背景技術(shù)：

1、基于工程化細(xì)胞的療法為治療復(fù)雜疾病提供了有前景的新方法，因?yàn)榧?xì)胞有能力去感測(cè)和整合廣泛的信號(hào)，主動(dòng)移動(dòng)到特定的組織區(qū)室，并啟動(dòng)鄰近依賴性反應(yīng)，例如fischbach等人,science?transl.med.,5:1797(2013)。此類基于細(xì)胞的方法提供了新穎的治療裝置，該治療裝置解決了小分子和生物制劑目前面臨的障礙，諸如靶特異性差、組織區(qū)室定位不理想、缺乏個(gè)性化，以及一旦施用于患者，藥物的效果在空間和時(shí)間上或響應(yīng)于不斷變化的臨床表現(xiàn)進(jìn)行修改的潛力有限。這些問(wèn)題可以降低此類化合物的藥物效用。細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞(cl)(諸如細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞(ctl)和天然殺傷細(xì)胞(nk))是用于建造基于細(xì)胞的治療系統(tǒng)的優(yōu)秀平臺(tái)，原因有以下幾個(gè)：(i)細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞在顆粒酶-穿孔素途徑中具有獨(dú)特的遞送細(xì)胞到靶細(xì)胞分子轉(zhuǎn)移系統(tǒng)；(ii)t細(xì)胞受體(tcr)或相關(guān)的嵌合抗原受體(car)賦予細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞在靶向呈遞主要組織相容性復(fù)合體(mhc)結(jié)合的同源抗原或在car的情況下呈遞任意表面抗原的細(xì)胞群時(shí)的高度特異性；(iii)激活的細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞差別地表達(dá)細(xì)胞因子和組織特異性受體，使淋巴細(xì)胞能夠選擇性地貫穿整個(gè)身體歸巢到靶組織；以及(iv)在過(guò)繼細(xì)胞療法領(lǐng)域中已經(jīng)開(kāi)發(fā)了淋巴細(xì)胞修飾和治療性施用的實(shí)驗(yàn)室和臨床方案，例如，restifo等人,nature?reviews?immunology,12:269-281(2012)。鑒于這些優(yōu)勢(shì)和積極的臨床結(jié)果，許多基于細(xì)胞的療法已被批準(zhǔn)用于治療一系列癌癥和其他病癥。

2、然而，隨著基于細(xì)胞的療法的成功，由于使用活生物體作為藥物的復(fù)雜性，在開(kāi)發(fā)、制造和質(zhì)量保證方面也存在重大挑戰(zhàn)。必須進(jìn)行測(cè)試，以選擇合適的細(xì)胞亞群進(jìn)行工程化，并確保在制造過(guò)程的每個(gè)步驟中工程化亞群的身份、純度或可操作性沒(méi)有有害變化，例如，tanna等人,cytotherapy,21:278-288(2019)；wang等人,molecular?therapy,3:16015(2016)；levine等人,molecular?therapy:methods&clinical?development,4:92-101(2017)。因此，細(xì)胞分析平臺(tái)(包括方法和系統(tǒng))的可用性將推動(dòng)基于細(xì)胞的療法的領(lǐng)域，該細(xì)胞分析平臺(tái)用于執(zhí)行與基于細(xì)胞的療法的開(kāi)發(fā)和制造相關(guān)的廣泛的高度多重細(xì)胞測(cè)定。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明涉及用于執(zhí)行大規(guī)模多重單細(xì)胞測(cè)定(特別是用于表征為醫(yī)學(xué)或工業(yè)應(yīng)用(諸如基于細(xì)胞的療法)開(kāi)發(fā)的群體工程化細(xì)胞)的方法和系統(tǒng)。示例性單細(xì)胞測(cè)定包括但不限于細(xì)胞毒性、增殖能力、激活狀態(tài)、轉(zhuǎn)化細(xì)胞的載體拷貝數(shù)和插入位點(diǎn)分析等。

2、在一方面，本文提供了一種確定一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性的方法，該方法包括：(a)合成一個(gè)或多個(gè)水凝膠室，其中該一個(gè)或多個(gè)水凝膠室中的水凝膠室包封布置在通道的表面上的細(xì)胞；(b)裂解細(xì)胞，使得該細(xì)胞的基因組dna釋放到該細(xì)胞的水凝膠室中；(c)擴(kuò)增細(xì)胞的基因組dna，從而獲得經(jīng)擴(kuò)增的基因組dna；以及(d)使用經(jīng)擴(kuò)增的基因組dna，測(cè)量細(xì)胞的病毒拷貝數(shù)、病毒整合位點(diǎn)或基因組拷貝數(shù)變異。

3、在一些情況下，測(cè)量進(jìn)一步包括：(i)將載體特異性引物與經(jīng)擴(kuò)增的基因組dna退火；(ii)延伸載體特異性引物，從而獲得包括基因組dna的區(qū)段的拷貝的延伸產(chǎn)物；以及(iii)從區(qū)段識(shí)別載體特異性引物與基因組dna的一個(gè)或多個(gè)整合位點(diǎn)。在一些情況下，細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，并且測(cè)量進(jìn)一步包括：(i)對(duì)經(jīng)擴(kuò)增的基因組dna的一個(gè)或多個(gè)片段進(jìn)行測(cè)序，從而獲得一個(gè)或多個(gè)片段的序列；和(ii)從一個(gè)或多個(gè)片段的序列確定細(xì)胞的基因組拷貝數(shù)變異。在一些情況下，測(cè)序包括獲取0.25x或更大的經(jīng)擴(kuò)增的基因組dna的序列覆蓋度。在一些情況下，基因組拷貝數(shù)變異的確定具有3兆堿基或更高的分辨率。

4、在另一方面，本文提供了一種確定一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性的方法，該方法包括：(a)提供流體裝置，該流體裝置包括：(i)通道，該通道包括第一表面、一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞以及一種或多種聚合物前體，其中一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞布置在第一表面上或第一表面附近；(ii)空間能量調(diào)制元件，該空間能量調(diào)制元件與第一表面光學(xué)連通；以及(iii)檢測(cè)器；(b)用檢測(cè)器識(shí)別通道中的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的位置；(c)使用空間能量調(diào)制元件，將能量投射到通道中使得投射的能量使一種或多種聚合物前體形成一個(gè)或多個(gè)室的聚合物基體壁，其中一個(gè)或多個(gè)室在由檢測(cè)器識(shí)別的位置處至少部分地包封一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞；(d)向通道加載一種或多種測(cè)定試劑；以及(e)在測(cè)定條件下溫育一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞，以從一個(gè)或多個(gè)室生成指示被一個(gè)或多個(gè)室包封的細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性的信號(hào)。

5、在一些情況下，(i)一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性包括增殖率，(ii)在測(cè)定條件下的溫育包括在生長(zhǎng)條件下的溫育，并且(iii)該方法進(jìn)一步包括：在溫育后，確定至少部分地被一個(gè)或多個(gè)室包封的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的增殖率。在一些情況下，增殖率的確定包括對(duì)至少部分地被一個(gè)或多個(gè)室包封的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。在一些情況下，一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性進(jìn)一步包括細(xì)胞膜蛋白的譜，并且該方法進(jìn)一步包括用抗體溫育一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞，該抗體各自對(duì)不同的細(xì)胞表面蛋白具有特異性，該不同的細(xì)胞表面蛋白的相對(duì)表達(dá)允許識(shí)別一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞，并且此類抗體中的每一個(gè)具有不同的標(biāo)記。在一些情況下，第一表面包括一個(gè)或多個(gè)捕獲元件，該一個(gè)或多個(gè)捕獲元件用于捕獲一種或多種測(cè)定組分或者一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的一種或多種組分。在一些情況下，抗體中的每一個(gè)具有寡核苷酸標(biāo)記，該寡核苷酸標(biāo)記包括能夠被一個(gè)或多個(gè)捕獲元件捕獲的抗體特異性條形碼。

6、在一些情況下，該方法進(jìn)一步包括：(i)提供寡核苷酸標(biāo)記，其中該寡核苷酸標(biāo)記通過(guò)易裂開(kāi)鍵聯(lián)附接到抗體；(ii)向通道加載釋放試劑以切割易裂開(kāi)鍵聯(lián)，使得寡核苷酸標(biāo)記被釋放并且被捕獲元件捕獲；(iii)復(fù)制被捕獲的寡核苷酸標(biāo)記以產(chǎn)生被捕獲的寡核苷酸標(biāo)記的互補(bǔ)dna；以及(iv)對(duì)互補(bǔ)dna進(jìn)行測(cè)序以識(shí)別被捕獲的寡核苷酸標(biāo)記。

7、在一些情況下，第一表面包括一個(gè)或多個(gè)捕獲元件，該一個(gè)或多個(gè)捕獲元件用于捕獲一種或多種測(cè)定組分或者一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的組分，其中一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性進(jìn)一步包括細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組，并且該方法進(jìn)一步包括：(i)向通道加載裂解試劑，使得一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的信使rna被釋放并且被一個(gè)或多個(gè)捕獲元件捕獲；(ii)向通道加載逆轉(zhuǎn)錄試劑，以復(fù)制被捕獲的信使rna，從而產(chǎn)生互補(bǔ)dna；以及(iii)對(duì)互補(bǔ)dna進(jìn)行測(cè)序。

8、在一些情況下，(i)一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性進(jìn)一步包括由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)的譜，(ii)通道進(jìn)一步包括蛋白質(zhì)捕獲表面，該蛋白質(zhì)捕獲表面包括結(jié)合由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)親和試劑，并且(iii)該方法進(jìn)一步包括使用一定量的經(jīng)標(biāo)記的蛋白質(zhì)檢測(cè)抗體來(lái)檢測(cè)由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞分泌的與相鄰于一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的蛋白質(zhì)捕獲表面結(jié)合的蛋白質(zhì)。

9、在一些情況下，(i)一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性包括細(xì)胞毒性，(ii)第一表面包括布置在第一表面上的靶細(xì)胞，(iii)該方法進(jìn)一步包括向通道加載效應(yīng)細(xì)胞，使得效應(yīng)細(xì)胞布置在第一表面上或第一表面附近，(iv)溫育的步驟包括用在死細(xì)胞但不在活細(xì)胞中生成光信號(hào)(optical?signal)的活體染劑溫育效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞；并且(v)對(duì)一個(gè)或多個(gè)室中的每一個(gè)中的死細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)以確定被一個(gè)或多個(gè)室中的每一個(gè)包封的效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞毒性值。在一些情況下，第一表面包括一個(gè)或多個(gè)捕獲元件，該一個(gè)或多個(gè)捕獲元件用于捕獲一種或多種測(cè)定組分或者一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的一種或多種組分。在一些情況下，一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性進(jìn)一步包括細(xì)胞膜蛋白的譜，并且該方法進(jìn)一步包括用抗體溫育一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞，該抗體各自對(duì)不同的細(xì)胞表面蛋白具有特異性，該不同的細(xì)胞表面蛋白的相對(duì)表達(dá)允許識(shí)別細(xì)胞，并且此類抗體中的每一個(gè)具有不同的標(biāo)記。在一些情況下，抗體中的每一個(gè)具有寡核苷酸標(biāo)記，該寡核苷酸標(biāo)記包括能夠被一個(gè)或多個(gè)捕獲元件捕獲的抗體特異性條形碼。在一些情況下，該方法進(jìn)一步包括：(i)提供寡核苷酸標(biāo)記，其中該寡核苷酸標(biāo)記通過(guò)易裂開(kāi)鍵聯(lián)附接到抗體；(ii)向通道加載釋放試劑以切割易裂開(kāi)鍵聯(lián)，使得寡核苷酸標(biāo)記被釋放并且被捕獲元件捕獲；(iii)復(fù)制被捕獲的寡核苷酸標(biāo)記以產(chǎn)生被捕獲的寡核苷酸標(biāo)記的互補(bǔ)dna；以及(iv)對(duì)互補(bǔ)dna進(jìn)行測(cè)序以識(shí)別被捕獲的寡核苷酸標(biāo)記。

10、在一些情況下，第一表面包括一個(gè)或多個(gè)捕獲元件，該一個(gè)或多個(gè)捕獲元件用于捕獲一種或多種測(cè)定組分或者一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的組分，其中一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性進(jìn)一步包括細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組，并且該方法進(jìn)一步包括：(i)向通道加載裂解試劑，使得一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的信使rna被釋放并且被一個(gè)或多個(gè)捕獲元件捕獲；(ii)向通道加載逆轉(zhuǎn)錄試劑，以復(fù)制被捕獲的信使rna，從而產(chǎn)生互補(bǔ)dna；以及(iii)對(duì)互補(bǔ)dna進(jìn)行測(cè)序。在一些情況下，(i)一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性進(jìn)一步包括由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)的譜，(ii)通道進(jìn)一步包括蛋白質(zhì)捕獲表面，該蛋白質(zhì)捕獲表面包括結(jié)合由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)親和試劑，并且(iii)該方法進(jìn)一步包括使用一定量的經(jīng)標(biāo)記的蛋白質(zhì)檢測(cè)抗體來(lái)檢測(cè)由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞分泌的與相鄰于一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的蛋白質(zhì)捕獲表面結(jié)合的蛋白質(zhì)。

11、在一些情況下，一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性包括一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的基因組dna中的一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列的拷貝數(shù)，并且該方法進(jìn)一步包括：(a)裂解一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞以釋放基因組dna；(b)擴(kuò)增一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列，從而獲得一個(gè)或多個(gè)經(jīng)擴(kuò)增的核苷酸序列；(c)用布置在通道上的一個(gè)或多個(gè)捕獲元件捕獲經(jīng)擴(kuò)增的一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列；(d)復(fù)制被捕獲的一個(gè)或多個(gè)經(jīng)擴(kuò)增的核苷酸序列以產(chǎn)生被捕獲的一個(gè)或多個(gè)經(jīng)擴(kuò)增的核苷酸序列的互補(bǔ)dna；以及(e)對(duì)互補(bǔ)dna進(jìn)行測(cè)序以識(shí)別一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列的拷貝數(shù)。在一些情況下，一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列各自為條形碼。在一些情況下，條形碼各自包括獨(dú)特分子標(biāo)識(shí)符。在一些情況下，獨(dú)特分子標(biāo)識(shí)符識(shí)別整合到基因組dna中的病毒dna，并且在單細(xì)胞中識(shí)別的許多不同的獨(dú)特分子標(biāo)識(shí)符指示此類單細(xì)胞的病毒拷貝數(shù)。

12、在一些情況下，一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性包括一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的基因組dna中的一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列的拷貝數(shù)，并且該方法進(jìn)一步包括：(a)裂解一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞以釋放基因組dna；(b)向通道加載擴(kuò)增試劑，該擴(kuò)增試劑生成與一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列的拷貝數(shù)成比例的信號(hào)；以及(c)擴(kuò)增一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列以生成與一個(gè)或多個(gè)核酸序列的拷貝數(shù)成比例的光信號(hào)。在一些情況下，擴(kuò)增試劑是定量pcr試劑，并且信號(hào)是光信號(hào)。在一些情況下，(i)第一表面包括橋式pcr引物，(ii)擴(kuò)增試劑包括橋式pcr試劑，并且(iii)信號(hào)是由橋式pcr形成的許多簇。在一些情況下，擴(kuò)增試劑包括滾環(huán)擴(kuò)增試劑，并且信號(hào)是許多dna納米球。

13、在一些情況下，一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞隨機(jī)布置在第一表面上。在一些情況下，一個(gè)或多個(gè)室中的每一個(gè)包封一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞中的單細(xì)胞。在一些情況下，一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞包括被載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞，并且一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性包括被載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的載體整合位點(diǎn)，并且該方法進(jìn)一步包括：(a)裂解被載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞，以將每個(gè)細(xì)胞的基因組dna釋放到每個(gè)細(xì)胞的相應(yīng)的室中；(b)擴(kuò)增被釋放的基因組dna；(c)將載體特異性引物與經(jīng)擴(kuò)增的基因組dna退火；(d)延伸載體特異性引物，從而獲得包括基因組dna的區(qū)段的拷貝的延伸產(chǎn)物；以及(e)從區(qū)段識(shí)別載體特異性引物與基因組dna的一個(gè)或多個(gè)整合位點(diǎn)。

14、在一些情況下，一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，并且一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性包括基因組拷貝數(shù)變異，并且該方法進(jìn)一步包括：(a)裂解一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞以將每個(gè)細(xì)胞的基因組dna釋放到每個(gè)細(xì)胞的相應(yīng)的室中；(b)擴(kuò)增被釋放的基因組dna；(c)對(duì)經(jīng)擴(kuò)增的基因組dna的片段進(jìn)行測(cè)序，從而獲得基因組dna片段的序列；以及(d)從基因組dna片段的序列確定每個(gè)細(xì)胞的基因組拷貝數(shù)變異。在一些情況下，測(cè)序包括獲取0.25x或更大的基因組dna片段的序列覆蓋度，并且基因組拷貝數(shù)變異的確定具有3兆堿基或更高的分辨率。

15、在另一方面，本文提供了一種用于測(cè)量細(xì)胞群的單細(xì)胞特性的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括：(a)一個(gè)或多個(gè)通道，該一個(gè)或多個(gè)通道各自包括表面、布置在表面上的多個(gè)細(xì)胞以及一種或多種聚合物前體；(b)至少一個(gè)空間能量調(diào)制元件，該至少一個(gè)空間能量調(diào)制元件與每個(gè)通道的表面光學(xué)連通；(c)至少一個(gè)檢測(cè)器，該至少一個(gè)檢測(cè)器與每個(gè)通道的表面光學(xué)連通并且與至少一個(gè)空間能量調(diào)制元件可操作地相關(guān)聯(lián)，其中檢測(cè)器被配置為檢測(cè)多個(gè)細(xì)胞中的每一個(gè)并確定多個(gè)細(xì)胞中的每一個(gè)在至少一個(gè)通道的表面上的位置；以及(d)每個(gè)通道中的多個(gè)凝膠室，其中每個(gè)凝膠室包封多個(gè)細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞，其中通過(guò)用至少一個(gè)空間能量調(diào)制元件將光投射到通道中，使得投射的光使一種或多種聚合物前體形成凝膠室的聚合物基體壁來(lái)合成凝膠室，并且其中合成的室的位置部分地由通過(guò)檢測(cè)器識(shí)別的被合成的室包封的細(xì)胞的位置來(lái)確定。

16、在一些情況下，凝膠室隨機(jī)布置在表面中的至少一個(gè)上。在一些情況下，凝膠室中的每一個(gè)包封單細(xì)胞。在一些情況下，聚合物基體壁對(duì)于分子量小于3×106道爾頓的分子是可滲透的，并且對(duì)于分子量大于3×106道爾頓的分子是不可滲透的。在一些情況下，聚合物基體壁對(duì)于分子量小于3×105道爾頓的分子是可滲透的，并且對(duì)于分子量大于3×105道爾頓的分子是不可滲透的。在一些情況下，聚合物基體壁對(duì)于分子量小于3×104道爾頓的分子是可滲透的，并且對(duì)于分子量大于3×104道爾頓的分子是不可滲透的。在一些情況下，聚合物基體壁對(duì)于分子量小于3×103道爾頓的分子是可滲透的，并且對(duì)于分子量大于3×103道爾頓的分子是不可滲透的。

17、在一些情況下，凝膠室是可降解的水凝膠室。在一些情況下，凝膠室是中空的，并且包封表面的區(qū)域。在一些情況下，表面包括被配置為捕獲核酸的捕獲元件。

18、在另一方面，本文提供了一種確定一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性的方法，該方法包括：(a)提供流體裝置，該流體裝置包括：(i)通道，該通道包括第一表面、一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞以及一種或多種聚合物前體，其中一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞布置在第一表面上或第一表面附近；(ii)空間能量調(diào)制元件，該空間能量調(diào)制元件與第一表面光學(xué)連通；以及(iii)檢測(cè)器；(b)用檢測(cè)器識(shí)別通道中的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的位置；(c)使用空間能量調(diào)制元件，將能量投射到通道中使得投射的能量使一種或多種聚合物前體形成一個(gè)或多個(gè)室的聚合物基體壁，其中一個(gè)或多個(gè)室在由檢測(cè)器識(shí)別的位置處至少部分地包封一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞；以及(d)對(duì)通道中的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞執(zhí)行一項(xiàng)或多項(xiàng)測(cè)定，以確定一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性，其中一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞特性選自細(xì)胞毒性、生存力、增殖率、表型、載體拷貝數(shù)、載體整合位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄組和基因組拷貝數(shù)變異。在一些情況下，流體裝置進(jìn)一步包括多個(gè)通道，并且執(zhí)行一項(xiàng)或多項(xiàng)測(cè)定包括執(zhí)行多項(xiàng)測(cè)定，其中一項(xiàng)或多項(xiàng)測(cè)定中的每一項(xiàng)不同測(cè)定在多個(gè)通道中的不同通道中執(zhí)行。