2,9-雙苯乙烯取代的鄰菲羅啉類化合物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及2, 9-雙苯乙烯取代的鄰菲羅啉類化合物及其制 備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] G-四鏈體（G-quadruplex)是由富鳥嗓呤（G)的核酸序列，通過(guò)鏈間或鏈內(nèi)對(duì) 應(yīng)的G堿基之間形成Hoogsteen堿基配對(duì)，從而使四條或四段富G的核酸片段聚集形成 的一種特殊的核酸二級(jí)結(jié)構(gòu)[S.Burgeetal.NucleicAcidsRes, 2006, 34, 5402-5415]。 富G序列在具有重要功能的基因組中普遍存在，如端粒，基因啟動(dòng)子區(qū)，免疫球蛋白開關(guān) 區(qū)等[J.L.Huppertetal.NucleicAcidsRes，2005,33,2908_2916;2007, 35, 406-413; A.K.Toddetal.NucleicAcidsRes, 2005, 33, 2901-2907] 〇 并且與人類壽命、 癌癥、HIV和其他疾病的形成機(jī)制密切相關(guān)等[T.A.Brooksetal.FEBSJournal 2010, 277, 3459-3469]，目前G-四鏈體已成為重要的藥物作用靶點(diǎn)，用于發(fā)現(xiàn)新的抗腫瘤 類藥物。因此，發(fā)展對(duì)G-四鏈體結(jié)構(gòu)具有選擇性光學(xué)響應(yīng)的分子探針及抗腫瘤藥物具有重 要的意義。
[0003] 目前人們已發(fā)現(xiàn)了一些可與核酸G-四鏈體結(jié)合的化合物，如二喹啉衍生物， 二吲哚衍生物和二苯并咪唑衍生物等，其中有些化合物表現(xiàn)出抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活 性。但大部分化合物對(duì)G-四鏈體的選擇性不高，可同時(shí)與核酸單鏈和雙鏈結(jié)合[T.Ouet al.ChemMedChem2008, 3, 690-713]。另外，大部分化合物與G-四鏈體結(jié)合后其光學(xué)性質(zhì)變 化不明顯，不能用于G-四鏈體結(jié)構(gòu)的探測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的之一是提供一種2, 9-雙苯乙烯取代的鄰菲羅啉類化合物及其制備 方法。
[0005] 本發(fā)明所提供的2, 9-雙苯乙烯取代的鄰菲羅啉類化合物，其結(jié)構(gòu)式如式I所示：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 式I所示化合物：
上述式I中，R#R2獨(dú)立地選自下述任意一種：H、鹵素、C1-C6烷基雙取代的氨基、C1-C8烷基、取代或未取代的含有雜原子的環(huán)烷基； 所述取代或未取代的含有雜原子的環(huán)烷基中的雜原子選自下述至少一種：N、0和S;所 述環(huán)烷基為3-6元環(huán)烷基； 所述取代的含有雜原子的環(huán)烷基中的取代基選自下述至少一種：C1-C6烷基、_(CH2)n-0H其中n= 1-8、_(CH2)n_Ar其中n= 1-6,Ar表示芳香基。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于：所述化合物為下述任意一種：

3. -種制備權(quán)利要求1或2所述化合物的方法，包括下述步驟：將式II所示化合物與 式III所示化合物和式IV所示化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到式I所示化合物；
上述式III和式IV中，&和R2獨(dú)立地選自下述任意一種：H、鹵素、C1-C6烷基雙取代的氨 基、C1-C8烷基、取代或未取代的含有雜原子的環(huán)烷基； 所述取代或未取代的含有雜原子的環(huán)烷基中的雜原子選自下述至少一種：N、0和S;所 述環(huán)烷基為3-6元環(huán)烷基； 所述取代的含有雜原子的環(huán)烷基中的取代基選自下述至少一種：C1-C6烷基、_(CH2)n-0H其中n= 1-8、_(CH2)n_Ar其中n= 1-6,Ar表示芳香基。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述方法中，所述式II所示化合物與所述 式III所示化合物、所述式IV所示化合物的摩爾比依次為1:1:1 ; 所述縮合反應(yīng)的溫度為90°C_120°C，時(shí)間為12h-36h。
5. 權(quán)利要求1或2所述化合物作為分子探針在識(shí)別核酸G-四鏈體結(jié)構(gòu)中的應(yīng)用。
6. -種核酸G-四鏈體結(jié)構(gòu)的識(shí)別方法，其特征在于：所述核酸G-四鏈體結(jié)構(gòu)的識(shí)別 方法采用權(quán)利要求1或2所述的化合物作為核酸G-四鏈體結(jié)構(gòu)的識(shí)別探針； 所述核酸G-四鏈體結(jié)構(gòu)的識(shí)別方法，包括下述步驟： (1) 將待檢測(cè)核酸樣品和參比核酸樣品分別溶于緩沖液中，得到待檢測(cè)核酸樣品溶液 A和參比核酸樣品溶液B;用有機(jī)溶劑將所述式I所示化合物溶解后，用所述緩沖液稀釋得 到檢測(cè)溶液C; (2) 將所述待檢測(cè)核酸樣品溶液A與檢測(cè)溶液C混合得到混合溶液1，將所述參比核酸 樣品溶液B與檢測(cè)溶液C混合得到混合溶液2,然后將得到的混合溶液1和混合溶液2分別 進(jìn)行孵育，得到孵育后混合溶液1和孵育后混合溶液2 ;再對(duì)所述孵育后混合溶液1和所述 孵育后混合溶液2進(jìn)行下述a)或b): a) 對(duì)所述孵育后混合溶液1和孵育后混合溶液2分別進(jìn)行紫外-可見吸收光譜分析， 將所述孵育后混合溶液1中的式I所示化合物的紫外-可見吸收光譜與所述孵育后混合溶 液2中的式I所示化合物的紫外-可見吸收光譜進(jìn)行比較，從而判斷所述待檢測(cè)核酸樣品 是否為G-四鏈體結(jié)構(gòu)的核酸； 或 b) 對(duì)所述孵育后混合溶液1和孵育后混合溶液2分別進(jìn)行熒光光譜分析，將所述孵育 后混合溶液1中的式I所示化合物的熒光光譜與所述孵育后混合溶液2中的式I所示化合 物的熒光光譜進(jìn)行比較，從而判斷所述待檢測(cè)核酸樣品是否為G-四鏈體結(jié)構(gòu)的核酸。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法步驟（1)中，所述待檢測(cè)核酸樣 品為G-四鏈體結(jié)構(gòu)的核酸； 所述參比核酸樣品為非G-四鏈體結(jié)構(gòu)的核酸； 所述緩沖液為Tris-HCl緩沖液或磷酸鹽緩沖液； 所述緩沖液的pH值為6-8 ; 所述待檢測(cè)核酸樣品溶液A，待檢測(cè)核酸樣品的摩爾濃度為0. 25yM-60yM; 所述參比核酸樣品溶液B中，參比核酸樣品的摩爾濃度為0. 25yM-60yM; 所述檢測(cè)溶液C中，式I所示化合物的摩爾濃度為0. 5yM-20yM。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述方法步驟（2)中，所述混合溶液 1中，所述待檢測(cè)核酸樣品與式I所示化合物的摩爾比為〇. 125-6 ; 所述混合溶液2中，所述參比核酸樣品與式I所示化合物的摩爾比為0. 125-6 ; 所述a)中，當(dāng)觀察到所述孵育后混合溶液1中的式I所示化合物的紫外-可見吸收光 譜在310~550nm范圍內(nèi)明顯增強(qiáng)，且在470~550nm范圍內(nèi)出現(xiàn)新的吸收峰，則所述待檢 測(cè)核酸樣品確認(rèn)為G-四鏈體結(jié)構(gòu)的核酸；反之，則為非G-四鏈體結(jié)構(gòu)的核酸； 所述b)中，當(dāng)觀察到孵育后混合溶液1中的式I所示化合物的熒光發(fā)射光譜在450~ 630nm范圍內(nèi)出現(xiàn)熒光峰且熒光強(qiáng)度升高，并高于所述孵育后混合溶液2中的式I所示化合 物的熒光發(fā)射光譜在450~630nm范圍內(nèi)出現(xiàn)的熒光強(qiáng)度，則待檢測(cè)核酸樣品確認(rèn)為G-四 鏈體結(jié)構(gòu)的核酸；反之，則為非G-四鏈體結(jié)構(gòu)的核酸。
9. 權(quán)利要求1或2所述的化合物在下述方面的應(yīng)用： 1)在制備真核生物腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑中的應(yīng)用；2)在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物 中的應(yīng)用； 所述真核生物為哺乳動(dòng)物；所述腫瘤細(xì)胞為癌細(xì)胞；所述癌細(xì)胞為肺癌細(xì)胞、乳腺癌 細(xì)胞或前列腺癌細(xì)胞； 所述肺腺癌細(xì)胞為耐藥性肺癌細(xì)胞A549T ; 所述乳腺癌細(xì)胞為人乳腺癌細(xì)胞MCF-7 ; 所述肺癌細(xì)胞為人肺癌細(xì)胞A549 ; 所述前列腺癌細(xì)胞為人前列腺癌細(xì)胞PC-3 ; 所述腫瘤為癌； 所述癌為肺癌、乳腺癌或前列腺癌。
10. -種產(chǎn)品，其活性成分為權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中，所述產(chǎn)品為：1)真核 生物腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑；2)預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合G-四鏈體結(jié)構(gòu)的核酸的2,9-雙苯乙烯取代的鄰菲羅啉化合物及其制備方法與其在抗腫瘤中的應(yīng)用。其結(jié)構(gòu)式如式I所示。利用式I所示化合物通過(guò)紫外-可見吸收光譜或熒光光譜可快速判斷待測(cè)樣品是否為G-四鏈體結(jié)構(gòu)的核酸。藥效試驗(yàn)證明，所述式I所示化合物在體外對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株具有較強(qiáng)的抑制作用。本發(fā)明所述的2,9-雙苯乙烯取代的鄰菲羅啉化合物可用于制備抗癌的藥物。
【IPC分類】A61K31-496, C07D471-04, G01N21-64, A61K31-4745, C12Q1-68, C09K11-06, A61P35-00
【公開號(hào)】CN104693199
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510103607
【發(fā)明人】上官棣華, 劉祥軍, 吳尚榮, 王林林
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院化學(xué)研究所
【公開日】2015年6月10日
【申請(qǐng)日】2015年3月9日