終通過(guò)計(jì)算得出ic50值。
選用細(xì)胞株為食管癌ec109和胃癌mgc803，以5-fu(5-氟尿嘧啶)和順鉑為陽(yáng)性對(duì)照藥。最終各化合物對(duì)細(xì)胞株的ic50值見(jiàn)表2。
表2受試化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用
從表2可以看出，化合物h15對(duì)ec109食管癌細(xì)胞株有一定的抑制作用，化合物h16則對(duì)兩種細(xì)胞株均有一定的抑制作用且其ic50值接近陽(yáng)性對(duì)照藥，說(shuō)明化合物有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。