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改造人工“兩步法”萜類生產(chǎn)途徑及利用大腸桿菌高產(chǎn)drimane型萜類化合物

文檔序號(hào):40615766發(fā)布日期:2025-01-07 21:23閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種改性酸性磷酸酶phon,其特征在于,來(lái)源于shigella?flexneri的酸性磷酸酶phon的第122位氨基酸由谷氨酸轉(zhuǎn)變成精氨酸,第157蘇氨酸轉(zhuǎn)變成賴氨酸,第160位精氨酸轉(zhuǎn)變成賴氨酸,氨基酸序列如seq?id?no:1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的改性酸性磷酸酶phon,其特征在于,核苷酸序列如seq?id?no:2所示。

3.權(quán)利要求1所述的改性酸性磷酸酶phon在生物合成萜類化合物中的應(yīng)用。

4.一種融合水解酶,其特征在于,融合了來(lái)源于焦土鏈霉菌(streptomycesshowdoensis)的ssndh蛋白和drimenol合酶ssdms,氨基酸序列如seq?id?no:3、5、7、9所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的融合水解酶,其特征在于,核苷酸序列如seq?id?no:4、6、8、10所示。

6.一種drimane型萜類化合物的生產(chǎn)方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)原料dmaa和iso在酸性磷酸酶phon和磷酸激酶ipk的作用下生成dmapp和ipp;

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)方法,其特征在于,步驟(1)所述酸性磷酸酶phon為shigella?flexneri來(lái)源的磷酸酶phon或權(quán)利要求1所述改性酸性磷酸酶phon。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)方法,其特征在于,步驟(4)中所述水解酶為大腸桿菌內(nèi)源性的水解酶、外源性水解酶ssndh。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)方法,其特征在于,步驟(4)中所述drimenol合成酶ssdms、水解酶或可替換成權(quán)利要求4所述的融合水解酶。

10.一種高效生產(chǎn)drimane型萜化合物的大腸桿菌,其特征在于:含有導(dǎo)入ipk、ispa、idi、權(quán)利要求1所述改性酸性磷酸酶phon、ancc表達(dá)載體的大腸桿菌細(xì)胞;


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了改造人工“兩步法”萜類生產(chǎn)途徑及利用大腸桿菌高產(chǎn)drimane型萜類化合物,本發(fā)明首次將水解酶與drimenol合酶融合表達(dá),使產(chǎn)量提高了7.3倍。并結(jié)合理性設(shè)計(jì)改造兩步法途徑PhoN,使其磷酸化效率進(jìn)一步提高3.6倍,最后還通過(guò)優(yōu)化發(fā)酵條件,使drimenol產(chǎn)量提高27倍,從15mg/L提高到398.4mg/L,并將高產(chǎn)體系成功遷移至生產(chǎn)albicanol,獲得了3.5g/L的產(chǎn)量。

技術(shù)研發(fā)人員:董廖斌,杜雯煜,潘興明,劉晨浩,岳明宇
受保護(hù)的技術(shù)使用者:中國(guó)藥科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/6
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