一種外用藥物組合物、制備方法和用圖
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療日光性皮炎的外用藥物組合物、制備方法和用途，屬于藥物制劑領(lǐng)域。該藥物組合物療效確切，且含量均勻、穩(wěn)定性好、適合于工業(yè)生產(chǎn)。藥物組合物特征：苦參4-8份、野菊花4-8份、蒲公英4-8份、紫花地丁4-8份、金銀花4-8份、黃柏2-6份、虎杖2-6份、白鮮皮2-6份、蛇床子2-6份、冰片0.5-1份。制備方法：取苦參等六味，加12倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0.5g生藥，備用；另取黃柏等三味，加8倍量60％乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于0.5g生藥，備用。再加入冰片及藥學(xué)上可接受的輔料，制成各種外用劑型。
【專利說(shuō)明】
-種外用藥物組合物、制備方法和用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種治療日光性皮炎的外用藥物組合物、其制 備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前針對(duì)日光性皮炎的治療藥物較少，療效不甚確切，臨床報(bào)道較少；傳統(tǒng)治療多 采用激素類藥物、抗組胺藥及抗生素進(jìn)行治療，激素類藥物會(huì)出現(xiàn)局部皮膚萎縮，毛細(xì)血管 擴(kuò)張，色素改變，局部感染等副作用，甚至引發(fā)激素依賴性皮炎；抗組胺藥其嗜睡、乏力、口 干等副作用。
[0003] 中醫(yī)辨證：日光性皮炎與中醫(yī)古代文獻(xiàn)中的"赤面風(fēng)"相類似。明代《外科活人定 本?赤面風(fēng)》記載："此癥生于正面之上，紅腫而浮起。初覺宜發(fā)散……若稍遲變成大毒，目艮 閉口腫，顴高顧凸，甚可畏也。"本病由于稟賦不耐，血熱內(nèi)蘊(yùn)，進(jìn)食發(fā)物，脾胃失調(diào)，濕熱內(nèi) 生，復(fù)因日曬，光毒曝照，熱毒襲膚，突然而發(fā)。分析本病發(fā)病機(jī)制，認(rèn)為本病稟賦不耐、血熱 內(nèi)蘊(yùn)為內(nèi)因，進(jìn)食發(fā)物、感受光毒為外因，其中大量進(jìn)食或接觸某些植物為誘因，經(jīng)受日光 曝曬、感受光毒為最主要的發(fā)病因素。對(duì)于光毒致病，中醫(yī)古典文獻(xiàn)中描述不多。清代陳士 鐸《洞天奧旨》中寫到"日曬瘡，乃夏天曝烈之日曝而成者也，必先疼而后破，乃外熱所傷，非 內(nèi)熱所損也。"形象描述了光毒致病的特點(diǎn)，并且指出本病"外熱"為主要原因，內(nèi)因并不占 主導(dǎo)地位，但并未提出"光毒"之名。"光毒"這一概念是在解放以后現(xiàn)代醫(yī)家根據(jù)光線性皮 膚病的特點(diǎn)所提出，但對(duì)其系統(tǒng)的論述尚不多見。"光毒"為毒邪之一，為日光所引起。日為 陽(yáng)，月為陰，中醫(yī)基礎(chǔ)理論中區(qū)分陰陽(yáng)的最初標(biāo)準(zhǔn)即是以日光照射處為陽(yáng)，背光處為陰，故 日光的性質(zhì)無(wú)疑應(yīng)屬陽(yáng)熱。光毒致病過(guò)程中患者經(jīng)受日光曝曬，毒熱襲膚，故見肌膚紅腫、 灼熱，邪毒引動(dòng)體內(nèi)之濕熱外發(fā)于肌膚，故見腫脹水皰、糜爛滲出。外感光毒是本病發(fā)病的 主要外部原因，本病的發(fā)病還與患者的內(nèi)在體質(zhì)因素有關(guān)，即是中醫(yī)所說(shuō)的"稟賦不耐"，為 本病發(fā)生的重要的內(nèi)在因素。因此，本病的發(fā)病機(jī)制中體質(zhì)、日曬這兩個(gè)因素缺一不可。
[0004] 日光性皮炎俗稱"曬斑"，中醫(yī)認(rèn)為是由于皮膚"腠理不密"、"外受暑毒"引起的，其 治療原則主要以清熱涼血，解毒透疹、消腫止痛為主。方中野菊花苦辛，微寒，清熱解毒，苦 寒之性勝于白菊及黃菊，獨(dú)擅清熱之功，《本草綱目》稱其"治癰腫疔毒";蒲公英性寒，味甘， 微苦，其中苦以泄降，甘以解毒，寒能清熱兼散滯氣，為清熱解毒，消腫散結(jié)之佳品，兩者合 用，共為君藥。黃柏性寒味苦，既能清熱燥濕，用能瀉火解毒，《藥品化義》:"黃柏，味苦入骨， 是以降火能自頂至踵";輔助君藥清熱解毒，合祛暑毒，所以共為臣藥。日光性皮炎經(jīng)光照后 癢感加重，故需要?dú)⑾x止癢。方中苦參味苦性寒，具有清熱燥濕，殺蟲止癢之功?！侗静菡x》： "苦參，大苦大寒，退熱泄降，蕩滌濕火";蛇床子殺蟲止癢，祛風(fēng)燥濕，《本草新編》："蛇床子， 功用頗奇，內(nèi)外具可施治，而外治優(yōu)良"，與苦參配伍，相須為用，止癢力度增強(qiáng)；虎杖有涼血 泄熱，收斂止血之功；冰片辛苦味寒，具有清熱解毒，生肌斂瘡之功，由于性偏寒涼，以清熱 止痛見長(zhǎng)，《本草衍義》："冰片，大通利關(guān)膈熱塞，其清香為百藥之先，然非常服之藥，獨(dú)行則 勢(shì)弱，佐使則有功"，以上三味合用，收濕止癢，清熱止痛，佐助君藥，所以共為佐藥。其中冰 片可以引藥達(dá)到病變部位，所以兼為使藥。諸藥合用，共奏清熱解毒，涼血祛暑之功。俾熱 邪祛除，陽(yáng)氣得復(fù)，腠理得密，諸證可愈。本組方按照中醫(yī)理論進(jìn)行科學(xué)組方，符合中醫(yī)對(duì)日 光性皮炎的治療原則。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種外用藥物組合物、其制備方法和用途，本發(fā)明的外用藥 物組合物，在制備治療日光性皮炎疾病藥物中的用途。
[0006] 本發(fā)明的治療日光性皮炎的外用藥物組合物含量均勻、穩(wěn)定性良好、療效好。
[0007] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種適合于工業(yè)生產(chǎn)的、簡(jiǎn)便的治療日光性皮炎的外 用藥物組合物的制備方法。
[0008] 具體技術(shù)方案如下：
[0009] 本發(fā)明提供一種外用藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物主要由以下重量份 的原料藥制成：苦參4-8份、野菊花4-8份、蒲公英4-8份、紫花地丁 4-8份、金銀花4-8份、 黃柏2-6份、虎杖2-6份、白鮮皮2-6份、蛇床子2-6份、冰片0. 5-1份。
[0010] 優(yōu)選的，本發(fā)明的外用藥物組合物，其特征在于由以下重量份的原料藥制成：苦參 5-7份、野菊花5-7份、蒲公英5-7份、紫花地丁 5-7份、金銀花5-7份、黃柏3-5份、虎杖3-5 份、白鮮皮3-5份、蛇床子3-5份、冰片0. 6-0. 9份。
[0011] 更優(yōu)選的，本發(fā)明的外用藥物組合物，其特征在于由以下重量份的原料藥制成： 苦參6份、野菊花6份、蒲公英6份、紫花地丁 6份、金銀花6份、黃柏4. 5份、虎杖4. 5份、 白鮮皮4. 5份、蛇床子4. 5份、冰片0. 75份。
[0012] 本發(fā)明提供一種外用藥物組合物，在制備治療日光性皮炎疾病藥物中的用途。
[0013] 本發(fā)明治療日光性皮炎的外用藥物組合物，其包括上述的外用藥物組合物和藥學(xué) 上可接受的輔料，為外用劑型，包括溶液劑、洗劑、油劑、酊劑、搽劑、軟膏劑、乳劑、糊劑、涂 膜劑、噴霧劑、膜劑、醑劑、膠漿劑、泥膏劑、凝膠劑。
[0014] 本發(fā)明提供一種制備治療日光性皮炎的外用藥物組合物的方法，其特征在于包括 如下步驟：
[0015] 1)稱取所述重量配比的取苦參、野菊花、蒲公英、紫花地丁、金銀花、白鮮皮六味， 加12倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生 藥，備用；
[0016] 2)另取所述重量配比的黃柏、虎杖、蛇床子三味，加8倍量60%乙醇回流提取3 次，合并提取液，回收乙醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于〇. 5g生藥，備用；
[0017] 3)將1)和2)所得溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙醇溶解后加入，再加入5%丙 二醇，1 %氮酮，3%卡波姆，攪勾，用三乙胺調(diào)PH值至6. 5,共制1000ml，即得凝膠劑。
[0018] 上述治療日光性皮炎的外用藥物組合物的制備方法，所述步驟2)之后，將1)和2) 所得溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙醇溶解后加入，攪勻，共制1000ml，即得溶液劑。
[0019] 上述治療日光性皮炎的外用藥物組合物的制備方法，所述步驟2)之后，另制備乳 劑型軟膏基質(zhì)：將油相成分（硬脂酸7. 5g、油酸山梨坦2g、單硬脂酸甘油酯7. 5g、液體石蠟 12g及凡士林7g)與水相成分（聚山梨酯80 : 6g、甘油12. 5、山梨酸Ig及水75g)分別加 熱至80,將油相加入水相中，邊加邊攪拌，至冷凝成乳劑型基質(zhì)。將1)和2)所得溶液合并 后，緩緩加入制備好的乳劑型基質(zhì)中，邊加邊攪拌，至完全均勻?yàn)橹?，即得乳膏劑?br>[0020] 上述治療日光性皮炎的外用藥物組合物的制備方法，所述步驟2)之后，將1)和 2)所得溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙醇溶解后加入，再加入聚山梨酸酯-8020ml，甘油 60ml，氮酮15ml，調(diào)整體積至1000ml，即得搭劑。
[0021] 上述治療日光性皮炎的外用藥物組合物的制備方法，所述步驟2)之后，另取羧甲 基纖維素鈉30g，聚乙烯醇22g分別加水適量浸泡溶脹并使溶化，攪勻，濾過(guò)，得濾液備用； 將濾液、1)和2)所得溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙醇溶解后加入，再加入甘油30g，調(diào) 整體積至1000ml，即得涂膜劑。
【附圖說(shuō)明】
[0022] 圖1為黃柏TLC色譜圖，其中：1_鹽酸小檗堿；2-黃柏；3、4、5_復(fù)方參金凝膠； 6-陰性對(duì)照。
[0023] 圖2為蛇床子TLC色譜圖，其中：1_蛇床子；2-蛇床子；3、4、5_復(fù)方參金凝膠； 6-陰性對(duì)照。
[0024] 圖3為苦參TLC色譜圖，其中：1-氧化苦參堿；2-苦參堿；3、4、5_復(fù)方參金凝膠； 6_苦參；7-陰性對(duì)照。
[0025] 圖4為綠原酸對(duì)照品HPLC色譜圖。
[0026] 圖5為供試品HPLC色譜圖。
[0027] 圖6為陰性對(duì)照HPLC色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 以下通過(guò)【具體實(shí)施方式】的描述對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但這并非是對(duì)本發(fā)明的限 制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本 發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0029] 實(shí)施例1凝膠劑
[0030] 處方組成：
[0031] 苦參60g 野菊花60 g 蒲公英60g 紫花地丁 60g 金銀花60g 黃柏45g 虎杖45g 白鮮皮45g 蛇床子45g 冰片7.5g
[0032] 制備方法：以上十味，取苦參、野菊花、蒲公英、紫花地丁、金銀花、白鮮皮六味，加 12倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生藥， 備用；另取黃柏、虎杖、蛇床子三味，加8倍量60%乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙 醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于〇.5g生藥，備用。將上述兩份溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙 醇溶解后加入，再加入5%丙二醇，1 %氮酮，3%卡波姆，攪勻，用三乙胺調(diào)PH值至6. 5,共制 1000ml，即得。
[0033] 實(shí)施例2溶液劑
[0034] 處方組成：
[0035] 苦參60g 野菊花60 g 蒲公英60g 紫花地丁 60g 金銀花60g 黃柏45g 虎杖45g 白鮮皮45g 蛇床子45g 冰片7.5g
[0036] 制備方法：以上十味，取苦參、野菊花、蒲公英、紫花地丁、金銀花、白鮮皮六味，加 12倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生藥， 備用；另取黃柏、虎杖、蛇床子三味，加8倍量60%乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙 醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于〇.5g生藥，備用。將上述兩份溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙 醇溶解后加入，攪勻，共制1000ml，即得。
[0037] 實(shí)施例3乳膏劑
[0038] 處方組成：
[0039] 苦參60g 野菊花60 g 蒲公英60g 紫花地丁 60g 金銀花60g 黃柏45g 虎杖45g 白鮮皮45g 蛇床子45g 冰片7.5g
[0040] 制備方法：以上十味，取苦參、野菊花、蒲公英、紫花地丁、金銀花、白鮮皮六味，加 12倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生藥， 備用；另取黃柏、虎杖、蛇床子三味，加8倍量60%乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙 醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于〇.5g生藥，備用。乳劑型軟膏基質(zhì)的制備，將油相成分（硬脂酸 7. 5g、油酸山梨坦2g、單硬脂酸甘油酯7. 5g、液體石蠟12g及凡士林7g)與水相成分（聚山 梨酯80 : 6g、甘油12. 5、山梨酸Ig及水75g)分別加熱至80,將汕相加入水相中，邊加邊攪 拌，至冷凝成乳劑型基質(zhì)。將兩種提取液合并后，緩緩加入制備好的乳劑型基質(zhì)中，邊加邊 攪拌，至完全均勻?yàn)橹?，即得?br>[0041] 實(shí)施例4搽劑
[0042] 處方組成：
[0043] 苦參60g 野菊花60 g 蒲公英60g 紫花地丁 60g 金銀花60g 黃柏45g 虎杖45g 白鮮皮45g
[0044] 蛇床子45g 冰片7.5g
[0045] 以上十味，取苦參、野菊花、蒲公英、紫花地丁、金銀花、白鮮皮六味，加12倍量水 煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生藥，備用；另取 黃柏、虎杖、蛇床子三味，加8倍量60%乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙醇并濃縮至 每毫升相當(dāng)于〇. 5g生藥，備用。將上述兩份溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙醇溶解后加 入，再加入聚山梨酸酯-80 20ml，甘油60ml，氮酮15ml，調(diào)整體積至1000ml，即得。
[0046] 實(shí)施例5涂膜劑
[0047] 處方組成：
[0048] 苦參60g 野菊花60 g 蒲公英60g 紫花地丁 60g 金銀花60g 黃柏45g 虎杖45g 白鮮皮45g 蛇床子45g 冰片7.5g
[0049] 制備方法：以上十味，取苦參、野菊花、蒲公英、紫花地丁、金銀花、白鮮皮六味，加 12倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生藥， 備用；另取黃柏、虎杖、蛇床子三味，加8倍量60%乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙 醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于〇. 5g生藥，備用。另取羧甲基纖維素鈉30g，聚乙烯醇22g分別加 水適量浸泡溶脹并使溶化，攪勻，濾過(guò)，濾液備用，將上述三份溶液合并，另取冰片用適量無(wú) 水乙醇溶解后加入，再加入甘油30g，調(diào)整體積至1000ml，即得。
[0050] 實(shí)施例6凝膠劑
[0051] 處方組成：
[0052] 苦參40g 野菊花40 g 蒲公英40g 紫花地丁 40g 金銀花40g 黃柏25g 虎杖25g 白鮮皮25g 蛇床子25g 冰片6g
[0053] 制備方法：以上十味，取苦參、野菊花、蒲公英、紫花地丁、金銀花、白鮮皮六味，加 12倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生藥， 備用；另取黃柏、虎杖、蛇床子三味，加8倍量60%乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙 醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于〇.5g生藥，備用。將上述兩份溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙 醇溶解后加入，再加入5%丙二醇，1 %氮酮，3%卡波姆，攪勻，用三乙胺調(diào)PH值至6. 5,共制 1000ml，即得。
[0054] 實(shí)施例7溶液劑
[0055] 處方組成：
[0056] 苦參80g 野菊花80 g 蒲公英80g 紫花地丁 80g 金銀花80g 黃柏60g 虎杖60g 白鮮皮60g 蛇床子60g 冰片9g
[0057] 制備方法：以上十味，取苦參、野菊花、蒲公英、紫花地丁、金銀花、白鮮皮六味，加 12倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生藥， 備用；另取黃柏、虎杖、蛇床子三味，加8倍量60%乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙 醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于〇.5g生藥，備用。將上述兩份溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙 醇溶解后加入，攪勻，共制1000ml，即得。
[0058] 實(shí)施例8正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方參金凝膠水提工藝
[0059] 1儀器與試藥
[0060] 高效液相色譜儀（美國(guó)熱電公司），配P4000栗，UV1000檢測(cè)器，N 2000數(shù)據(jù) 工作站；Kromasi C18 (4. 6 X 250mm，5 μ m) ;RE52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器 廠）；HS3120超聲清洗器（天津恒奧科技發(fā)展公司）；綠原酸對(duì)照品（供含量測(cè)定用， 0753-200111)(中國(guó)藥品生物制品檢定所）；金銀花等藥材均購(gòu)自陜西省藥材公司，由西安 藥檢所專家謝志明主任藥師鑒定；甲醇（色譜純，美國(guó)TEDIA公司），其余試劑均為分析純。
[0061] 2方法與結(jié)果
[0062] 2. 1因素水平的選擇
[0063] 金銀花主要成分為綠原酸，為水溶性成分，故選水為提取溶媒，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 選擇回流次數(shù)（A)、回流時(shí)間（B)、加水量（C) 3個(gè)因素為考察因素，以君藥金銀花中綠原酸 含量和浸膏得率為指標(biāo)，采用L9 (34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，因素水平表見表1.
[0064] 表1因素水平表
[0067] 2. 2試驗(yàn)方法
[0068] 按處方比例稱取金銀花等藥材粗粉置回流裝置中，以水為提取溶媒，按正交試驗(yàn) 設(shè)計(jì)條件進(jìn)行提取，藥液濾過(guò)，離心取上清液濃縮定容至50ml備用。
[0069] 2. 3浸膏得率測(cè)定
[0070] 精密吸取上述藥液10ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴蒸干后，于105 °C干 燥3h，移置干燥器中，冷卻30min，迅速精密稱定重量，計(jì)算浸膏得率。
[0071] 2. 4含量測(cè)定
[0072] 2. 4. 1色譜條件
[0073] 色譜柱 Kromasi C18 (4. 6X 150mm，5 μ m);以甲醇一 0.4%磷酸溶液（13 :87)為流 動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
[0074] 2. 4. 2對(duì)照品溶液的制備
[0075] 取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含80 μ g的溶液，即得。
[0076] 2. 4. 3供試品的制備
[0077] 精密吸取正交試驗(yàn)所得溶液各2ml至25ml量瓶中加甲50%醇至刻度，搖勻，即得。
[0078] 2. 4. 4線性關(guān)系考察
[0079] 分別精密吸取對(duì)照品溶液：1、3、5、10、15、20μ1，以進(jìn)樣量C(yg)為橫坐標(biāo)，峰 面積A為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程為：Y = 3151711. 36X-755. 70, r = 0. 9999 ;表明綠原酸在 0. 08~1. 60 μ g范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。
[0080] 2. 4. 5含量測(cè)定
[0081] 精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注人液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0082] 2. 5正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析
[0083] 按2. 2實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行正交試驗(yàn)得到9份供試品溶液，測(cè)得各供試品溶液的實(shí)驗(yàn)數(shù) 據(jù)。正交試驗(yàn)結(jié)果見表2,方差分析見表3。
[0084] 由表2、表3可見，以綠原酸為指標(biāo)的最佳提取工藝為A3B1C 3;以浸膏得率為指標(biāo)的 最佳提取工藝為A3B2C3，且A有顯著差異，最佳工藝為12倍量水回流3次，每次lh。綜合2 個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)并考慮實(shí)際生產(chǎn)中節(jié)約成本，節(jié)約時(shí)間等因素，最終選擇最佳工藝為A 3B1C3即 12倍量水回流3次，每次lh。
[0085] 表2正交試驗(yàn)結(jié)果表
[0087] 表3方差分析表
[0088]
[0089] 2· 6最佳工藝驗(yàn)證
[0090] 按處方比例平行稱取3份藥材，根據(jù)篩選得到的最佳工藝A3B1C 3即12倍量水回流 3次，每次lh。進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，并分別測(cè)定浸膏得率和綠原酸含量，果見表4。實(shí)驗(yàn)表明最佳 工藝條件合理同時(shí)也表明此工藝有較好的穩(wěn)定性。
[0091] 表4最佳工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
[0093] 實(shí)施例9正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方參金凝膠醇提工藝
[0094] 1儀器與試藥
[0095] 高效液相色譜儀（美國(guó)熱電公司），配P4000栗，UV1000檢測(cè)器，N 2000數(shù)據(jù)工 作站；Kromasi Cls(4.6X250mm，5ym) ;HS3120超聲清洗器（天津恒奧科技發(fā)展公司）； 鹽酸小檗堿對(duì)照品（供含量測(cè)定用，0713-200107,）；蛇床子素對(duì)照品（供含量測(cè)定用， 110822-200406);甲醇（色譜純，美國(guó)TEDIA公司），其余試劑均為分析純。
[0096] 2方法與結(jié)果
[0097] 2. 1因素水平的選擇
[0098] 黃柏主要成分為鹽酸小檗堿、蛇床子主要成分為蛇床子素，均為酯溶性成分，故選 不同濃度乙醇為提取溶媒，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇回流次數(shù)（A)、回流時(shí)間（B)、加水量（C)3 個(gè)因素為考察因素，以方中臣藥黃柏、蛇床子的活性成分鹽酸小檗堿、蛇床子素和浸膏得率 為指標(biāo)，采用L 9 (34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，因素水平表見表1.
[0099] 表1因素水平表
[0100]
[0101] 2.2試驗(yàn)方法
[0102] 按處方比例稱取黃柏、蛇床子等藥材粗粉置回流裝置中，以不同濃度乙醇為提取 溶媒，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)條件進(jìn)行提取，藥液濾過(guò)，離心取上清液濃縮定容至50ml備用。
[0103] 2. 3浸膏得率測(cè)定
[0104] 精密吸取上述藥液10ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴蒸干后，于105°C干 燥3h，移置干燥器中，冷卻30min，迅速精密稱定重量，計(jì)算浸膏得率。2. 4含量測(cè)定
[0105] 2. 4.1黃柏含量測(cè)定
[0106] 2. 4. I. 1黃柏定色譜條件
[0107] 色譜柱 Kromasi C18 (4. 6 X 150_，5 μ m)，以乙腈一 0· 1 % 磷酸溶液（56 :44)(每 100mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿計(jì)算 應(yīng)不低于3000。
[0108] 2. 4. 1. 2對(duì)照品溶液的制備
[0109] 取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含48 μ g的溶液，即得。
[0110] 2. 4. 1. 3供試品的制備
[0111] 精密吸取正交試驗(yàn)所得溶液各2ml至25ml量瓶中加甲醇至刻度，搖勻，即得。
[0112] 2.4. 1.4線性關(guān)系考察
[0113] 分別精密吸取對(duì)照品溶液：2. 5、5、7. 5、10、12. 50 μ 1，以進(jìn)樣量C( μ g)為橫坐標(biāo)， 峰面積A為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程為：Y = 491922X+125468，r = 0. 9999,表明鹽酸小檗堿在 0. 12 yg~0. 6yg范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。
[0114] 2. 4. L 5含量測(cè)定
[0115] 精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得。
[0116] 2. 4. 2蛇床子含量測(cè)定
[0117] 2. 4. 2. 1蛇床子色譜條件
[0118] 色譜柱Kromasi C1S(4. 6Χ 150mm，5 μπι)，以乙腈一水（65 :35)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng) 為322nm，理論板數(shù)按蛇床子素計(jì)算應(yīng)不低于3000。
[0119] 2. 4. 2. 2對(duì)照品溶液的制備
[0120] 取蛇床子素對(duì)照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1ml含56 μ g的溶液，即得。
[0121] 2.4. 1.3供試品的制備
[0122] 精密吸取正交試驗(yàn)所得溶液各2ml至25ml量瓶中加甲醇至刻度，搖勻，即得。
[0123] 2. 4. 1. 4線性關(guān)系考察
[0124] 分別精密吸取對(duì)照品溶液：1、2、3、4、5 μ 1，以進(jìn)樣量C( μ g)為橫坐標(biāo)，峰面積A為 縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程為：Y = 232254X+11805, r = 0. 9997,表明蛇床子素在0. 056 yg~ 0. 28 μ g范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。
[0125] 2. 4. 1.5 含量測(cè)定
[0126] 精密吸取取蛇床子素對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注人液相色譜儀，測(cè)定， 即得。
[0127] 2. 5、正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析
[0128] 按2. 2實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行正交試驗(yàn)得到9份供試品溶液，測(cè)得各供試品溶液的實(shí)驗(yàn)數(shù) 據(jù)。正交試驗(yàn)結(jié)果見表2,方差分析見表3。
[0129] 由表2、表3可見，以鹽酸小檗堿為指標(biāo)的最佳提取工藝為A3B1C 3D3且A、C有顯著 差異；以蛇床子素為指標(biāo)的最佳提取工藝為A3B2C 2 (C3) D2且A有顯著差異；以浸膏得率為指 標(biāo)的最佳提取工藝為A3B1C 3D3，且A、C有顯著差異，綜合3個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)并考慮實(shí)際生產(chǎn)中節(jié) 約成本，節(jié)約時(shí)間等因素，最終選擇最佳工藝為A 3B2C2D2即8倍量60%乙醇回流3次，每次 lh〇
[0130] 表2正交試驗(yàn)結(jié)果表

[0135] 2. 6最佳工藝驗(yàn)證
[0136] 按處方比例平行稱取3份藥材，根據(jù)篩選得到的最佳工藝A3B2C 2D2即8倍量60% 乙醇回流3次，每次Ih進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，并分別測(cè)定鹽酸小檗堿含量、蛇床子素含量和浸膏得 率結(jié)果見表4。實(shí)驗(yàn)表明最佳工藝條件合理同時(shí)也表明此工藝有較好的穩(wěn)定性。
[0137] 表4最佳工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
L0139J 買施例10止又試驗(yàn)1尤選復(fù)萬(wàn)篸金凝股制爸丄藝妍％
[0140] 1、處方因素考察
[0141] 評(píng)價(jià)指標(biāo)以光澤性、涂展性、均勻度和離心性的綜合評(píng)分為考察指標(biāo)，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為 滿分100分，光澤性、涂展性、均勻度和離心性各占25分，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1。
[0142] 表1凝膠劑處方篩選及制備工藝指標(biāo)評(píng)分
[0144] 2、正交試驗(yàn)取處方量的浸膏，以光澤性、涂展性、均勻度和離心性的綜合評(píng)分為指 標(biāo)進(jìn)行L 9 (34)正交試驗(yàn)，因素水平表見表2,結(jié)果見表3,4。
[0145] 表2凝膠劑處方制備工藝正交試驗(yàn)因素水平
[0147] 表3凝膠刑止交試驗(yàn)安排和數(shù)據(jù)分析表

[0152] *F0.05(2j2)= 19. 00
[0153] 直觀分析結(jié)果可以看出，影響因素 A > C > B，且A2B1C2為佳，方差分析結(jié)果表明A， C因素有顯著性影響，B因素?zé)o顯著性影響，因此確定凝膠劑處方為卡波姆3%、丙二醇8%、 PH值為6. 5。
[0154] 實(shí)施例11復(fù)方參金凝膠的TCL鑒定研究
[0155] 1儀器與試藥
[0156] I. 1儀器ZF-2型三用紫外儀（上海安亭電子儀器廠）；101-0A電熱鼓風(fēng)干燥箱 (天津泰斯特儀器有限公司）；HS3120超聲清洗器（天津恒奧科技發(fā)展公司）。
[0157] 1.2試藥鹽酸小檗堿對(duì)照品（供含量測(cè)定用，0713-200107,）；蛇床子素對(duì)照品 (供含量測(cè)定用，110822-200406);苦參堿對(duì)照品（供含量測(cè)定用，805-200005);氧化苦參 堿對(duì)照品（供含量測(cè)定用，0780-200004);黃柏對(duì)照藥材（供鑒別用，121510-201105)均購(gòu) 自中國(guó)藥品生物制品檢定所；試劑均為分析純。
[0158] 2方法與結(jié)果
[0159] 2. 1薄層色譜定性鑒別
[0160] 2. I. 1黃柏的鑒別取本品5g，加甲醇25ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘 渣加2ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取黃柏對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。 取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0. 5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另按處方組織 制備不含黃柏的空白樣品，并按供試品溶液制備方法制陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（中 國(guó)藥典2010版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板 上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水-三乙胺（3 : 3.5 : 1 : 1.5 : 0.5 : 1) 為展開劑，置用濃氨試液預(yù)飽和20分鐘的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同的黃色熒光斑點(diǎn)，在與對(duì)照 品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的一個(gè)黃色熒光斑點(diǎn)。陰性無(wú)干擾（見說(shuō)明書附圖1)。
[0161] 2. 1. 2蛇床子的鑒別取本品2g，加乙酸乙酯5ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，作為供 試品溶液。另取蛇床子對(duì)照藥材l.Og，同法制成對(duì)照藥材溶液。取蛇床子素對(duì)照品，加乙 醇制成每1ml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。另按處方組織制備不含蛇床上子的空白樣 品，并按供試品溶液制備方法制陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010版-部附錄 VIB)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯 (9 : 1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照 藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性無(wú)干擾（見說(shuō)明書附圖 2) 〇
[0162] 2. 1. 3苦參的鑒別取本品2g，加濃氨試液0. 3ml，三氯甲烷25ml，放置過(guò)夜，濾過(guò)， 濾液蒸干，殘?jiān)?ml三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液。另取苦參對(duì)照藥材0. 5g，同法制 成對(duì)照藥材溶液。取苦參堿對(duì)照品、氧化苦參堿對(duì)照品，各加乙醇制成每1ml含0. 2mg的溶 液，作為各自對(duì)照品溶液。另按處方組織制備不含苦參的空白樣品，并按供試品溶液制備方 法制陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述五種 溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙 酯-甲醇-水（2 : 4 : 2 : 1)10°C以下放置的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴碘 化鉍鉀試液，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒 光斑點(diǎn)陰性無(wú)干擾（見說(shuō)明書附圖3)。
[0163] 實(shí)施例12 HPLC法測(cè)定復(fù)方參金凝膠中綠原酸的含量
[0164] 1儀器與試藥
[0165] 高效液相色譜儀（美國(guó)熱電），配Ρ4000栗，UV1000檢測(cè)器，N 2000數(shù)據(jù)工作站； Kromasi Cls(4.6X250mm，5ym) ;HS3120超聲清洗器（天津恒奧科技發(fā)展公司）；綠原酸對(duì) 照品（供含量測(cè)定用，110753-200212)(中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙腈（色譜純，美國(guó) TEDIA公司），其余試劑均為分析純。
[0166] 2方法與結(jié)果
[0167] 2. 1 色譜條件色譜柱 Kromasi C1S(4. 6X 150mm，5 μπι);流速：1. OmL/min ;流動(dòng)相 為甲醇-0. 4%磷酸溶液（13 : 87);檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm ;柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μ L。
[0168] 2. 2溶液的制備
[0169] 2. 2. 1供試品溶液的制備
[0170] 精密稱取復(fù)方參金凝膠2g至25ml量瓶中加50%甲醇至刻度，搖勻，超聲處理 (150W，20kHZ) 20分鐘，放冷，濾過(guò)，即得。
[0171] 2. 2. 2對(duì)照品溶液的制備
[0172] 取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含80 μ g的溶液，即得。
[0173] 2. 2. 3陰性對(duì)照溶液的制備
[0174] 按處方量制備不含金銀花藥材的陰性樣品，按供試品溶液方法制備，即得。
[0175] 2. 3專屬性試驗(yàn)分別精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各 10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見說(shuō)明書附圖4-6,陰性對(duì)照色譜中，在與 綠原酸對(duì)照品相應(yīng)的位置上，無(wú)干擾峰。
[0176] 2. 4線性關(guān)系考察將綠原酸對(duì)照品配制成Iml含0.0 SOmg的50%甲醇溶液，依次 準(zhǔn)確進(jìn)樣I、3、5、10、15、20 μ I，以進(jìn)樣量C ( μ g)為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方 程為：Y = 3151711. 36X-755. 70，r = 0· 9999 ;表明綠原酸在0· 08~L 60 yg范圍內(nèi)，峰面 積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。
[0177] 2. 5精密度試驗(yàn)分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，分別重復(fù)進(jìn)樣 6次，結(jié)果綠原酸峰面積積分值的RSD分別為1. 13% ;1. 08%。
[0178] 2. 6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液10 μ 1、供試品溶液10 μ 1，分別于0， 2,4,6,8,10,12, 24小時(shí)測(cè)定，結(jié)果綠原酸峰面積值RSD分別為0. 93%，1. 10%。表明綠原 酸在24小時(shí)內(nèi)是穩(wěn)定的。
[0179] 2. 7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品（批號(hào)20111115)5份，分別按供試品溶液制備法 操作，按色譜條件測(cè)定，結(jié)果綠原酸平均含量為2. 043mg/ml，RSD為1. 21 %。
[0180] 2.8加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品（批號(hào)20111115)5份，各0.2g，精密稱 定，各加入綠原酸對(duì)照品溶液（0.080mg/mL)適量，依供試品溶液制備法操作，按色譜條件 測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98. 99%，RSD為0.71%。見表1。
[0181] 表1復(fù)方參金凝膠中綠原酸加樣回收率
[0183] 2. 9含量測(cè)定按照上述方法制備綠原酸的對(duì)照品溶液和復(fù)方參金凝膠供試品溶 液，分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液10 μ L依法測(cè)定，以外標(biāo)法峰面積計(jì)算。測(cè)定了 3批樣 品（20120909、20120915、20120919)的含量，結(jié)果見表 2。
[0184] 表2復(fù)方參金凝膠中綠原酸含量測(cè)定結(jié)果（η = 3)
L0186J 頭施例13炅萬(wàn)S」凝肷王安約雙字試驗(yàn)
[0187] 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò)考察復(fù)方SJ凝膠對(duì)二甲苯致小鼠耳廓炎癥的影響、對(duì)小鼠肉芽腫 炎癥的影響，對(duì)小鼠醋酸腹腔致痛作用的影響、對(duì)小鼠熱板法致痛作用的影響，明確復(fù)方SJ 凝膠的藥理藥效學(xué)作用，為本品的進(jìn)一步深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[0188] 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
[0189] 1實(shí)驗(yàn)用藥品及主要實(shí)驗(yàn)設(shè)施
[0190] 1.1復(fù)方SJ凝膠
[0191] 名稱：復(fù)方SJ凝膠。功能主治：日光性皮炎。規(guī)格：10ml/支（0. 5g生藥/ml)。性 狀：棕褐色凝膠劑。批號(hào)=20120828。用法：皮膚外用藥。擬定臨床用法與用量：根據(jù)皮膚 日光性皮炎面積適量涂抹。貯存方式：冷藏保存。提供單位：中國(guó)人民解放軍第323醫(yī)院。
[0192] 1.2對(duì)照藥品
[0193] 1. 2. 1吲哚美辛軟膏，批號(hào)：1100910。規(guī)格：1%。沈陽(yáng)市興齊制藥有限責(zé)任公司。
[0194] 1. 2. 2嗎啡注射液，批號(hào)：20101101。規(guī)格：25mg/支。青海大地藥業(yè)有限公司。 1. 2. 3鹽酸苯海拉明注射液，批號(hào)：20110621。規(guī)格：1ml :20mg，武漢制藥集團(tuán)股份有限公 司。
[0195] 1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理
[0196] 1.3. 1實(shí)驗(yàn)室條件
[0197] 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)室溫度：18~26 °C，相對(duì)濕度：40~ 70%，光照條件：1211/1211明暗交替，通風(fēng)情況：全新風(fēng)。
[0198] 1.3. 2飲水自由飲用生活飲用水。
[0199] 1. 3. 3飼料鼠全價(jià)顆粒飼料，營(yíng)養(yǎng)成分符合GB14924. 3-2001，生產(chǎn)單位：西安交 通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0200] 2復(fù)方SJ凝膠對(duì)二甲苯致小鼠耳廓炎癥的影響
[0201] 2.1實(shí)驗(yàn)材料
[0202] 2. I. 1復(fù)方SJ凝膠復(fù)方SJ凝膠（詳見I. I. 1)。
[0203] 2. L 2對(duì)照品吲哚美辛軟膏（詳見L 2. 1)。
[0204] 2. 1. 3主要實(shí)驗(yàn)儀器與試劑FA1104型微量電子分析天平，上海精密科學(xué)儀器有限 公司。
[0205] 二甲苯，批號(hào)：20110401，上海有機(jī)化工試劑研究所。
[0206] 2. 1. 4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，一級(jí)，60只，18~22g，雌、雄各半。許可證號(hào)： SCXK(陜）：2007-001號(hào)。供應(yīng)單位：西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0207] 2. 2實(shí)驗(yàn)方法
[0208] 2. 2. 1分組與劑量設(shè)置動(dòng)物按性別分別采用完全隨機(jī)法，分成5組，雌雄各半，參 見表1。
[0209] 表1復(fù)方SJ凝膠對(duì)二甲苯致小鼠耳廓炎癥影響實(shí)驗(yàn)分組及劑暈設(shè)計(jì)

[0212] 2. 2. 2操作步驟均勻地將復(fù)方SJ凝膠劑涂抹于復(fù)方SJ凝膠低、中、高各劑量組小 鼠雙側(cè)耳廓部，每次量約〇. 25ml，模型對(duì)照組涂抹等體積生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組涂抹吲哚美 辛軟膏。每日2次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后30min，在各小鼠右耳均勻涂抹分析純二甲苯 50 μ 1致炎，致炎后Ih脫頸椎處死小鼠，剪下左、右兩耳，用直徑8_的打孔器沿左、右耳廓 同一部位等面積打孔，沖下兩側(cè)耳片分別稱重，記錄。兩耳片重量差值即為腫脹度，結(jié)果進(jìn) 行統(tǒng)計(jì)分析，并計(jì)算腫脹抑制率。
[0214] 2. 2. 3數(shù)據(jù)處理方法SPSS 13. 0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)或方差分析。
[0215] 2. 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0216] 2. 3. 1復(fù)方SJ凝膠對(duì)二甲苯致小鼠耳廓炎癥的影響見表2。
[0217] 表2復(fù)方SJ凝膠對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（? ±s )
[0219] 注：與模型對(duì)照組比較，*P < 0· 05, **P < 0· 01
[0220] 由上表結(jié)果可見，吲哚美辛軟膏組對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用， 與模型對(duì)照組比較，耳廓腫脹度的差異有顯著性（P < 〇. 01)。復(fù)方SJ凝膠給藥組對(duì)二甲苯 致小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用，與模型對(duì)照組比較，復(fù)方SJ凝膠高劑量組、中劑量組 耳廓腫脹度的差異有顯著性（分別為P < 〇. 01和P < 〇. 05)。
[0221] 2. 3. 2實(shí)驗(yàn)小結(jié)小鼠經(jīng)7天局部給予復(fù)方SJ凝膠，中、高劑量組均能顯著減輕二 甲苯致小鼠耳廓炎癥，表明復(fù)方SJ凝膠有一定的抗炎作用。
[0222] 3復(fù)方SJ凝膠對(duì)小鼠肉芽腫炎癥的影響
[0223] 3. 1實(shí)驗(yàn)材料
[0224] 3. I. 1復(fù)方SJ凝膠復(fù)方SJ凝膠（詳見I. I. 1)。
[0225] 3. 1. 2對(duì)照品吲哚美辛軟膏（詳見1. 2. 1)。
[0226] 3. I. 3主要實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
[0227] FA1104型微量電子分析天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司。濾紙片（直徑約8mm、 厚約1.5臟、重1.911^)，干燥滅菌30分鐘。戊巴比妥鈉，批號(hào)疋20091012，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試 劑有限公司。
[0228] 3. 1. 4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0229] ICR小鼠，一級(jí)，50只，18~22g，雌性。許可證號(hào)：SCXK(陜）：2007-001號(hào)。供應(yīng) 單位：西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0230] 3. 2實(shí)驗(yàn)方法
[0231] 3. 2. 1分組與劑量設(shè)置動(dòng)物按性別分別采用完全隨機(jī)法，分成5組，雌雄各半，參 見表3。
[0232] 表3復(fù)方SJ凝膠對(duì)二甲苯致小鼠耳廓炎癥影響實(shí)驗(yàn)分組及劑量設(shè)計(jì)
[0234] 3. 2. 2操作步驟
[0235] 3. 2. 2. 1 造模
[0236] 在0. 3%戊巴比妥鈉麻醉下，將紙片分別植入50只動(dòng)物左、右肩部或上腕部皮下 各1片（共2片），縫合。
[0237] 3. 2. 2. 2 給藥方法
[0238] 所有小鼠造模24h后按體重隨機(jī)分為5組。復(fù)方SJ凝膠組給予不同劑量的復(fù)方 SJ凝膠局部涂抹，陽(yáng)性對(duì)照組給予等體積的吲哚美辛軟膏局部涂抹，總給藥量每日分3次 給予，連續(xù)給藥7天。末次給藥后30min處死動(dòng)物，將紙片與肉芽組織一并摘出，于60°C干 燥24h稱干重。干重減去紙片重量，即為肉芽?jī)糁亍?br>[0239] 3. 2. 3數(shù)據(jù)處理方法采用SPSS13. 0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)或方差分析。
[0240] 3. 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0241] 3. 3. 1復(fù)方SJ凝膠對(duì)小鼠肉芽腫炎癥的影響見表4。
[0242] 表4復(fù)方SJ凝膠對(duì)小鼠肉芽腫炎癥的影響G ±s )
[0243]
[0244] 注：與模型對(duì)照組比較，*P < 0· 05, #P < 0· 01
[0245] 由上表結(jié)果可見，陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)小鼠肉芽腫炎癥有明顯的抑制作用，肉芽?jī)糁嘏c 模型對(duì)照組比較，差異有顯著性（P < 0. 01)。復(fù)方SJ凝膠給藥組對(duì)小鼠肉芽腫有明顯的抑 制作用，肉芽?jī)糁嘏c模型對(duì)照組比較，復(fù)方SJ凝膠高、中、低劑量組的差異有顯著性（分別 為 P < 0· 01、P < 0· 05 和 P < 0· 05)。
[0246] 3. 3. 2實(shí)驗(yàn)小結(jié)在本實(shí)驗(yàn)條件下，小鼠經(jīng)7天給予復(fù)方SJ凝膠，高、中、低劑量組 能顯著抑制小鼠肉芽腫的形成，表明復(fù)方SJ凝膠有一定的抗炎作用。
[0247] 4復(fù)方SJ凝膠對(duì)乙酸引起小鼠扭體反應(yīng)的影響
[0248] 4. 1實(shí)驗(yàn)材料
[0249] 4. I. 1復(fù)方SJ凝膠復(fù)方SJ凝膠（詳見I. I. 1)。4. L 2對(duì)照品嗎啡注射液（詳 見 1. 2. 2)。
[0250] 4. L 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0251] 動(dòng)物：ICR小鼠，等級(jí)：一級(jí)，數(shù)量：60只，重量：18_22g，性別：雌性。供應(yīng)單位：西 安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。許可證號(hào)：SCXK(陜）：2007-001號(hào)。
[0252] 4. 2實(shí)驗(yàn)方法
[0253] 4. 2. 1分組與劑量設(shè)置動(dòng)物按性別分別采用完全隨機(jī)法，分成5組，每組12只，各 組給藥劑量參見表5。
[0254] 表5復(fù)方SJ凝膠對(duì)乙酸致小鼠扭體反應(yīng)試驗(yàn)分組及劑量設(shè)計(jì)
[0256] 4. 2. 2操作步驟：
[0257] 除嗎啡組在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天0. 02g/kg皮下注射外，其余各組均按劑量每天局部給藥或 生理鹽水1次，連續(xù)7d，末次給藥后45min，每只小鼠腹腔注射0. 7%乙酸0.0 lml/g體重， 5min后開始記錄IOmin內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
[0258] 4. 2. 3數(shù)據(jù)處理方法SPSSlI. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。
[0259] 4. 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0260] 4. 3. 1復(fù)方SJ凝膠對(duì)乙酸引起小鼠扭體反應(yīng)的影響見表6。
[0261] 表6復(fù)方SJ凝膠對(duì)乙酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（J ±S )
L0263J 注：與空臼對(duì)照組比較，*P < 0· 05, ***P < 0· 001。
[0264] 由上表結(jié)果可見，陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)乙酸致小鼠扭體次數(shù)有明顯的減少作用，扭體次 數(shù)與模型對(duì)照組比較，差異有顯著性（P < 〇. 01)。復(fù)方SJ凝膠給藥組對(duì)小鼠乙酸致小鼠扭 體次數(shù)有明顯的減少作用，扭體次數(shù)與模型對(duì)照組比較，復(fù)方SJ凝膠高、中劑量組的差異 有顯著性（分別為P < 〇· 01和P < 〇· 05)。
[0265] 4. 3. 2實(shí)驗(yàn)小結(jié)在本實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)小鼠給予復(fù)方SJ凝膠高、中劑量組對(duì)乙酸致 小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)有顯著的抑制作用，表明復(fù)方SJ凝膠具有一定的鎮(zhèn)痛作用。
[0266] 5復(fù)方SJ凝膠對(duì)熱痛刺激反應(yīng)潛伏期的影響（熱板法）
[0267] 5. 1實(shí)驗(yàn)材料
[0268] 5. I. 1復(fù)方SJ凝膠復(fù)方SJ凝膠（詳見I. I. 1)。5. 1. 2對(duì)照品嗎啡注射液（詳見 1. 2. 2) 〇
[0269] 5. 1. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0270] 動(dòng)物：ICR小鼠，等級(jí)：一級(jí)，數(shù)量：60只，重量：18_22g，性別：雌性。供應(yīng)單位：西 安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。許可證號(hào)：SCXK(陜）：2007-001號(hào)。
[0271] 5. 2實(shí)驗(yàn)方法
[0272] 5. 2. 1分組與劑量設(shè)置
[0273] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用智能熱板儀篩選痛閾小于10秒或大于30秒者及在熱板上多次跳躍者 剔除，選出合格的小鼠60只，按體重隨機(jī)分為5組，每組12只，各組給藥劑量參見表7。
[0274] 表7復(fù)方SJ凝膠對(duì)熱痛刺激反應(yīng)潛伏期試驗(yàn)分組及劑量設(shè)計(jì)
[0275]
[0276] 5. 2. 2 操作步驟：.
[0277] 除嗎啡組在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天0. 02g/kg皮下注射外，其余各組均按劑量每天灌胃給藥或 水1次，連續(xù)7d，末次給藥后45min、90min和120min，將小鼠放入智能熱板儀中，分別記錄 小鼠自放入儀器至舔后足的時(shí)間，作為小鼠的疼痛潛伏期。數(shù)據(jù)以i ± s表示，組間t測(cè)驗(yàn)， 以判斷藥物的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
[0278] 5. 2. 3數(shù)據(jù)處理方法SPSSlI. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。
[0279] 5. 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0280] 5. 3. 1復(fù)方SJ凝膠對(duì)熱痛刺激反應(yīng)潛伏期的影響見表8。
[0281] 表8復(fù)方SJ凝膠對(duì)熱痛刺激疼痛反應(yīng)潛伏期的影響（X ± S η = 12)
[0283] 注：與空白對(duì)照組比較，*Ρ < 0· 05, **Ρ < 0· 01，***Ρ < 0· 001。
[0284] 由上表結(jié)果可見，陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)小鼠熱痛刺激疼痛反應(yīng)潛伏期有明顯的延長(zhǎng)作 用，熱痛刺激疼痛反應(yīng)潛伏期在45min、90min和120min時(shí)與空白對(duì)照組比較，差異有顯著 性（分別為P < 〇. 01、P < 〇. 01和P < 〇. 05)。復(fù)方SJ凝膠給藥組對(duì)小鼠熱痛刺激疼痛反應(yīng) 潛伏期有明顯的延長(zhǎng)作用，熱痛刺激疼痛反應(yīng)潛伏期與模型對(duì)照組比較，復(fù)方SJ凝膠高、 中劑量組在45min以及高劑量組在90min時(shí)的差異有顯著性（分別為P < 0.0 UP < 0. 05 和 P < 0· 05) 〇
[0285] 5. 3. 2實(shí)驗(yàn)小結(jié)在本實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)小鼠給予復(fù)方SJ凝膠高、中劑量組對(duì)熱痛刺 激疼痛反應(yīng)潛伏期有顯著的延長(zhǎng)作用，表明復(fù)方SJ凝膠具有一定的鎮(zhèn)痛作用。
[0286] 實(shí)施例14復(fù)方參金凝膠急性毒性試驗(yàn)
[0287] 試驗(yàn)?zāi)康模河^察動(dòng)物完整皮膚及破損皮膚短期內(nèi)接觸受試物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。
[0288] L試驗(yàn)條件
[0289] I. 1動(dòng)物品系：KM小鼠，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：NQ: 0014335,許可證號(hào)：SCXK(陜）2007-001。實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)1周，選行為活動(dòng)、飲食、精神狀況正 常的小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0290] 1. 2受試藥物：復(fù)方參金凝膠由解放軍323醫(yī)院提供，批號(hào)20131101。外用，涂于 患處，一日數(shù)次。
[0291] L 3賦型劑：卡波姆。
[0292] 2.試驗(yàn)方法
[0293] 2. 1受試動(dòng)物皮膚準(zhǔn)備
[0294] 2. I. 1完整皮膚準(zhǔn)備：小鼠在給藥前12小時(shí)，將背部脊柱兩側(cè)去毛約2 X 2cm2,去 毛后24小時(shí)檢查去毛皮膚，將受傷皮膚的小鼠剔除。
[0295] 2. 1. 2破損皮膚準(zhǔn)備：按上述方法將受試小鼠去毛，消毒皮膚后，用砂皮紙摩擦打 毛皮膚，以皮膚出現(xiàn)輕微滲血為度。
[0296] 2. 2給藥方法及觀察時(shí)間：大鼠按體重隨機(jī)分六組，每組10只，雌雄各半，第一組 為完整皮膚對(duì)照組，將卡波姆Ig均勻涂敷于動(dòng)物背部脫毛區(qū)，牛皮紙覆蓋并用無(wú)刺激膠帶 加以固定，以下涂藥固定方式相同；第二組完整皮膚組大劑量組，涂復(fù)方參金凝膠Ig ;第三 組完整皮膚小劑量組，涂復(fù)方參金凝膠〇. 5g ;第四組為破損皮膚對(duì)照組，涂卡波姆Ig ;第 五組破損皮膚大劑量組，涂復(fù)方參金凝膠Ig ;第六組破損皮膚小劑量組，涂復(fù)方參金凝膠 〇. 5g。給藥24小時(shí)后，用溫水去除殘留復(fù)方參金凝膠，每日觀察小鼠全身狀況，活動(dòng)行為變 化，呼吸，循環(huán)，消化及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性反應(yīng)及死亡情況，逐日記錄之，連續(xù)14天。并稱 量給藥前及給藥14日后小鼠體重，14日后尸解，對(duì)主要臟器心、肝、脾、肺、腎、腦、胰腺、胃、 十二指腸、直腸、膀胱、睪丸、精囊腺、前列腺、胸腺、腎上腺及體腔做大體觀察，肉眼觀察有 明顯改變者作病理鏡檢。
[0297] 3.試驗(yàn)結(jié)果
[0298] 3. 1用藥組及對(duì)照組小鼠在14日內(nèi)活動(dòng)正常，對(duì)外界刺激反應(yīng)靈敏，毛發(fā)光亮，呼 吸平穩(wěn)，攝食飲水正常，二便無(wú)異常。口、鼻、眼無(wú)異常分泌物。無(wú)死亡。
[0299] 3. 2小鼠體重增長(zhǎng)，組間無(wú)明顯差異，見表1。
[0300] 3. 3用藥組及對(duì)照組大鼠心、肝、脾、肺、腎等器官剖解未見異常。
[0301] 4.結(jié)論：
[0302] 復(fù)方參金凝膠未發(fā)現(xiàn)皮膚急性中毒反應(yīng)。
[0303] 表1急毒小鼠體重（g) (I ± S ) η = 10

[0306] 注：與對(duì)照組相比P >0· 05
[0307] 實(shí)施例15復(fù)方參金凝膠過(guò)敏試驗(yàn)
[0308] 試驗(yàn)?zāi)康模簭?fù)方參金凝膠重復(fù)接觸豚鼠皮膚，觀察有無(wú)過(guò)敏反應(yīng)。
[0309] L試驗(yàn)材料
[0310] I. 1試驗(yàn)動(dòng)物：白色豚鼠，西安交大試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重200 ±20g，雌雄兼用。 合格證號(hào)：NQ:0014340,許可證號(hào)：SCXK (陜）2007-001。
[0311] 1. 2受試物：復(fù)方參金凝膠，由解放軍323醫(yī)院提供，批號(hào)2013. 12. 1。外用，涂于 患處，一日數(shù)次。
[0312] 1. 3試劑：2. 4-二硝基氯苯用丙酮配制成1 %的致敏濃度和0. 1 %的激發(fā)濃度。
[0313] 1.4賦型劑：卡波姆。
[0314] 2.試驗(yàn)方法
[0315] 2.1試驗(yàn)準(zhǔn)備
[0316] 于給受試物前24小時(shí)，將豚鼠背部?jī)蓚?cè)毛脫掉，去毛區(qū)范圍每側(cè)約3cmX3cm。去 毛后24小時(shí)檢查去毛皮膚上有無(wú)因去毛而受傷，受傷的皮膚不宜做本試驗(yàn)。
[0317] 將豚鼠按體重性別隨機(jī)分為三組，每組10只（雌雄各半），第一組給復(fù)方參金凝 膠；第二組空白對(duì)照組給卡波姆；第三組陽(yáng)性對(duì)照組2,4-二硝基氯苯。
[0318] 2. 2試驗(yàn)過(guò)程
[0319] 2.2. 1致敏接觸：將復(fù)方參金凝膠0.2g涂在豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)（覆蓋牛皮紙，再用 膠布固定）持續(xù)6小時(shí)，然后洗凈?？瞻讓?duì)照組用卡波姆0. 2g，陽(yáng)性對(duì)照組用1% 2,4_二 硝基氯苯0. 2ml，致敏方法同上。第7天、第14天再致敏2次。
[0320] 2. 2. 2激發(fā)接觸：第28天，將復(fù)方參金凝膠0. 2g、卡波姆0. 2g及0. 1 % 2. 4-二硝 基氯苯0. 2ml，涂在豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)，持續(xù)6小時(shí)，然后洗凈。即刻觀察皮膚過(guò)敏反應(yīng)情況， 以及24h、48h、72h時(shí)皮膚過(guò)敏反應(yīng)情況，皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)按《中藥新藥研制學(xué)》第 110,111頁(yè)所示。
[0321] 3.試驗(yàn)結(jié)果致敏情況見表1 :
[0322] 表3可見，陽(yáng)性組表現(xiàn)極度致敏性，復(fù)方參金凝膠組及空白對(duì)照組均無(wú)致敏性。
[0323] 4.試驗(yàn)結(jié)論：復(fù)方參金凝膠對(duì)豚鼠皮膚無(wú)致敏性。
[0324] 表1過(guò)敏反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果η = 10
[0326] 實(shí)施例16復(fù)方參金凝膠治療日光性皮炎的臨床觀察
[0327] 1臨床資料
[0328] I. 1 一般資料189例均為男性，年齡18~47歲，平均年齡21. 1歲，曬傷至就診時(shí) 間為8~24h，平均16h。傷處皮膚紅腫，有明顯燒灼感，面部、頸部和跟上肢等暴露部位出 現(xiàn)紅斑、丘疹、丘庖疹，甚至滲出、糜爛。平均皮損面積9. 8% TBSA其中治療組采用復(fù)方參金 凝膠治療者95例，；對(duì)照組采用復(fù)方爐甘石洗劑治療者94例。
[0329] 1. 2治療方法創(chuàng)面處理簡(jiǎn)單清創(chuàng)，生理鹽水清洗創(chuàng)面后，其中污染明顯的創(chuàng)面用 1 %苯扎溴銨溶液消毒，無(wú)菌紗布蘸干創(chuàng)面后直接將復(fù)方參金凝膠均勻噴于創(chuàng)面，每4~6h 給藥1次，給藥前用棉簽將創(chuàng)面滲出物清除，以保證創(chuàng)面潔凈、濕潤(rùn)，不浸漬。以暴露治療為 主，不宜包扎。治療過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)損傷原則，不使創(chuàng)面疼痛、出血、干燥。對(duì)照組復(fù)方爐甘 石洗劑的治療方法同上，療程均為l〇d。
[0330] 1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：兩組組間比較采用t檢驗(yàn)。
[0331] 2結(jié)果兩組止痛時(shí)間、愈合時(shí)間見表1。
[0332] 表1兩組日光性皮炎療效果比較
[0334] 注：與對(duì)照組比較 < 0· 01，*P < 0· 05
[0335] 3 討論
[0336] 本文結(jié)果表明，復(fù)方參金凝膠組治療日光性皮炎的止痛時(shí)間（44± 15min)、愈合時(shí) 間（6. 1±L 9min)、痊愈率（72. 63% )及總有效率（92. 63% )均稍高于復(fù)方爐甘石洗劑 (201±19min、8. 1±3. lmin、、55. 32%、74. 47% )，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著差異，兩組療效有顯著 差異，治療組優(yōu)于對(duì)照組，且治療組作用溫和，無(wú)明顯不良反應(yīng)。我們應(yīng)用復(fù)方參金凝膠治 療日光皮炎，取得了顯著療效，具有止痛效果顯著、抗感染作用強(qiáng)、創(chuàng)面愈合快、愈后瘢痕輕 等優(yōu)點(diǎn)，其治療方法簡(jiǎn)單易行，療效可靠。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種外用藥物組合物，主要由以下重量份的原料藥制成：苦參4-8份、野菊花4-8 份、蒲公英4-8份、紫花地丁 4-8份、金銀花4-8份、黃柏2-6份、虎杖2-6份、白鮮皮2-6份、 蛇床子2-6份、冰片0. 5-1份。2. 如權(quán)利要求1所述外用藥物組合物，其特征在于由以下重量份的原料藥制成：苦參 5-7份、野菊花5-7份、蒲公英5-7份、紫花地丁 5-7份、金銀花5-7份、黃柏3-5份、虎杖3-5 份、白鮮皮3-5份、蛇床子3-5份、冰片0. 6-0. 9份。3. 如權(quán)利要求1所述外用藥物組合物，其特征在于由以下重量份的原料藥制成：苦參6 份、野菊花6份、蒲公英6份、紫花地丁 6份、金銀花6份、黃柏4. 5份、虎杖4. 5份、白鮮皮 4. 5份、蛇床子4. 5份、冰片0. 75份。4. 如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的外用藥物組合物，在制備治療日光性皮炎疾病藥物中 的用途。5. -種治療日光性皮炎的外用藥物組合物，其包括權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的藥物組 合物和藥學(xué)上可接受的輔料，為外用劑型，包括溶液劑、洗劑、油劑、酊劑、搽劑、軟膏劑、乳 劑、糊劑、涂膜劑、噴霧劑、膜劑、醑劑、膠漿劑、泥膏劑、凝膠劑。6. 如權(quán)利要求1和5所述治療日光性皮炎的外用藥物組合物，其特征在于制備方法包 括如下步驟： 1) 稱取所述重量配比的取苦參、野菊花、蒲公英、紫花地丁、金銀花、白鮮皮六味，加12 倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并三次提取液，并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生藥，備 用； 2) 另取所述重量配比的黃柏、虎杖、蛇床子三味，加8倍量60%乙醇回流提取3次，合 并提取液，回收乙醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于0. 5g生藥，備用； 3) 將1)和2)所得溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙醇溶解后加入，再加入5%丙二 醇，1 %氮酮，3%卡波姆，攪勾，用三乙胺調(diào)PH值至6. 5,共制1000ml，即得凝膠劑； 4) 在上述步驟2)之后，將1)和2)所得溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙醇溶解后加 入，攪勻，共制l〇〇〇ml，即得溶液劑； 5) 在上述步驟2)之后，另制備乳劑型軟膏基質(zhì)：將油相成分（硬脂酸7. 5g、油酸山梨 坦2g、單硬脂酸甘油酯7. 5g、液體石錯(cuò)12g及凡士林7g)與水相成分（聚山梨酯80 : 6g、 甘油12. 5、山梨酸lg及水75g)分別加熱至80,將油相加入水相中，邊加邊攪拌，至冷凝成 乳劑型基質(zhì)，將1)和2)所得溶液合并后，緩緩加入制備好的乳劑型基質(zhì)中，邊加邊攪拌，至 完全均勻?yàn)橹粒吹萌楦鄤? 6) 在上述步驟2)之后，將1)和2)所得溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水乙醇溶解后加 入，再加入聚山梨酸酯-8020ml，甘油60ml，氮酮15ml，調(diào)整體積至1000ml，即得搽劑； 7) 在上述步驟2)之后，另取羧甲基纖維素鈉30g，聚乙烯醇22g分別加水適量浸泡溶 脹并使溶化，攪勻，濾過(guò)，得濾液備用；將濾液、1)和2)所得溶液合并，另取冰片用適量無(wú)水 乙醇溶解后加入，再加入甘油30g，調(diào)整體積至1000ml，即得涂膜劑。
【文檔編號(hào)】A61K31/045GK105983021SQ201510072498
【公開日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年2月12日
【發(fā)明人】湯迎爽, 康阿龍, 劉龍友, 儲(chǔ)雪蓉, 王倩云, 王蓮紅
【申請(qǐng)人】湯迎爽