一種棘白菌素b的純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)涉及藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及藥物中間體的分離純化方法，更進(jìn)一步的 涉及一種棘白菌素 B的純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 芬凈類(lèi)藥物作為棘白菌素家族的重要成員，可以抑制真菌細(xì)胞壁β-α - 3) _ 葡聚糖合成，對(duì)于臨床常見(jiàn)的念珠菌屬及其他真菌有較強(qiáng)的抗菌活性。已上市的芬凈類(lèi)藥 物阿尼芬凈和米卡芬凈都是由各自的前體在酰基水解酶作用下得到母核，再經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾 而得，棘白菌素 Β是轉(zhuǎn)化生成棘白菌素 Β母核的關(guān)鍵底物，提1?棘白菌素 Β母核的轉(zhuǎn)化廣量 將提高合成產(chǎn)品阿尼芬凈的產(chǎn)量，而目前棘白菌素 B主要是通過(guò)發(fā)酵而得，而高純度的棘 白菌素 B將明顯提高棘白菌素 B母核的轉(zhuǎn)化效率和產(chǎn)量，因此，得到高純度的棘白菌素 B就 在提高棘白菌素 B母核轉(zhuǎn)化率上具有明顯的優(yōu)勢(shì)。
[0003] 棘白菌素 B (Echinocandin B,簡(jiǎn)稱(chēng) ECB)由構(gòu)巢曲霉（Aspergilus nidulans)代 謝產(chǎn)生，是棘白菌素類(lèi)中的一種，其結(jié)構(gòu)如下：
[0004] 目前較少有將棘白菌素 B提純到高純度后再進(jìn)行轉(zhuǎn)化生成棘白菌素 B母核，而高 純度的棘白菌素 B將明顯提高棘白菌素 B母核的轉(zhuǎn)化效率和產(chǎn)量。因此，找到一種高效的、 低成本的獲得高純度棘白菌素 B的方法具有可行的工業(yè)意義的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的主要目的是為了解決棘白菌素 B的純化問(wèn)題，并提供用于制備高純度棘 白菌素 B。
[0006] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種高純度的棘白菌素 B的制備方法，該方法 包括以下步驟： 將發(fā)酵液固液分離得到的粗品進(jìn)行反相制備柱分離，可得高純度棘白菌素 B，其色譜純 度大于97%。
[0007] 其中，所述的反相制備柱為C1S柱，柱料的粒徑為6μπι ~10μπι，優(yōu)選8μπι;反相制 備柱上樣方法為：用解析液將粗品溶解成濃度為90g/L~110g/L，優(yōu)選100g/L，然后上樣。
[0008] 所述反相制備柱的解析液為甲醇：水：乙腈=70:20:10 (V/V)。
[0009] 本發(fā)明所提供的方法具有工藝簡(jiǎn)單、收率高的優(yōu)點(diǎn)，由本發(fā)明所述方法制備的棘 白菌素 B色譜純度大于97%。
[0010]
【附圖說(shuō)明】： 圖1顯示的是由實(shí)施例1方法純化后得到的棘白菌素 B的HPLC譜圖，其中棘白菌素 B 的保留時(shí)間約為12. 177min。
[0011]
【具體實(shí)施方式】： 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但不是對(duì)本發(fā)明的限定。另外，除非 另有說(shuō)明，在本說(shuō)明書(shū)中，一般操作均是在室溫條件下進(jìn)行的，室溫是指25-30°C。棘白菌素 B粗品可參考US4288549、US6506726等現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)的方法獲得。 實(shí)施例
[0012] C1S反相柱填料（日本大曹公司）規(guī)格：Size :8 μ m。
[0013] C1S 柱規(guī)格：填料裝量：200g ;Size :41. 4mmX 250mm。
[0014] 將lg棘白菌素 B粗品溶解于10ml解析液中，過(guò)濾得10ml濾液，對(duì)該濾液進(jìn)行 HPLC分析，棘白菌素 B的含量為0. 51g，用甲醇：水：乙腈=70:20:10 (V/V)溶液平衡柱 子。上樣完畢，用甲醇：水：乙腈=70:20:10(V/V)溶液進(jìn)行洗脫，并通過(guò)UV檢測(cè)器監(jiān)測(cè)， 當(dāng)棘白菌素 B峰峰高上升到0. 4AU開(kāi)始收集，當(dāng)棘白菌素 B峰峰高下降到0. 5AU停止收集， 合并收集液，得棘白菌素 B高純度收集液243ml，對(duì)該收集液進(jìn)行HPLC分析，棘白菌素 B的 含量為 0. 36g，HPLC 純度 97. 3 %，收率 70. 6 %。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種棘白菌素B的純化方法，包括如下步驟： 將發(fā)酵液固液分離得到的粗品進(jìn)行反相制備柱分離，所述的反相制備柱為C1S柱，柱料 的粒徑為8μm;反相制備柱上樣方法為：用解析液將粗品溶解成濃度為90g/L~110g/L,然 后上樣。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所方法，其特征在于，所述反相制備柱的解析液為甲醇：水：乙腈 =70:20:10 (V/V)〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法，其特征在于，分離純化后得到的棘白菌素B色譜純度 大于97%。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種棘白菌素B的純化方法，采用C18反相色譜柱進(jìn)行分離純化，以甲醇:水:乙腈＝70:20:10（V/V）為解吸液，本發(fā)明所提供的方法具有工藝簡(jiǎn)單、收率高的優(yōu)點(diǎn)，由本發(fā)明所述方法制備的棘白菌素B色譜純度大于97%。
【IPC分類(lèi)】C07K7/56, C07K1/20
【公開(kāi)號(hào)】CN105481951
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410536786
【發(fā)明人】岳崇斌, 易中宏, 郭明, 劉亞軍
【申請(qǐng)人】重慶乾泰生物醫(yī)藥有限公司
【公開(kāi)日】2016年4月13日
【申請(qǐng)日】2014年10月13日