本發(fā)明屬于保健食品的
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及脂質(zhì)體及脂質(zhì)體的制備方法，關(guān)鍵涉及一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體及其制備方法。通過利用脂質(zhì)體運載蘆筍的活性成分可以延長其在體內(nèi)的循環(huán)時間，使其功能因子的生物學(xué)活性進一步增強。
背景技術(shù)：
：隨著社會的飛速發(fā)展，人們的工作壓力不斷增大，作息不規(guī)律，生活節(jié)奏嚴(yán)重紊亂等一系列外界因素，使大多數(shù)人處于亞健康狀態(tài)，保健品和功能食品便應(yīng)運而生，但由于天然產(chǎn)物中特定的功能因子含量較低，要提高其功效就需要改進其劑型以提高功能因子的生物利用度。納米脂質(zhì)體是目前公認的可提高包載物生物利用度的新型載體系統(tǒng)。目前，國內(nèi)外制備的脂質(zhì)體大多會添加一定的膽固醇以作為脂質(zhì)體的膜材，但高膽固醇會引發(fā)動脈粥樣硬化、冠心病等健康問題，隨著人們追求健康食品的意識越來越強，膽固醇已被限制在食品以及保健品中的應(yīng)用。發(fā)明一種水溶性物質(zhì)的食品級納米載體制備技術(shù)是目前亟待解決的問題。蘆筍又名"荻筍"、"南荻筍"，為百合科植物石刁柏的嫩芽，在國際市場上享有"蔬菜之王"的美稱，蘆筍富含多種氨基酸、蛋白質(zhì)和維生素，其含量均高于一般水果和蔬菜，特別是蘆筍中的天冬酰胺和微量元素硒、鉬、鉻、錳等，具有調(diào)節(jié)機體代謝，提高身體免疫力的功效，在對高血壓、心臟病、白血病、血癌、水腫、膀胱炎等的預(yù)防和治療中，具有很強的抑制作用和藥理效應(yīng)。其中的活性成分蘆筍皂苷具有增強免疫力、降血脂、促進睡眠、保護肝臟、抑制癌細胞增殖、治療骨質(zhì)疏松、抗糖尿病、延緩衰老、清熱瀉火、利水消腫、滋陰降火等功效。但單純服用蘆筍汁，其進入人體后只有少量的被吸收利用，大部分會經(jīng)循環(huán)排出體外，不能有效的發(fā)揮其生物價值。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體及其制備方法，脂質(zhì)體是一種類似于生物膜的雙分子層囊泡，具有良好的生物相容性以及可生物降解的特性。通過將蘆筍提取物包封進脂質(zhì)體內(nèi)，可以延長其在體內(nèi)的循環(huán)時間，提高其功能因子的生物利用度。傳統(tǒng)的脂質(zhì)體的穩(wěn)定性差、緩釋效果不明顯，這些缺點使它的應(yīng)用受到限制，對脂質(zhì)體進行功能修飾，可以進一步提高其穩(wěn)定性，提高功能因子的功效發(fā)揮。本發(fā)明為實現(xiàn)其目的采用的技術(shù)方案是：一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體，按重量份數(shù)計，包括以下組分：豆甾醇4-6份、卵磷脂30-90份、蘆筍水提物5-20份、殼聚糖5-20份。一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體的制備方法，采用薄膜水化法，包括以下步驟：A、按下述重量份數(shù)準(zhǔn)備原料：豆甾醇4-6份、卵磷脂30-90份、蘆筍水提物5-20份、殼聚糖5-20份；B、將豆甾醇，卵磷脂溶解于有機溶劑中，于20℃-70℃，20-70rpm的條件下，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，形成脂相薄膜,過高或過低的溫度影響磷脂和甾醇的物理學(xué)特性，因而影響脂質(zhì)體膜的形成，經(jīng)過長期的創(chuàng)造性研究，總結(jié)出溫度控制在20-70℃；減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的轉(zhuǎn)速是為了控制形成膜的厚度，經(jīng)過長期的創(chuàng)造性研究，總結(jié)出只有在此轉(zhuǎn)速才可以形成所需厚度的膜；C、取蘆筍水提物加入到步驟B中得到的脂相薄膜中，于20℃-60℃，20-70rpm的條件下，旋轉(zhuǎn)水化，形成脂質(zhì)體粗懸液；20℃-60℃范圍可以使磷脂和甾醇形成脂質(zhì)體的物理學(xué)狀態(tài)最適，有利于通過分子自組裝形成所需的特性結(jié)構(gòu)、粒徑和形貌脂質(zhì)體；轉(zhuǎn)速控制是為了控制脂質(zhì)體的形貌和尺寸的控制，過高的轉(zhuǎn)速導(dǎo)致粒徑尺寸會過小，過低的尺寸易出現(xiàn)脂質(zhì)體的融合。D、將步驟C中得到的脂質(zhì)體粗懸液進行震蕩處理，得到蘆筍脂質(zhì)體；E、取殼聚糖溶解于水中，得到殼聚糖溶液；F、將步驟D得到的蘆筍脂質(zhì)體與步驟E得到殼聚糖溶液，按體積比(0.8-1.2)：(0.8-1.2)的比例混合，得到殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體，當(dāng)蘆筍脂質(zhì)體與殼聚糖溶液的體積比大于或小于這個范圍時，無法制備出殼聚糖修飾的脂質(zhì)體，得到的修飾后的脂質(zhì)體穩(wěn)定性差。步驟A中所述的有機溶劑為無水乙醇。步驟B中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的時間為1-4h，經(jīng)過長期的創(chuàng)造性研究，將時間控制在該范圍內(nèi)，有助于產(chǎn)品的穩(wěn)定性。步驟C中旋轉(zhuǎn)水化的時間為1-4h。步驟D中震蕩處理采用超聲波進行超聲處理2-20min。本發(fā)明通過超聲使脂質(zhì)體由多室變成單室，同時使脂質(zhì)體的粒徑變小、分散性更好。步驟E中，殼聚糖溶液的濃度為0.0001-0.01g/mL。將蘆筍脂質(zhì)體與殼聚糖溶液混合后，進行磁力攪拌1-4h。本發(fā)明的有益效果是：1、本發(fā)明制備的脂質(zhì)體采用豆甾醇，在取代了膽固醇的同時，能有效的降低心血管疾病的發(fā)生率。2、制備方法操作簡便，易于控制。3、能實現(xiàn)蘆筍中功能因子的緩釋效果，增加蘆筍中有益的功能因子在體內(nèi)的循環(huán)時間，促進人體的吸收利用，提高生物利用度，提高緩釋和長效作用。4、本發(fā)明蘆筍脂質(zhì)體的脂質(zhì)粒徑為100-250nm。5、本發(fā)明蘆筍脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)為外層由磷脂雙分子層組成的囊膜，內(nèi)部的空腔里包封的蘆筍水提物。附圖說明圖1是本發(fā)明實施例1所得蘆筍脂質(zhì)體透射電子顯微鏡圖。圖2是本發(fā)明實施例2所得蘆筍脂質(zhì)體透射電子顯微鏡圖。圖3是本發(fā)明實施例3所得蘆筍脂質(zhì)體透射電子顯微鏡圖。圖4是本發(fā)明實施例1所得蘆筍脂質(zhì)體zeta電位圖。圖5是本發(fā)明實施例2所得蘆筍脂質(zhì)體zeta電位圖。圖6是本發(fā)明實施例3所得蘆筍脂質(zhì)體zeta電位圖。圖7是本發(fā)明測定前繪制的蘆筍皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖8是實施例1蘆筍脂質(zhì)體粒徑分布圖。圖9是實施例2蘆筍脂質(zhì)體粒徑分布圖。圖10是實施例3蘆筍脂質(zhì)體粒徑分布圖。具體實施方式下面結(jié)合附圖及具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。本發(fā)明所用蘆筍水提物可由現(xiàn)有方法制備，也可以用下述方法制備：取干燥蘆筍莖葉加水于80-100℃提取40-100min，提取次數(shù)1-2次，棄去殘渣，抽濾，合并蘆筍汁，得到蘆筍水提物。其中蘆筍干燥蘆筍莖葉與水的重量比為1：(10-20)。實施例1取4mg豆甾醇(購自上海源葉生物技術(shù)有限公司)，24mg大豆卵磷脂(購自沈陽天峰生物制藥有限公司)，溶解于4mL無水乙醇中，在20℃，20rpm的條件下，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1h去除無水乙醇，形成脂相薄膜。取蘆筍水提物6mL作為水相，加入到脂相薄膜中，在10℃，20rpm的條件下，旋轉(zhuǎn)水化1h形成脂質(zhì)體粗懸液。將得到的粗懸液在冰浴下利用超聲波細胞破碎儀進行超聲(2s/2s，50％W)2min，得到蘆筍脂質(zhì)體。將0.001g的水溶性殼聚糖溶解于10mL無菌水中，攪拌0.5h，得到0.0001g/mL殼聚糖溶液。取1mL的蘆筍脂質(zhì)體與1mL的殼聚糖溶液混合，經(jīng)磁力攪拌0.5h，得到殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體。應(yīng)用透射電子顯微鏡對殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體進行形貌表征，如圖1所示，納米脂質(zhì)體呈球形。利用激光粒度儀檢測殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體帶電荷狀態(tài)，如圖4所示，從圖中可以看出脂質(zhì)體帶正電荷。利用高效液相色譜儀測定殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體的蘆筍皂苷的包封率為83.77％，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖7所示。實施例2取4mg豆甾醇(購自上海源葉生物技術(shù)有限公司)，48mg大豆卵磷脂(購自沈陽天峰生物制藥有限公司)，溶解于7mL無水乙醇中，在45℃，45rpm的條件下，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2.5h去除無水乙醇，形成脂相薄膜。取蘆筍水提物9mL作為水相，加入到脂相薄膜中，在35℃，45rpm的條件下，旋轉(zhuǎn)水化2.5h形成脂質(zhì)體粗懸液。將得到的粗懸液在冰浴下利用超聲波細胞破碎儀超聲(2s/2s，50％W)11min，即得到蘆筍納米脂質(zhì)體。將0.05g的水溶性殼聚糖溶解于10mL無菌水中，溶解4h，得到0.005g/mL殼聚糖溶液。取5mL的蘆筍脂質(zhì)體與5mL的殼聚糖溶液，磁力攪拌混合4h，得到殼聚糖修飾的脂質(zhì)體。應(yīng)用透射電子顯微鏡對殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體進行形貌表征，如圖2所示，納米脂質(zhì)體呈球形。利用激光粒度儀檢測殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體帶電荷狀態(tài)，如圖5所示，從圖中可以看出脂質(zhì)體帶正電荷。利用高效液相色譜儀測定殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體中蘆筍皂苷的包封率為86.54％,標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖7所示。實施例3取4mg豆甾醇(購自上海源葉生物技術(shù)有限公司)，72mg大豆卵磷脂(購自沈陽天峰生物制藥有限公司)，溶解于10mL無水乙醇中，在70℃，70rpm的條件下，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)4h去除無水乙醇，形成脂相薄膜。取蘆筍提取物16mL作為水相，加入到脂相薄膜中，在60℃，70rpm的條件下，旋轉(zhuǎn)水化4h形成脂質(zhì)體粗懸液。將得到的粗懸液在冰浴下超聲波細胞破碎儀超聲(2s/2s，50％W)20min，即得到蘆筍納米脂質(zhì)體。將0.1g的殼聚糖溶解于10mL無菌水中，攪拌8h，得到0.01g/mL殼聚糖溶液。取10mL的蘆筍納米脂質(zhì)體與10mL的殼聚糖溶液，磁力攪拌混合8h，得到殼聚糖修飾的脂質(zhì)體。應(yīng)用透射電子顯微鏡對殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體進行形貌表征，如圖3所示，納米脂質(zhì)體呈球形。利用激光粒度儀檢測殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體帶電荷狀態(tài)，如圖6所示，從圖中可以看出脂質(zhì)體帶正電荷。利用高效液相色譜儀測定殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體的蘆筍皂苷包封率為88.05％，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖7所示。實施例4本發(fā)明殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體的穩(wěn)定性試驗：將已經(jīng)制備好的納米脂質(zhì)體分別放置在4℃和25℃，測定14天中包封率的變化，結(jié)果見表1,表1常溫和4℃下脂質(zhì)體包封率隨時間的變化項目初始包封率1d7d14d常溫的包封率(％)87.385.580.279.84℃包封率(％)89.187.383.780.2根據(jù)上述表1及附圖8-10，可以明顯的看出，本發(fā)明制備的殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體穩(wěn)定性好，圖8可知，平均粒徑為81.00nm，PDI為0.246；圖9平均粒徑為79.36nm，PDI為0.258；圖10平均粒徑為79.73nm，PDI為0.222。由圖8-10可以看出得到的脂質(zhì)體平均粒徑小，分散性良好。本發(fā)明制備的殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體利用高效液相色譜儀測定殼聚糖修飾的蘆筍脂質(zhì)體的蘆筍皂苷的包封率為72.77-90.5％。當(dāng)前第1頁1 2 3