本發(fā)明涉及一種十二烷基癸烯酸BDSF在提升RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬的能力中的應(yīng)用，屬于生物藥品技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
C.abicans白色假絲酵母(又稱白念珠菌)是人體重要的條件致病真菌。在正常人體中,白假絲酵母是一種無害共生真菌；在免疫力低下人群中,白假絲酵母可引起假絲酵母病,輕者可導(dǎo)致黏膜感染,重者可發(fā)展為系統(tǒng)性疾病,甚至危及生命。白假絲酵母從酵母相至菌絲相的形態(tài)轉(zhuǎn)變是極其重要的致病因素之一。十二烷基癸烯酸(BDSF)是小分子短鏈脂肪酸，由Burkholderiacenocepacia分泌產(chǎn)生。BDSF屬于DSF家族在結(jié)構(gòu)上與DSF十分相似，分子結(jié)構(gòu)式為文獻(xiàn)(BoonC,DengY,WangLH,HeY,XuJL,FanY,PanSQ,ZhangLH.AnovelDSF-likesignalfromBurkholderiacenocepaciainterfereswithCandidaalbicansmorphologicaltransition[J].ISMEJ,2008,2(1):27-36.)RAW264.7巨噬細(xì)胞(單核巨噬細(xì)胞)屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。一旦機(jī)體創(chuàng)傷活動(dòng)開始,巨噬細(xì)胞就能大量分泌多種生物活性物質(zhì)以及多種酶類物質(zhì)，其中生物活性物質(zhì)又稱巨噬細(xì)胞源性生物因子，包括多肽轉(zhuǎn)換生長(zhǎng)因子、白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子以及一氧化氮等；酶類物質(zhì)主要包括膠原酶、彈性蛋白酶、纖溶酶原激活劑等；些生物活性物質(zhì)直接引導(dǎo)著機(jī)體修復(fù)的整進(jìn)程。同時(shí)，巨噬細(xì)胞作為炎癥階段的主要吞噬細(xì)胞，負(fù)責(zé)清除機(jī)體損傷處組織和細(xì)胞的壞死碎片以及病原體等，這些物質(zhì)對(duì)創(chuàng)傷愈合過程都有重要的調(diào)控作用。因此，研究創(chuàng)傷修復(fù)過程中巨噬細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子的種類和含量在創(chuàng)傷后不同時(shí)間的變化規(guī)律，將可能從分子水平和細(xì)胞水平上提供一些與損傷時(shí)間相關(guān)的標(biāo)志性變化或依據(jù)；而文獻(xiàn)報(bào)道巨噬細(xì)胞吞噬物的變化亦具有與時(shí)間相關(guān)的特點(diǎn)，巨噬細(xì)胞吞噬物在形態(tài)上易于觀察和檢測(cè)，這些特征使得巨噬細(xì)胞在損傷時(shí)間推斷過程中具有重要的法醫(yī)學(xué)意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是：提供BDSF的新用途，即BDSF在提升RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans的能力中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案是十二烷基癸烯酸BDSF在提升RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬能力中的應(yīng)用，加入BDSF的濃度為3～300μmol/L時(shí)可以提升RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans的能力。優(yōu)選的，所述BDSF的濃度為100μmol/L。優(yōu)選的，BDSF提升RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.Albicans的作用時(shí)間為2h，3h，4h，5h，6h。有益效果：本研究中的BDSF具有低生物毒性，且對(duì)免疫細(xì)胞RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬能力的提升有顯著效果，使得小分子脂肪酸BDSF對(duì)動(dòng)物細(xì)胞免疫功能方面的影響有重要的研究意義，同時(shí)為免疫學(xué)研究提供了新的材料，對(duì)微生物及生物免疫方面具有重要的研究意義。附圖說明下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的作進(jìn)一步說明。圖1.RAW264.7巨噬細(xì)胞在BDSF作用下吞噬一個(gè)或多個(gè)C.albicans細(xì)胞圖2.BDSF對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans細(xì)胞的吞噬率的影響圖3.BDSF對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans細(xì)胞的吞噬指數(shù)的影響圖4.共聚焦顯微鏡連續(xù)拍攝RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬多個(gè)C.albicans細(xì)胞的過程圖5.MTT比色法檢測(cè)BDSF對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞作用12、24、36、48h的細(xì)胞活力情況具體實(shí)施方式為了更好地理解本發(fā)明專利的內(nèi)容，下面通過具體的實(shí)例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。但這些實(shí)施實(shí)例并不限制本發(fā)明。實(shí)施例1MTT比色法檢測(cè)BDSF對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活力影響的實(shí)驗(yàn):在RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)液中加入BDSF，濃度分別為0、3、30、100、200、300μmol/L。傳代培養(yǎng)RAW264.7巨噬細(xì)胞，將細(xì)胞接種于5塊96孔板上每孔100μL(密度為1×104)每組6個(gè)復(fù)孔，37℃5％CO2孵育箱內(nèi)培養(yǎng)過夜后，加入含不同濃度的BDSF的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12、24、36、48h，空白對(duì)照組不加BDSF，達(dá)到藥物作用時(shí)間后加入MTT孵育4h后加入DMSO150μL震蕩10min，使用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)570nm處檢測(cè)吸光度。如圖5實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，加入BDSF對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞的生長(zhǎng)及活力影響和對(duì)照組相比無明顯變化，可以顯示出，BDSF對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞的生長(zhǎng)增值無不良影響，生物毒性低，顯示出BDSF的應(yīng)用前景良好。實(shí)施例2瑞氏吉姆薩染色法分析BDSF作用下RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans120min的實(shí)驗(yàn)：將傳代培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細(xì)胞以5×105的密度接種于24孔板中，細(xì)胞貼壁后加入不同濃度的BDSF(濃度分別為0，3，30，100，200，300μmol/L)并培養(yǎng)24h后，更換新培養(yǎng)液；將過夜培養(yǎng)的酵母態(tài)C.albicans加入24孔板中共同培養(yǎng)，C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的比例為3：1；經(jīng)過C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的的共同培養(yǎng)120min后，用1％PBS洗液洗滌3次，洗去未固定的細(xì)胞，用瑞氏吉姆薩染液固定并染色20分鐘后，用1％PBS洗液洗滌3次，再在熒光顯微鏡下觀察并計(jì)算出RAW264.7吞噬C.albicans的吞噬率(至少吞噬一個(gè)真菌細(xì)胞的巨噬細(xì)胞百分?jǐn)?shù))及吞噬指數(shù)(每100個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬真菌細(xì)胞的總數(shù))。如圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬率分別為4.0％、6.9％、11.8％、11.9％、11.8％、8.0％，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬率均高于對(duì)照組的4.0％，其中BDSF濃度為100μmol/L達(dá)到最大吞噬率為11.9％；如圖3實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬指數(shù)分別為0.28、0.46、0.61、0.60、0.69、0.36，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)均高于對(duì)照組的0.28?？偨Y(jié)得出BDSF作用2h可以提高RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬能力。數(shù)據(jù)獲取于三組獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，分析至少每孔200個(gè)巨噬細(xì)胞。實(shí)施例3瑞氏吉姆薩染色法分析BDSF作用下RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans180min的實(shí)驗(yàn):(1)將傳代培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細(xì)胞以5×105的密度接種于24孔板中，細(xì)胞貼壁后加入不同濃度的BDSF并培養(yǎng)24h后，更換新培養(yǎng)液；將過夜培養(yǎng)的酵母態(tài)C.albicans加入24孔板中共同培養(yǎng)，C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的比例為3：1；(2)經(jīng)過C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的的共同培養(yǎng)180min后，用1％PBS洗液洗滌3次，洗去未固定的細(xì)胞，用瑞氏吉姆薩染液固定并染色20分鐘后，用1％PBS洗液洗滌3次，再在熒光顯微鏡下觀察并計(jì)算出RAW264.7吞噬C.albicans的吞噬率(至少吞噬一個(gè)真菌細(xì)胞的巨噬細(xì)胞百分?jǐn)?shù))及吞噬指數(shù)(每100個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬真菌細(xì)胞的總數(shù))。如圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬率分別為12.0％、15.9％、24.0％、34.5％、27.7％、30.1％，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬率均高于對(duì)照組的12.0％，其中BDSF濃度為100μmol/L達(dá)到最大吞噬率為34.5％；如圖3實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬指數(shù)分別為0.39，0.61，1.01，0.80，1.20，0.84，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)均高于對(duì)照組的0.39?？偨Y(jié)得出BDSF作用3h可以提高RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬能力。數(shù)據(jù)獲取于三組獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，分析至少每孔200個(gè)巨噬細(xì)胞。實(shí)施例4瑞氏吉姆薩染色法分析BDSF作用下RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans240min的實(shí)驗(yàn):(1)將傳代培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細(xì)胞以5×105的密度接種于24孔板中，細(xì)胞貼壁后加入不同濃度的BDSF并培養(yǎng)24h后，更換新培養(yǎng)液；將過夜培養(yǎng)的酵母態(tài)C.albicans加入24孔板中共同培養(yǎng)，C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的比例為3：1；(2)經(jīng)過C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的的共同培養(yǎng)240min后，用1％PBS洗液洗滌3次，洗去未固定的細(xì)胞，用瑞氏吉姆薩染液固定并染色20分鐘后，用1％PBS洗液洗滌3次，再在熒光顯微鏡下觀察并計(jì)算出RAW264.7吞噬C.albicans的吞噬率(至少吞噬一個(gè)真菌細(xì)胞的巨噬細(xì)胞百分?jǐn)?shù))及吞噬指數(shù)(每100個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬真菌細(xì)胞的總數(shù))。如圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬率分別為12.2％、30.5％、32.9％、55.3％、37.5％、34.0％，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬率均高于對(duì)照組的12.2％，其中BDSF濃度為100μmol/L達(dá)到最大吞噬率為55.3％；如圖3實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬指數(shù)分別為0.35，0.63，1.9，1.73，1.86，1.23，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)均高于對(duì)照組的0.35。總結(jié)得出BDSF作用4h可以提高RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬能力。數(shù)據(jù)獲取于三組獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，分析至少每孔200個(gè)巨噬細(xì)胞。實(shí)施例5瑞氏吉姆薩染色法分析BDSF作用下RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans300min的實(shí)驗(yàn)(1)將傳代培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細(xì)胞以5×105的密度接種于24孔板中，細(xì)胞貼壁后加入不同濃度的BDSF并培養(yǎng)24h后，更換新培養(yǎng)液；將過夜培養(yǎng)的酵母態(tài)C.albicans加入24孔板中共同培養(yǎng)，C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的比例為3：1；(2)經(jīng)過C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的的共同培養(yǎng)300min后，用1％PBS洗液洗滌3次，洗去未固定的細(xì)胞，用瑞氏吉姆薩染液固定并染色20分鐘后，用1％PBS洗液洗滌3次，再在熒光顯微鏡下觀察并計(jì)算出RAW264.7吞噬C.albicans的吞噬率(至少吞噬一個(gè)真菌細(xì)胞的巨噬細(xì)胞百分?jǐn)?shù))及吞噬指數(shù)(每100個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬真菌細(xì)胞的總數(shù))。如圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬率分別為13.1％、33.5％、33.8％、54.1％、41.5％、35.1％，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬率均高于對(duì)照組的13.1％，其中BDSF濃度為100μmol/L達(dá)到最大吞噬率為54.1％；如圖3實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬指數(shù)分別為0.38，0.67，1.16，1.90，1.78，1.27，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)均高于對(duì)照組的0.38?？偨Y(jié)得出BDSF作用5h可以提高RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬能力。數(shù)據(jù)獲取于三組獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，分析至少每孔200個(gè)巨噬細(xì)胞.實(shí)施例6瑞氏吉姆薩染色法分析BDSF作用下RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans360min的實(shí)驗(yàn)(1)將傳代培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細(xì)胞以5×105的密度接種于24孔板中，細(xì)胞貼壁后加入不同濃度的BDSF并培養(yǎng)24h后，更換新培養(yǎng)液；將過夜培養(yǎng)的酵母態(tài)C.albicans加入24孔板中共同培養(yǎng)，C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的比例為3：1；(2)經(jīng)過C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的的共同培養(yǎng)360min后，用1％PBS洗液洗滌3次，洗去未固定的細(xì)胞，用瑞氏吉姆薩染液固定并染色20分鐘后，用1％PBS洗液洗滌3次，再在熒光顯微鏡下觀察并計(jì)算出RAW264.7吞噬C.albicans的吞噬率(至少吞噬一個(gè)真菌細(xì)胞的巨噬細(xì)胞百分?jǐn)?shù))及吞噬指數(shù)(每100個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬真菌細(xì)胞的總數(shù))。如圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬率分別為12.3％、33.4％、34.1％、47.7％、40.0％、36.3％，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬率均高于對(duì)照組的12.3％，其中BDSF濃度為100μmol/L達(dá)到最大吞噬率為47.7％；如圖3實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度BDSF作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞后吞噬C.albicans的吞噬指數(shù)分別為0.36，0.65，0.99，1.98，1.85，1.40，BDSF為3～300μmol/L時(shí)RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)均高于對(duì)照組的0.36?？偨Y(jié)得出BDSF作用6h可以提高RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬能力。數(shù)據(jù)獲取于三組獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，分析至少每孔200個(gè)巨噬細(xì)胞.實(shí)施例7共聚焦顯微鏡連續(xù)拍攝在100μmol/LBDSF作用下，RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬C.albicans的實(shí)驗(yàn)。步驟i.傳代培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細(xì)胞以5×105的密度接種于培養(yǎng)皿中，細(xì)胞貼壁后加入100μmol/L的BDSF并培養(yǎng)24h；步驟ii.將過夜培養(yǎng)的酵母態(tài)C.albicans加入步驟i中的培養(yǎng)中共同培養(yǎng)，C.albicans與RAW264.7巨噬細(xì)胞的比例為3：1；步驟iii.利用共聚焦顯微鏡的連續(xù)拍攝功能每隔10s拍攝一次培養(yǎng)皿中細(xì)胞的狀態(tài)，連續(xù)拍攝五小時(shí)，觀察其中RAW264.7巨噬細(xì)胞與C.albicans的作用情況。如圖1所示，在100μmol/LBDSF作用下，RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬一個(gè)和多個(gè)C.albicans的現(xiàn)象。細(xì)胞的活力增強(qiáng)，吞噬能力得到提升。如圖4所示，圖中的RAW264.7巨噬細(xì)胞從A-L這段時(shí)間內(nèi)不斷吞噬多個(gè)C.albicans的現(xiàn)象，可以看出BDSF可顯著提高RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬能力。本發(fā)明的不局限于上述實(shí)施例所述的具體技術(shù)方案，凡采用等同替換形成的技術(shù)方案均為本發(fā)明要求的保護(hù)范圍。