本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及一種以七葉皂苷a、b為活性成分的脂質(zhì)體凝膠及其制備方法。
背景技術(shù)：
：七葉皂苷又稱七葉皂苷酸，為從七葉樹科七葉樹屬植物種子提取得到的總皂苷、β-七葉皂苷或異七葉皂苷等的總稱，屬于三萜皂苷類。七葉皂苷的水溶解度較差，為增加其溶解度，常將其制成鈉鹽，研究證明，七葉皂苷鈉中含量較高的成分為七葉皂苷a、b、c、d。七葉皂苷鈉能降低病理性毛細(xì)血管通透性增高，增加靜脈張力，減少炎性物質(zhì)滲出，具有抗炎、消腫、止痛、改善血液循環(huán)、促進(jìn)急性閉合性軟組織損傷恢復(fù)等作用。七葉皂苷鈉口服生物利用度不高，注射對(duì)血管刺激性較大，而外部用藥使藥物通過皮膚的滲透作用到達(dá)機(jī)體內(nèi)部，具有如下優(yōu)點(diǎn)：①可避免肝臟的首過效應(yīng)和藥物在胃腸道內(nèi)的降解，藥物吸收不受胃腸道因素的影響，減少用藥的個(gè)體差異；②一次給藥可以長(zhǎng)時(shí)間使藥物以恒定的速率進(jìn)入體內(nèi)，減少給藥次數(shù)，延長(zhǎng)給藥間隔；③避免了口服給藥引起的血藥濃度峰谷現(xiàn)象，降低了毒副反應(yīng)。目前已有七葉皂苷鈉軟膏、氣霧劑、搽劑等外用劑型問世，現(xiàn)有七葉皂苷鈉外用制劑具有以下缺點(diǎn)：1.七葉皂苷鈉鹽水溶性很好，油水分配系數(shù)很低，透皮吸收效果差；2.七葉皂苷鈉成分復(fù)雜，性質(zhì)不穩(wěn)定，制成的外用劑型穩(wěn)定性較差；3.七葉皂苷鈉外用制劑對(duì)皮膚刺激性較大。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有七葉皂苷鈉外用制劑透皮吸收效果差，皮膚刺激性大等問題，提供一種以七葉皂苷a、b為活性成分的脂質(zhì)體凝膠及其制備方法。本發(fā)明提供的七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠，它由以下重量配比的成分組成：優(yōu)選地，所述的七葉皂苷b脂質(zhì)體凝膠，它由以下重量配比的成分組成：本發(fā)明提供的制備方法包括以下步驟：1)脂質(zhì)體的制備：取七葉皂苷a、七葉皂苷b、大豆磷脂和膽固醇，加入無水乙醇，55～65℃攪拌使溶解，將所得的乙醇溶液通過蠕動(dòng)泵以5-30ml/min的速度注入到已恒溫至55～65℃的純化水中，攪拌10～30min，制成脂質(zhì)體混懸液；然后將脂質(zhì)體混懸液置于脂質(zhì)體擠出儀中，依次經(jīng)過孔徑為200nm和100nm的pc濾膜各擠出2～4次；最后采用膜透析的方法，將擠出液加純化水稀釋，透析2～3次，除去擠出液中的乙醇，得含七葉皂苷a、b的脂質(zhì)體；2)脂質(zhì)體凝膠的制備：取卡波姆加純化水溶脹，得到重量濃度為1～3％的卡波姆溶液，然后加入三乙醇胺、薄荷腦、edta·2na，攪拌均勻，制得空白凝膠基質(zhì)；最后將含七葉皂苷a、b的脂質(zhì)體加入到空白凝膠劑基質(zhì)中，邊加邊攪拌直至均勻混合，即得七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠。本發(fā)明的有益效果是：1)本發(fā)明提供的脂質(zhì)體凝膠具有更好的透皮吸收效果，七葉皂苷a和b的總透過率明顯高于七葉皂苷a、b凝膠，而且具有緩控釋作用，能夠以一定速率緩慢釋放，從而在皮膚內(nèi)形成恒定的血藥濃度，有利于延長(zhǎng)藥物的治療時(shí)間。2)本發(fā)明提供的脂質(zhì)體凝膠具有較好的質(zhì)量穩(wěn)定性。3)本發(fā)明提供的脂質(zhì)體凝膠具有更好的安全性，能夠減少皮膚刺激反應(yīng)的發(fā)生率。4)本發(fā)明提供的脂質(zhì)體凝膠具有更好的抗炎、抗?jié)B出效果。具體實(shí)施方式以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地說明。實(shí)施例1原料處方：制備工藝：1)脂質(zhì)體的制備：取七葉皂苷a6.8g、七葉皂苷b4.3g、大豆磷脂20g和膽固醇5g，加入無水乙醇50g，60℃攪拌使溶解，將所得的乙醇溶液通過蠕動(dòng)泵以15ml/min的速度注入到已恒溫至60℃的250g純化水中，攪拌30min，制成脂質(zhì)體混懸液；然后將脂質(zhì)體混懸液置于脂質(zhì)體擠出儀中，依次經(jīng)過孔徑為200nm和100nm的pc濾膜各擠出4次,得到擠出液305g；最后采用膜透析的方法，先向擠出液中加入200g純化水稀釋，再透析3次，以除去擠出液中的乙醇，得七葉皂苷a、b脂質(zhì)體414g；按照文獻(xiàn)方法檢測(cè)脂質(zhì)體的包封率和粒徑，包封率為87％，平均粒徑為310nm。2)凝膠劑的制備：取卡波姆8g，加入400g純化水，40℃條件下攪拌使充分溶脹，得到濃度為2％的卡波姆溶液，然后向卡波姆溶液中加入三乙醇胺8g、薄荷腦20g、edta·2na0.1g，攪拌均勻，制得空白凝膠基質(zhì)436g；最后將含七葉皂苷a、b的脂質(zhì)體414g加入到空白凝膠劑基質(zhì)436g中，邊加邊攪拌直至均勻混合，即得七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠850g。經(jīng)計(jì)算，所述七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠中，各成分的理論含量為：實(shí)施例2原料處方：制備工藝：1)脂質(zhì)體的制備：取七葉皂苷a14g、七葉皂苷b4g、大豆磷脂25g和膽固醇10g，加入無水乙醇100g，60℃攪拌使溶解，將所得的乙醇溶液通過蠕動(dòng)泵以25ml/min的速度注入到已恒溫至60℃的300g純化水中，攪拌30min，制成脂質(zhì)體混懸液；然后將脂質(zhì)體混懸液置于脂質(zhì)體擠出儀中，依次經(jīng)過孔徑為200nm和100nm的pc濾膜各擠出4次,得到擠出液370g；最后采用膜透析的方法，先向擠出液中加入300g純化水稀釋，再透析3次，以除去擠出液中的乙醇，得七葉皂苷a、b脂質(zhì)體505g；按照文獻(xiàn)方法檢測(cè)脂質(zhì)體的包封率和粒徑，包封率為83％，平均粒徑為390nm。2)凝膠劑的制備：取卡波姆5g，加入400g純化水，40℃條件下攪拌使充分溶脹，得到濃度為1.25％的卡波姆溶液，然后向卡波姆溶液中加入三乙醇胺5g、薄荷腦15g、edta·2na0.2g，攪拌均勻，制得空白凝膠基質(zhì)425g；最后將含七葉皂苷a、b的脂質(zhì)體505g加入到空白凝膠劑基質(zhì)425g中，邊加邊攪拌直至均勻混合，即得七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠930g。經(jīng)計(jì)算，所述七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠中，各成分的理論含量為：實(shí)施例3原料處方：制備工藝：1)脂質(zhì)體的制備：取七葉皂苷a3.2g、七葉皂苷b5.2g、大豆磷脂15g和膽固醇4g，加入無水乙醇30g，60℃攪拌使溶解，將所得的乙醇溶液通過蠕動(dòng)泵以5ml/min的速度注入到已恒溫至60℃的180g純化水中，攪拌30min，制成脂質(zhì)體混懸液；然后將脂質(zhì)體混懸液置于脂質(zhì)體擠出儀中，依次經(jīng)過孔徑為200nm和100nm的pc濾膜各擠出4次,得到擠出液195g；最后采用膜透析的方法，先向擠出液中加入150g純化水稀釋，再透析3次，以除去擠出液中的乙醇，得七葉皂苷a、b脂質(zhì)體320g；按照文獻(xiàn)方法檢測(cè)脂質(zhì)體的包封率和粒徑，包封率為85％，平均粒徑為430nm。2)凝膠劑的制備：取卡波姆7.5g，加入300g純化水，40℃條件下攪拌使充分溶脹，得到濃度為2.5％的卡波姆溶液，然后向卡波姆溶液中加入三乙醇胺6g、薄荷腦10g、edta·2na0.1g，攪拌均勻，制得空白凝膠基質(zhì)323g；最后將含七葉皂苷a、b的脂質(zhì)體320g加入到空白凝膠劑基質(zhì)323g中，邊加邊攪拌直至均勻混合，即得七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠643g。經(jīng)計(jì)算，所述七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠中，各成分的理論含量為：實(shí)施例4原料處方：制備工藝：1)脂質(zhì)體的制備：取七葉皂苷a9.3g、七葉皂苷b4.6g、大豆磷脂16g和膽固醇9.6g，加入無水乙醇80g，60℃攪拌使溶解，將所得的乙醇溶液通過蠕動(dòng)泵以15ml/min的速度注入到已恒溫至60℃的250g純化水中，攪拌30min，制成脂質(zhì)體混懸液；然后將脂質(zhì)體混懸液置于脂質(zhì)體擠出儀中，依次經(jīng)過孔徑為200nm和100nm的pc濾膜各擠出4次,得到擠出液315g；最后采用膜透析的方法，先向擠出液中加入180g純化水稀釋，再透析3次，以除去擠出液中的乙醇，得七葉皂苷a、b脂質(zhì)體380g；按照文獻(xiàn)方法檢測(cè)脂質(zhì)體的包封率和粒徑，包封率為86％，平均粒徑為340nm。2)凝膠劑的制備：取卡波姆6.4g，加入360g純化水，40℃條件下攪拌使充分溶脹，得到濃度為1.8％的卡波姆溶液，然后向卡波姆溶液中加入三乙醇胺6.4g、薄荷腦24g、edta·2na0.16g，攪拌均勻，制得空白凝膠基質(zhì)396g；最后將含七葉皂苷a、b的脂質(zhì)體380g加入到空白凝膠劑基質(zhì)396g中，邊加邊攪拌直至均勻混合，即得七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠776g。經(jīng)計(jì)算，所述七葉皂苷a、b脂質(zhì)體凝膠中，各成分的理論含量為：試驗(yàn)例1.透皮吸收實(shí)驗(yàn)取sd大鼠，采用10％na2s水溶液褪除背部毛，次日斷頸處死，立即剪下背部皮膚，剔除皮下組織和脂肪，生理鹽水反復(fù)沖洗干凈后，剪成適當(dāng)大小，檢查皮膚完整性。采用改良franz立式雙室擴(kuò)散池(有效面積為2.9cm2)，將處理好的大鼠皮膚固定于擴(kuò)散池的兩室之間，角質(zhì)層面向供給室。將實(shí)施例1～4制備的七葉皂苷ab脂質(zhì)體凝膠和對(duì)照藥(按常規(guī)方法制得的七葉皂苷ab凝膠)精密取0.5ml置于供給室，向接收室中加入7ml接收液，接收液為pbs緩沖液(0.01m，ph7.4)。設(shè)定恒溫水浴為32℃，以150r/min磁力攪拌。分別于0.5、1、2、4、6、8、12、24h取0.5ml接收液，同時(shí)補(bǔ)充0.5mlpbs緩沖液，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，取20μl進(jìn)樣測(cè)定七葉皂苷a、b峰面積，計(jì)算藥物濃度。hplc色譜條件如下：固定相為ultimatec18(5μm，4.6×250mm)，流動(dòng)相為乙腈：0.55％磷酸水溶液(38：62)，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，流速1ml/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量20μl。體外透皮實(shí)驗(yàn)顯示：七葉皂苷a、b普通凝膠在4小時(shí)的累積透過率分別為a31％、b27％，而且隨著時(shí)間延長(zhǎng)a、b的透過率變化不大，12小時(shí)的累積透過率分別為a34％、b32％；實(shí)施例1的脂質(zhì)體凝膠在4小時(shí)的累積透過率分別為a27％、b24％，隨后逐漸增加，12小時(shí)的累積透過率分別為a43％、b39％；實(shí)施例2的脂質(zhì)體凝膠在4小時(shí)的累積透過率分別為a29％、b25％，隨后逐漸增加，12小時(shí)的累積透過率分別為a38％、b34％；實(shí)施例3的脂質(zhì)體凝膠在4小時(shí)的累積透過率分別為a25％、b22％，隨后逐漸增加，12小時(shí)的累積透過率分別為a36％、b34％；實(shí)施例4的脂質(zhì)體凝膠在4小時(shí)的累積透過率分別為a30％、b25％，隨后逐漸增加，12小時(shí)的累積透過率分別為a41％、b36％。從以上結(jié)果可以看出，本發(fā)明不僅可以提高七葉皂苷a、b的透皮吸收效果，總透過率均明顯高于七葉皂苷ab普通凝膠，而且具有緩控釋作用，能夠以一定速率緩慢釋放，從而在皮膚內(nèi)形成恒定的血藥濃度，有利于延長(zhǎng)藥物的治療時(shí)間。2.穩(wěn)定性試驗(yàn)參考藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，將藥物置稱量瓶中，攤成≤5mm厚的薄層，開展了本發(fā)明的高溫、高濕和強(qiáng)光的穩(wěn)定性試驗(yàn)研究，以下為具體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(1)高溫試驗(yàn)供試品置密封潔凈容器中，在60℃條件下放置10天，于0、5、10天取樣檢測(cè)。表1高溫試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果(2)高濕試驗(yàn)供試品置恒濕設(shè)備中，于25℃、rh92.5％±5％條件下放置10天，在0、5、10天取樣檢測(cè)。表2高濕試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果(3)強(qiáng)光照射試驗(yàn)供試品置裝有日光燈的光照箱或其它適宜的光照容器內(nèi)，于照度為4500lx±500lx條件下放置10天，在0、5、10天取樣檢測(cè)。表3強(qiáng)光試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果3.皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)取健康家兔(2.0±0.2kg)20只，隨機(jī)分為5組，每組雌雄各半，考察實(shí)施例1～4制備的脂質(zhì)體凝膠和按常規(guī)方法制備的七葉皂苷a、b普通凝膠的皮膚刺激性。于給藥前24h，用10％硫化鈉溶液將動(dòng)物脊柱兩側(cè)毛脫掉，每側(cè)去毛范圍約3cm×3cm，不可損傷表皮。試驗(yàn)采用同體左右側(cè)自身對(duì)照法。左、右側(cè)去毛區(qū)分別給予脂質(zhì)體凝膠和水。每天2次，連續(xù)給藥一周，于第8天用溫水洗去殘留受試藥物。分別于去除藥物后1、6、12、24h觀察給藥部位有無紅斑及水腫情況，無紅斑或水腫定為0級(jí)，有紅斑或水腫則按由輕到重定為1-4級(jí)。表4家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n＝5)從以上試驗(yàn)可以看出，本發(fā)明皮膚刺激反應(yīng)發(fā)生率較低，僅有輕度紅斑或水腫出現(xiàn)，且停藥后能在24小時(shí)內(nèi)完全消除，不影響治療，而七葉皂苷a、b普通凝膠的皮膚刺激反應(yīng)發(fā)生率較高，且癥狀更為嚴(yán)重，好轉(zhuǎn)較慢，24小時(shí)仍各有1例有輕微紅斑和水腫，說明本發(fā)明的安全性比普通凝膠更好。4.抗腫脹/抗?jié)B出試驗(yàn)采用小鼠耳腫脹模型，設(shè)空白組、七葉皂苷ab脂質(zhì)體凝膠組、七葉皂苷ab普通凝膠組、七葉皂苷鈉普通凝膠組，每組10只動(dòng)物，涂藥后測(cè)定腫脹度，結(jié)果見表5。表5抗腫脹作用試驗(yàn)結(jié)果將3、4組進(jìn)行比較，結(jié)果表明，七葉皂苷ab和七葉皂苷鈉均能降低小鼠耳腫脹模型的腫脹度，兩組結(jié)果沒有顯著性差異，表明采用七葉皂苷ab進(jìn)行抗炎治療的方案可行。將2、3組進(jìn)行比較，結(jié)果表明，七葉皂苷ab脂質(zhì)體凝膠的抗腫脹能力明顯優(yōu)于七葉皂苷ab普通凝膠，二者有顯著差異(p<0.05)。采用對(duì)大鼠急性巴豆油肉芽腫的影響的動(dòng)物模型，設(shè)空白組、七葉皂苷ab脂質(zhì)體凝膠組、七葉皂苷ab普通凝膠組、七葉皂苷鈉普通凝膠組，每組10只動(dòng)物，涂藥后測(cè)定滲出量，結(jié)果見表6。表6抗?jié)B出作用試驗(yàn)結(jié)果組別劑量急性滲出量(ml)1陰性對(duì)照組/6.69±3.522七葉皂苷ab脂質(zhì)體凝膠組5mg/kg3.56±2.103七葉皂苷ab普通凝膠組5mg/kg4.86±2.214七葉皂苷鈉普通凝膠組5mg/kg4.31±2.14結(jié)果表明，七葉皂苷ab和七葉皂苷鈉均能降低小鼠耳腫脹模型的滲出量且二者沒有顯著差異；七葉皂苷ab脂質(zhì)體凝膠的抗?jié)B出能力明顯優(yōu)于七葉皂苷ab普通凝膠，二者有顯著差異(p<0.05)。當(dāng)前第1頁(yè)12