一種抗菌用三氯生脂質(zhì)體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物制劑和抗菌材料技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種載抗菌型藥物脂質(zhì)體，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種抗菌用三氯生脂質(zhì)體及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]三氯生，學(xué)名稱作“二氯苯氧氯酸”，化學(xué)分子式為C12H7C1302，是一種廣譜型的高效抗菌劑，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌、酵母及病毒均有殺滅和抑制作用，被廣泛應(yīng)用于肥皂、牙膏等日用化學(xué)品之中。但是，三氯生是疏水性抗菌劑且在水基質(zhì)中容易聚集而失去活性，從而導(dǎo)致生物利用率降低，限制了其應(yīng)用范圍。因此，如何將疏水的三氯生均勻分散到親水性基質(zhì)中，是三氯生在實(shí)際應(yīng)用中面臨的難題。目前以三氯生為主要活性成分的產(chǎn)品多是通過(guò)添加乙二醇、甘油等有機(jī)溶劑增加其溶解性，仍難以解決提高其穩(wěn)定性和持久作用的目的，而且乙二醇等添加劑也容易產(chǎn)生神經(jīng)毒性，不利于三氯生水系抗菌產(chǎn)品的廣泛應(yīng)用。
[0003]脂質(zhì)體(liposome)是英國(guó)學(xué)者Bangham和Standish于1965年發(fā)現(xiàn)的，并很快被應(yīng)用于藥物載體領(lǐng)域。脂質(zhì)體由磷脂及附加劑組成，磷脂為兩性物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)上有親水及親油基團(tuán)，常用的有蛋黃磷脂、大豆磷脂等。構(gòu)成雙分子層的類脂的親水性的首部形成膜的內(nèi)外表面，而親脂性的尾端部分處于膜的中間，膜壁厚度約為5?7nm，而囊的直徑一般在25?50nm之間。脂質(zhì)體的這種結(jié)構(gòu)使其能夠攜帶各種親水或疏水性物質(zhì)，特別是可以用于裝載疏水性藥物以提高藥物在水體系中的分散性和活性。同時(shí)，脂質(zhì)體與生物膜結(jié)構(gòu)相似，能與細(xì)胞膜有較強(qiáng)的親和力，可以增強(qiáng)活性物的通透能力，提高療效，通過(guò)改變脂質(zhì)體的大小甚至可以控制其在組織內(nèi)的分布。因此，將水不溶性抗菌藥物三氯生包封成脂質(zhì)體，可以極大地提高其水溶液中的有效濃度，延長(zhǎng)作用時(shí)間，有望使三氯生水性抗菌產(chǎn)品的應(yīng)用得到廣泛擴(kuò)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)目前抗菌劑三氯生自身存在的難溶性，不利于其抗菌產(chǎn)品的廣泛使用，提供一種產(chǎn)品質(zhì)量高，粒徑均勻，產(chǎn)品穩(wěn)定性好，載藥量高的抗菌用三氯生脂質(zhì)體材料，同時(shí)提供一種方法簡(jiǎn)單，易于生成，成本較低的制備該抗菌用三氯生材料的方法。
[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0006]本發(fā)明所述的抗菌用三氯生脂質(zhì)體，它的組分包括三氯生、磷脂、膽固醇，各組分的重量份配比為三氯生6.2?15.3份、磷脂78.5?82.5份、膽固醇4.7?11.5份。作為優(yōu)選，所述各組分的重量份配比為三氯生9.2份、磷脂82.5份、膽固醇8.3份。
[0007]在所述三氯生脂質(zhì)體中，三氯生為抗菌藥物活性成分，磷脂和膽固醇為構(gòu)成脂質(zhì)體膜結(jié)構(gòu)的基本成分。
[0008]本發(fā)明所述的三氯生脂質(zhì)體屬于小單室脂質(zhì)體，是以磷脂和膽固醇為膜材構(gòu)成單室的雙層脂質(zhì)膜的封閉囊泡，膽固醇分布在脂質(zhì)膜雙分子層的內(nèi)部，三氯生同樣被包埋在脂質(zhì)膜的雙分子層中間。
[0009]該脂質(zhì)體的抗菌藥物活性成分三氯生包埋在脂質(zhì)體中，有效提高了三氯生在水中的有效濃度，并且結(jié)合脂質(zhì)體與細(xì)胞膜的較強(qiáng)親和力優(yōu)勢(shì)，提高三氯生的生物利用效率。當(dāng)脂質(zhì)體在水溶液中與細(xì)菌接觸時(shí)，脂質(zhì)體膜可以與細(xì)菌相結(jié)合，持續(xù)釋放抗菌活性成分三氯生，起到殺死細(xì)菌的效果，因此該三氯生脂質(zhì)體具有較好的抗菌性能。
[0010]作為對(duì)本發(fā)明的限定，所述磷脂為天然蛋黃磷脂、天然大豆磷脂或氫化大豆磷脂。優(yōu)選地，考慮到脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，所述磷脂為氫化大豆磷脂。氫化大豆磷脂由天然的大豆磷脂經(jīng)化學(xué)加氫而得，因此具有更高的相變溫度和穩(wěn)定性，因此制得的脂質(zhì)體也更加穩(wěn)定。
[0011]本發(fā)明所述抗菌用三氯生脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟:
[0012](1)按比例分別稱取三氯生、磷脂、膽固醇，充分溶解于乙醇中配制成混合溶液；
[0013]在步驟(1)中所述的混合溶液中，磷脂的濃度為1.25?5mg/mL。當(dāng)磷脂的濃度小于1.25mg/mL時(shí)，磷脂含量低導(dǎo)致脂質(zhì)體的藥物裝載能力低；當(dāng)磷脂濃度大于5mg/mL時(shí)，所得脂質(zhì)體形態(tài)不好、穩(wěn)定性差。優(yōu)選地，混合溶液中磷脂的濃度為2.5mg/mL。
[0014]在步驟(1)中所述的混合溶液中，磷脂、膽固醇與三氯生的重量份配比為1:0.06?
0.14:0.1?0.4。當(dāng)膽固醇比例過(guò)低時(shí)，會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)雙層的流動(dòng)性降低，影響脂質(zhì)雙分子層的穩(wěn)定性；當(dāng)膽固醇比例過(guò)高時(shí)，膽固醇會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合磷脂的親脂性區(qū)域，導(dǎo)致脂質(zhì)體的載藥率降低，并會(huì)使磷脂的脂肪酸鏈僵化，同樣影響脂質(zhì)體膜的穩(wěn)定性。當(dāng)三氯生的比例過(guò)低時(shí)，脂質(zhì)體的載藥率不高，藥物有效濃度低，實(shí)用意義不大；當(dāng)三氯生的濃度過(guò)高時(shí)，所得脂質(zhì)體的親水性下降，其水溶液的穩(wěn)定性較差。優(yōu)選地，混合溶液中磷脂、膽固醇與三氯生的質(zhì)量配比為1:0.1:0.2。
[0015](2)將步驟(1)中所述的磷脂、膽固醇、三氯生的混合乙醇溶液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，緩慢除去乙醇，在瓶底形成乳白色薄膜；
[0016]所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的旋轉(zhuǎn)速度為60?100轉(zhuǎn)/min，旋轉(zhuǎn)時(shí)間為30min?lh，水浴溫度為40?60°C。當(dāng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的旋轉(zhuǎn)速度低于60轉(zhuǎn)/min時(shí)，形成的脂質(zhì)膜較厚；當(dāng)旋轉(zhuǎn)速度高于100轉(zhuǎn)/min時(shí)，形成的脂質(zhì)膜不均勻，均影響生成脂質(zhì)體的均勻性。水浴溫度低于40°C時(shí)，達(dá)不到氫化大豆磷脂的相變溫度，無(wú)法成膜;水溶溫度高于60°C時(shí)，乙醇溶液容易暴沸影響成膜。優(yōu)選地，所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的旋轉(zhuǎn)速度為80轉(zhuǎn)/min，旋轉(zhuǎn)時(shí)間為45min，水浴溫度55°C。
[0017](3)將純水或磷酸鈉緩沖溶液加入到燒瓶中，在搖床上振蕩，得到脂質(zhì)體混懸液；
[0018]磷酸鈉緩沖溶液的濃度為0.01mol/L，pH為7.4，作為水合介質(zhì)。
[0019]所述步驟(3)中的振蕩時(shí)間為25?40min，可以使薄膜充分溶脹水合。脂質(zhì)發(fā)生溶脹并被一層層洗脫，大多數(shù)形成了多層脂質(zhì)體。優(yōu)選地，所述振蕩時(shí)間為30min。
[0020](4)對(duì)步驟(3)中得到的脂質(zhì)體混懸液在冰水浴中進(jìn)行探頭超聲，形成透明液體；過(guò)濾，收集濾液，得到抗菌用三氯生脂質(zhì)體的水溶液。
[0021 ] 所述探頭超聲的方法為:設(shè)置功率為80?120W;采用循環(huán)超聲，每次超聲0.6?Is，間隔0.6?0.8s，超聲時(shí)間10?30min，在冰水浴中進(jìn)行。本發(fā)明采用探頭式超聲方法，將粒徑較大的多層脂質(zhì)體進(jìn)一步分散為粒徑較小的單層脂質(zhì)體，使得到的脂質(zhì)體粒徑較小且較均一，通過(guò)冰水浴的降溫防止超聲過(guò)程中熱量聚集導(dǎo)致磷脂氧化。優(yōu)選地，所述探頭超聲的方法為:設(shè)置功率為100W;采用循環(huán)超聲，每次超聲0.8s，間隔0.8s，超聲時(shí)間20min。
[0022]所述步驟(4)中采用0.22μπι孔徑的一次性無(wú)菌針式過(guò)濾器過(guò)濾除菌。既可以控制粒徑，提高均一性，又可以通過(guò)過(guò)濾去除溶液中的細(xì)菌，達(dá)到除菌的效果，便于實(shí)際應(yīng)用。
[0023]通過(guò)紫外可見(jiàn)吸收光譜計(jì)算可以得到，本發(fā)明得到的三氯生脂質(zhì)體中，三氯生的有效裝載率6.2?15.3%，在水溶液中三氯生的有效濃度可以達(dá)到0.12?0.3mg/mL，有效改善了三氯生的水溶性，進(jìn)而可以使其在水系抗菌產(chǎn)品中的應(yīng)用范圍更加廣泛。
[0024]將本發(fā)明得到的抗菌用三氯生脂質(zhì)體用于制備深層抗菌型皮膚藥劑，具有抗菌作用的織物類醫(yī)療器械或其他產(chǎn)品以及在水性抗菌材料中的應(yīng)用。
[0025]其中優(yōu)選地，上述三氯生脂質(zhì)體可以用于針對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌等多種抗菌型藥劑、織物和水性抗菌材料中的應(yīng)用。
[0026]采用上述技術(shù)方案后，本發(fā)明得到的有益效果是:本發(fā)明所述脂質(zhì)體采用三氯生、磷脂、膽固醇為原料，并調(diào)節(jié)各原料的重量份配比，將抗菌活性成分三氯生包埋在脂質(zhì)體中，藥物產(chǎn)品質(zhì)量高，粒徑均勻，穩(wěn)定性好，載藥量高，有效提高了藥物在水中的有效濃度，具有細(xì)胞膜親和性，可通過(guò)融合進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，釋放活性藥物，提高了藥物的抗菌效果。同時(shí)，本發(fā)明所述三氯生脂質(zhì)體的制備方法提高了產(chǎn)品質(zhì)量，載藥量大，且方法簡(jiǎn)單，易于生成，成本較低。
【附圖說(shuō)明】
[0027]圖1為三氯生脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)示意圖，磷脂與膽固醇組成脂質(zhì)體雙分子膜結(jié)構(gòu)，三氯生分子被包埋在磷脂的雙分子層中間。1是整體結(jié)構(gòu)模型圖，2表示磷脂的疏水鏈，3表示磷脂的親水端，4表示膽固醇，5表示三氯生。
[0028]圖2為通過(guò)實(shí)施例3制備的三氯生脂質(zhì)體的粒徑分布圖，脂質(zhì)體具有較均一的尺寸，平均粒徑為52nm，為小單層脂質(zhì)體。
[0029]圖3為通過(guò)實(shí)施例3制備的三氯生脂質(zhì)體溶液的紫外可見(jiàn)吸收光譜圖，由三氯生在280nm位置處的特征吸收峰可通過(guò)其標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得三氯生的裝載率為9.2%。
[0030]圖4為通過(guò)實(shí)施例3制備的三氯生脂質(zhì)體的抗菌效果:2_a為對(duì)照組；2-b為三氯生脂質(zhì)體組，菌液中三氯生有效濃度為10yg/mL。測(cè)試細(xì)菌為大腸桿菌。
【具體實(shí)施方式】
[0031]為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】做詳細(xì)的說(shuō)明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來(lái)實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開(kāi)的具體實(shí)施的限制。
[0032]下面為具體實(shí)施例部分。
[0033]實(shí)施例1
[0034]按比例分別稱取天然蛋黃磷脂、膽固醇、三氯生，加入一定量乙醇中，充分溶解得到混合乙醇溶液，其中磷脂濃度為3.5mg/mL，磷脂、膽固醇與三氯生的質(zhì)量配比為1:0.1:
0.13ο
[0035]將上述磷脂、膽固醇