專利名稱：含磷的二苯乙烯類化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的化合物，具體地說(shuō)涉及含磷的二苯乙烯類化合物。
本發(fā)明還涉及上述化合物的制備方法和用途。

背景技術(shù)：
癌癥是人類健康的一大威脅，人類的大多數(shù)腫瘤都是由外界環(huán)境因素造成的，全世界每年死于癌癥的人數(shù)大于500萬(wàn)。雖然現(xiàn)在已有一些治療辦法，如外科手術(shù)、放療、化療等可使病人治愈，但治愈率不高。用化學(xué)藥物預(yù)防及治療癌癥，目前是制服腫瘤的最有效方法之一。
具有1，2-二苯乙烯骨架的化合物及其聚合物總稱為茋類化合物(Stilbenoid)，天然茋類化合物的單體分為順式和反式兩種。天然界中存在的苷或苷元以反式構(gòu)型較多，并常形成(E)-3，4’，5-三羥基二苯乙烯(反式-白藜蘆醇，trans-Resveratrol)的骨架及其衍生物，分布于多種植物中。其中，白藜蘆醇主要以反式結(jié)構(gòu)存在于桑椹、花生、葡萄等70多種植物中，1940年被首次從毛葉藜蘆(Veratrum guandiform)的根部提取得到，它具有抗老年癡呆、抗氧化、抗微生物、治療糖尿病、神經(jīng)保護(hù)作用等諸多重要的生物活性。而且，白藜蘆醇對(duì)癌變過(guò)程中細(xì)胞和組織變異的三個(gè)主要階段(誘導(dǎo)、起始和發(fā)展)都有抑制作用，成為抑制和治療組織癌變和腫瘤發(fā)生最有前途的藥物之一。

目前，以天然產(chǎn)物中的活性成分為母體化合物，根據(jù)藥物分子學(xué)的原理進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，設(shè)計(jì)開發(fā)具有高活性、低毒副作用的新分子實(shí)體已是新藥開發(fā)的一種重要手段。因此，以白藜蘆醇的結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)進(jìn)行修飾，有可能開發(fā)出高活性、低毒副作用、抗癌譜廣、穩(wěn)定性好、從而可應(yīng)用于臨床的的化合物。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是研究開發(fā)一種毒性低、抗癌譜廣、抗癌活性高、穩(wěn)定性好的含磷的二苯乙烯類衍生物。
本發(fā)明的另一目的是提供上述化合物的制備方法。
本發(fā)明還提供含有上述化合物的藥物組合物及其用途。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)目的，以天然產(chǎn)物白藜蘆醇及其苷(例如虎杖苷)為先導(dǎo)化合物，在酚羥基上引入含磷或含磷酸酯或它們的衍生物基團(tuán)，設(shè)計(jì)得到一類具有如式(I)所示結(jié)構(gòu)的含磷的二苯乙烯類化合物
或
式(I)中，p、q、r、s獨(dú)立地為0-5的整數(shù)，且r+s＞0，m、n獨(dú)立地為0-20的整數(shù)，式(I)化合物可以是順式或反式結(jié)構(gòu)； R、R′獨(dú)立地選自H、C1-C20直鏈或支鏈烷基、C1-C20酰胺基、C1-C20酰氧基、C1-C20鏈烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷基羰基氨基、C1-C20烷基氨基、C2-C20直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C20直鏈或支鏈鏈炔基、-CO2H、-CO2R′″、-NH2、-CN、-NHR′″、-OH、-OR′″、鹵素、取代的C1-C20直鏈或支鏈烷基或者取代的C2-C20直鏈或支鏈鏈烯基，其中R′″是C1-C20直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈烯基、或直鏈或支鏈炔基； A和B獨(dú)立地選自H、C1-C20烷氧基、C1-C20酰胺基、C1-C20酰氧基、C1-C20鏈烷?；?、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷基羰基氨基、C1-C20烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、羥基、糖基； Ar獨(dú)立地為取代或未取代的芐基、苯基等； R1、R2、R3、R4獨(dú)立地選自H、金屬離子、銨根離子、C1-C20直鏈或支鏈烷基、C2-C20直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C20直鏈或支鏈鏈炔基、C1-C20的未取代或取代的飽和脂環(huán)烴基、芐基、苯基； 在本發(fā)明中，所述糖基包括葡萄糖基、阿拉伯糖基、木糖基、來(lái)蘇糖基、核糖基、甘露糖基、半乳糖基、阿洛糖基、果糖基、山梨糖基、夫糖基、雞納糖基、芹糖基、鼠李糖基、金李梅糖基；所述金屬離子包括鉀離子、鈉離子、鈣離子、鎂離子、鋅離子等。
進(jìn)一步地，本發(fā)明的化合物具有式(II)所示的結(jié)構(gòu)
式(II)中，p、q、r、s獨(dú)立地為0-5的整數(shù)，且r+s＞0；式(II)化合物可以是順式或反式結(jié)構(gòu)； Y為Ar或-(CH2)x-；Ar為取代或未取代的芐基、苯基等；x為0-8的整數(shù)； R、R′獨(dú)立地選自H、C1-C8直鏈或支鏈烷基、C1-C8酰胺基、C1-C8酰氧基、C1-C8鏈烷?；?、C1-C8烷氧羰基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷基羰基氨基、C1-C8烷基氨基、C2-C8直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C8直鏈或支鏈鏈炔基、-CO2H、-CO2R′″、-NH2、-CN、-NHR′″、-OH、-OR′″、鹵素、取代的C1-C8直鏈或支鏈烷基或者取代的C2-C8直鏈或支鏈鏈烯基，其中R′″是C1-C8直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈烯基、或直鏈或支鏈炔基； A和B獨(dú)立地選自H、C1-C8烷氧基、C1-C8酰胺基、C1-C8酰氧基、C1-C8鏈烷酰基、C1-C8烷氧羰基、C1-C8烷基羰基氨基、C1-C8烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、羥基、糖基； R1、R2、R3、R4獨(dú)立地選自H、金屬離子、銨根離子、C1-C8直鏈或支鏈烷基、C2-C8直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C8直鏈或支鏈鏈炔基、C1-C8的未取代或取代的飽和脂環(huán)烴基、芐基、苯基。
本發(fā)明中，所述“C1-C8直鏈或支鏈烷基”包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物具有如通式(III)所示的結(jié)構(gòu)
其中，R1、R2、R3、R4獨(dú)立地選自H、金屬離子、銨根離子、C1-C8直鏈或支鏈烷基、C2-C8直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C8直鏈或支鏈鏈炔基、C1-C8的未取代或取代的飽和脂環(huán)烴基、芐基、苯基。
進(jìn)一步地，典型的化合物包括白藜蘆醇三氧代磷酸鈉鹽(化合物3)以及制備該化合物的中間體白藜蘆醇三氧代磷酸(化合物2)和白藜蘆醇三氧代磷酸乙酯(化合物1)，即式(I)中p＝0，q＝0，s＝2，r＝1，m＝1，n＝1，當(dāng)R1-R4為乙基時(shí)，為化合物1；當(dāng)R1-R4為氫時(shí)，為化合物2；當(dāng)R1-R4為鈉離子時(shí)，為化合物3，具體結(jié)構(gòu)式如下
化合物3是一種具有抗腫瘤活性的含磷的二苯乙烯類化合物。在體外抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)中，該化合物顯示出對(duì)體外培養(yǎng)的人肺癌、肝癌、血癌細(xì)胞的明顯的生長(zhǎng)抑制作用，并顯示劑量-效應(yīng)關(guān)系。該化合物可結(jié)合化療、放療、生物技術(shù)療法治療腫瘤，用于增強(qiáng)療效和降低藥物副作用。
本發(fā)明的化合物具有潛在的改善心血管、降血脂、抗炎、抗腫瘤等藥理活性，并且經(jīng)藥理試驗(yàn)證明，本發(fā)明的部分化合物，與白藜蘆醇和虎杖苷一樣，可用于預(yù)防和治療腫瘤，心血管疾病等，其中一些化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，其活性甚至明顯強(qiáng)于白藜蘆醇和虎杖苷。而且，這些化合物因結(jié)構(gòu)中存在磷酸酯基，能夠成鹽，與上述天然化合物相比，其穩(wěn)定性更高，并且藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)也得到改善。
本發(fā)明還提供制備上述含磷的二苯乙烯類化合物的方法。
方法一通過(guò)白黎蘆醇或虎杖苷等先導(dǎo)化合物，在堿性條件下，相轉(zhuǎn)移催化劑作用下，與鹵代磷酸酯類化合物縮合，得到含磷酸酯的二苯乙烯類衍生物，然后在堿性條件下水解得相應(yīng)的酸，酸與堿反應(yīng)得相應(yīng)的鹽。
所述的堿為氫氧化物、碳酸鹽、有機(jī)或無(wú)機(jī)胺類化合物、四氫吡咯、哌啶、嗎啉、哌嗪等的一種或其組合。“氫氧化物”的例子有氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣等，“碳酸鹽”的例子有碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鈣等，胺類化合物的例子有氨水、三乙胺、吡啶等。
所述的相轉(zhuǎn)移催化劑為季銨鹽，選自四丁基氯化銨、四丁基溴化銨和四丁基碘化銨，優(yōu)選四丁基氯化銨。
例如，以白藜蘆醇為原料，通過(guò)以下途徑可以合成化合物1、2和3
白藜蘆醇經(jīng)步驟a與鹵代磷酸酯反應(yīng)得化合物1，化合物1經(jīng)步驟b水解得酸2，或者白藜蘆醇經(jīng)步驟d與鹵代磷酸反應(yīng)直接得化合物2，化合物2經(jīng)步驟3與堿反應(yīng)得化合物3。并且對(duì)于化合物3，優(yōu)選經(jīng)步驟a、b、c制備，因?yàn)榇寺肪€條件溫和、處理方便，反應(yīng)總收率達(dá)55.7％。
本發(fā)明其他代表性化合物也可通過(guò)方法一來(lái)合成。例如，以白藜蘆醇及虎杖苷為起始原料，分別與氯磷酸二乙酯、氯甲基磷酸二乙酯、溴乙基磷酸二乙酯、氯芐基磷酸二乙酯反應(yīng)可合成化合物4、5、6、7，結(jié)構(gòu)式如下所示
方法二本發(fā)明化合物的合成還可通過(guò)以下全合成方案來(lái)實(shí)現(xiàn)。
全合成方案
根據(jù)該方案，醛或酮化合物(IV)與苯酚化合物(V)可在鈉氫和四氫呋喃(或乙酸酐和三乙胺)中縮合以形成不飽和酚(VI)，將化合物VI與鹵代磷酸酯化合物反應(yīng)，然后在酸性條件下水解，在堿性條件下成鹽，從而形成目標(biāo)化合物I。此外，不飽和酚VI直接與鹵代磷酸酯化合物發(fā)生取代反應(yīng)也可得到目標(biāo)化合物1。
例如，通過(guò)上述方案可以合成得到化合物11、12、13
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種藥物組合物，包含上述含磷的二苯乙烯類化合物為有效成分和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的藥物組合物可根據(jù)任何本領(lǐng)域公知的劑型制備方法，用于制備預(yù)防和治療腫瘤、改善心血管、降血脂等的藥物。特別地，該藥物化合物用于預(yù)防或治療異常細(xì)胞生長(zhǎng)，所述異常細(xì)胞生長(zhǎng)可以表現(xiàn)為腫瘤，所述腫瘤可以是肺癌、肝癌、血癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、黑素癌、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌、軟組織肉瘤、尿道癌、前列腺癌、淋巴細(xì)胞瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、脊椎腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤，尤其是肺癌、肝癌、血癌、胰腺癌或乳腺癌。
所述組合物可以單獨(dú)使用、或與一種或多種其他抗腫瘤藥物聯(lián)合使用。與載體物質(zhì)組合以制備單一劑型的活性成分的量可以依據(jù)所治療的宿主及具體的給藥方式而改變。
所述藥物組合物可制備成適于給藥的任意形式的制劑，例如適用于腸內(nèi)(例如口服或直腸給藥)、局部或腸外給藥、或通過(guò)吸入噴霧向哺乳動(dòng)物(包括人)給藥，例如口服、注射、植入、外用等形式。其中，口服包括片劑(普通片、含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分色片、可溶片、泡騰片、陰道片或陰道泡騰片、緩釋片、控釋片、腸溶片、口腔控釋片等)；膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、腸溶膠囊等)；丸劑(滴丸、糖丸、小丸)；口服液體制劑(糖漿劑、口服溶液劑、口服混懸劑、口服乳劑)；顆粒劑(混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒、控釋顆粒等)；散劑。注射劑包括注射液、注射無(wú)菌粉末或無(wú)菌塊狀物(包括采用溶劑結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等工藝制備)、注射用濃溶液；植入劑；外用制劑包括栓劑；氣霧劑；粉霧劑；噴霧劑；膜劑；凝膠劑；貼劑等制劑形式。

具體實(shí)施例方式 下列實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，并不意味著對(duì)本發(fā)明范圍的任何限制。
試劑與儀器 白黎蘆醇、虎杖苷購(gòu)自陜西賽德高科技生物股份有限公司，含量≥99％，其他試劑均為市購(gòu)分析純?cè)噭?br> 熔點(diǎn)測(cè)定采用申光牌WRR熔點(diǎn)儀； 元素分析測(cè)定采用德國(guó)Elmentar Vario EL元素分析儀； 核磁共振波譜測(cè)定采用美國(guó)Varian UNITY INOVA 400超導(dǎo)脈沖傅里葉變換核磁共振譜儀； 質(zhì)譜測(cè)定采用英國(guó)VG ZAB-HS色質(zhì)聯(lián)用儀。
實(shí)施例1化合物4的合成
在50mL三頸瓶中，加入1.95g(5mmol)虎杖苷和4.14g(30mmol)無(wú)水碳酸鉀，加入35mL DMF中，降溫至-5℃，攪拌下緩慢滴加2.2mL(15mmol)氯磷酸二乙酯，緩慢升溫至100℃，TLC跟蹤反應(yīng)，至原料點(diǎn)完全消失，約15小時(shí)后反應(yīng)結(jié)束，加入至30mL水中，用二氯甲烷萃取(10mL×5)，分層，有機(jī)相用水洗(15mL×3)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，固體物用300-400目的硅膠經(jīng)柱色譜分離，得1.51g白色固體化合物。收率45.7％；熔點(diǎn)205-206℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.11-1.15(m，12H)，3.40-3.49(m，12H)，3.54-3.57(m，1H)，3.76-3.79(m，2H)，3.91-3.93(m，1H)，4.07-4.15(m，8H)，5.88-5.94(m，1H)，6.09-6.49(m，3H)，6.73-7.25(m，6H)；MS(FAB)663(M+)。
實(shí)施例2化合物5的合成
在50mL三頸瓶中，加入1.14g(5mmol)白藜蘆醇、4.15g(30mmol)無(wú)水碳酸鉀，加到35mL丙酮中，降溫至-5℃，攪拌下緩慢滴加2.9mL(20mmol)氯磷酸二乙酯，緩慢升溫至室溫，TLC跟蹤反應(yīng)，至原料點(diǎn)完全消失，約4小時(shí)后反應(yīng)結(jié)束，加入至30mL水中，用二氯甲烷萃取(10mL×5)，分層，有機(jī)相用水洗(15mL×3)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，固體物用300-400目的硅膠經(jīng)柱色譜分離，得1.95g黃色液體化合物。收率61.3％；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.30-1.41(m，18H)，4.18-4.31(m，12H)，6.94-7.12(m，3H)，7.20-7.26(m，4H)，7.46-7.52(d，J＝8.6Hz，2H)；MS(FAB)637(M+)。
實(shí)施例3化合物6的合成
在100mL的三頸燒瓶中，加入2.28g(10mmol)白藜蘆醇，8.3g(60mmol)無(wú)水碳酸鉀，同時(shí)加入50mL DMF，攪拌下滴加10.9mL(60mmol)溴代乙基磷酸二乙酯，加畢，慢慢升溫至100℃，TLC跟蹤反應(yīng)，至原料點(diǎn)完全消失，約4小時(shí)后反應(yīng)結(jié)束，停止加熱，待冷卻后，加入至120mL水中，用二氯甲烷萃取(40mL×5)，分層，有機(jī)相用水洗(60mL×3)，其后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，固體物用300-400目的硅膠經(jīng)柱色譜分離，得4.83克白色固體的化合物6。收率67.0％；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.40-1.57(m，18H)，3.99-4.14(m，6H)，6.29-6.31(t，J＝2.1Hz，1H)，6.56-6.63(m，2H)，6.81-6.90(m，3H)，6.98-7.02(d，J＝16.2Hz，1H)，7.37-7.43(m，2H)；MS(FAB)721(M+)。
實(shí)施例4化合物7的合成
在100mL的三頸燒瓶中，加入2.28g(10mmol)白藜蘆醇，4.15g(30mmol)無(wú)水碳酸鉀，同時(shí)加入50mLDMF，攪拌下滴加4.41mL(20mmol)的氯代芐基磷酸二乙酯，加畢，慢慢升溫至100℃，TLC跟蹤反應(yīng)，至原料點(diǎn)完全消失，約4小時(shí)后反應(yīng)結(jié)束，停止加熱，待冷卻后，加入至60mL水中，用二氯甲烷萃取(20mL×5)，分層，有機(jī)相用水洗(30mL×3)，其后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，固體物用300-400目的硅膠經(jīng)柱色譜分離，得2.28克白色固體的化合物7。收率50.3％；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.40-1.45(m，6H)，4.01-4.08(m，4H)，6.29-6.30(t，J＝2.2Hz，1H)，6.55-6.56(m，1H)，6.61-6.63(m，1H)，6.81-6.90(m，3H)，6.98-7.02(d，J＝16.2Hz，1H)，7.37-7.43(m，2H)；MS(FAB)455(M+)。
實(shí)施例5化合物1的合成
在1000mL的三頸燒瓶中，加入22.8g(100mmol)白黎蘆醇，600mL DMF，82.8g(600mmol))無(wú)水碳酸鉀，攪拌下滴加111.9g(600mmol)氯甲基磷酸二乙酯，加畢，慢慢升溫至100℃，TLC跟蹤反應(yīng)，至原料點(diǎn)完全消失，約4小時(shí)后反應(yīng)結(jié)束，停止加熱，待冷卻后，加入至600mL水中，用二氯甲烷萃取(200mL×50)，所得有機(jī)相用水洗(300mL×3)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，固體物用300-400目的硅膠經(jīng)柱色譜分離，得42.7克白色固體的化合物。收率63.0％；熔點(diǎn)198-200℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.11-1.18(m，18H)，4.07-4.15(m，12H)，4.42-4.53(m，6H)，6.13-6.17(m，1H)，6.49-6.53(m，2H)，6.77-6.84(m，2H)，6.99-7.03(m，2H)，7.31-7.36(m，2H)；MS(FAB)679(M+)。
實(shí)施例6化合物2的合成
在500mL的三頸燒中，將13.56g(20mmol)的化合物1溶于200mL乙醇中，然后加入120mL水，此時(shí)可觀察到有白色沉淀析出，于混合物中加入12g(300mmol)的氫氧化鈉，溫度加熱50℃時(shí)，TLC跟蹤反應(yīng)至原料點(diǎn)消失，約2小時(shí)后，沉淀全部溶解，將溶劑蒸干，水200mL溶解，二氯甲烷及乙酸乙酯各200mL洗，稀鹽酸酸化，析出白色沉淀，真空干燥得三乙酸取代的白色粉末狀固體9.28克。產(chǎn)率91.0％；熔點(diǎn)224-226℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.57-4.63(m，6H)，6.13-6.18(m，1H)，6.49-6.54(m，2H)，6.77-6.83(m，2H)，6.91-6.99(d，J＝4.2Hz，2H)，7.31-7.35(m，2H)，12.03(s，br，6H)；MS(FAB)511(M+)。
實(shí)施例7化合物3的合成
稱取1.2g(30mmol)的氫氧化鈉溶于50mL水中，攪拌下加入5.11g(10mmol)上述磷酸化合物，不斷攪拌至幾乎澄清，過(guò)濾，所得濾液濃縮除水，干燥，得6.23克白色粉末狀固體化合物3。產(chǎn)率97.2％；熔點(diǎn)＞260℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.42-4.50(m，6H)，6.13-6.18(m，1H)，6.49-6.53(m，2H)，6.93-6.98(m，2H)，7.02-7.06(m，1H)，7.19-7.23(m，1H)，7.56(m，2H)。
實(shí)施例8化合物10的合成
在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，稱取將3.04g(20mmol)3，5-二甲氧基苯基磷酸酯8溶于40mL干燥的四氫呋喃中，溫度降低至-5℃，加入4.8g(200mmol)鈉氫。攪拌下30min，然后加入5.76g(20mmol)醛9(其溶解于60mL干燥的四氫呋喃中)，加畢，慢慢升溫至室溫，TLC跟蹤反應(yīng)，至原料點(diǎn)完全消失，約16h后反應(yīng)結(jié)束。降溫至0℃，加入20mL水淬滅反應(yīng)，用濃度1M的鹽酸調(diào)節(jié)pH＝6，然后用乙酸乙酯(100mL×4)萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗(60mL×2)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，固體物用300-400目的硅膠經(jīng)柱色譜分離，得2.74克白色固體化合物。收率48.0％；熔點(diǎn)90.5-94℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3-d6)δ3.82(s，6H)，3.90(s，3H)，6.60-6.78(t，J＝2.2Hz，1H)，6.63-6.66(d，J＝2.2Hz，2H)，6.82-6.92(m，2H)，6.96-7.00(m，2H)，7.13-7.15(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(FAB)287(M+)。
實(shí)施例9化合物11的合成
在100mL的三頸燒瓶中，加入2.74g(9.6mmol)的化合物10，加入60mLDMF、0.42mL(30mmol)三乙胺，攪拌下滴加5.45mL(30mmol)溴代乙基磷酸二乙酯，加畢，慢慢升溫至100℃，TLC跟蹤反應(yīng)，至原料點(diǎn)完全消失，約4小時(shí)后反應(yīng)結(jié)束，停止加熱，待冷卻后，加入至60mL水中，用二氯甲烷萃取(20mL×5)，所得有機(jī)相用水洗(30mL×3)，其后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，固體物用300-400目的硅膠經(jīng)柱色譜分離，得2.89克白色固體化合物。收率67.0％；熔點(diǎn)219-221℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.13-1.16(m，6H)，2.19-2.23(m，2H)，3.83(s，6H)，3.92(s，3H)，4.07-4.10(m，4H)，4.18-4.20(m，2H)，6.62-6.80(t，J＝2.2Hz，1H)，6.64-6.67(d，J＝2.2Hz，2H)，6.84-6.94(m，2H)，6.97-7.01(m，2H)，7.13-7.15(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(FAB)451(M+)。
實(shí)施例10化合物12的合成
在250mL的三頸燒中，將2.89g(6.4mmol)化合物11溶于60mL乙醇中，然后加入40mL水，此時(shí)可觀察到有白色沉淀析出，于混合物中加入3.84g(96mmol)氫氧化鈉，溫度加熱50℃時(shí)，TLC跟蹤反應(yīng)至原料點(diǎn)消失，約2小時(shí)后，沉淀全部溶解，將溶劑蒸干，水60mL溶解，二氯甲烷及乙酸乙酯各60mL洗，稀鹽酸酸化，析出白色沉淀，真空干燥得白色粉末狀固體2.35克。產(chǎn)率93.0％；熔點(diǎn)228-229℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.82(m，2H)，3.83(s，6H)，3.92(s，3H)，4.18-4.20(m，2H)，6.62-6.80(t，J＝2.2Hz，1H)，6.64-6.67(d，J＝2.2Hz，2H)，6.84-6.94(m，2H)，6.97-7.01(m，2H)，7.13-7.15(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(FAB)395(M+)。
實(shí)施例11化合物13的合成
稱取0.72g(18mmol)的氫氧化鈉溶于10mL水中，攪拌下加入2.35g(6mmol)上述磷酸化合物12，不斷攪拌至幾乎澄清，過(guò)濾，所得濾液濃縮除水，干燥，得2.58克白色粉末狀固體化合物13，產(chǎn)率98.0％，熔點(diǎn)＞260℃。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.84(m，2H)，3.84(s，6H)，3.94(s，3H)，4.19-4.21(m，2H)，6.64-6.82(t，J＝2.2Hz，1H)，6.65-6.68(d，J＝2.2Hz，2H)，6.86-6.96(m，2H)，6.98-7.02(m，2H)，7.14-7.16(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(FAB)439(M+)。
實(shí)施例12化合物的藥理活性試驗(yàn) 以化合物3為例，對(duì)化合物活性進(jìn)行了測(cè)定 1)化合物3對(duì)體外腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用 a)IC50值的測(cè)定(Lewis肺癌) 取Lewis肺癌細(xì)胞，培養(yǎng)于含10％小牛血清DMEM營(yíng)養(yǎng)液中，接種于96孔培養(yǎng)板，1×104細(xì)胞/孔，置于37℃，5％CO2孵箱中，用10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)液，將該化合物稀釋至所需濃度，分別加入96孔板各孔中，每濃度3孔，6孔空白對(duì)照。培養(yǎng)72小時(shí)，加入MTT液，1小時(shí)后加DMSO顯色，酶標(biāo)儀測(cè)OD值。計(jì)算各濃度藥物殺傷率，按坐標(biāo)法得出化合物3對(duì)人肝癌細(xì)胞的IC50＝12.9μg/ml。
b)用與上述試驗(yàn)相同的方法，測(cè)出化合物3對(duì)人肝癌細(xì)胞的IC50＝12.9μg/ml。
c)用與上述試驗(yàn)相同的方法，測(cè)出化合物3對(duì)人白血病細(xì)胞(血癌)IC50＝14.1μg/ml。
以上試驗(yàn)結(jié)果顯示，該化合物具有抑制體外非實(shí)體瘤細(xì)胞的功能。
2)化合物3抗腫瘤作用試驗(yàn) a)取30只體重21-22g昆明種小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成3組，每組10只，右腹皮下接種肝癌H22細(xì)胞懸浮液0.21ml/只。次日，取2組分別腹腔注射此化合物60mg，30mg/kg，每日一次，連續(xù)7天，對(duì)照組IP DMSO+生理鹽水。于停藥后次日處死小鼠，稱體重，瘤重，計(jì)算抑瘤率，結(jié)果見下表1。
表1化合物3對(duì)肝癌的抑瘤率
表1的結(jié)果顯示，化合物3對(duì)肝癌H22細(xì)胞具有明顯的抑制作用，并且抑癌率隨給藥劑量的增大而增大。
b)體外癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn) 以8μg/ml、16μg/ml化合物3處理人肺癌細(xì)胞(Lewis)及白血病細(xì)胞，觀察細(xì)胞動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)情況4天。兩天以內(nèi)給藥組與對(duì)照組細(xì)胞差別不大，第三天開始，給藥組細(xì)胞數(shù)急劇下降，而對(duì)照組癌細(xì)胞繼續(xù)呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)。隨著時(shí)間增加，組間差別愈大。
上述藥理試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明所述化合物對(duì)肝癌細(xì)胞(實(shí)體瘤)、白血病細(xì)胞(非實(shí)體瘤)的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，并顯示劑量-效應(yīng)關(guān)系。
權(quán)利要求
1.含磷的二苯乙烯類化合物，具有如式(1)所示的結(jié)構(gòu)
其中，p、q、r、s獨(dú)立地為0-5的整數(shù)，且r+s＞0，m、n獨(dú)立地為0-20的整數(shù)，所述化合物為順式或反式結(jié)構(gòu)；
R、R′獨(dú)立地選自H、C1-C20直鏈或支鏈烷基、C1-C20酰胺基、C1-C20酰氧基、C1-C20鏈烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷基羰基氨基、C1-C20烷基氨基、C2-C20直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C20直鏈或支鏈鏈炔基、-CO2H、-CO2R′″、-NH2、-CN、-NHR′″、-OH、-OR′″、鹵素、取代的C1-C20直鏈或支鏈烷基或者取代的C2-C20直鏈或支鏈鏈烯基，其中R′″是C1-C20直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈烯基、或直鏈或支鏈炔基；
A和B獨(dú)立地選自H、C1-C20烷氧基、C1-C20酰胺基、C1-C20酰氧基、C1-C20鏈烷?；?、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷基羰基氨基、C1-C20烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、羥基、糖基；所述糖基選自葡萄糖基、阿拉伯糖基、木糖基、來(lái)蘇糖基、核糖基、甘露糖基、半乳糖基、阿洛糖基、果糖基、山梨糖基、夫糖基、雞納糖基、芹糖基、鼠李糖基、金李梅糖基；
Ar獨(dú)立地為取代或未取代的芐基、苯基；
R1、R2、R3、R4獨(dú)立地選自H、金屬離子、銨根離子、C1-C20直鏈或支鏈烷基、C2-C20直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C20直鏈或支鏈鏈炔基、C1-C20的未取代或取代的飽和脂環(huán)烴基、芐基、苯基；所述金屬離子選自鉀離子、鈉離子、鈣離子、鎂離子、鋅離子。
2.權(quán)利要求1所述的含磷的二苯乙烯類化合物，其具有式(II)所示的結(jié)構(gòu)
其中，p、q、r、s獨(dú)立地為0-5的整數(shù)，且r+s＞0；所述化合物為順式或反式結(jié)構(gòu)；
Y為Ar或-(CH2)x-；Ar為取代或未取代的芐基、苯基等；x為0-8的整數(shù)；
R、R′進(jìn)一步獨(dú)立地選自H、C1-C8直鏈或支鏈烷基、C1-C8酰胺基、C1-C8酰氧基、C1-C8鏈烷?；1-C8烷氧羰基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷基羰基氨基、C1-C8烷基氨基、C2-C8直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C8直鏈或支鏈鏈炔基、-CO2H、-CO2R′″、-NH2、-CN、-NHR′″、-OH、-OR′″、鹵素、取代的C1-C8直鏈或支鏈烷基或者取代的C2-C8直鏈或支鏈鏈烯基，其中R′″是C1-C8直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈烯基、或直鏈或支鏈炔基；
A和B進(jìn)一步獨(dú)立地選自H、C1-C8烷氧基、C1-C8酰胺基、C1-C8酰氧基、C1-C8鏈烷?；?、C1-C8烷氧羰基、C1-C8烷基羰基氨基、C1-C8烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、羥基、糖基；
R1、R2、R3、R4進(jìn)一步獨(dú)立地選自H、金屬離子、銨根離子、C1-C8直鏈或支鏈烷基、C2-C8直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C8直鏈或支鏈鏈炔基、C1-C8的未取代或取代的飽和脂環(huán)烴基、芐基、苯基。
3.權(quán)利要求1所述的含磷的二苯乙烯類化合物，其具有通式(III)所示的結(jié)構(gòu)
其中，R1、R2、R3、R4進(jìn)一步獨(dú)立地選自H、金屬離子、銨根離子、C1-C8直鏈或支鏈烷基、C2-C8直鏈或支鏈鏈烯基、C2-C8直鏈或支鏈鏈炔基、C1-C8的未取代或取代的飽和脂環(huán)烴基、芐基、苯基。
4.權(quán)利要求1所述的含磷的二苯乙烯類化合物，其中所述化合物為白藜蘆醇三氧代磷酸乙酯(1)或白藜蘆醇三氧代磷酸(2)，結(jié)構(gòu)式如下
5.權(quán)利要求1所述的含磷的二苯乙烯類化合物，其中所述化合物為和白藜蘆醇三氧代磷酸鈉鹽(3)，結(jié)構(gòu)式如下
6.制備權(quán)利要求1所述的含磷的二苯乙烯類化合物的方法，包括醛或酮化合物(IV)與苯酚化合物(V)在鈉氫和四氫呋喃中、或在乙酸酐和三乙胺中縮合以形成不飽和酚(VI)，化合物VI與鹵代磷酸酯化合物反應(yīng)，然后在酸性條件下水解，在堿性條件下成鹽，得到目標(biāo)化合物I，或者不飽和酚VI
與鹵代磷酸酯化合物發(fā)生取代反應(yīng)得到目標(biāo)化合物1，反應(yīng)路線如下
7.制備權(quán)利要求5所述的含磷的二苯乙烯類化合物的方法，包括白黎蘆醇在堿性條件下，相轉(zhuǎn)移催化劑作用下，與鹵代磷酸酯類化合物縮合，得二苯乙烯磷酸酯類衍生物，然后在堿性條件下水解得相應(yīng)的酸，酸與堿反應(yīng)得相應(yīng)的鹽。
8.權(quán)利要求6或7所述的方法，其中所述堿為氫氧化物、碳酸鹽、有機(jī)或無(wú)機(jī)胺、四氫吡咯、哌啶、嗎啉、哌嗪中的一種或其結(jié)合。
9.權(quán)利要求7所述的方法，其中所述相轉(zhuǎn)移催化劑為季銨鹽。
10.一種藥物組合物，含有權(quán)利要求1所述含磷的二苯乙烯類化合物與藥學(xué)上可接受的輔料。
11.權(quán)利要求1所述的含磷的二苯乙烯類化合物在制備治療或預(yù)防腫瘤疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有式(I)所示結(jié)構(gòu)的含磷的二苯乙烯類化合物及其制備方法，以及含有該化合物的藥物組合物及其在用于制備治療或預(yù)防腫瘤疾病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07F9/12GK101691384SQ200910175158
公開日2010年4月7日 申請(qǐng)日期2009年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月8日
發(fā)明者唐田, 趙金華, 王彥表, 蔡敏英, 馮漢林, 于琳 申請(qǐng)人:深圳海王藥業(yè)有限公司