甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種紫杉醇脂質(zhì)體的合成方法。
【背景技術(shù)】
[0002]脂質(zhì)體(liposome)是一種新型藥物載體，可將難溶性紫杉醇包封在脂質(zhì)體磷脂雙分子層中，改善藥物的溶解性。紫杉醇是從紫杉(紅豆杉)屬植物中提取出的二萜類(lèi)化合物，是近年來(lái)廣泛應(yīng)用的抗腫瘤新藥。然而紫杉醇存在水溶性差的缺點(diǎn)，給它的使用帶來(lái)了不便，尤其靜脈給藥。而且應(yīng)用脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物的載體，可明顯地增加藥物療效、降低毒副作用。但是，作為藥物載體，脂質(zhì)體也存在一些問(wèn)題，如對(duì)組織器官特異性差、選擇性低等。在脂質(zhì)體上連接一種識(shí)別分子(配體)，利用配體分子的特異性和專(zhuān)一性，通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用主動(dòng)靶向藥物至靶區(qū)釋放藥物，可增加藥物靶向的特異性和選擇性，減少對(duì)非祀組織器官損傷，進(jìn)一步提高療效。甘草酸(glycyrrhizin, GL)是甘草的主要成分之一，Negishi在20世紀(jì)90年代初證實(shí)了大鼠肝細(xì)胞膜庫(kù)索細(xì)胞組分中含有大量甘草酸特異結(jié)合位點(diǎn)，甘草酸與該位點(diǎn)的結(jié)合呈受體特有的可飽和性、高度特異性，一些研究結(jié)果也表明以甘草次酸或甘草酸修飾的載體材料具有趨肝性，國(guó)內(nèi)也有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道用甘草酸作為肝靶向配體來(lái)修飾藥物載體，以提高藥物對(duì)肝臟的靶向性。由此本文擬采取甘草酸在卞基二環(huán)己基碳異脲保護(hù)其糖基上的游離羧基條件下與硬脂醇發(fā)生酯化反應(yīng)，最后氫化脫保護(hù)合成甘草酸的脂肪長(zhǎng)鏈修飾物(GL0ST)，將其作為脂質(zhì)體配體，對(duì)紫杉醇脂質(zhì)體進(jìn)行表面修飾。
[0003]現(xiàn)有的甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法步驟復(fù)雜，效率低且對(duì)環(huán)境造成污染。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明就是針對(duì)上述問(wèn)題，提供一種操作簡(jiǎn)單，效率高且環(huán)境友好的一種甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。
[0006]甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法，包括下步驟。
[0007](1)在冰水浴冷卻下，向GL與DM的混合溶液中滴加卞基二環(huán)己基異脲與DMF的混合溶液，反應(yīng)液在冰水浴冷卻下攪拌過(guò)夜，生成白色沉淀，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液減壓濃縮。經(jīng)硅膠柱層析，得純化產(chǎn)物6，6- 二卞基甘草酸。將硬脂醇與二環(huán)己基烴化二亞胺的混合物在CuCl催化下于85°C攪拌2小時(shí)，向混合物中滴加二卞基甘草酸與DMF的混合液，反應(yīng)液于50°C攪拌3小時(shí)。過(guò)濾，濾餅用乙酸乙酯潤(rùn)洗，濾液合并，真空干燥得粗品，經(jīng)硅膠柱層析純化得化合物-二卞基-30-硬酯醇基甘草酸，將二卞基-硬酯醇基甘草酸與異丙醇-乙酸乙酯的混合液在5%Pd-C催化下常壓氫解，反應(yīng)完畢后，過(guò)濾，濾液真空干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物GLOSTo
[0008](2)稱(chēng)取紫杉醇60mg溶于適量磷酸緩沖液，另取注射用豆磷脂1.8g、膽固醇0.6g及適量的磷脂酰甘油、水溶性維生素E溶于5mL乙醇中，置250mL茄形瓶中，待完全溶解后，65°C旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀減壓蒸餾除去乙醇，在瓶壁上形成均勻的類(lèi)脂薄膜。帶膜的茄形瓶減壓干燥8小時(shí)，加70mL磷酸緩沖液溶解，將GLOST適量(用無(wú)水乙醇溶解)注入其中，探頭超聲水合20min，過(guò)0.22lMn濾膜2次，高壓均質(zhì)二次，即得甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體。
[0009](3)精密吸取樣品液0.05mL,上葡聚糖凝50色譜柱，以蒸餾水為洗脫液，每份收集2mL,收集30份，加脂質(zhì)體消解液4mL，搖勻、離心，吸取20μ?注入液相色譜，計(jì)算峰面積，繪制洗脫曲線(xiàn)。1 一 6mL是空白洗脫液，7-20mL有乳光帶的是脂質(zhì)體部分，26-32mL是游離藥物，脂質(zhì)體與藥物能夠完全分離，取三批樣品，上柱分離，收集前20mL洗脫液測(cè)定PTX含量，脂質(zhì)體包封率=系統(tǒng)中包封藥量/系統(tǒng)中包封與未包封總藥量X 100%，測(cè)定包封率均值為
86.12%ο
[0010](4)取GL0ST-PTX脂質(zhì)體適量，置透析袋中，懸置于盛50mL釋放介質(zhì)的具塞錐形瓶中，密塞，置37 °C水浴恒溫振蕩，定時(shí)取樣，測(cè)定PTX含量，以藥物累積釋放度對(duì)時(shí)間線(xiàn)性擬合。
[0011 ] 作為一種優(yōu)選方案，標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備取紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇配成濃度為1.0mg.mL的溶液，即得。
[0012]本發(fā)明有益效果。
[0013]本發(fā)明本文通過(guò)采用化學(xué)法合成甘草酸修的脂肪長(zhǎng)鏈飾物(GL0ST)，再用GL0ST的對(duì)紫杉醇脂質(zhì)體進(jìn)行表面修飾，制備對(duì)肝臟具有靶向效應(yīng)GL0ST-PTX脂質(zhì)體。用GL0ST對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行修飾，一定程度上會(huì)增加脂質(zhì)體的粒徑。肝竇狀隙的平均孔徑約為106nm，最大可達(dá)200?300 nm。采用薄膜分散法制備甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體，粒徑達(dá)到(105.2±23.5)nm, 90%粒子粒徑<150nm。因此，所得的GL0ST-PTX脂質(zhì)體能透過(guò)肝竇狀隙，利用葡聚糖凝膠柱和高效液相色譜檢測(cè)脂質(zhì)體的包封率。是一種效果好且操作簡(jiǎn)單的甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法。
【具體實(shí)施方式】
[0014]甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法，包括下步驟。
[0015](1)在冰水浴冷卻下，向GL與DM的混合溶液中滴加卞基二環(huán)己基異脲與DMF的混合溶液，反應(yīng)液在冰水浴冷卻下攪拌過(guò)夜，生成白色沉淀，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液減壓濃縮。經(jīng)硅膠柱層析，得純化產(chǎn)物6，6- 二卞基甘草酸。將硬脂醇與二環(huán)己基烴化二亞胺的混合物在CuCl催化下于85°C攪拌2小時(shí)，向混合物中滴加二卞基甘草酸與DMF的混合液，反應(yīng)液于50°C攪拌3小時(shí)。過(guò)濾，濾餅用乙酸乙酯潤(rùn)洗，濾液合并，真空干燥得粗品，經(jīng)硅膠柱層析純化得化合物-二卞基-30-硬酯醇基甘草酸，將二卞基-硬酯醇基甘草酸與異丙醇-乙酸乙酯的混合液在5%Pd-C催化下常壓氫解，反應(yīng)完畢后，過(guò)濾，濾液真空干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物GLOSTo
[0016](2)稱(chēng)取紫杉醇60mg溶于適量磷酸緩沖液(PH=5.6)，另取注射用豆磷脂1.8g、膽固醇0.6g及適量的磷脂酰甘油、水溶性維生素E溶于5mL乙醇中，置250mL茄形瓶中，待完全溶解后，65°C旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀減壓蒸餾除去乙醇，在瓶壁上形成均勻的類(lèi)脂薄膜。帶膜的茄形瓶減壓干燥8小時(shí)，加70mL磷酸緩沖液溶解，將GL0ST適量注入其中，探頭超聲水合20min,過(guò)0.22lMn濾膜2次，高壓均質(zhì)二次，即得甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體。
[0017](3)精密吸取樣品液0.05mL，上葡聚糖凝50色譜柱，以蒸餾水為洗脫液，每份收集2mL,收集30份，加脂質(zhì)體消解液4mL，搖勻、離心，吸取20μ?注入液相色譜，計(jì)算峰面積，繪制洗脫曲線(xiàn)。1 一 6mL是空白洗脫液，7-20mL有乳光帶的是脂質(zhì)體部分，26-32mL是游離藥物，脂質(zhì)體與藥物能夠完全分離，取三批樣品，上柱分離，收集前20mL洗脫液測(cè)定PTX含量，脂質(zhì)體包封率=系統(tǒng)中包封藥量/系統(tǒng)中包封與未包封總藥量X 100%，測(cè)定包封率均值為
86.12%ο
[0018](4)取GL0ST-PTX脂質(zhì)體適量，置透析袋中，懸置于盛50mL釋放介質(zhì)的具塞錐形瓶中，密塞，置37 °C水浴恒溫振蕩，定時(shí)取樣，測(cè)定PTX含量，以藥物累積釋放度對(duì)時(shí)間線(xiàn)性擬合。
[0019]標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備取紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇配成濃度為1.0mg -mL的溶液，即得。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括下步驟； (1)在冰水浴冷卻下，向GL與DM的混合溶液中滴加卞基二環(huán)己基異脲與DMF的混合溶液，反應(yīng)液在冰水浴冷卻下攪拌過(guò)夜，生成白色沉淀，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液減壓濃縮；經(jīng)硅膠柱層析，得純化產(chǎn)物6，6- 二卞基甘草酸；將硬脂醇與二環(huán)己基烴化二亞胺的混合物在CuCl催化下于85°C攪拌2小時(shí)，向混合物中滴加二卞基甘草酸與DMF的混合液，反應(yīng)液于50°C攪拌3小時(shí)；過(guò)濾，濾餅用乙酸乙酯潤(rùn)洗，濾液合并，真空干燥得粗品，經(jīng)硅膠柱層析純化得化合物-二卞基-30-硬酯醇基甘草酸，將二卞基-硬酯醇基甘草酸與異丙醇-乙酸乙酯的混合液在5%Pd-C催化下常壓氫解，反應(yīng)完畢后，過(guò)濾，濾液真空干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物GLOST ； (2)稱(chēng)取紫杉醇60mg溶于適量磷酸緩沖液，另取注射用豆磷脂1.8g、膽固醇0.6g及適量的磷脂酰甘油、水溶性維生素E溶于5mL乙醇中，置250mL茄形瓶中，待完全溶解后，65°C旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀減壓蒸餾除去乙醇，在瓶壁上形成均勻的類(lèi)脂薄膜；帶膜的茄形瓶減壓干燥8小時(shí)，加70mL磷酸緩沖液溶解，將GLOST適量(用無(wú)水乙醇溶解)注入其中，探頭超聲水合20min，過(guò)0.22lMn濾膜2次，高壓均質(zhì)二次，即得甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體； (3)精密吸取樣品液0.05mL,上葡聚糖凝50色譜柱，以蒸餾水為洗脫液，每份收集2mL，收集30份，加脂質(zhì)體消解液4mL，搖勻、離心，吸取20μ?注入液相色譜，計(jì)算峰面積，繪制洗脫曲線(xiàn)；1 - 6mL是空白洗脫液，7-20mL有乳光帶的是脂質(zhì)體部分，26-32mL是游離藥物，脂質(zhì)體與藥物能夠完全分離，取三批樣品，上柱分離，收集前20mL洗脫液測(cè)定PTX含量，脂質(zhì)體包封率=系統(tǒng)中包封藥量/系統(tǒng)中包封與未包封總藥量X 100%,測(cè)定包封率均值為86.12% ； (4)取GLOST-PTX脂質(zhì)體適量，置透析袋中，懸置于盛50mL釋放介質(zhì)的具塞錐形瓶中，密塞，置37°C水浴恒溫振蕩，定時(shí)取樣，測(cè)定PTX含量，以藥物累積釋放度對(duì)時(shí)間線(xiàn)性擬合。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備取紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇配成濃度為1.0mg.mL的溶液，即得。
【專(zhuān)利摘要】甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法屬于藥品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種紫杉醇脂質(zhì)體的合成方法。本發(fā)明提供一種操作簡(jiǎn)單，效率高且環(huán)境友好的一種甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法。甘草酸修飾紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法，包括下步驟。（1）在冰水浴冷卻下，向GL與DM的混合溶液中滴加卞基二環(huán)己基異脲與DMF的混合溶液。（2）稱(chēng)取紫杉醇60mg溶于適量磷酸緩沖液，另取注射用豆磷脂1.8g、膽固醇0.6g及適量的磷脂酰甘油、水溶性維生素E溶于5mL乙醇中，（3）精密吸取樣品液0.05mL，上葡聚糖凝50色譜柱，以蒸餾水為洗脫液，每份收集2mL，收集30份。（4）取GLOST-PTX脂質(zhì)體適量，置透析袋中，懸置于盛50mL釋放介質(zhì)的具塞錐形瓶中。
【IPC分類(lèi)】A61K31/337, A61K47/48, A61K9/127, A61P35/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105311644
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410376266
【發(fā)明人】孫仁
【申請(qǐng)人】孫仁
【公開(kāi)日】2016年2月10日
【申請(qǐng)日】2014年8月3日