專利名稱：青錢柳酸a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種青錢柳酸A的制備方法。
背景技術(shù)：
青錢柳酸Α(3，23-β -印oxy-olean-12-en-28-oic acid)，是青錢柳特有的一種三
萜類活性成分，結(jié)構(gòu)如下所示 青錢柳[Cyclocaryapaliurus (Batal) Ijinskaja]是我國特有的一種單屬種植 物，極具醫(yī)療保健價值，用其葉子于配制成的降血糖茶在臨床上已使用多年。青錢柳葉中含 有多糖、黃酮、三萜、留體、酚類、內(nèi)酯、香豆精等活性成分。研究表明，青錢柳提取物具有降 血糖、降血壓、降血脂、抗氧化、抗菌、抗癌和增強機體免疫力等生物活性功能。青錢柳三萜 類成分作為青錢柳主要生物活性成分之一，目前已取得一定的研究進展，但關(guān)于青錢柳三 萜類成分的分離純化方法研究鮮見報道。且在市場上也未見青錢柳三萜單體樣品流通。因 此，尋找一種更好的提取率高、成本低和易于工業(yè)化生產(chǎn)的青錢柳酸A分離純化工藝，能為 青錢柳的特征生物活性研究奠定基礎(chǔ)，為構(gòu)效關(guān)系的研究提供前提。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種青錢柳酸A的制備方法。所述青錢柳酸A的制備方法包括如下步驟①將青錢柳葉的乙醇提取物浸膏350 500g粗提物，溶于IL蒸餾水中，得到青錢 柳葉粗提物水溶液；②將上述粗提物水溶液過DlOl型大孔吸附樹脂柱，充分吸附后，先用3 5L蒸餾 水洗脫除去部分水溶性雜質(zhì)，再用1L50%乙醇洗脫，收集50%乙醇部分進行濃縮至0. 1 0. 2倍體積，然后用300 500ml氯仿萃取，氯仿層經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無溶劑排出，得到氯仿 萃取物浸膏；③將上述獲得的氯仿萃取物浸膏樣品10 15g用氯仿溶解，過硅膠柱，氯仿的質(zhì) 量體積比為2 1 3 2，然后用氯仿和甲醇梯度洗脫，氯仿甲醇=100 0,95 5、 90 10,80 20;收集氯仿甲醇=90 10洗脫部分進行濃縮干燥，得粉末0. 15 0.30g，用0.5ml氯仿溶解，過硅膠柱，再用氯仿和甲醇梯度洗脫，氯仿甲醇=95 5 90 10，收集洗脫峰，在氯仿甲醇=90 10部分獲得青錢柳酸A樣品。
青錢柳葉的乙醇提取物浸膏的制備方法為將3 5kg青錢柳葉干燥粉碎，加入 10倍重量的90%乙醇中，在50°C下浸泡5h，過濾，濾液濃縮后得到青錢柳葉乙醇提取物浸 膏 350 500g。本發(fā)明的特點是①利用青錢柳葉為原料，制備得到青錢柳特有的三萜類物質(zhì)——青錢柳酸A，對青 錢柳的生物活性功能的構(gòu)效關(guān)系研究意義深遠；②將大孔樹脂用于青錢柳三萜的初步提純，使青錢柳三萜的純度大幅度提高；③ 通過硅膠柱層析進行反復(fù)分離純化，得到較高純度的青錢柳三萜單體樣品——青錢柳酸A。


圖1是實施例1所得青錢柳酸A的液相色譜圖；圖2是實施例1所得青錢柳酸A的質(zhì)譜圖。
具體實施例方式實施例11.以5kg青錢柳葉為原料，干燥粉碎，加入10倍重量的90%乙醇中，在50°C下浸 泡5h，過濾，濾液濃縮并干燥后得到500g粗提物，溶于IL蒸餾水中，備用。2.將上述水溶液過DlOl型大孔吸附樹脂柱(4. 5cmX 40cm)，使樹脂對提取液中的 青錢柳三萜類化合物進行充分吸附先用5L蒸餾水洗脫除去部分水溶性雜質(zhì)，再用1L50% 乙醇洗脫，收集50%乙醇部分進行濃縮至0. 2倍體積，然后用500ml氯仿萃取，氯仿層經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無溶劑蒸發(fā)，得到氯仿萃取物浸膏245g。3.將上述獲得的樣品IOg用5ml氯仿溶解，過硅膠柱(2. 5cmX40cm)，用氯仿和 甲醇梯度洗脫，氯仿甲醇=100 0,95 5,90 10,80 20(階段梯度)。收集氯 仿甲醇=90 10洗脫部分進行濃縮干燥，得粉末0. 15g，用0. 5ml氯仿溶解，過硅膠柱 (1.2CmX40Cm)，洗脫劑梯度氯仿甲醇=95 5 90 10 (線性梯度)，收集洗脫峰， 獲得青錢柳酸A樣品54. 9mg,經(jīng)高效液相色譜-質(zhì)譜分析(ZORBAX SB-C18色譜柱，流動相 乙腈和水，流速0. 4mL/min，檢測波長2IOnm ；質(zhì)譜條件電離方式=ESI (positive)；干燥 氣(N2)流速:25L · miiT1 ；輔助氣(N2)流速0. 75L · mirT1 ；離子傳輸管溫度300°C ；離子傳 輸管電壓7V ；電離電壓4. 5KV)，該樣品為青錢柳酸A，純度達95. 01 %。實施例21.將青錢柳葉3kg干燥粉碎，加入10倍重量的90%乙醇中，在50°C下浸泡5h，過 濾，濾液濃縮并干燥后得到359g粗提物，溶于IL蒸餾水中，備用。2.將上述水溶液過DlOl型大孔吸附樹脂柱(4. 6cmX 40cm)，使樹脂對提取液中的 青錢柳三萜類化合物進行充分吸附先用3L蒸餾水洗脫除去部分水溶性雜質(zhì)，再用1L50% 乙醇洗脫，收集50%乙醇部分進行濃縮至0. 2倍體積，然后用300ml氯仿萃取，氯仿層經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到氯仿萃取物166g。3.將上述獲得的樣品15g用IOml氯仿溶解，過硅膠柱(2. 5cmX40cm)，用氯仿和 甲醇梯度洗脫，氯仿甲醇=100 0,95 5,90 10,80 20 (階段梯度)。收集氯仿 甲醇=90 10洗脫部分進行濃縮至無溶劑蒸發(fā)，得粉末0.45g，用0.5ml氯仿溶解，過硅膠柱(1.2CmX40Cm)，洗脫劑梯度氯仿甲醇=95 5 90 10 (線性梯度)，收集洗脫峰， 獲得青錢柳酸A樣品32. 9mg,經(jīng)高效液相色譜-質(zhì)譜分析(ZORBAX SB-C18色譜柱，流動相 乙腈和水，流速0. 4mL/min，檢測波長2IOnm ；質(zhì)譜條件電離方式=ESI (positive)；干燥 氣(N2)流速:25L · miiT1 ；輔助氣(N2)流速0. 75L · mirT1 ；離子傳輸管溫度300°C ；離子傳 輸管電壓7V ；電離電壓4. 5KV)，該樣品為青錢柳酸A，純度達96. 31 %。
權(quán)利要求
青錢柳酸A的制備方法，其特征在于包括如下步驟①將青錢柳葉的乙醇提取物浸膏350 500g，溶于1L蒸餾水中，得到青錢柳葉粗提物水溶液；②將上述粗提物水溶液過D101型大孔吸附樹脂柱，充分吸附后，先用3～5L蒸餾水洗脫，再用1L50％乙醇洗脫，收集50％乙醇部分進行濃縮至0.1～0.2倍體積，然后用300～500ml氯仿萃取，氯仿層經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無溶劑排出，得到氯仿萃取物浸膏；③將上述獲得的氯仿萃取物浸膏樣品10～15g用氯仿溶解，過硅膠柱，氯仿的質(zhì)量體積比為2∶1～3∶2，然后用氯仿和甲醇梯度洗脫，氯仿∶甲醇＝100∶0、95∶5、90∶10、80∶20；收集氯仿∶甲醇＝90∶10洗脫部分進行濃縮干燥，得粉末0.15～0.30g，用0.5ml氯仿溶解，過硅膠柱，再用氯仿和甲醇梯度洗脫，氯仿∶甲醇＝95∶5～90∶10，收集洗脫峰，在氯仿∶甲醇＝90∶10部分獲得青錢柳酸A樣品。
2.如權(quán)利要求1所述的青錢柳酸A的制備方法，其特征在于青錢柳葉的乙醇提取物浸 膏的制備方法為將3 5kg青錢柳葉干燥粉碎，加入10倍重量的90%乙醇中，在50°C下 浸泡5h，過濾，濾液濃縮后得到青錢柳葉乙醇提取物浸膏350 500g。
全文摘要
本發(fā)明涉及青錢柳酸A的制備方法，包括如下步驟①將青錢柳葉的乙醇提取物浸膏溶于蒸餾水中，得到青錢柳葉粗提物水溶液；②將上述粗提物水溶液過D101型大孔吸附樹脂柱，充分吸附后，先用蒸餾水洗脫，再用1L50％乙醇洗脫，收集50％乙醇部分進行濃縮，然后用氯仿萃取，氯仿層經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無溶劑排出，得到氯仿萃取物浸膏；③將氯仿萃取物浸膏樣品用氯仿溶解，過硅膠柱，氯仿的質(zhì)量體積比為2∶1～3∶2，然后用氯仿和甲醇梯度洗脫，收集氯仿∶甲醇＝90∶10洗脫部分進行濃縮干燥，得粉末，用氯仿溶解，過硅膠柱，再用氯仿和甲醇梯度洗脫，在氯仿∶甲醇＝90∶10部分獲得青錢柳酸A樣品。本發(fā)明利用青錢柳葉為原料，制備得到青錢柳酸A。
文檔編號C07J63/00GK101899083SQ201010238879
公開日2010年12月1日 申請日期2010年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月28日
發(fā)明者吳彩娥, 徐琳, 方升佐, 李婷婷, 楊萬霞, 范龔健 申請人:南京林業(yè)大學