一種硅膠柱層析法分離純化魚卵中卵磷脂的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離提取【技術領域】。具體涉及一種硅膠柱層析法分離純化魚卵中卵磷脂的方法。所述方法包括用丙酮、乙醇提取卵磷脂，柱層析法進行純化，以異丙醇-甲醇作為洗脫劑，得到高純度的卵磷脂。本發(fā)明從海洋加工副產(chǎn)物魚卵中提取高純度的卵磷脂。得到的產(chǎn)品純度高，且無毒；本發(fā)明方法可為醫(yī)藥品，保健品和化妝品等產(chǎn)品提供含不飽和脂肪酸比例高達39.15%的高純度卵磷脂。
【專利說明】一種硅膠柱層析法分離純化魚卵中卵磷脂的方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離提取【技術領域】。具體涉及一種硅膠柱層析法分離純化魚卵中卵磷脂的方法。

【背景技術】
[0002]磷脂(Phospholipid)，也稱磷脂類、磷脂質(zhì)，是一類含磷酸根脂質(zhì)的總稱，屬于復合脂質(zhì)。磷脂在植物種子、動物臟器、血液、卵巢、蛋黃及細菌中與油脂并存，是生物細胞構(gòu)成的必需物質(zhì)，也是生命的基礎物質(zhì)之一。
[0003]一般磷脂組成成分包括:卵磷脂、腦磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇。其中，卵磷脂是磷脂的主要組成成分，同時具有親水性磷酸脂酪基、膽堿或膽胺等(極性基團)和疏水性脂肪酸基(非極性基團)，因此卵磷脂是一種兩性表面活性劑。具有分散、潤濕、溶解、消泡等作用，在營養(yǎng)和保健方面也起著非常重要的作用，能預防和治療高膽固醇和高脂血癥，緩解糖尿病的病情等功能，因此，卵磷脂是目前公認的最具有生物學活性的磷脂，在食品、醫(yī)藥、化妝品和飼料及其它工業(yè)部門都有著廣泛的應用。
[0004]海洋食品加工副產(chǎn)物魚卵等下腳料中含有豐富的磷脂，而且卵磷脂占比較高，且相比傳統(tǒng)動植物來源磷脂，其結(jié)構(gòu)中富含有不飽和脂肪酸。為增加海洋食品加工企業(yè)加工下腳料的經(jīng)濟附加值，可以開發(fā)上述資源用于提取富含不飽和脂肪酸的卵磷脂，增加相關產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟附加值。
[0005]柱層析的固定相分為氧化鋁與硅膠兩大類。由于氧化鋁柱不能再生，無法重復使用，硅膠則成為最佳的固定相，流動相多種多樣。因此，本專利采用硅膠柱層析的方法，從海洋食品加工副產(chǎn)物中分離純化得到高純度的卵磷脂，為海洋食品加工企業(yè)產(chǎn)業(yè)鏈的發(fā)展提供參考依據(jù)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種硅膠柱層析法分離純化卵磷脂的方法，可以從海洋加工副產(chǎn)物魚卵中提取高純度的卵磷脂。
[0007]本發(fā)明采取的技術方案如下:
(I)卵磷脂的提取:將魚卵勻漿后，取勻漿后的魚卵，用丙酮以l:5?l:9w/V的料液比浸提35?45min，抽濾后的濾餅用質(zhì)量比為90?98%的乙醇，以料液比1:5?l:9w/v浸提，提取溫度30?45°C，超聲輔助萃取15?25min，超聲波功率為300-500w，脈沖間隔I?5s，提取I?3次后抽濾，濃縮干燥得到卵磷脂粗品。
[0008](2)卵磷脂的純化:將卵磷脂粗品溶于異丙醇中，用柱層析法進行純化，以200-300目柱層析硅膠為固定相，流動相:異丙醇-甲醇作為洗脫劑，異丙醇-甲醇的體積比為1:1-1: 3，流速控制在2-4mL/min，洗脫液用TLC板定性分析，收集卵磷脂餾分，然后濃縮干燥，即得到卵磷脂產(chǎn)品。
[0009]本發(fā)明方法的優(yōu)點: (1)本發(fā)明硅膠柱層析中的流動相采用異丙醇/甲醇體系，分離效果好；
(2)本發(fā)明方法中的洗脫劑回收率高，成本價格低；
(3)本發(fā)明方法得到的產(chǎn)品純度高，且無毒；
(4)本發(fā)明方法可為醫(yī)藥品，保健品和化妝品等產(chǎn)品提供含不飽和脂肪酸比例高達39.15%的高純度卵磷脂。

【具體實施方式】
[0010]實施例1
(1)取30g勻漿后的魚卵，丙酮與魚卵以1:5的料液比浸提35min，抽濾后濾餅用90%的乙醇，在料液比1:5，提取溫度30°C的條件下，超聲輔助萃取15min，超聲波功率為300w，脈沖間隔2s，提取I次，抽濾；
(2)濃縮干燥:將乙醇提取液經(jīng)40°C下減壓濃縮后，置于45°C真空干燥得到粗磷脂2.1g ；
(3)分別將2.1g粗磷脂溶于異丙醇，氯仿和95%乙醇中，以2mL/min流速倒入硅膠柱中，分別采用三種洗脫體系，包括異丙醇-甲醇溶液(1:1 )，氯仿-甲醇(1:1)和95%乙醇。用TLC板檢測樣品的洗脫順序。通過TLC分析，把與標準品卵磷脂有相同R值的PC餾分收集在一起，減壓濃縮至膏狀，真空干燥得到的卵磷脂的純度分別為:92%，93.12%，87.22% ；說明氯仿-甲醇體系洗脫效果最好，但是鑒于氯仿毒性較大，不宜用于卵磷脂的純化。綜合，選擇異丙醇-甲醇洗脫體系為最佳洗脫條件。
[0011]實施例2
(1)取30g勻漿后的魚卵，丙酮與魚卵以1:7的料液比浸提40min，抽濾后濾餅用95%的乙醇以7的料液比，45°C超聲輔助萃取20min，超聲波頻率400w，脈沖間隔3s，反復提取2次，抽濾；
(2)濃縮干燥:將乙醇提取液經(jīng)45°C減壓濃縮后，置于50°C真空干燥得到粗磷脂
2.5g ；
(3)分別將2.5g粗磷脂溶于異丙醇，氯仿和95%乙醇中，以3mL/min流速倒入硅膠柱中，分別采用三種洗脫體系，包括異丙醇-甲醇溶液(1:2)，氯仿-甲醇(1:2)和95%乙醇。用TLC板檢測樣品的洗脫順序。通過TLC分析，把與標準品卵磷脂有相同R值的PC餾分收集在一起，減壓濃縮至膏狀，真空干燥得到的卵磷脂的純度分別為93.16%，93.45%，86.78%說明氯仿-甲醇體系洗脫效果最好，但是鑒于氯仿毒性較大，不宜用于卵磷脂的純化。綜合，選擇異丙醇-甲醇洗脫體系為最佳洗脫條件。
[0012]實施例3
(1)取30g勻漿后的魚卵，丙酮與魚卵以1:9的料液比浸提45min，抽濾后濾餅用98%的乙醇以1:9的料液比，45°C超聲輔助萃取25min，反復提取3次，超聲波頻率500w，脈沖間隔3s，抽濾；
(2)濃縮干燥:將乙醇提取液經(jīng)45°C下減壓濃縮后，置于55°C真空干燥得到粗卵磷脂
3.0g ；
(3)分別將3.0g粗磷脂溶于異丙醇，氯仿和95%乙醇中，以4mL/min流速倒入硅膠柱中，分別采用三種洗脫體系，包括異丙醇-甲醇溶液(1:3)，氯仿-甲醇(1:3)和95%乙醇。用TLC板檢測樣品的洗脫順序。通過TLC分析，把與標準品卵磷脂有相同R值的PC餾分收集在一起，減壓濃縮至膏狀，真空干燥得到的卵磷脂的純度分別為94.16%，95.10%，86.39%說明氯仿-甲醇體系洗脫效果最好，但是鑒于氯仿毒性較大，不宜用于卵磷脂的純化。綜合，選擇異丙醇-甲醇洗脫體系為最佳洗脫條件。
【權(quán)利要求】
1.一種硅膠柱層析法分離純化卵磷脂的方法，其特征在于:所述方法包括以下步驟:(O卵磷脂的提取:將魚卵勻漿后，取勻漿后的魚卵，用丙酮以l:5?l:9w/V的料液比浸提35?45min，抽濾后的濾餅用質(zhì)量比為90、8%的乙醇，以料液比1:5?1: 9w/v浸提，提取溫度30^450C，超聲輔助萃取15?25min，超聲波功率為300-500w，脈沖間隔f 5s，提取f 3次后抽濾，濃縮干燥得到卵磷脂粗品； (2)卵磷脂的純化:將卵磷脂粗品溶于異丙醇中，用柱層析法進行純化，以200-300目柱層析硅膠為固定相，流動相:異丙醇-甲醇作為洗脫劑，異丙醇-甲醇的體積比為1:1-1:3,流速控制在2-4mL/min，洗脫液用TLC板定性分析，收集卵磷脂餾分，然后濃縮干燥，即得到卵磷脂產(chǎn)品。
【文檔編號】C07F9/10GK104370954SQ201410501211
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月26日
【發(fā)明者】梁鵬, 陳麗嬌, 程文健, 許艷萍, 張惠婷, 李丹, 曾文武, 鐘機 申請人:福建農(nóng)林大學