一種與人類乳腺癌相關的血清標志物及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學領域，涉及一種與人類乳腺癌相關的血清標志物及其應用； 具體涉及血清rniR-598-3p或miR-598-3p與CA153的組合及其應用。
【背景技術】
[0002] 乳腺癌（breast cancer, BC)是女性最常見惡性腫瘤之一，全球每年約有120萬新 發(fā)乳腺癌病例，50萬死亡病例，在我國每年約有19萬新發(fā)乳腺癌病例。近年來乳腺癌的發(fā) 病率逐年上升，發(fā)病年齡日趨年輕化，早期診斷和輔助化療、激素治療等綜合治療手段使得 乳腺癌的死亡率有所遞減，但仍屬于發(fā)病率和死亡率最高的女性惡性腫瘤。
[0003] 乳腺癌早期予以手術治療，5年生存率高達60 %以上，所以乳腺癌早期診斷具有 重要意義。現(xiàn)階段臨床上乳腺癌的輔助診斷使用超聲、乳腺鑰靶、CT、MRI檢查等多種手段， 但誤診率仍高且不能早期診斷。由于腫瘤組織標本需手術切除后獲得限制了其在臨床的 應用。細針穿刺細胞學檢查雖是診斷乳腺癌的主要方法，但是具有損傷性，且診斷靈敏度 和準確度受腫塊大小、位置深淺、操作經(jīng)驗、涂片制作、讀片水平等因素影響。此外，腫瘤標 志物因其無創(chuàng)性而廣泛應用于臨床，如腫瘤標志物糖鏈抗原153 (CA153)，但其陽性率僅為 53%。
[0004] 微小RNA (miRNA)是一組非編碼小RNA，長約18-25個核苷酸，主要通過結合靶基因 mRNA的5' UTR、編碼區(qū)或3' UTR，在轉錄后水平對基因的表達行負調(diào)控功能，在細胞增殖、 分化、凋亡、免疫反應及腫瘤形成等一系列過程中發(fā)揮重要作用。多數(shù)miRNA具有高度保守 性、時序性和組織特異性。miRNA和腫瘤的關系為腫瘤的診斷及治療帶來了新思路。Calin 等發(fā)現(xiàn)50%以上的miRNA基因定位于與腫瘤相關的區(qū)域或脆弱位點，首次證明miRNA失調(diào) 在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用（Calin G A，et al, Human microRNA genes are frequently located at fragile sites and genomic regions involved in cancers, Proc Natl Acad Sci U S A, 2004, 101(9) :2999-3004)。Takemizawa 等報道了第一個肺癌相關性 miRNA:let-7(Takamizawa J, et al, Reduced expression of the let-7microRNAs in human lung cancers in association with shortened postoperative survival, Cancer Res, 2004, 64(11) :3753-3756)。有研究表明，miRNA異常表達參與了乳腺癌的發(fā)生和發(fā) 展，對于乳腺癌的診斷和預后判斷具有重要價值。Zhu等對乳腺癌患者血清miR-155的含 量進行了小樣本的研究，發(fā)現(xiàn)血清miR-155水平在乳腺癌患者和非乳腺癌患者中沒有顯著 性差異，但在癌組織孕酮受體陽性的患者中血清含量要高于陰性患者，提示其可能不是診 斷乳腺癌的指標，但有希望提示患者病程或預后的相關信息（Zhu W，et al, Circulating microRNAs in breast cancer and healthy subjects, BMC Res Notes, 2009, 2 (89))。血清 miRNA-lOb在乳腺癌骨轉移患者中顯著高表達，可以作為乳腺癌骨轉移的腫瘤標志物（Zhao FL, et al, Serum over expression of microRNA-10b in patients with bone metastatic primary breast Cancer，J Int Med Res, 2012, 40 (3): 859 - 866)。
[0005] miR-598在食管癌患者中表達上調(diào)，提示患者預后良好（Zhao BS, et al，Screening of microRNA in patients with esophageal cancer at same tumor nodemetastasis stage with different prognoses,Asian Pac J Cancer Prev，2013, 14 (1) : 139-143)。目前還沒有將血清miR-598-3p作為乳腺癌腫瘤標志物的報 道，若能檢測出miR-598-3p在乳腺癌患者中的顯著性表達差異，將對乳腺癌的診斷和治療 具有重要的臨床應用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的之一在于提供一種與人類乳腺癌相關的血清標志物。
[0007] 本發(fā)明的目的之二在于提供上述血清標志物的檢測試劑。
[0008] 本發(fā)明的目的之三在于提供一種人類乳腺癌的診斷試劑盒。
[0009] 本發(fā)明的目的之四在于提供上述血清標志物在制備人類乳腺癌診斷試劑中的應 用。
[0010] 本發(fā)明的目的之五在于提供上述血清標志物和上述血清標志物的檢測試劑在制 備人類乳腺癌診斷試劑盒中的應用。
[0011] 發(fā)明人通過分離和研究乳腺癌患者及健康人群血清中的miR-598-3p，發(fā)現(xiàn) miR-598-3p與乳腺癌相關，并且能很好的將乳腺癌患者和健康人區(qū)分開來，以此研制出了 可便于臨床應用的乳腺癌診斷試劑盒，為乳腺癌的篩查和診斷提供數(shù)據(jù)支持，為發(fā)現(xiàn)具有 潛在治療價值的新型小分子藥物提供數(shù)據(jù)支持。
[0012] 本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：
[0013] 本發(fā)明提供了一種與人類乳腺癌相關的血清標志物，所述標志物為miR-598-3p 或miR-598-3p與CA153的組合；對于乳腺癌診斷，血清miR-598-3p優(yōu)于CA153,具有高靈 敏度和高特異性，而且miR-598-3p聯(lián)合CA153診斷更優(yōu)。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種上述血清標志物的檢測試劑。對于miR-598-3p來說，所述試 劑能夠檢測人類血清中miR-598-3p的含量；對于miR-598-3p與CA153的組合來說，所述試 劑能夠同時檢測人類血清中miR-598-3p和CA153的含量。優(yōu)選地，對于miR-598-3p來說， 所述試劑包括檢測miR-598-3p的引物；對于miR-598-3p與CA153的組合來說，所述試劑包 括檢測miR-598-3p的引物和檢測CA153的抗體；檢測miR-598-3p的引物由正向引物序列 和通用反向引物組成；所述正向引物序列如SEQ ID NO. 1所示。所述檢測CA153的抗體可 從商業(yè)途徑獲取，只要能檢測血清中CA153的含量即可。
[0015] 本發(fā)明還提供了一種人類乳腺癌診斷試劑盒。所述試劑盒包括檢測人類血清中 miR-598-3p的含量的試劑。優(yōu)選地，所述試劑是檢測miR-598-3p的引物，檢測miR-598-3p 的引物由正向引物序列和通用反向引物組成；所述正向引物序列如SEQ ID NO. 1所示。 [0016] 作為一種可替代的技術方案，本發(fā)明提供的人類乳腺癌診斷試劑盒包括檢測人類 血清中miR-598-3p的含量的試劑和檢測CA153蛋白含量的試劑。優(yōu)選地，檢測人類血清中 miR-598-3p的含量的試劑是檢測miR-598-3p的引物，檢測miR-598-3p的引物由正向引物 序列和通用反向引物組成；所述正向引物序列如SEQ ID NO. 1所示；檢測CA153蛋白含量的 試劑是CA153抗體，所述檢測CA153的抗體可從商業(yè)途徑獲取，只要能檢測血清中CA153的 含量即可。
[0017] 本發(fā)明還提供了上述血清標志物在制備人類乳腺癌診斷試劑中的應用。對于 miR-598-3p來說，所述試劑包括檢測miR-598-3p的引物；對于miR-598-3p與CA153的組 合來說，所述試劑包括檢測miR-598-3p的引物和檢測CA153的抗體；檢測miR-598-3p的引 物由正向引物序列和通用反向引物組成；所述正向引物序列如SEQ ID NO. 1所示。所述檢 測CA153的抗體可從商業(yè)途徑獲取，只要能檢測血清中CA153的含量即可。
[0018] 本發(fā)明還提供了上述檢測試劑在制備人類乳腺癌診斷試劑盒中的應用。所述人類 乳腺癌診斷試劑盒包括檢測人類血清中mi