吡嗪類(lèi)化合物及其在醫(yī)藥上的用圖
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一類(lèi)熒光標(biāo)記β?淀粉樣斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)的吡嗪類(lèi)化合物，所述化合物的結(jié)構(gòu)通式如式（Ⅰ）或式（Ⅱ）所示：其中，n為1、2或3。本發(fā)明還提供所述化合物的制備方法及應(yīng)用。該類(lèi)化合物可直接做為檢測(cè)或顯像動(dòng)物或人體組織內(nèi)β-淀粉樣斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)的顯像劑。該類(lèi)化合物特別適合于制備直接檢測(cè)并診斷包括阿爾茨海默病在內(nèi)的β-淀粉樣蛋白沉積疾病或神經(jīng)纖維纏結(jié)疾病的顯像劑或診斷藥物。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
[0001] 吡嗪類(lèi)化合物及其在醫(yī)藥上的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及特異性分子識(shí)別診斷試劑領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，涉及一類(lèi)與β-淀粉樣斑 塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)具有高親和力的新型小分子熒光化合物，以及該類(lèi)化合物在制備用于檢 測(cè)或顯像淀粉樣蛋白沉積疾病或神經(jīng)纖維纏結(jié)疾病的顯像劑中的應(yīng)用。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004] 阿爾茨海默病(Alzheimer ' s Disease，AD)是一種進(jìn)行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行 性疾病。目前我國(guó)已提前進(jìn)入老齡化社會(huì)，大約有600萬(wàn)人患AD，數(shù)量居世界各國(guó)之首，且患 病人數(shù)以每年30萬(wàn)以上的速度遞增。我國(guó)65歲以上人群患病率達(dá)7.2%，且AD患者正在向年 輕化趨勢(shì)發(fā)展。AD已成為僅次于心臟病、癌癥、中風(fēng)的導(dǎo)致老人死亡的第四大殺手。AD不但 嚴(yán)重影響中老年人的生活質(zhì)量，而且給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。由于AD病因 復(fù)雜，確切的發(fā)病機(jī)理目前仍不清楚，臨床上主要通過(guò)評(píng)價(jià)患者的認(rèn)知功能損傷來(lái)診斷，確 診患者多已進(jìn)入病程的中晚期而延誤治療。缺乏有效的檢測(cè)手段，已成為AD早期診斷與治 療的重大障礙。
[0005] 在AD患者腦內(nèi)，以β-淀粉樣蛋白（Αβ)為主要成分的β-淀粉樣斑塊(Αβ斑塊)和以過(guò) 度磷酸化Tau蛋白為主要成分的神經(jīng)纖維纏結(jié)是AD最為顯著的兩大神經(jīng)病理學(xué)特征。研究 表明，腦內(nèi)Αβ斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)的沉積均不同程度地早于AD的臨床發(fā)病期，故開(kāi)發(fā)以Αβ 斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)為靶標(biāo)的檢測(cè)試劑，將對(duì)AD的早期診斷、病程監(jiān)測(cè)以及治療藥物的研 究等提供重要的分析手段。
[0006] 過(guò)去數(shù)年間，多個(gè)用于正電子發(fā)射斷層掃描成像技術(shù)(PET)的Αβ斑塊示蹤劑進(jìn)入 臨床試驗(yàn)階段，其中C-11 標(biāo)記的[nC]PIB(KlunkWE,et al. Ann. Neurol. 2004，55(3)， 306-319)是目前全球應(yīng)用最為廣泛的Αβ斑塊PET顯像劑；[1乍從￥-45(10即0?，6七&1· J. Nucl. Med.2010, 51(6), 913-920)^ [18F]GE-〇67(Koole M, et al. J. Nucl. Med. 2009,50 (5), 818-822)以及[18F]BAY-94-9172(Rowe CC, et al .Lancet. Neurol. 2008， 7 (2)，129-135 )等三個(gè)F-l 8標(biāo)記的Αβ顯像劑已被美國(guó)FDA和歐洲EMA批準(zhǔn)用于人體腦內(nèi)Αβ 斑塊的PET顯像（Villemagne VL. Ageing. Res. Rev. 2016，pii: S1568-1637(16) 30005-8)。用于腦內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)PET顯像的小分子探針也有數(shù)個(gè)進(jìn)入人體臨床試驗(yàn)，具體 包括：[ 18卩從￥-1451、[1乍]1'服-5117、[1乍]1'冊(cè)-5351、[ 11(：]?883以及[1乍]1?06958948等 (Okamura N, et al. Ageing. Res. Rev. 2016，pii: S1568-1637(15)30045-3)。但是放 射性顯像劑的應(yīng)用也受一些因素限制，比如放射性顯像劑所發(fā)出的射線對(duì)人體具有一定的 輻射損傷、需要醫(yī)療機(jī)構(gòu)配套有生產(chǎn)放射性核素的回旋加速器、放射性顯像劑須專(zhuān)業(yè)技術(shù) 人員標(biāo)記配制、顯像時(shí)間長(zhǎng)且圖像處理費(fèi)時(shí)等。
[0007] 相較之下，光學(xué)成像具有安全無(wú)放射性、數(shù)據(jù)采集時(shí)間短以及成本低廉等諸多優(yōu) 勢(shì)，近年在醫(yī)學(xué)診斷等中的應(yīng)用受到廣泛重視;尤其是新興的近紅外熒光成像技術(shù)，在其光 譜范圍內(nèi)，生物組織的自發(fā)熒光干擾較小，組織背景熒光信號(hào)很低，且穿透組織距離可高達(dá) 數(shù)厘米。此外，光聲成像技術(shù)(photoacoustic imaging，PAI)通過(guò)光聲信號(hào)的轉(zhuǎn)換，可實(shí)現(xiàn) 三維掃描成像。因此，研發(fā)與Αβ斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)具有高親和力的靶向光學(xué)探針，并直接 應(yīng)用于制備檢測(cè)或顯像β-淀粉樣蛋白沉積疾病或神經(jīng)纖維纏結(jié)疾病的顯像劑，將具有非常 重要的科學(xué)意義和實(shí)際價(jià)值。然而，目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)靶向Αβ斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)的熒光化 合物的研究報(bào)道較少，還處于起步階段。基于上述技術(shù)背景，研發(fā)性能優(yōu)異的新型小分子熒 光化合物，符合我國(guó)社會(huì)民生的迫切需求和老齡化社會(huì)國(guó)情，具有重大的應(yīng)用前景和科學(xué) 意義。
[0008]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，現(xiàn)有顯像探針常需外接熒光團(tuán)，且熒光團(tuán)具有較 大的分子結(jié)構(gòu)并帶有電荷，因而不適合應(yīng)用于制備須通過(guò)血腦屏障的腦內(nèi)Αβ斑塊或神經(jīng)纖 維纏結(jié)的顯像劑，且非特異結(jié)合的熒光團(tuán)發(fā)光對(duì)成像易產(chǎn)生干擾信號(hào)。本發(fā)明提供一類(lèi)不 帶電荷的小分子熒光化合物，其結(jié)構(gòu)中的推電子基團(tuán)和拉電子基團(tuán)，形成推-拉電子作用的 共輒結(jié)構(gòu)，并通過(guò)碳碳雙鍵增加躍迀的共輒體系，使化合物分子產(chǎn)生的熒光向長(zhǎng)波方 向移動(dòng)(減少生物自發(fā)熒光干擾），同時(shí)其結(jié)構(gòu)整體又滿足了與Αβ斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)的親 和力?；衔锱cΑβ斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)結(jié)合后發(fā)射波長(zhǎng)藍(lán)移或紅移，且熒光強(qiáng)度顯著提高， 從而有效排除非特異結(jié)合的化合物發(fā)光對(duì)成像可能產(chǎn)生的干擾，因此該類(lèi)化合物可直接做 為檢測(cè)或顯像淀粉樣蛋白沉積疾病或神經(jīng)纖維纏結(jié)疾病的藥物或藥物有效成分。
[0010] 本發(fā)明的目的在于提供與Αβ斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)具有高親和力的小分子熒光化 合物。
[0011] 本發(fā)明的另一目的是提供所述化合物的制備方法及應(yīng)用。
[0012] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一類(lèi)與Αβ斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)具有高親和力的化 合物，其特征在于，所述化合物結(jié)構(gòu)如式(I)或式（Π )所示：
其中，η為1、2或3。 1 本發(fā)明還提供前述式（I)所示化合物的制備方法。具體如下：通過(guò)Knoevenagel縮 合反應(yīng)合成目標(biāo)化合物:取2-甲基P比嗪3 mmol及對(duì)應(yīng)醛1 mmol溶于20-40 mL干燥四氫咲喃 后，加入叔丁醇鉀4 mmol，80°C加熱回流2小時(shí)，旋蒸除去溶劑;加入20 mL水析出固體，抽 濾后將所得固體進(jìn)行柱層析分離得到如式(I)所示的化合物。
[0014]本發(fā)明也提供前述式（Π )所示化合物的制備方法。具體如下:通過(guò)Knoevenagel縮 合反應(yīng)合成目標(biāo)化合物:取2-甲基喹喔啉2 mmol及對(duì)應(yīng)醛1 mmol溶于10-30 mL氫氧化鈉 溶液(5mol/L)，加入Aliquat 336(0.1 mmol)，100°C加熱回流8-15小時(shí)，冷卻，過(guò)濾，將所得 固體進(jìn)行柱層析分離得到如式（Π )所示的化合物。
[0015] 本發(fā)明進(jìn)一步提供一種藥物組合物，所述組合物包括式（I)或式（Π )所示的化合 物與藥學(xué)上可接受的鹽、前藥或載體組成的制劑。"藥學(xué)上可接受的載體"包括各種賦形劑 和稀釋劑。本發(fā)明所述的在組合物中藥學(xué)上可接受的載體可包括液體，如水、生理鹽水、甘 油和乙醇等。
[0016] 本發(fā)明式（I)或式（Π )所示的化合物可有效熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)基因小鼠和人腦中的Αβ斑 塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)，且該類(lèi)化合物與Αβ斑塊結(jié)合后發(fā)射波長(zhǎng)藍(lán)移、與神經(jīng)纖維纏結(jié)結(jié)合后 發(fā)射波長(zhǎng)紅移，因此通過(guò)單個(gè)化合物的多光譜成像即可實(shí)現(xiàn)β-淀粉樣斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié) 的同步實(shí)時(shí)檢測(cè)。
[0017] 本發(fā)明進(jìn)一步提供式（I)或式（Π )所示的化合物在制備檢測(cè)或顯像動(dòng)物或人體組 織內(nèi)的淀粉樣斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)的藥物或其藥物有效成分中的應(yīng)用。在應(yīng)用過(guò)程中， 將可檢測(cè)量的式（I)或式（Π )所示的化合物通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法給藥至動(dòng)物或 人體組織內(nèi)。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，以可檢測(cè)量的式（I)或式（Π )所示的化合物引入 動(dòng)物或人體內(nèi)并且在足以使化合物與淀粉樣斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)結(jié)合的時(shí)間之后，非創(chuàng) 傷性地檢測(cè)化合物。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，將式(I)或式（Π )所示的化合物引入動(dòng)物 或人體內(nèi)，經(jīng)足量的時(shí)間以使化合物與淀粉樣斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)結(jié)合，取組織樣品，并 脫離動(dòng)物或人體檢測(cè)組織中的化合物。在本發(fā)明的第三個(gè)實(shí)施方案中，自動(dòng)物或人體取組 織樣品并且將式（I)或式（Π )所示的化合物引入該組織樣品。在足以使該化合物結(jié)合至β-淀粉樣斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)的時(shí)間之后，檢測(cè)化合物。
[0018] 本發(fā)明所述的顯像手段為光學(xué)顯像或光聲顯像，包括但不限于熒光顯微技術(shù)、激 光共聚焦顯微技術(shù)、多光子顯微技術(shù)、光學(xué)投影斷層掃描技術(shù)(OPT)、光片照明顯微技術(shù) (SPIM)、熒光成像系統(tǒng)、介觀熒光斷層掃描技術(shù)、熒光分子斷層掃描成像技術(shù)(FMT)、多模態(tài) 成像系統(tǒng)(熒光成像結(jié)合X射線/CT/MRI)、光聲成像系統(tǒng)、多光譜光聲斷層成像(MS0T)等。
[0019] 本發(fā)明所述淀粉樣蛋白沉積疾病或神經(jīng)纖維纏結(jié)疾病包括但不限于阿爾茨海默 病、淀粉樣腦血管病、淀粉樣蛋白多發(fā)性神經(jīng)病、全身性老年淀粉樣蛋白病、淀粉樣蛋白心 肌病、具有淀粉樣變的遺傳性腦出血、克雅氏病、Π 型糖尿病胰島瘤、額顳葉癡呆、匹克氏 病、纏結(jié)為主型癡呆、進(jìn)行性核上麻痹(PSP)、皮質(zhì)綜合征(CBS)、慢性創(chuàng)傷性腦病變(CTE)、 神經(jīng)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤等。
[0020] 本發(fā)明提供了一類(lèi)基于推拉電子結(jié)構(gòu)的與Αβ斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)具有高親和力 的熒光化合物。體外熒光染色實(shí)驗(yàn)表明，該類(lèi)化合物能夠清楚地與轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片和患 病人腦組織切片的Αβ斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)結(jié)合，發(fā)射波長(zhǎng)移動(dòng)且熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)；正常 小鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該類(lèi)化合物具有良好的入腦能力并能從腦內(nèi)快速清除。因此， 該類(lèi)化合物具有成為阿爾茨海默病等淀粉樣蛋白沉積疾病或神經(jīng)纖維纏結(jié)疾病的新型 顯像劑和診斷藥物的巨大潛力。
[0021]
【附圖說(shuō)明】
[0022]圖1為本發(fā)明式(I)及式（Π )化合物合成過(guò)程示意圖 圖2為PB-1和QB-1分別對(duì)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片熒光染色標(biāo)記結(jié)果。其中右圖為硫 磺素 S(ThS)對(duì)相鄰鼠腦切片的染色結(jié)果。
[0023]圖3為PB-1對(duì)AD患者腦切片熒光染色標(biāo)記結(jié)果。其中圖A、B、C分別為PB-1染色后同 一位置在紫光、綠光、紅光波段下的染色結(jié)果:Arrow head所指處為PB-1熒光標(biāo)記的神經(jīng)纖 維纏結(jié)，arrow所指處為PB-1熒光標(biāo)記的Αβ斑塊;圖D為同一位置的免疫染色結(jié)果。
[0024]圖4為ΡΒ-1與她-42聚集體混合前后的熒光發(fā)射光譜。
[0025]
【具體實(shí)施方式】
[0026] 以下通過(guò)實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不限于所述實(shí)施例。常見(jiàn)的且對(duì) 本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見(jiàn)的各種條件和參數(shù)的其他適當(dāng)?shù)男揎椇透淖兲幱诒景l(fā)明的 精神和范圍之內(nèi)。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟識(shí)的常 規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0027] 實(shí)施例一:式(I)所示的化合物的合成 本發(fā)明式(I)所示的化合物的合成路徑如圖1所示。
[0028] 合成 ΡΒ-1
將2-甲基吡嗪（282.3 mg，3 mmol)與4-Ν，Ν二甲氨基肉桂醛（175.4 mg，l mmol)溶于 20 mL干燥四氫呋喃，加入叔丁醇鉀（448.8 mg，4 mmol)，80°C加熱回流2小時(shí)，旋蒸除去溶 劑;加入20 mL水析出固體，抽濾后將所得固體進(jìn)行柱層析分離，得到105.8 mg PB-1，產(chǎn)率 42.1%。結(jié)構(gòu)如下：h-NMR (400 MHz, CDCl3)j 8.50 (s，1H), 8.47 (s，1H)，8.30 (s， 1Η), 7.51 (dt, J = 36.4, 18.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.83 (d, J = 7.0 Hz, 1H),6.81 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 3.00 (s, 6H)〇
[0029] 實(shí)施例二:式（Π )所示的化合物的合成 本發(fā)明式（Π )所示的化合物的合成路徑如圖1所示。
[0030] 合成 QB-1
取2-甲基喹喔啉（288 mg，2 mmol)及4_N，N二甲氨基肉桂醛（175.4 mg，l mmol)溶于 15 mL 氫氧化鈉溶液(5mol/L)，加入Aliquat 336(43 mg，0.1 mmol)，100°C加熱回流 10小 時(shí)，冷卻，過(guò)濾，將所得固體進(jìn)行柱層析分離得到91.0 mg QB-1，產(chǎn)率30.2%。結(jié)構(gòu)如下：咕-匪R (400 MHz, CDC13):S 8.90 (s， 1H)， 8.03-7.99 (m， 1H)， 7.73-7.63 (m， 4H)， 7.40 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 6.89 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 6.81 (d, 1H, J = 15.6 Hz), 6.70 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 3.02 (s, 6H)。
[0031] 實(shí)施例三:光學(xué)參數(shù)的測(cè)定 1.最大吸收波長(zhǎng)與摩爾吸收系數(shù)的測(cè)定 以二氯甲烷為溶劑，分別配制一定濃度梯度的化合物，如1、5、10、20、25 μΜ的溶液，用 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)掃描紫外吸收光譜，記錄最大吸收波長(zhǎng)(Aabs)和吸光度，并計(jì)算摩爾 吸收系數(shù)ε(Μ< cnf1)。本發(fā)明實(shí)施例中的部分化合物的最大吸收波長(zhǎng)與摩爾吸收系數(shù)見(jiàn)表 1〇
[0032] 2.熒光激發(fā)波長(zhǎng)與熒光發(fā)射波長(zhǎng)的測(cè)定 本發(fā)明中的化合物具有良好的熒光性質(zhì)。為了考察本發(fā)明中的化合物的熒光性質(zhì)，具 體實(shí)施步驟為:精密稱(chēng)取本發(fā)明中的化合物適量，溶于二氯甲烷，并用二氯甲烷稀釋至1 μ mol ?I/1。應(yīng)用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行熒光檢測(cè)。固定激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)并400-750 nm連續(xù)掃描 發(fā)射/激發(fā)波長(zhǎng)，繪制波行圖像。本發(fā)明實(shí)施例中的部分化合物的最大激發(fā)波長(zhǎng)(λΜ)與最大 發(fā)射波長(zhǎng)(U見(jiàn)表1。
[0033] 表1實(shí)施例中的部分化合物的光學(xué)性質(zhì)
實(shí)施例四：體外熒光染色實(shí)驗(yàn) 1.小鼠腦切片的熒光染色 本發(fā)明中的化合物能夠清晰染色轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片上的Αβ斑塊，并有效地?zé)晒鈽?biāo)記Αβ 斑塊。為了考察對(duì)Αβ斑塊的標(biāo)記能力，具體實(shí)施步驟為:配制濃度為Ιμπιο? · Γ1的本發(fā)明中 的化合物，分別滴加覆蓋APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠（26月齡)腦切片（1 Ομπι)，室溫培育10分鐘；切 片按40 %乙醇(2分鐘）、40 %乙醇(2分鐘）、純水(30秒）的順序進(jìn)行漂洗，風(fēng)干后應(yīng)用熒光顯 微鏡觀察。鄰接切片用硫磺素染色以確認(rèn)Αβ斑塊位置。本發(fā)明中的化合物染色熒光斑點(diǎn)與 鄰接切片的熒光斑點(diǎn)位置一致，能夠選擇性結(jié)合Αβ斑塊，并有效地?zé)晒鈽?biāo)記Αβ斑塊。其中， 本發(fā)明實(shí)施例中的部分化合物的染色結(jié)果如圖2。
[0034] 2. AD患者腦切片的熒光染色 本發(fā)明中的化合物能夠清晰有效地?zé)晒鈽?biāo)記AD患者腦切片上的神經(jīng)纖維纏結(jié)。具體實(shí) 施步驟為:配制濃度為1 μπιο? ?I/1的本發(fā)明中的化合物，分別滴加覆蓋AD患者腦切片(5 μ m)，室溫培育15分鐘；切片按40%乙醇（1分鐘）、40%乙醇（1分鐘）、純水(30秒)的順序進(jìn)行漂 洗，風(fēng)干后應(yīng)用熒光顯微鏡觀察。同一切片用磷酸化Tau蛋白特異抗體(AT-8)和DAB染色劑 通過(guò)免疫染色確認(rèn)神經(jīng)纖維纏結(jié)。本發(fā)明實(shí)施例中的部分化合物的染色結(jié)果如圖3。本發(fā)明 中的化合物PB-1在紅光波段能夠清晰有效地?zé)晒鈽?biāo)記神經(jīng)纖維纏結(jié)(arrow head)而不顯 示Αβ斑塊熒光，在紫光波段能夠清晰有效地?zé)晒鈽?biāo)記Αβ斑塊(arrow)而不顯示神經(jīng)纖維纏 結(jié)熒光；因此通過(guò)PB-1在不同波段的多光譜顯像，可實(shí)現(xiàn)同時(shí)特異性區(qū)分檢測(cè)神經(jīng)纖維纏 結(jié)和Αβ斑塊。
[0035]實(shí)施例五:Α&-42聚集體混合后的化合物熒光光譜 本發(fā)明中的化合物與Αβ聚集體結(jié)合后具有熒光增強(qiáng)的性質(zhì)。為了考察本發(fā)明中的化合 物與Αβ混合后的熒光光譜行為的變化，具體實(shí)施步驟為:精密稱(chēng)取本發(fā)明中的化合物適量， 溶于乙醇，并用PBS稀釋至1 μπιο? ?I/1。應(yīng)用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行熒光檢測(cè)。固定激發(fā)/發(fā)射 波長(zhǎng)并400-750 nm連續(xù)掃描發(fā)射/激發(fā)波長(zhǎng)，繪制波行圖像。選用ΑβΗ〗蛋白在37°C水浴中 培育如聚集體，用于模擬人腦內(nèi)的如聚集體。將化合物（1以111 〇1*1/1)與仙1-42聚集體(2.75 μπιο? ·Ι^)混合，應(yīng)用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行熒光檢測(cè)。固定激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)并400-750 nm連 續(xù)掃描發(fā)射/激發(fā)波長(zhǎng)，繪制波行圖像。本發(fā)明中的化合物與Αβ聚集體結(jié)合后具有熒光增強(qiáng) 的性質(zhì)。其中，本發(fā)明實(shí)施例中的化合物與Afo- 42聚集體混合前后的熒光光譜行為見(jiàn)圖4?；?合物PB-1與Afo-42聚集體混合后的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，為化合物自身熒光強(qiáng)度的76倍。
[0036]實(shí)施例六:正常小鼠腦內(nèi)攝取與清除實(shí)驗(yàn) 本發(fā)明中的化合物能夠快速有效地穿過(guò)血腦屏障入腦，并具有良好的初始攝取量和清 除速率。具體實(shí)施步驟為:取本發(fā)明中的化合物(2.0 mg/kg，含20%二甲亞砜和80%丙二醇）， 經(jīng)尾靜脈注射入正常小鼠 （η = 5)體內(nèi)，分別于注射后2、10、30以及60 min時(shí)斷頭取腦。腦 組織稱(chēng)重、勻漿，并用乙腈1 mLX3次提取，低溫高速離心（10000 r，4°C)5 min，取上層清 液，經(jīng)0.22 μπι微孔濾膜過(guò)濾，注入HPLC儀分析并計(jì)算％ injected dose per gram (%ID/ g)。本發(fā)明實(shí)施例中的部分化合物的HPLC分析條件見(jiàn)表2。本發(fā)明實(shí)施例中的部分化合物的 分析結(jié)果見(jiàn)表3。本發(fā)明中的化合物能夠快速穿過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)（注射后2 min即已入 腦），且具有良好的腦初始攝取量和清除速率。
[0037] 表2 HPLC分析條件
表3 HPLC分析結(jié)果
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種熒光標(biāo)記β-淀粉樣斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)的化合物，其特征在于，所述化合物結(jié) 構(gòu)如式(I)所示：其中，η為1、2或3。2. 權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于，通過(guò)Knoevenagel縮合反應(yīng)合成 目標(biāo)化合物:取2-甲基吡嗪3 mmol及對(duì)應(yīng)醛I mmol溶于20-40 mL干燥四氫呋喃后，加入叔 丁醇鉀4 mm〇l，80°C加熱回流2小時(shí)，旋蒸除去溶劑;加入20 mL水析出固體，抽濾后將所得 固體進(jìn)行柱層析分離得到如式(I)所示的化合物。3. -種藥物組合物，其特征在于由權(quán)利要求1中所述的化合物與藥學(xué)上可接受的鹽、前 藥或載體組成的制劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所述的化合物在制備檢測(cè)或顯像動(dòng)物或 人體組織內(nèi)的β-淀粉樣斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)的藥物或其藥物有效成分中的應(yīng)用。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物為光學(xué)顯像技術(shù)或光聲顯像技 術(shù)藥物。6. -種熒光標(biāo)記β_淀粉樣斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)的化合物，其結(jié)構(gòu)如式（Π )所示：其中，η為1、2或3。7. 權(quán)利要求6所述化合物的制備方法，其特征在于，通過(guò)Knoevenagel縮合反應(yīng)合成目 標(biāo)化合物:取2-甲基喹喔啉2 mmol及對(duì)應(yīng)醛I mmol溶于10-30 mL氫氧化鈉溶液(5mol/L)， 加入AI i qua t 3 3 6 (0 · I mmo 1 )，10 0 °C加熱回流8 -15小時(shí)，冷卻，過(guò)濾，將所得固體進(jìn)行柱層 析分離得到如式（Π )所示的化合物。8. -種藥物組合物，其特征在于由權(quán)利要求6中所述的化合物與藥學(xué)上可接受的鹽、前 藥或載體組成的制劑。9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其特征在于所述的化合物在制備檢測(cè)或顯像動(dòng)物或 人體組織內(nèi)的β-淀粉樣斑塊或神經(jīng)纖維纏結(jié)的藥物或其藥物有效成分中的應(yīng)用。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物為光學(xué)顯像技術(shù)或光聲顯像技 術(shù)藥物。
【文檔編號(hào)】A61K49/22GK106008374SQ201610396936
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年6月7日
【發(fā)明人】程妍
【申請(qǐng)人】四川大學(xué)