本發(fā)明涉及用于核酸遞送的陽離子脂質(zhì)、包含其的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體及它們的用途。
背景技術(shù)：
：核酸醫(yī)藥品將功能性核酸遞送至細(xì)胞質(zhì)內(nèi)而抑制致病蛋白質(zhì)的表達(dá)，作為新一代的醫(yī)藥品而受到矚目，對其已進(jìn)行了眾多研究。由于功能性核酸有在血中的穩(wěn)定性較低、會(huì)迅速分解的缺點(diǎn)，因此，載體是必要的。作為遞送核酸的載體，可列舉病毒、聚合物膠束、脂質(zhì)體等脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體。雖然病毒載體因?yàn)楸磉_(dá)效率高而最為常用，但具有致病性、抗原性，并且存在諸如難以賦予功能性的缺點(diǎn)。因此，需要安全性更高的非病毒載體的開發(fā)，聚合物膠束、脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體等的研究正在開展。聚合物膠束為由聚乙二醇(以下稱為“peg”)、聚氨基酸等構(gòu)成的載體，但臨床研究的例子仍較少。脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體為由陽離子脂質(zhì)、磷脂等構(gòu)成的載體。其優(yōu)點(diǎn)為易于對構(gòu)成載體的成分的組成進(jìn)行改變、利用結(jié)構(gòu)修飾來賦予功能性。迄今為止已進(jìn)行了多次臨床研究，是最常使用的非病毒載體。對將脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體用作載體并有效地將功能性核酸遞送至細(xì)胞內(nèi)而言，除了改善脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的血中穩(wěn)定性、腫瘤積累性等藥物動(dòng)力學(xué)以外，需要提高細(xì)胞的攝取、內(nèi)質(zhì)逃逸能力等細(xì)胞內(nèi)動(dòng)力學(xué)。對作為脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的構(gòu)成成分之一的陽離子脂質(zhì)而言，以賦予脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體以ph響應(yīng)性的目的使用。通過使用陽離子脂質(zhì)，一方面使脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體在血中等生理環(huán)境下穩(wěn)定地存在。另一方面在細(xì)胞內(nèi)那樣的酸性環(huán)境下使脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體崩潰，從而使藥物能夠向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)放出。陽離子脂質(zhì)大致由疏水部分和親水部分構(gòu)成，疏水部分為脂肪酸殘基、甾醇?xì)埢仁杷曰鶊F(tuán)，親水部分為氨基或銨基等陽離子性基團(tuán)。尤其是疏水部分含有2個(gè)疏水性基團(tuán)，且親水部分含有1個(gè)氨基或銨基等陽離子性基團(tuán)的結(jié)構(gòu)(雙鏈型陽離子脂質(zhì))廣為人知。作為脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體使用的陽離子脂質(zhì)，可列舉作為公知化合物的1,2-二油酰基-3-二甲基氨基丙烷(以下，稱為“dodap”)、1,2-二亞油?；?3-二甲基氨基丙烷(以下，稱為“dlindap”)等。對陽離子脂質(zhì)中包含的氨基而言，通過伴隨周圍環(huán)境的ph的降低而質(zhì)子化變化為陽離子性，從而賦予脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體以ph響應(yīng)性。給予至活體的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體被內(nèi)體攝入。已知早期內(nèi)體隨著向高爾基體附近進(jìn)行移動(dòng)，而向內(nèi)部包含有許多內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的晚期內(nèi)體成熟，并與溶酶體結(jié)合。如果晚期內(nèi)體與溶酶體結(jié)合，則功能性核酸會(huì)被溶酶體內(nèi)的分解酶分解，因此，對于將功能性核酸有效地遞送至細(xì)胞內(nèi)，需要在從早期內(nèi)體起，到晚期內(nèi)體與溶酶體結(jié)合為止的過程中，將功能性核酸向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)放出。但是，非專利文獻(xiàn)1主張封裝了功能性核酸的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體僅在早期內(nèi)體的階段向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)放出功能性核酸，并且放出量為百分之幾。像這樣，盡管使用了傳統(tǒng)的陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體是該領(lǐng)域中的技術(shù)進(jìn)步，但利用其所實(shí)現(xiàn)的向細(xì)胞內(nèi)的核酸遞送能力還不足夠滿意?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)1：naturebiotechnology,31,638-646(1july2013)技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的課題在于提供一種陽離子脂質(zhì)，其在作為用于遞送功能性核酸的載體的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體使用的情況下，可以實(shí)現(xiàn)比傳統(tǒng)的陽離子脂質(zhì)更高的細(xì)胞內(nèi)遞送效率。解決問題的方法已知具有較小的親水部分、較大的疏水部分的圓錐型結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)，通常容易從層狀相向反向六角相轉(zhuǎn)變。與此相對，認(rèn)為對傳統(tǒng)的雙鏈型陽離子脂質(zhì)而言，由于氨基在活體內(nèi)發(fā)生質(zhì)子化而帶正電，氨基會(huì)彼此發(fā)生排斥導(dǎo)致親水部分?jǐn)U張，因此脂質(zhì)膜變得難以發(fā)生從層狀相向反向六角相的相轉(zhuǎn)變。因而，在包含傳統(tǒng)的雙鏈型陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體中，脂質(zhì)膜難以發(fā)生相轉(zhuǎn)變，脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體與內(nèi)體膜之間的膜融合能力不足，因此包含該脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的核酸導(dǎo)入劑的向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)遞送功能性核酸的能力較低。本發(fā)明人等對上述課題進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：開發(fā)了為了抑制由靜電排斥導(dǎo)致的親水部分的擴(kuò)張而具有1個(gè)或2個(gè)陽離子性基團(tuán)，并且為了加大疏水部分而導(dǎo)入了1個(gè)至4個(gè)疏水性基團(tuán)的陽離子脂質(zhì)。包含本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體，在活體內(nèi)那樣的酸性條件下的膜融合能力較高，相比于使用了包含傳統(tǒng)的雙鏈型的陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的核酸導(dǎo)入劑，使用該脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的核酸導(dǎo)入劑向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)遞送功能性核酸的能力顯著升高，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明包含以下內(nèi)容。[1]由式(1)表示的陽離子脂質(zhì)。[化學(xué)式1](式中，x1～x6中的任意4個(gè)各自獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)、由式(xb)表示的基團(tuán)或羥基(其中，不包括該4個(gè)同時(shí)為羥基的情況)，其余2個(gè)各自獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)或羥基(其中，不包括這2個(gè)同時(shí)為羥基的情況))[化學(xué)式2]-y1-r1(xa)(式中，r1表示碳原子數(shù)8～22個(gè)的脂肪族烴基或碳原子數(shù)8～22個(gè)的?；粂1表示-o-或-nh-。)[化學(xué)式3](式中，r2表示甾醇?xì)埢蛑苄跃S生素殘基；z1表示碳原子數(shù)2或3個(gè)的亞烷基；y2表示-o-co-或-nh-co-。)[化學(xué)式4](式中，r3及r4獨(dú)立地表示碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基，r3和r4任選互相結(jié)合而形成環(huán)；z2表示碳原子數(shù)1～6個(gè)的亞烷基；y3表示-o-、-o-co-或-nh-co-；n表示0或1。)[2]根據(jù)[1]所述的陽離子脂質(zhì)，其中，x1～x6中的任意4個(gè)各自獨(dú)立地為由式(xa)表示的基團(tuán)或由式(xb)表示的基團(tuán)，其余2個(gè)各自獨(dú)立地為由式(xc)表示的基團(tuán)。[3]根據(jù)[1]所述的陽離子脂質(zhì)，其中，x1～x6中的任意4個(gè)各自獨(dú)立地為由式(xa)表示的基團(tuán)，其余2個(gè)各自獨(dú)立地為由式(xc)表示的基團(tuán)。[4]根據(jù)[1]～[3]中任一項(xiàng)所述的陽離子脂質(zhì)，其中，r1為碳原子數(shù)10～20個(gè)的脂肪族烴基或碳原子數(shù)10～20個(gè)的?；5]根據(jù)[1]～[3]中任一項(xiàng)所述的陽離子脂質(zhì)，其中，r1為含有不飽和鍵的碳原子數(shù)10～20個(gè)的脂肪族烴基、或碳原子數(shù)10～20個(gè)的?；6]根據(jù)[1]～[5]中任一項(xiàng)所述的陽離子脂質(zhì)，其中，y1為-o-。[7]根據(jù)[1]所述的陽離子脂質(zhì)，其中，x1～x6中的任意4個(gè)各自獨(dú)立地為由式(xb)表示的基團(tuán)，其余2個(gè)各自獨(dú)立地為由式(xc)表示的基團(tuán)。[8]包含[1]～[7]中任一項(xiàng)所述的陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體。[9]包含[8]所述的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體及核酸的核酸導(dǎo)入劑。發(fā)明的效果本發(fā)明涉及一種包括含有1個(gè)至4個(gè)疏水性基團(tuán)的疏水部分，并含有1個(gè)或2個(gè)陽離子性基團(tuán)的親水部分的陽離子脂質(zhì)，及包含該陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體、包含該脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體及核酸的核酸導(dǎo)入劑。本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)可以形成穩(wěn)定的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體，可以將作為脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的酸解離常數(shù)(以下，稱為“pka”)調(diào)整至中性附近。進(jìn)一步，在利用使用本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的核酸導(dǎo)入劑進(jìn)行功能性核酸的導(dǎo)入時(shí)，可以僅在內(nèi)體內(nèi)那樣的弱酸性環(huán)境下顯示與內(nèi)體膜的較高的膜融合能力，有效地將功能性核酸向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)放出。即，通過利用使用本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的核酸導(dǎo)入劑進(jìn)行功能性核酸的導(dǎo)入，可以利用遞送至細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的功能性核酸來實(shí)現(xiàn)有效的基因敲低(geneknockdown)。附圖說明[圖1]示出tlm-c2-dmamend、tlm-c3-dmamend、tlm-c4-dmamend、tdm-c3-dmamend、tlmes-c3-dmamend、dlindapmend、dodapmend的溶血活性的圖。[圖2]示出第1～第4mend、tlm-c3-dmamend、tlm-c4-dmamend的溶血活性的圖。[圖3]示出由tlm-c2-dmamend、tlm-c3-dmamend、tlm-c4-dmamend、dlindapmend、dodapmend導(dǎo)致的fvii敲低活性的圖。[圖4]示出由tlm-c3-dmamend、tdm-c3-dmamend、tlmes-c3-dmamend導(dǎo)致的fvii敲低活性的圖。[圖5]示出由第1～第4mend、tlm-c3-dmamend、tlm-c4-dmamend導(dǎo)致的fvii敲低活性的圖。[圖6]示出由tlm-c3-dmammend、tdm-c3-dmammend導(dǎo)致的mrna表達(dá)活性的圖。具體實(shí)施方式以下，對本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行說明。1.本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)本發(fā)明提供由式(1)表示的陽離子脂質(zhì)。[化學(xué)式5](式中，x1～x6中的任意4個(gè)獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)、由式(xb)表示的基團(tuán)或羥基(其中，不包括該4個(gè)同時(shí)為羥基的情況)，其余2個(gè)獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)或羥基(其中，不包括這2個(gè)同時(shí)為羥基的情況)。)[化學(xué)式6]-y1-r1(xa)(式中，r1表示碳原子數(shù)8～22個(gè)的脂肪族烴基或碳原子數(shù)8～22個(gè)的?；粂1表示-o-或-nh-。)[化學(xué)式7](式中，r2表示甾醇?xì)埢蛑苄跃S生素殘基；z1表示碳原子數(shù)2或3個(gè)的亞烷基；y2表示-o-co-或-nh-co-。)[化學(xué)式8](式中，r3及r4獨(dú)立地表示碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基，r3和r4任選互相結(jié)合而形成環(huán)；z2表示碳原子數(shù)1～6個(gè)的亞烷基；y3表示-o-、-o-co-或-nh-co-；n表示0或1。)在式(1)中，x1～x6中的任意4個(gè)可以是獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)、由式(xb)表示的基團(tuán)或羥基(其中，不包括該4個(gè)同時(shí)為羥基的情況)，其余2個(gè)可以是獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)或羥基(其中，不包括這2個(gè)同時(shí)為羥基的情況)，優(yōu)選x1～x6中的任意4個(gè)獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)或由式(xb)表示的基團(tuán)，其余2個(gè)獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)或羥基(其中，不包括這2個(gè)同時(shí)為羥基的情況)，更優(yōu)選x1～x6中的任意4個(gè)獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)或由式(xb)表示的基團(tuán)，其余2個(gè)獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)。作為式(1)的一個(gè)形態(tài)，在x1～x6中的任意4個(gè)獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)或由式(xb)表示的基團(tuán)，其余2個(gè)獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)的情況下，雖然該x1～x6中由式(xa)表示的基團(tuán)、由式(xb)表示的基團(tuán)及由式(xc)表示的基團(tuán)的組合是任意的，但作為該組合的具體例，可列舉以下(1)～(8)的組合。(1)x1、x2、x5及x6獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)，并且x3及x4獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)。(2)x1、x3、x4及x6獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)，并且x2及x5獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)。(3)x2、x3、x4及x5獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)，并且x1及x6獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)。(4)x1、x2、x3及x4獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)，并且x5及x6獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)。(5)x1、x2、x5及x6獨(dú)立地表示由式(xb)表示的基團(tuán)，并且x3及x4獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)。(6)x1、x3、x4及x6獨(dú)立地表示由式(xb)表示的基團(tuán)，并且x2及x5獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)。(7)x2、x3、x4及x5獨(dú)立地表示由式(xb)表示的基團(tuán)，并且x1及x6獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)。(8)x1、x2、x3及x4獨(dú)立地表示由式(xb)表示的基團(tuán)，并且x5及x6獨(dú)立地表示由式(xc)表示的基團(tuán)。其中，從原料采購、制造的容易程度的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選(1)的組合，尤其優(yōu)選其中，x1、x2、x5及x6的由式(xa)表示的基團(tuán)全部相同，并且x3及x4的由式(xc)表示的基團(tuán)相同的(1)的組合。另外，從原料采購、制造的容易程度的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選(3)的組合，尤其優(yōu)選其中，x2、x3、x4及x5的由式(xa)表示的基團(tuán)全部相同，并且x1及x6的由式(xc)表示的基團(tuán)相同的(3)的組合。作為式(1)的一個(gè)形態(tài)，在x1～x6中的任意4個(gè)獨(dú)立地表示由式(xa)表示的基團(tuán)或由式(xb)表示的基團(tuán)的情況下，例如，其余2個(gè)可以為一方為由式(xc)表示的基團(tuán)且另一方為羥基，或者也可以為其余2個(gè)均為由式(xc)表示的基團(tuán)。在式(1)中，表示羥基的x1～x6的數(shù)量優(yōu)選為3以下，更優(yōu)選為1以下，特別優(yōu)選為0。以下對于式(xa)、式(xb)及式(xc)中的各基團(tuán)的定義進(jìn)行詳述。[式(xa)]式(xa)呈-y1-r1的結(jié)構(gòu)。r1表示碳原子數(shù)8～22個(gè)的脂肪族烴基或碳原子數(shù)8～22個(gè)的?；?。該脂肪族烴基及酰基中包含的碳原子數(shù)優(yōu)選為10～20個(gè)。該脂肪族烴基及?；梢詾橹辨湢?，也可以具有支鏈或環(huán)，但優(yōu)選為直鏈狀。該脂肪族烴基及?；梢院酗柡鸵部梢院胁伙柡玩I，但優(yōu)選為含有不飽和鍵。在該脂肪族烴基及酰基含有不飽和鍵的情況下，其中包含的不飽和鍵的數(shù)量通常為1～6個(gè)，優(yōu)選為1～3個(gè)，更優(yōu)選為1～2個(gè)。其中包含的不飽和鍵優(yōu)選為碳-碳雙鍵。作為碳原子數(shù)8～22個(gè)的脂肪族烴基，可列舉例如：辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一碳烯基、十二碳烯基、十三碳烯基、十四碳烯基、十五碳烯基、十六碳烯基、十七碳烯基、十八碳烯基、十九碳烯基、二十碳烯基、二十一碳烯基、二十二碳烯基、辛二烯基、壬二烯基、癸二烯基、十一碳二烯基、十二碳二烯基、十三碳二烯基,十四碳二烯基,十五碳二烯基,十六碳二烯基、十七碳二烯基、十八碳二烯基、十九碳二烯基、二十碳二烯基、二十一碳二烯基、二十二碳二烯基、十八碳三烯基、二十碳三烯基、二十碳四烯基、二十碳五烯基、二十二碳六烯基、異十八烷基、四甲基十六碳烯基(植烷基)等。優(yōu)選為癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、癸烯基、十二碳烯基、十四碳烯基、十六碳烯基、十八碳烯基、二十碳烯基、癸二烯基、十二碳二烯基、十四碳二烯基、十六碳二烯基、十八碳二烯基、二十碳二烯基等含有飽和或不飽和鍵的碳原子數(shù)10～20個(gè)的脂肪族烴基，更優(yōu)選為癸烯基、十二烯基、十四碳二烯基、十六碳二烯基、十八碳二烯基等含有不飽和鍵的碳原子數(shù)10～20個(gè)的脂肪族烴基。作為碳原子數(shù)8～22的?；闪信e例如：辛?；⑷甚；?、癸酰基、十一碳?；?、十二碳?；⑹减；⑹奶减；?、十五碳?；⑹减；⑹咛减；⑹颂减；?、十九碳?；?、二十碳酰基、二十一碳?；⒍减；?、辛烯酰基、壬烯酰基、癸烯?；⑹惶枷；?、十二碳烯酰基、十三碳烯酰基、十四碳烯?；⑹逄枷；?、十六碳烯?；?、十七碳烯?；⑹颂枷；?、十九碳烯酰基、二十碳烯?；⒍惶枷；⒍枷；?、辛二烯酰基、壬二烯酰基、癸二烯?；⑹惶级；?、十二碳二烯?；?、十三碳二烯酰基、十四碳二烯酰基、十五碳二烯?；⑹级；?、十七碳二烯?；?、十八碳二烯酰基、十九碳二烯酰基、二十碳二烯?；?、二十一碳二烯?；?、二十二碳二烯?；?、十八碳三烯?；⒍既；?、二十碳四烯?；?、二十碳五烯酰基、二十二碳六烯酰基、異硬脂酰基、四甲基十六碳?；?植物?；?、視黃?；龋瑑?yōu)選為癸?；?、十二碳酰基、十四碳酰基、十六碳酰基、十八碳?；?、二十碳酰基、癸烯酰基、十二碳烯酰基、十四碳烯酰基、十六碳烯?；⑹颂枷；⒍枷；?、癸二烯?；⑹级；⑹奶级；?、十六碳二烯酰基、十八碳二烯?；?、二十碳二烯酰基等含有飽和或不飽和鍵的碳原子數(shù)10～20個(gè)的?；?，更優(yōu)選為癸烯?；?、十二碳烯?；⑹奶级；⑹级；?、十八碳二烯?；群胁伙柡玩I的碳原子數(shù)10～20個(gè)的?；Ｔ谑?1)包含2個(gè)以上由式(xa)表示的基團(tuán)的情況下，各r1可以相同也可以不同，但優(yōu)選為全部相同。y1為-o-或-nh-，優(yōu)選為-o-。在式(1)包含2個(gè)以上由式(xa)表示的基團(tuán)的情況下，各y1可以相同也可以不同，但優(yōu)選為全部相同。作為優(yōu)選的由式(xa)表示的基團(tuán)，為由式(xa)表示的基團(tuán)中，r1為含有不飽和鍵的碳原子數(shù)10～20的脂肪族烴基或?；?，y1為-o-的基團(tuán)。在式(1)包含2個(gè)以上由式(xa)表示的基團(tuán)的情況下，各個(gè)由式(xa)表示的基團(tuán)可以相同也可以不同，但優(yōu)選為全部相同。[式(xb)]式(xb)呈-y2-z1-co-r2的結(jié)構(gòu)。r2表示甾醇?xì)埢蛑苄跃S生素殘基，優(yōu)選為脂溶性維生素殘基。作為甾醇?xì)埢?，可列舉例如：膽甾烯基(cholesteryl)(膽甾醇?xì)埢?、膽甾烷基(cholestaryl)(膽甾烷醇?xì)埢?、β-谷甾烯基(β-谷甾醇?xì)埢?、羊毛甾烯基(羊毛甾醇?xì)埢?、麥角甾烯基(麥角甾醇?xì)埢?等。甾醇?xì)埢鶅?yōu)選為膽甾烯基或膽甾烷基。作為脂溶性維生素殘基，可列舉例如：視黃醇?xì)埢?、視黃醛殘基、麥角甾醇?xì)埢?-羥基膽甾醇?xì)埢?-脫氫膽甾醇?xì)埢⑩}化醇?xì)埢?、膽骨化醇?xì)埢?、二氫麥角鈣化醇?xì)埢?、二氫速固醇?xì)埢?、生育酚殘基、生育三烯酚殘基等。脂溶性維生素殘基優(yōu)選為視黃醇?xì)埢蛏託埢?。在?1)包含2個(gè)以上由式(xb)表示的基團(tuán)的情況下，各r2可以相同也可以不同，但優(yōu)選為全部相同。z1表示碳原子數(shù)2或3的亞烷基，該亞烷基可以為直鏈狀也可以具有支鏈，但優(yōu)選為直鏈狀。作為碳原子數(shù)2或3的亞烷基，例如可列舉亞乙基、三亞甲基等，優(yōu)選為三亞甲基。在式(1)包含2個(gè)以上由式(xb)表示的基團(tuán)的情況下，各z1可以相同也可以不同，但優(yōu)選為全部相同。y2為-o-co-或-nh-co-，優(yōu)選為-o-co-。對y2的鍵的方向沒有限制，例如在y2為-o-co-的情況下，式(xb)優(yōu)選呈-o-co-z1-co-r2的結(jié)構(gòu)。另外，例如在y2為-nh-co-的情況下，式(xb)優(yōu)選呈-nh-co-z1-co-r2的結(jié)構(gòu)。在式(1)包含2個(gè)以上由式(xb)表示的基團(tuán)的情況下，各y2可以相同也可以不同，但優(yōu)選為全部相同。作為優(yōu)選的由式(xb)表示的基團(tuán)，為r2為甾醇?xì)埢?優(yōu)選為膽甾烯基或膽甾烷基)或脂溶性維生素殘基(優(yōu)選為視黃醇?xì)埢蛏託埢?，z1為碳原子數(shù)2或3的亞烷基(優(yōu)選為亞乙基或三亞甲基，更優(yōu)選為三亞甲基)，y2為-o-co-的由式(xb)表示的基團(tuán)。在式(1)包含2個(gè)以上由式(xb)表示的基團(tuán)的情況下，各由式(xb)表示的基團(tuán)可以相同也可以不同，但優(yōu)選為全部相同。[式(xc)]式(xc)呈-(y3-z2)n-nr3r4的結(jié)構(gòu)。r3及r4獨(dú)立地表示碳原子數(shù)1～6的烷基。r3及r4可以為直鏈狀、支鏈狀及環(huán)狀中的任意，并且也可以r3與r4互相結(jié)合而形成環(huán)。該烷基的碳原子數(shù)優(yōu)選為1～3。作為直鏈狀或支鏈狀的碳原子數(shù)1～6的烷基，可列舉例如：甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、叔戊基、1,2-二甲基丙基、2-甲基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、環(huán)己基等。作為在r3與r4互相結(jié)合并形成環(huán)的情況下的-nr3r4的例子，具體可列舉：氮丙啶基、氮雜環(huán)丁烷基、唑啉基(azolidyl)、哌啶基等。r3及r4優(yōu)選為甲基、乙基、丙基或異丙基，更優(yōu)選為甲基。r3和r4可以相同也可以不同，優(yōu)選r3與r4相同。在式(1)包含2個(gè)由式(xc)表示的基團(tuán)的情況下，各r3可以相同也可以不同，但優(yōu)選為相同。在式(1)包含2個(gè)由式(xc)表示的基團(tuán)的情況下，各r4可以相同也可以不同，但優(yōu)選為相同。z2表示碳原子數(shù)1～6的亞烷基。z2可以為直鏈狀也可以具有支鏈，但優(yōu)選為直鏈狀。作為碳原子數(shù)1～6的亞烷基，可列舉例如：亞甲基、亞乙基、三亞甲基、異亞丙基、四亞甲基、異亞丁基、五亞甲基、新亞戊基、六亞甲基等。z2優(yōu)選為亞甲基、亞乙基、三亞甲基、異亞丙基、四亞甲基、六亞甲基，更優(yōu)選為亞乙基、三亞甲基。在式(1)包含2個(gè)由式(xc)表示的基團(tuán)的情況下，各z2可以相同也可以不同，但優(yōu)選為相同。y3表示-o-、-o-co-或-nh-co-，優(yōu)選為-o-co-。對y3的鍵的方向沒有限制，例如在y3為-o-co-的情況下，式(xc)優(yōu)選呈-(o-co-z2)n-nr3r4的結(jié)構(gòu)。另外，例如在y3為-o-的情況下，式(xc)優(yōu)選為呈-(o-z2)n-nr3r4的結(jié)構(gòu)，在y3為-nh-co-的情況下，式(xc)優(yōu)選為呈-(nh-co-z2)n-nr3r4的結(jié)構(gòu)。在式(1)包含2個(gè)由式(xc)表示的基團(tuán)的情況下，各y3可以相同也可以不同，但優(yōu)選為相同。n為0或1，優(yōu)選為1。在n為1的情況下，式(xc)呈-y3-z2-nr3r4的結(jié)構(gòu)，在n為0的情況下，式(xc)呈-nr3r4的結(jié)構(gòu)。在式(1)包含2個(gè)由式(xc)表示的基團(tuán)的情況下，各n可以相同也可以不同，但優(yōu)選為相同。作為優(yōu)選的由式(xc)表示的基團(tuán)，為r3及r4獨(dú)立地表示碳原子數(shù)1～3的烷基(優(yōu)選為甲基、乙基、丙基或異丙基，更優(yōu)選為甲基)，z2為碳原子數(shù)1～6的亞烷基(優(yōu)選為亞甲基、亞乙基、三亞甲基、異亞丙基、四亞甲基、六亞甲基、更優(yōu)選為亞乙基、三亞甲基)，y3為-o-co-，n為1的由式(xc)表示的基團(tuán)。在式(1)包含2個(gè)由式(xc)表示的基團(tuán)的情況下，各由式(xc)表示的基團(tuán)可以相同也可以不同，但優(yōu)選為相同。作為本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的具體例，可列舉表1所述的tlm-c2-dma(1,2,5,6-四亞油?；?3,4-二(二甲基氨基乙?；?-d-甘露醇)、tlm-c3-dma(1,2,5,6-四亞油?；?3,4-二(3-二甲基氨基丙酰基)-d-甘露醇)、tlm-c4-dma(1,2,5,6-四亞油?；?3,4-二(4-二甲基氨基丁酰基)-d-甘露醇)，tdm-c3-dma(1,2,5,6-四(癸烯基)-3,4-二(3-二甲基氨基丙酰基)-d-甘露醇)、tlmes-c3-dma(四亞油?；?二(3-二甲基氨基丙?；?-d-甘露醇)等。[表1]下面對本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的制造方法進(jìn)行說明。作為本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的制造方法，可列舉向具有6個(gè)羥基的由式(1’)表示的化合物中，導(dǎo)入由式(xa)表示的基團(tuán)和/或由式(xb)表示的基團(tuán)、以及由式(xc)表示的基團(tuán)的方法，例如：(i)導(dǎo)入xa和/或xb之后導(dǎo)入xc的方法，(ii)導(dǎo)入xc之后導(dǎo)入xa和/或xb的方法，(iii)同時(shí)導(dǎo)入xa和/或xb和xc的方法，或基于這些的方法等。[化學(xué)式9]對本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的制造方法沒有特別限制，優(yōu)選為上述(i)方法。雖然以下舉出了該(i)方法的具體例，但本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的制造方法并不特別限定于該方法。作為起始化合物，可列舉例如，在具有6個(gè)羥基的式(1’)表示的化合物中有2個(gè)羥基利用保護(hù)基保護(hù)的化合物，或在式(1’)表示的化合物中有4個(gè)羥基利用保護(hù)基保護(hù)的化合物等。需要說明的是，就這些起始化合物而言，可以容易地取得市售品，或者可以按照本身公知的方法或基于公知的方法的方法進(jìn)行制造。作為向式(1’)導(dǎo)入的保護(hù)基，可列舉例如：異亞丙基、亞芐基、苯甲酰基、芐基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4,4’-二甲氧基三苯甲基、三烷基硅烷基(例如，三甲基硅烷基、三乙基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基等)等。對該保護(hù)基的導(dǎo)入方法沒有特別的限制，可以根據(jù)本身公知的方法或基于其的方法進(jìn)行。例如，在制造作為本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)為式(1)中的x1、x2、x5及x6為由式(xa)表示的基團(tuán)(r1：脂肪族烴基、y1：-o-，此外的符號(hào)如式(xc)所定義)，x3及x4為由式(xc)表示的基團(tuán)(y3：-co-o-，n：1)時(shí)的式(5)表示的化合物的情況下，對由該式(5)表示的化合物而言，可以使用由式(1a)表示的化合物作為起始化合物，經(jīng)過以下的工序1(醚化)、工序2(脫保護(hù))、工序3(酯化)、或者工序1(醚化)、工序2(脫保護(hù))、工序4(酯化)、工序5(氨基化)來制造。[化學(xué)式10]式中，a表示保護(hù)基(例如異亞丙基、亞芐基、苯甲?；?、芐基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4,4’-二甲氧基三苯甲基、三烷基甲硅烷基等)，b表示脫離基(例如：碘原子、溴原子、氯原子、甲烷磺酰氧基、對甲苯磺酰氧基、三氟甲烷磺酰氧基等)，d表示羥基或鹵原子(例如：碘原子、溴原子、氯原子等)，e表示由式(e)表示的基團(tuán)或乙烯基。[化學(xué)式11]b-z2-(e)(式中，z2表示碳原子數(shù)1～6的亞烷基，b表示脫離基(例如：碘原子、溴原子、氯原子、甲烷磺酰氧基、對甲苯磺酰氧基、三氟甲烷磺酰氧基等)。)工序1(醚化)通過將由式(1a)表示的化合物與由r1-b(式中的r1及b與上述同義)表示的化合物發(fā)生反應(yīng)，得到由式(2)表示的化合物。在反應(yīng)中可以使用氫氧化鉀、氫化鈉、叔丁醇鉀等堿催化劑，也可以無催化劑進(jìn)行。優(yōu)選將氫氧化鉀作為催化劑使用。作為使用的催化劑量，相對于由式(1a)表示的化合物通常為6～20摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為8～12摩爾當(dāng)量。雖然反應(yīng)可以使用溶劑，也可以無溶劑進(jìn)行，但由于由式(1a)表示的化合物為高極性的固體，需要在反應(yīng)體系中分散，因此優(yōu)選使用溶劑。作為溶劑，可以使用不阻礙反應(yīng)，由式(1a)表示的化合物可分散的溶劑，可列舉例如：己烷、甲苯、二甲基甲酰胺、二甲亞砜(以下，稱為“dmso”)等。這些中，優(yōu)選甲苯。反應(yīng)溫度通常為20～150℃，優(yōu)選為40～100℃。反應(yīng)時(shí)間通常為1～50小時(shí)，優(yōu)選為10～30小時(shí)。得到的由式(2)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。工序2(脫保護(hù))對由式(2)表示的化合物的保護(hù)基脫保護(hù)，得到包含2個(gè)游離的羥基的由式(3)表示的化合物。在反應(yīng)中使用酸催化劑。作為酸催化劑，可列舉鹽酸、乙酸、硫酸、磷酸、對甲苯磺酸一水合物等，優(yōu)選為鹽酸。作為使用的催化劑量，相對于由式(2)表示的化合物通常為1～50摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為5～20摩爾當(dāng)量。在反應(yīng)中使用溶劑。作為溶劑，可列舉甲醇、乙醇、異丙醇、水等，優(yōu)選為甲醇、乙醇。反應(yīng)溫度通常為20～70℃，優(yōu)選為40～60℃。反應(yīng)時(shí)間通常為1～12小時(shí)，優(yōu)選為4～8小時(shí)。得到的由式(3)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。工序3(酯化)可以通過將由式(3)表示的化合物與由式(p)(式中，r3、r4及z2與上述同義)表示的化合物發(fā)生反應(yīng)，得到本發(fā)明的式(5)表示的化合物。在反應(yīng)中，使用二環(huán)己基碳二亞胺(以下，稱為“dcc”)、二異丙基碳二亞胺(以下，稱為“dic”)、1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(以下，稱為“edc”)等縮合劑。在反應(yīng)中添加堿催化劑。作為堿催化劑，可列舉4-二甲基氨基吡啶(以下，稱為“dmap”)、吡啶、三乙胺等，優(yōu)選為dmap。由式(p)表示的化合物的投入量，相對于由式(3)表示的化合物通常為2～10摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為4～8摩爾當(dāng)量。雖然反應(yīng)可以使用溶劑，也可以無溶劑進(jìn)行，但由于由式(p)表示的化合物為高極性的固體，需要在反應(yīng)體系中溶解或分散，因此優(yōu)選使用溶劑。作為可使式(p)表示的化合物溶解或分散的溶劑，可列舉例如，氯仿、二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯等，這些中，優(yōu)選氯仿。反應(yīng)溫度通常為10～60℃，優(yōu)選為20～40℃。反應(yīng)時(shí)間通常為1～20小時(shí)，優(yōu)選為2～10小時(shí)。得到的由式(5)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。工序4(酯化)可以通過將由式(3)表示的化合物與由式(q)(式中的d、e與上述同義)表示的化合物發(fā)生反應(yīng)，得到由式(4)表示的化合物。在由式(q)表示的化合物中的d為羥基的情況下，在反應(yīng)中，使用dcc、dic、edc等縮合劑?？梢允褂墒?3)表示的化合物與由式(q)表示的化合物直接反應(yīng)，或也可以形成由式(q)表示的化合物的酸酐后再與式(3)表示的化合物反應(yīng)。在由式(q)表示的化合物中的d為鹵原子的情況下，為了中和副產(chǎn)的鹵化氫而添加堿。作為堿，可列舉三乙胺、吡啶等。反應(yīng)使用溶劑。作為溶劑，可列舉氯仿、二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯等，優(yōu)選為甲苯。由式(q)表示的化合物的投入量，相對于由式(3)表示的化合物通常為2～10摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為2～5摩爾當(dāng)量。反應(yīng)溫度通常為0～60℃，優(yōu)選為10～40℃，反應(yīng)時(shí)間通常為1～10小時(shí)，優(yōu)選為1～5小時(shí)。得到的由式(4)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。工序5(氨基化)可以通過使含有r3及r4的仲胺與由式(4)表示的化合物發(fā)生反應(yīng)，得到本發(fā)明的式(5)表示的化合物。在反應(yīng)中可以使用碳酸鉀、碳酸鈉、叔丁醇鉀等堿催化劑，也可以無催化劑進(jìn)行。反應(yīng)可以使用溶劑，也可以無溶劑進(jìn)行。對于溶劑，可以使用例如乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯、甲苯、四氫呋喃(以下，稱為“thf”)等，這些中，優(yōu)選甲苯。含有r3及r4的仲胺的投入量，相對于由式(4)表示的化合物通常為1～20摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為5～10摩爾當(dāng)量。反應(yīng)溫度通常為10～100℃，優(yōu)選為60～80℃。反應(yīng)時(shí)間通常為1～10小時(shí)，優(yōu)選為2～6小時(shí)。得到的由式(5)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過適當(dāng)選擇原料并基于本說明書的實(shí)施例的方法進(jìn)行反應(yīng)，來制造需要的本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)。另外，例如，在制造如下由式(9)表示的化合物的情況下，其中，在由式(9)表示的化合物中，式(1)中的x2、x3、x4及x5為由式(xa)表示的基團(tuán)(r1：?；1：-o-)，x1及x6為由式(xc)表示的基團(tuán)(n：1，y3：-co-o-，此外的符號(hào)如式(xc)所定義)，對以該式(9)表示的化合物而言，可以使用由式(1b)表示的化合物作為起始化合物，經(jīng)過以下的工序6(酯化)、工序7(脫保護(hù))、工序8(酯化)、或者工序6(酯化)、工序7(脫保護(hù))、工序9(酯化)、工序10(氨基化)來制造。[化學(xué)式12]式中，a表示保護(hù)基(例如異亞丙基、亞芐基、苯甲?；⑵S基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4,4’-二甲氧基三苯甲基、三烷基硅烷基等)，d表示羥基或鹵原子(例如：碘原子、溴原子、氯原子等)，e表示由式(e)表示的基團(tuán)或乙烯基。[化學(xué)式13]b-z2-(e)(式中，z2表示碳原子數(shù)1～6的亞烷基，b表示脫離基(例如：碘原子、溴原子、氯原子、甲烷磺酰氧基、對甲苯磺酰氧基、三氟甲烷磺酰氧基等)。)工序6(酯化)通過將由式(1b)表示的化合物與由r1-d(式中的r1及d與上述同義)表示的化合物發(fā)生反應(yīng)，得到由式(6)表示的化合物。在r1-d的d為羥基的情況下，在反應(yīng)中，使用dcc、dic、edc等縮合劑。對使用量而言，相對于式(1b)表示的化合物，通常為4～10摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為5～8摩爾當(dāng)量。在反應(yīng)中添加堿催化劑。作為堿催化劑，可列舉dmap、吡啶、三乙胺等，優(yōu)選為dmap。在反應(yīng)中使用溶劑。作為溶劑，只要是不阻礙反應(yīng)、基質(zhì)可溶解的溶劑即可，沒有特別限定。具體而言，可列舉氯仿、二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯等，優(yōu)選為氯仿。反應(yīng)溫度通常為0～60℃，優(yōu)選為10～40℃。反應(yīng)時(shí)間通常為1～50小時(shí)，優(yōu)選為10～30小時(shí)。得到的由式(6)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。工序7(脫保護(hù))對由式(6)表示的化合物的保護(hù)基進(jìn)行脫保護(hù)，得到包含2個(gè)游離的羥基的由式(7)表示的化合物。在a為三烷基甲硅烷基的情況下，在反應(yīng)中使用氟化物。作為氟化物，可列舉：四丁基氟化銨、四丙基氟化銨、四乙基氟化銨、四甲基氟化銨、氫氟酸、氟化銫等，優(yōu)選為四丁基氟化銨。作為氟化物的使用量，相對于式(6)表示的化合物通常為2～10摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為4～8摩爾當(dāng)量。在三烷基甲硅烷基的脫保護(hù)的過程中，生成為強(qiáng)堿的烷氧化物。由于如果存在烷氧化物，則會(huì)發(fā)生酯的分解、轉(zhuǎn)移，因此，需要迅速地中和。因而，優(yōu)選向反應(yīng)體系中添加作為質(zhì)子源的酸。由于酸過強(qiáng)則會(huì)分解酯，因此優(yōu)選為弱酸。具體而言，可列舉乙酸、乙二酸、檸檬酸、磷酸、苯甲酸、硼酸、三乙胺鹽酸鹽等，優(yōu)選為乙酸。作為酸的使用量，相對于式(6)表示的化合物通常為2～10摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為4～8當(dāng)量。在反應(yīng)中使用溶劑。作為溶劑，可列舉：四氫呋喃、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇等，優(yōu)選為四氫呋喃。反應(yīng)溫度通常為0～70℃，優(yōu)選為10～60℃。反應(yīng)時(shí)間通常為1～12小時(shí)，優(yōu)選為4～8小時(shí)。得到的由式(7)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。工序8(酯化)可以通過將由式(7)表示的化合物與由式(p)(式中，r3、r4及z2與上述同義)表示的化合物發(fā)生反應(yīng)，得到本發(fā)明的式(9)表示的化合物。在反應(yīng)中，使用dcc、dic、edc等縮合劑。反應(yīng)時(shí)，可以使由式(7)表示的化合物與由式(p)表示的化合物直接反應(yīng)，或也可以形成由式(p)表示的化合物的酸酐后再與由式(7)表示的化合物反應(yīng)。在反應(yīng)中添加堿催化劑。作為堿催化劑，可列舉dmap、吡啶、三乙胺等，優(yōu)選為dmap。由式(p)表示的化合物的投入量，相對于由式(7)表示的化合物通常為2～10摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為4～8摩爾當(dāng)量。雖然反應(yīng)可以使用溶劑，也可以無溶劑進(jìn)行，但由于由式(p)表示的化合物為高極性的固體，需要在反應(yīng)體系中分散，因此優(yōu)選使用溶劑。作為可使由式(p)表示的化合物分散的溶劑，可列舉例如，氯仿、二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯等，這些中，優(yōu)選氯仿。反應(yīng)溫度通常為10～60℃，優(yōu)選為20～40℃。反應(yīng)時(shí)間通常為1～20小時(shí)，優(yōu)選為2～10小時(shí)。得到的由式(9)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。工序9(酯化)可以通過將由式(7)表示的化合物與由式(q)(式中的d、e與上述同義)表示的化合物發(fā)生反應(yīng)，得到由式(8)表示的化合物。在由式(q)表示的化合物中的d為羥基的情況下，在反應(yīng)中，使用dcc、dic、edc等縮合劑?？梢允褂墒?7)表示的化合物與由式(q)表示的化合物直接反應(yīng)，或也可以形成由式(q)表示的化合物的酸酐后再與由式(7)表示的化合物反應(yīng)。在反應(yīng)中添加堿催化劑。作為堿催化劑，可列舉dmap、吡啶、三乙胺等，優(yōu)選為dmap。在由式(q)表示的化合物中的d為鹵原子的情況下，為了中和副產(chǎn)的鹵化氫而添加堿。作為堿，可列舉三乙胺、吡啶等。反應(yīng)使用溶劑。作為溶劑，可列舉氯仿、二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯等，優(yōu)選為甲苯。由式(q)表示的化合物的投入量，相對于由式(7)表示的化合物通常為2～10摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為2～5摩爾當(dāng)量。反應(yīng)溫度通常為0～60℃，優(yōu)選為10～40℃，反應(yīng)時(shí)間通常為1～10小時(shí)，優(yōu)選為1～5小時(shí)。得到的由式(8)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。工序10(氨基化)可以通過使含有r3及r4的仲胺與由式(8)表示的化合物發(fā)生反應(yīng)，得到本發(fā)明的式(9)表示的化合物。在反應(yīng)中可以使用碳酸鉀、碳酸鈉、叔丁醇鉀等堿催化劑，也可以無催化劑進(jìn)行。反應(yīng)可以使用溶劑，也可以無溶劑進(jìn)行。對于溶劑，可以使用例如乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯、甲苯、thf等，這些中，優(yōu)選使用甲苯。含有r3及r4的仲胺的投入量，相對于由式(8)表示的化合物通常為1～20摩爾當(dāng)量，優(yōu)選為5～10摩爾當(dāng)量。反應(yīng)溫度通常為10～100℃，優(yōu)選為60～80℃。反應(yīng)時(shí)間通常為1～10小時(shí)，優(yōu)選為2～6小時(shí)。得到的由式(9)表示的化合物可以通過提取、重結(jié)晶、吸附處理、再沉淀、柱色譜等方法進(jìn)行適當(dāng)純化。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過適當(dāng)選擇原料并基于本說明書的實(shí)施例的方法進(jìn)行反應(yīng)，來制造需要的本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)。2.本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體下面對本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體進(jìn)行說明。本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體，含有由上述式(1)表示的陽離子脂質(zhì)(即，本發(fā)明的陽離子脂質(zhì))作為膜的構(gòu)成脂質(zhì)。這里，本發(fā)明中的“脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體”是指，膜的構(gòu)成脂質(zhì)的親水基團(tuán)朝向界面的水相側(cè)排列的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體。對本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的形態(tài)沒有特別限定，例如，作為本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)分散在水系溶劑中而成的形態(tài)，可列舉脂質(zhì)體(例如：單層脂質(zhì)體、多層脂質(zhì)體等)、o/w型乳液、w/o/w型乳液、球狀膠束、帶狀膠束、或不特定的層狀結(jié)構(gòu)物(unspecifiedlayerstructure)等。本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的形態(tài)優(yōu)選為脂質(zhì)體。本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體除了本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)以外，也可以進(jìn)一步含有這以外的其它構(gòu)成成分。作為該其它構(gòu)成成分，可列舉例如：脂質(zhì)(例如：磷脂(例如：磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰膽堿等)、糖脂、肽脂、膽甾醇、除了本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)以外的陽離子脂質(zhì)、peg脂質(zhì)等)、表面活性劑(例如：chaps、膽酸鈉鹽、辛基糖苷、n-d-葡萄糖-n-甲基烷酰胺類、poloxamer類、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯類等)、peg、蛋白質(zhì)等。本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體中的該其它構(gòu)成成分的含量，通常為5～90重量％，優(yōu)選為10～30重量％。本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體中包含的本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)可以僅為1種，也可以組合2種以上使用。通過組合2種以上本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)使用，可以將本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的pka在4～7的范圍中任意調(diào)整。通過將本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的pka調(diào)整為適于目的的值，能夠?qū)⒐δ苄院怂岣咝实剡f送至細(xì)胞內(nèi)。對本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體中包含的本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的含量沒有特別限定，例如，在將本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體使用于后述的核酸導(dǎo)入劑中的情況下，本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體，優(yōu)選包含為了導(dǎo)入核酸的充分量的本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)。本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體中包含的本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的含量，通常為本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體中包含的總脂質(zhì)量(totallipidamount)的5～100mol％，優(yōu)選為30～90mol％，更優(yōu)選為50～70mol％。本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體，可以通過將本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)及其它構(gòu)成成分(脂質(zhì)等)溶解或分散于適當(dāng)?shù)娜軇┗蚍稚⒔橘|(zhì)，例如：水性溶劑、醇性溶劑中，并根據(jù)需要進(jìn)行誘導(dǎo)組織化的操作進(jìn)行制備。作為“誘導(dǎo)組織化的操作”，可列舉例如：乙醇稀釋法、簡單水和法、超聲波處理、加熱、渦旋震蕩(vortex)、醚注入法、法壓法(frenchpressmethod)、膽酸法、ca2+融合法、凍融法、反相蒸發(fā)法等本身公知的方法。3.本發(fā)明的核酸導(dǎo)入劑通過向包含本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體導(dǎo)入核酸，并使其與活體內(nèi)和/或活體外的細(xì)胞接觸，可以向該細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入核酸。因此，本發(fā)明也提供核酸導(dǎo)入劑(以下，稱為“本發(fā)明的試劑”)。本發(fā)明的試劑的主要的特征為含有上述包含本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體及核酸。作為一種形態(tài)，本發(fā)明的試劑可以含有本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體及核酸，在這種情況下，優(yōu)選該核酸已被導(dǎo)入至本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體。這里，將核酸“導(dǎo)入”至本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體是指將核酸封裝到由脂質(zhì)雙重膜形成的空間中。對可導(dǎo)入本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的核酸沒有特別的限制，可以使用任意核酸。作為核酸的種類，可列舉例如：dna、rna、dna和rna的嵌合核酸、dna/rna的雜合等，但不限于這些。另外，對核酸而言，可使用1～3條鏈中的任意，優(yōu)選為1條鏈或2條鏈。核酸可以為例如：作為嘌呤或嘧啶堿的n-糖苷的其它類型的核苷酸，或者具有非核苷酸骨架的其它低聚物(例如：市售的肽核酸(pna)等)或含有特殊的鍵的其它低聚物(其中，該低聚物含有具有在dna、rna中發(fā)現(xiàn)的那樣的堿基配對、允許堿基的附著的構(gòu)造的核苷酸)等。并且該核酸可以為例如：添加了公知的修飾的核酸、具有該領(lǐng)域已知的標(biāo)記的核酸、帶帽的核酸、經(jīng)甲基化的核酸、將1個(gè)以上的天然的核苷酸用類似物進(jìn)行置換而成的核酸、分子內(nèi)核苷酸修飾后的核酸、具有非電荷鍵的核酸(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)、具有帶電荷的鍵或含硫鍵(例如：硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的核酸、例如蛋白質(zhì)(例如：核酸酶、核酸酶抑制劑、毒素、抗體、信號(hào)肽、聚-l-賴氨酸等)、糖(例如：單糖等)等具有側(cè)鏈基團(tuán)的核酸、具有插層化合物(intercalatingcompound)(例如：吖啶、補(bǔ)骨脂素等)的核酸，含有螯合化合物(例如：金屬、具有放射活性的金屬、硼、氧化性的金屬等)的核酸、含有烷基化劑的核酸、具有經(jīng)修飾的鍵的核酸(例如：α異頭物型核酸等)等。對在本發(fā)明中可以使用dna的種類沒有特別的限制，可以根據(jù)使用的目的適當(dāng)選擇，可列舉例如，質(zhì)粒dna、cdna、反義dna、染色體dna、pac、bac等，優(yōu)選為質(zhì)粒dna、cdna、反義dna，更優(yōu)選為質(zhì)粒dna。質(zhì)粒dna等環(huán)狀dna也可以適當(dāng)利用限制酶等進(jìn)行消化，而以線性dna形式使用。在本發(fā)明中可以使用的rna的種類沒有特別的限制，可以根據(jù)使用的目的適當(dāng)選擇，可列舉例如sirna、mirna、shrna、反義rna、信使rna(mrna)、單鏈rna基因組、雙鏈rna基因組、rna復(fù)制子、轉(zhuǎn)移rna、核糖體rna等，優(yōu)選為sirna、mirna、shrna、mrna、反義rna、rna復(fù)制子。在本發(fā)明中使用的核酸優(yōu)選通過本領(lǐng)域技術(shù)人員通常使用的方法進(jìn)行純化。對本發(fā)明的試劑而言，例如，可以出于疾病的預(yù)防和/或治療的目的進(jìn)行活體內(nèi)(invivo)給予。因此，在本發(fā)明中使用的核酸優(yōu)選相對于某給定的疾病具有預(yù)防和/或治療活性(預(yù)防、治療用核酸)。作為這樣的核酸，可列舉例如用于所謂基因治療的核酸等。對向本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體導(dǎo)入核酸的方法沒有特別限制，例如，可以通過在形成本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體時(shí)，使本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的構(gòu)成成分與期望的核酸共存，來向本發(fā)明的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)體導(dǎo)入核酸。例如，在利用乙醇稀釋法形成本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體時(shí)，通過將核酸的水溶液與本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的構(gòu)成成分(脂質(zhì)等)的乙醇溶液利用渦旋震蕩等劇烈混合后，將混合物利用適當(dāng)?shù)木彌_液進(jìn)行稀釋，從而得到導(dǎo)入了核酸的本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的懸浮液。利用單純水合法形成本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體時(shí)，通過將本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的構(gòu)成成分(脂質(zhì)等)溶解于適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑，并將該溶液放入玻璃容器，通過減壓干燥而蒸餾除去溶劑，得到脂質(zhì)薄膜，然后，這里添加核酸的水溶液，使其水合后，利用超聲波發(fā)生器進(jìn)行超聲波處理，從而得到導(dǎo)入了核酸的本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的懸浮液。作為本發(fā)明的試劑的一種形態(tài)，可列舉例如，多功能性包絡(luò)型納米結(jié)構(gòu)體(multifunctionalenvelope-typenanodevice，以下，稱為“mend”)。該mend例如可以通過將核酸與聚陽離子(例如，魚精蛋白等)之間的靜電復(fù)合體導(dǎo)入本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體等來制備(kogureketal.,multifunctionalenvelope-typenanodevice(mend)asanon-viralgenedeliverysystem.adv.drugdeliv.rev.,60,559-571(1march2008)。該結(jié)構(gòu)體(mend)可以用作將核酸等選擇地遞送至特定的細(xì)胞內(nèi)的藥物遞送系統(tǒng)，對例如基于向樹突細(xì)胞導(dǎo)入抗原基因的dna疫苗、腫瘤的基因治療等有用。導(dǎo)入了核酸的本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的表面電荷(zeta電位)優(yōu)選為-10～+10mv，進(jìn)一步優(yōu)選為-10～+5mv。在以往的基因?qū)胫?，主要使用了表面電荷帶正電的粒子。其理由在于促進(jìn)與具有負(fù)電荷的細(xì)胞表面的硫酸肝素之間的靜電相互作用，雖然作為用于促進(jìn)細(xì)胞的攝取的方法有用，但就正的表面電荷而言，存在產(chǎn)生在細(xì)胞內(nèi)由于與導(dǎo)入基因之間的相互作用而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄抑制、由于與mrna之間的相互作用而導(dǎo)致翻譯抑制的可能性。通過在上述的范圍內(nèi)調(diào)整表面電荷，可解決該問題。表面電荷的測定，可以用metasizernano(malverninstrumentsltd.)進(jìn)行。通過將本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的構(gòu)成成分的組成在不破壞本發(fā)明的目的范圍內(nèi)適宜調(diào)整，可以將表面電荷調(diào)整為期望的值。通過使本發(fā)明的試劑與細(xì)胞接觸，可以將本發(fā)明的試劑中包含的核酸導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)。對該“細(xì)胞”的種類沒有特別限定，可使用原核生物及真核生物的細(xì)胞，優(yōu)選為真核生物的細(xì)胞。對該真核生物的種類也沒有特別限定，可列舉例如：包括人的哺乳類(例如：人、猴、小鼠、大鼠、倉鼠、牛等)、鳥類(例如：雞、鴕鳥等)、兩棲類(例如：青蛙等)、魚類(例如：斑馬魚、鳉魚(稻田魚)等)等脊椎動(dòng)物；昆蟲(例如：蠶、蛾、果蠅等)等非脊椎動(dòng)物；植物；微生物(例如：酵母等)等。更優(yōu)選的是，作為本發(fā)明的對象的細(xì)胞，優(yōu)選為動(dòng)物細(xì)胞(例如：脊椎動(dòng)物細(xì)胞等)或者植物細(xì)胞，進(jìn)一步優(yōu)選為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。該細(xì)胞可以是包括癌細(xì)胞的培養(yǎng)細(xì)胞株，也可以是從個(gè)體、組織分離而成的細(xì)胞，或者組織或者組織片的細(xì)胞。另外，該細(xì)胞可以為貼壁細(xì)胞，也可以為非貼壁細(xì)胞。以下對在活體外(invitro)使本發(fā)明的試劑與細(xì)胞接觸的方法進(jìn)行具體說明。對細(xì)胞而言，在與本發(fā)明的試劑接觸的數(shù)天前懸浮于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中，以適當(dāng)?shù)臈l件進(jìn)行培養(yǎng)。在與本發(fā)明的試劑接觸的時(shí)候，細(xì)胞可以處于增殖期，也可以不是。該接觸時(shí)的培養(yǎng)液可以是含血清培養(yǎng)基，也可以是不含血清培養(yǎng)基，優(yōu)選培養(yǎng)基中的血清濃度為30重量％以下，更優(yōu)選為20重量％以下。如果培養(yǎng)基中含有過量的血清等蛋白質(zhì)，則存在阻礙本發(fā)明的試劑與細(xì)胞之間的接觸的可能性。對該接觸時(shí)的細(xì)胞密度沒有特別限定，可以考慮細(xì)胞的種類等進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定，通常為1×104～1×107細(xì)胞/ml的范圍。向這樣制備的細(xì)胞，例如，添加上述的導(dǎo)入了核酸的本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的懸浮液。對該懸浮液的添加量沒有特別限定，可以考慮細(xì)胞數(shù)等進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。對與細(xì)胞接觸時(shí)該懸浮液中的本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的濃度而言，只要能夠?qū)崿F(xiàn)目標(biāo)核酸向細(xì)胞內(nèi)的導(dǎo)入即可，沒有特別限定，作為脂質(zhì)濃度，通常為1～100nmol/ml，優(yōu)選為10～50nmol/ml，作為核酸的濃度，通常為0.01～100μg/ml，優(yōu)選為0.1～10μg/ml。將上述的懸浮液添加至細(xì)胞后，培養(yǎng)該細(xì)胞。對培養(yǎng)時(shí)的溫度、濕度、co2濃度等而言，可以考慮細(xì)胞的種類進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。在細(xì)胞為源自哺乳動(dòng)物的細(xì)胞時(shí)，通常溫度為約37℃，濕度為約95％，co2濃度為約5％。另外，雖然培養(yǎng)時(shí)間也可以考慮使用的細(xì)胞的種類等條件進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定，但通常為0.1～24小時(shí)的范圍，優(yōu)選為0.25～4小時(shí)的范圍，更優(yōu)選為0.5～2小時(shí)的范圍。如果上述培養(yǎng)時(shí)間過短，則核酸不能充分地導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，如果培養(yǎng)時(shí)間過長，則細(xì)胞可能變虛弱。通過上述培養(yǎng)將核酸導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，優(yōu)選為將培養(yǎng)基與新鮮的培養(yǎng)基交換，或向培養(yǎng)基中添加新鮮的培養(yǎng)基并進(jìn)一步繼續(xù)培養(yǎng)。在細(xì)胞為源自哺乳動(dòng)物的細(xì)胞時(shí)，優(yōu)選新鮮的培養(yǎng)基含有血清或營養(yǎng)因子。另外，如上所述，通過使用本發(fā)明的試劑，不僅在活體外(invitro)，在活體內(nèi)(invivo)中能夠也將核酸導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。即，通過將本發(fā)明的試劑給予對象，例如，使導(dǎo)入了核酸的本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體到達(dá)并與目標(biāo)細(xì)胞接觸，在活體內(nèi)將已導(dǎo)入該脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體中的核酸導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。對可以給予本發(fā)明的試劑的對象沒有特別限定，可以舉出例如：包括人的哺乳類(例：人、猴、小鼠、大鼠、倉鼠、牛等)、鳥類(例：雞、鴕鳥等)、兩棲類(例：青蛙等)、魚類(例、斑馬魚、鳉魚等)等脊椎動(dòng)物，昆蟲(例、蠶、蛾、果蠅等)等無脊椎動(dòng)物、植物等。本發(fā)明的試劑的給予對象優(yōu)選為人或其它哺乳動(dòng)物。對目標(biāo)細(xì)胞的種類沒有特別限定，可以通過使用本發(fā)明的試劑，向各種組織(例如，肝、腎、胰腺、肺、脾、心臟、血液、肌肉、骨、腦，胃、小腸、大腸、皮膚、脂肪組織等)中的細(xì)胞導(dǎo)入核酸。另外，本發(fā)明的試劑中包含的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體，也可以導(dǎo)入有除了核酸以外的化合物。在本發(fā)明的試劑含有導(dǎo)入了除了核酸以外的化合物的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的情況下，就給予本發(fā)明的試劑的對象(例如：脊椎動(dòng)物、無脊椎動(dòng)物等)的方法而言，只要是能夠使該脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體到達(dá)并與目標(biāo)細(xì)胞接觸，并將已導(dǎo)入至該脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的化合物導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的方法即可，沒有特別限定，可以考慮導(dǎo)入化合物的種類、目標(biāo)細(xì)胞的種類、部位等，適當(dāng)選擇本身公知的給予方法(例如：口服給予、非口服給予(例如：靜脈內(nèi)給予、肌肉內(nèi)給予、局部給予、經(jīng)皮給予、皮下給予、腹腔內(nèi)給予、噴霧等)等)。對本發(fā)明的試劑的給予量而言，只要是能夠?qū)崿F(xiàn)化合物向細(xì)胞內(nèi)的導(dǎo)入的范圍即可，沒有特別限定，可以考慮給予對象的種類、給予方法、導(dǎo)入化合物的種類、目標(biāo)細(xì)胞的種類、部位等進(jìn)行適當(dāng)選擇。對將化合物導(dǎo)入至本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體的方法沒有特別的限制，例如，可以通過與上述的向本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體導(dǎo)入核酸的方法同樣的方法，或基于其的方法制備。對本發(fā)明的試劑的劑型沒有特別限制，可列舉例如：注射劑(例如：皮下注射劑、靜脈內(nèi)注射劑、肌肉內(nèi)注射劑、腹腔內(nèi)注射劑、點(diǎn)滴注射劑等)等。本發(fā)明的試劑可以通過將本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體按照相應(yīng)于用途(例如研究用試劑、醫(yī)藥等)的常規(guī)方法進(jìn)行制劑化而制造。在將本發(fā)明的試劑作為研究用試劑提供的情況下，對該本發(fā)明的試劑而言，可以將本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體直接使用，或者使用其與例如水、或者除了水以外的生理上允許的液體(例如，水溶性溶劑(例如，蘋果酸緩沖液等)、有機(jī)溶劑(例如：甲醇、乙醇、dmso等)或者水溶性溶劑和有機(jī)溶劑的混合液等)而成的無菌性溶液或者懸浮液進(jìn)行提供。本發(fā)明的試劑可以適當(dāng)含有本身公知的生理上允許的添加劑(例如：賦形劑、媒介物、防腐劑、穩(wěn)定劑、粘合劑等)。另外，在將本發(fā)明的試劑作為醫(yī)藥提供的情況下，對該本發(fā)明的試劑而言，可以將本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體直接使用，或者與醫(yī)藥上允許的公知的添加劑(例如：載體、香味劑、賦形劑、媒介物、防腐劑、穩(wěn)定劑、粘合劑等)一起使用，通過以通常認(rèn)定的制劑實(shí)施所要求的單位用量形態(tài)進(jìn)行混合，以口服劑(例如：片劑、膠囊劑等)或者非口服劑(例如注射劑、噴霧劑等)的形式，優(yōu)選為非口服劑(更優(yōu)選注射劑)的形式進(jìn)行制造。本發(fā)明的試劑除了成人用以外，也可以作為兒童用的制劑。本發(fā)明的試劑也能夠以試劑盒的形態(tài)進(jìn)行提供。該試劑盒除了本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體及核酸此外，可以包含向細(xì)胞導(dǎo)入核酸時(shí)使用的試劑。在一種形態(tài)中，本發(fā)明的試劑(或試劑盒)可以進(jìn)一步包含聚陽離子(例如：魚精蛋白等)。本發(fā)明的試劑(或試劑盒)，可以通過進(jìn)一步包含聚陽離子(例如：魚精蛋白等)，容易地將核酸與聚陽離子(例如：魚精蛋白等)而成的靜電復(fù)合體導(dǎo)入至本發(fā)明的脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)體而制備mend。該mend可用于核酸的細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入。實(shí)施例以下，舉出實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，但本發(fā)明不限于該實(shí)施例。在實(shí)施例的說明中使用的簡稱的含義，分別如下所述。lin-ms：甲磺酸亞油酰酯mim：3,4-o-異亞丙基-d-甘露醇tlmim：1,2,5,6-四亞油?；?3,4-o-異亞丙基-d-甘露醇tlm：1,2,5,6-四亞油酰基-d-甘露醇tlm-c2-br：1,2,5,6-四亞油?；?3,4-二(溴乙?；?-d-甘露醇dmap：4-二甲基氨基吡啶chol：膽甾醇peg2000-dmg：1,2-二肉豆蔻酰-sn-丙三醇，甲氧基聚乙二醇(peg分子量：2000)decenyl-ms：甲基磺酸癸烯基酯tdmim：1,2,5,6-四(癸烯基)-3,4-o-異亞丙基-d-甘露醇tdm：1,2,5,6-四(癸烯基)-d-甘露醇tbdps-cl：叔丁基二苯基氯硅烷dipea：二異丙基乙基胺dtbdps-m：1,6-二-(叔丁基二苯基甲硅烷基)-d-甘露醇dtbdps-tlmes：1,6-二-(叔丁基二苯基甲硅烷基)-2,3,4,5-四亞油?；?d-甘露醇tlmes：四亞油?；?d-甘露醇tbaf：四丁基氟化銨在表2及表3中，示出了以下的實(shí)施例及比較例中制造的陽離子脂質(zhì)的名稱和結(jié)構(gòu)。[表2][表3][制造例1]<甲硅烷基保護(hù)>dtbdps-m的合成向d-甘露醇(東京化成工業(yè)株式會(huì)社制)3.0g(16.5mmol)中添加n,n-二甲基甲酰胺48ml及dipea(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制)6.4g(49.4mmol)，一邊攪拌一邊冷卻至0～10℃。向其中滴加添加將tbdps-cl(東京化成工業(yè)株式會(huì)社制)13.6g(49.4mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺16ml而成的溶液并使溫度不超過10℃。在滴加結(jié)束后，升溫至20℃，攪拌2.5小時(shí)。通過tlc分析(展開溶劑：氯仿/甲醇＝9/1(v/v)，以過錳酸鉀顯色)確認(rèn)了d-甘露醇及單甲硅烷基體消失，結(jié)束反應(yīng)。向反應(yīng)溶液加入離子交換水120ml及甲苯60ml，攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘使其分層。用離子交換水40ml再次水洗得到的甲苯層之后，濃縮了甲苯層。將得到的濃縮物質(zhì)溶解于乙腈170ml之后，利用己烷170ml進(jìn)行5次提取純化。蒸餾除去得到的乙腈層的溶劑，得到了9.2g的dtbdps-m。通過1h-nmr(600mhz，cdcl3)分析得到的dtbdps-m，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ1.03ppm(s,18h,(ch3-)3c-),δ3.79-3.89ppm(m,8h,-o-ch2-ch(-oh)-ch(-oh)-),δ7.25-7.72ppm(m,20h,tbu-si(-ph)2-)[實(shí)施例1](tlm-c2-dma的合成)<甲磺?；?gt;lin-ms的合成向脫水甲苯500g加入亞油酸醇100g(日油株式會(huì)社制，純度≥99％)(0.38mol)、三乙胺(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制)46g(0.45mol)并溶解，在氮?dú)怏w氛圍中一邊攪拌一邊冷卻至10℃。以溫度為30℃以下的方式，經(jīng)2小時(shí)滴加了甲磺酰氯(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制)47g(0.41mol)。滴加結(jié)束后，通過tlc分析(展開溶劑：氯仿，磷酸硫酸銅顯色)確認(rèn)了亞油酸醇的點(diǎn)已消失。添加乙醇5.2g(0.11mol)，通過濾紙濾去不溶物。利用離子交換水150g洗滌濾液，并廢棄水層。再次進(jìn)行水洗之后，向得到的有機(jī)層添加無水硫酸鎂20g進(jìn)行脫水處理。通過濾紙濾去不溶物，用蒸發(fā)儀蒸餾除去濾液的溶劑，得到了120g的lin-ms。通過1h-nmr(600mhz，cdcl3)分析得到的lin-ms，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,3h,ch3-ch2-),δ1.41-1.26ppm(m,16h,ch3-ch2-ch2-ch2-,-ch＝ch-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-),δ1.75ppm(quint,2h,-ch2-ch2-o-),δ2.05ppm(q,4h,-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-),δ2.77ppm(t,2h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),δ3.00ppm(s,3h,-so2-ch3),δ4.22ppm(t,2h,-ch2-o-),δ5.41-5.31ppm(m,4h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-)<醚化>tlmim的合成向甲苯40g添加mim(東京化成工業(yè)株式會(huì)社制)2.0g(9.00mmol)，進(jìn)一步添加氫氧化鉀(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制)4.2g(74.50mmol)、lin-ms18.6g(54.00mmol)，在25℃攪拌5分鐘。隨后升溫至80℃，攪拌了14小時(shí)。根據(jù)1h-nmr分析，確認(rèn)源自反應(yīng)產(chǎn)物的峰出現(xiàn)，源自lin-ms峰的積分值的減少停止，并終止反應(yīng)。向反應(yīng)溶液添加甲苯60ml和離子交換水100ml，在20℃攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層。除去水層之后，再次進(jìn)行水洗。接著添加25wt％的食鹽水100ml，攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層，除去水層。向得到的有機(jī)層添加無水硫酸鎂2.0g，進(jìn)行脫水處理。通過濾紙濾去不溶成分，用蒸發(fā)儀蒸餾除去濾液的溶劑，得到了褐色液體11.5g。將得到的褐色液體10g利用硅膠柱色譜進(jìn)行純化(洗脫液：己烷/乙酸乙酯＝100/0～98/2(v/v))，得到了tlmim3.0g。通過1hnmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tlmim，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),δ1.38-1.29ppm(m,64h,ch3-ch2-ch2-ch2-,-ch＝ch-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-),δ1.38ppm(s,6h,-o-c(ch3)2-o-),δ1.56ppm(m,8h,-ch2-ch2-o-),δ2.05ppm(q,16h,-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-),δ2.77ppm(t,8h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),δ3.54-3.41ppm(m,10h,-ch2-ch2-o-,-o-ch2-ch-ch-o-c(ch3)2-),δ3.67ppm(m,4h,-o-ch2-ch-ch-o-c(ch3)2-),δ4.06ppm(d,2h,-o-ch2-ch-ch-o-c(ch3)2-),δ5.40-5.31ppm(m,16h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-)<脫保護(hù)>tlm的合成向tlmim6.7g(5.51mmol)添加乙醇67ml、離子交換水4.0g(220.40mmol)、鹽酸(4.0m二噁烷溶液)(東京化成工業(yè)株式會(huì)社制)13.8ml(以鹽酸計(jì)為55.10mmol)，在60℃攪拌6h。通過tlc分析(展開溶劑：氯仿/甲醇＝99.5/0.5(v/v)，磷酸硫酸銅顯色)，確認(rèn)tlmim的點(diǎn)已消失，結(jié)束反應(yīng)。一邊將反應(yīng)液冷卻至5℃一邊靜置13h進(jìn)行分層，回收了有機(jī)層。回收的有機(jī)層利用氮?dú)夤呐荻麴s除去溶劑，得到了微褐色液體5.1g。將得到的微褐色液體4.6g利用硅膠柱色譜進(jìn)行純化(洗脫液：己烷/乙酸乙酯＝98/2～9/1(v/v))，得到了tlm3.5g。通過1hnmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tlm，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),δ1.38-1.28ppm(m,64h,ch3-ch2-ch2-ch2-,-ch＝ch-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-),δ1.56ppm(m,8h,-ch2-ch2-o-),2.05ppm(q,16h,-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-),2.77ppm(t,8h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),3.30ppm(d,2h,-oh),3.51-3.42ppm(m,6h,-o-ch2-ch-ch-oh,-o-ch2-ch-ch-oh),3.68-3.52ppm(m,8h,-ch2-ch2-o-),3.82ppm(d,2h,-o-ch2-ch-ch-oh),5.39-5.31ppm(m,16h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-)<酯化>tlm-c2-br的合成將tlm1.0g(0.85mmol)和溴乙酸(東京化成工業(yè)株式會(huì)社制)354.5mg(2.55mmol)溶解于氯仿10ml后，添加dmap(廣榮化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社制)51.9mg(0.43mmol)、dic(東京化成工業(yè)株式會(huì)社制)321.8mg(2.55mmol)，在25℃攪拌1小時(shí)。通過tlc分析(展開溶劑：僅氯仿，磷酸硫酸銅顯色)，確認(rèn)tlm的點(diǎn)已消失。隨后，利用離子交換水10ml、25wt％食鹽水10ml洗滌了反應(yīng)液，并回收有機(jī)層。向回收的有機(jī)層添加無水硫酸鎂1.0g進(jìn)行脫水處理，通過濾紙過濾分離不溶成分。用蒸發(fā)儀蒸餾除去濾液的溶劑，得到了微褐色液體1.6g。將得到的微褐色液體利用硅膠色譜進(jìn)行純化(洗脫液：己烷/乙酸乙酯＝100/0～97/3(v/v))，得到了tlm-c2-br980mg。通過1hnmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tlm-c2-br，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),1.38-1.27ppm(m,64h,ch3-ch2-ch2-ch2-,-ch＝ch-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-),1.52ppm(m,8h,-ch2-ch2-o-),2.05ppm(q,16h,-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-),2.77ppm(t,8h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),3.51-3.37ppm(m,10h,-ch2-ch2-o-,-o-ch2-ch-ch-o-co-),3.60ppm(m,4h,-o-ch2-ch-ch-o-co-),3.84ppm(s,4h,-o-co-ch2-),5.40-5.31ppm(m,16h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),5.51ppm(d,2h,-o-ch2-ch-ch-o-co-)<氨基化>tlm-c2-dma的合成將tlm-c2-br300mg(0.21mmol)溶解于thf2.2ml之后，添加二甲基胺(2.0mthf溶液)(東京化成工業(yè)株式會(huì)社制)846μl(以二甲基胺計(jì)1.68mmol)，在25℃攪拌4小時(shí)。通過tlc分析(展開溶劑：氯仿/甲醇＝96/4(v/v)，磷酸硫酸銅顯色)，確認(rèn)了反應(yīng)產(chǎn)物的點(diǎn)出現(xiàn)，以及作為原料的tlm-c2-br的點(diǎn)消失。向反應(yīng)溶液添加氯仿8ml、離子交換水10ml，攪拌10分鐘后，靜置10分鐘進(jìn)行分層，除去水層。隨后，進(jìn)行利用離子交換水10ml的水洗3次，利用25wt％食鹽水10ml的水洗一次，回收有機(jī)層。向回收的有機(jī)層添加無水硫酸鎂0.5g，進(jìn)行脫水處理。通過濾紙濾去不溶成分，用蒸發(fā)儀蒸餾除去濾液的溶劑，得到了tlm-c2-dma260mg。通過1hnmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tlm-c2-dma，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),1.38-1.27ppm(m,64h,ch3-ch2-ch2-ch2-,-ch＝ch-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-),1.52ppm(m,8h,-ch2-ch2-o-),2.05ppm(q,16h,-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-),2.35ppm(s,12h,-n-(ch3)2),2.77ppm(t,8h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),3.16ppm(q,4h,-o-co-ch2-),3.49-3.35ppm(m,10h,-ch2-ch2-o-,-o-ch2-ch-ch-o-co-),3.55ppm(m,4h,-o-ch2-ch-ch-o-co-),5.40-5.31ppm(m,16h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),5.47ppm(d,2h,-o-ch2-ch-ch-o-co-)[實(shí)施例2](tlm-c3-dma的合成)<酯化>將tlm1.0g(0.85mmol)和二甲基氨基丙酸鹽酸鹽(東京化成工業(yè)株式會(huì)社制)783.8mg(5.10mmol)溶解于氯仿10ml之后，添加dmap51.9mg(0.43mmol)、dcc(tama化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社制)1.1g(5.10mmol)、在25±5℃攪拌1小時(shí)。通過tlc分析(展開溶劑：氯仿/甲醇＝85/15(v/v)，磷酸硫酸銅顯色)，確認(rèn)tlm的點(diǎn)已消失。通過濾紙濾去反應(yīng)液中的不溶物，向得到的濾液添加氯仿10ml、離子交換水20ml、甲醇30ml洗滌，回收有機(jī)層。進(jìn)一步向有機(jī)層添加離子交換水20ml、甲醇40ml洗滌，回收有機(jī)層。向回收的有機(jī)層添加無水硫酸鎂1.0g，進(jìn)行脫水處理。通過濾紙濾去不溶成分，用蒸發(fā)儀蒸餾除去濾液的溶劑，得到了微褐色液體1.6g。將得到的微褐色液體利用硅膠色譜進(jìn)行純化(洗脫液：氯仿/甲醇＝98/2～96/4(v/v))，得到了tlm-c3-dma102mg。通過1hnmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tlm-c3-dma，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89(t,12h,ch3-ch2-),δ1.38-1.27(m,64h,ch3-ch2-ch2-ch2-,-ch＝ch-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-),δ1.52(m,8h,-ch2-ch2-o-),δ2.05(q,16h,-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-),δ2.23(s,12h,-n-(ch3)2),δ2.49(t,4h,-o-co-ch2-ch2-),δ2.60(m,4h,-o-co-ch2-ch2-),δ2.77(t,8h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),δ3.43(m,8h,-ch2-ch2-o-),δ3.53(m,6h,-o-ch2-ch-ch-o-co-,-o-ch2-ch-ch-o-co-),δ5.39-5.30(m,18h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-,-o-ch2-ch-ch-o-co-)[實(shí)施例3](tlm-c4-dma的合成)<酯化>將tlm0.5g(0.43mmol)和二甲基氨基丁酸鹽酸鹽(acrosorganics；thermofisherscientific公司制)427.6mg(2.55mmol)溶解于氯仿5ml之后，添加51.9mg的dmap(0.43mmol)、321.8mg的dic(tama2.55mmol)，在25℃攪拌4小時(shí)。通過tlc分析(展開溶劑：氯仿/甲醇＝85/15(v/v)，磷酸硫酸銅顯色)，確認(rèn)tlm的點(diǎn)已消失。隨后，向反應(yīng)液添加離子交換水5ml、乙醇5ml洗滌，回收有機(jī)層。再次進(jìn)行相同的洗滌，通過向回收的有機(jī)層添加硫酸鎂0.5g進(jìn)行脫水處理。通過濾紙濾去不溶成分，用蒸發(fā)儀蒸餾除去濾液的溶劑，得到了微褐色液體515.8mg。將得到的微褐色液體中的400mg利用硅膠色譜進(jìn)行純化(洗脫液：氯仿/甲醇＝96/4～8/2(v/v))，得到了tlm-c4-dma244mg。通過1hnmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tlm-c4-dma，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),δ1.38-1.27ppm(m,64h,ch3-ch2-ch2-ch2-,-ch＝ch-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-),δ1.53ppm(m,8h,-ch2-ch2-o-),δ1.77ppm(quint,4h,-ch2-ch2-ch2-n(ch3)2),δ2.05ppm(q,16h,-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-),δ2.21ppm(s,12h,-n-(ch3)2),δ2.28ppm(t,4h,-ch2-ch2-ch2-n(ch3)2),δ2.34ppm(m,4h,-ch2-ch2-ch2-n(ch3)2),δ2.77ppm(t,8h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),δ3.54-3.38ppm(m,14h,ch2-ch2-o-,-ch2-ch-ch-o-co-,-ch2-ch-ch-o-co-),δ5.40-5.32ppm(m,18h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-,-ch2-ch-ch-o-co-)[實(shí)施例4](tdm-c3-dma的合成)<甲磺?；?gt;decenyl-ms的合成向脫水甲苯50g添加癸烯醇(aldrich公司制)10.0g(64.0mol)、三乙胺7.8g(76.8mol)并使其溶解，在氮?dú)怏w氛圍中一邊攪拌一邊冷卻至10℃。以溫度為30℃以下的方式，經(jīng)30分鐘滴加了甲磺酰氯8.1g(70.4mol)。滴加結(jié)束后，通過tlc分析(展開溶劑：氯仿，磷酸硫酸銅顯色)確認(rèn)了癸烯醇的點(diǎn)已消失。添加乙醇0.9g(19.2mol)，通過濾紙濾去不溶物。利用離子交換水20g洗滌濾液，并廢棄水層。再次進(jìn)行水洗之后，向得到的有機(jī)層添加無水硫酸鎂5g進(jìn)行脫水處理。通過濾紙濾去不溶物，用蒸發(fā)儀蒸餾除去濾液的溶劑，得到了decenyl-ms14.5g。通過1h-nmr(600mhz，cdcl3)分析得到的decenyl-ms，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,3h,ch3-ch2-),δ1.26-1.36ppm(m,6h,ch3-ch2-ch2-ch2-),δ1.81ppm(quint,2h,-ch2-ch2-o-),δ2.02ppm(q,2h,ch3-ch2-ch2-ch2-ch＝),δ2.16ppm(q,2h,＝ch-ch2-ch2-ch2-o-),δ3.00ppm(s,3h,-so2-ch3),δ4.23ppm(t,2h,-ch2-o-),δ5.32ppm,δ5.45ppm(q,2h,-ch＝ch-)<醚化>tdmim的合成向mim1.8g(8.1mmol)添加甲苯36g，進(jìn)一步添加氫氧化鉀3.6g(64.8mmol)、decenyl-ms11.4g(48.6mmol)，在25℃攪拌5分鐘。隨后升溫至80℃，攪拌14小時(shí)。通過tlc分析(展開溶劑：氯仿，磷酸硫酸銅顯色)，確認(rèn)decenyl-ms的殘存量變得低于10％，結(jié)束反應(yīng)。向反應(yīng)溶液添加甲苯42ml和離子交換水72ml，在20℃攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層。除去水層之后，再次進(jìn)行水洗。接著添加20wt％的食鹽水72ml，攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層，除去水層。向得到的有機(jī)層添加無水硫酸鎂3.6g，進(jìn)行脫水處理。通過濾紙濾去不溶成分，用蒸發(fā)儀蒸餾除去濾液的溶劑，得到了褐色液體7.5g。將得到的褐色液體7.5g利用硅膠柱色譜進(jìn)行純化(洗脫液：己烷/乙酸乙酯＝100/0～98.5/1.5(v/v))，得到了tdmim5.3g。通過1h-nmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tdmim，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),δ1.26-1.38ppm(m,24h,ch3-ch2-ch2-ch2-),δ1.38ppm(s,6h,-o-c(ch3)2-o-),δ1.63ppm(m,8h,-ch2-ch2-o-),δ2.02ppm(q,8h,ch3-ch2-ch2-ch2-ch2-),δ2.77ppm(t,8h,-ch2-ch2-ch2-o-),δ3.54-3.41ppm(m,10h,-ch2-ch2-o-,-o-ch2-ch-ch-o-c(ch3)2-),δ3.67ppm(m,4h,-o-ch2-ch-ch-o-c(ch3)2-),δ4.06ppm(d,2h,-o-ch2-ch-ch-o-c(ch3)2-),δ5.40-5.31ppm(m,16h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-)<脫保護(hù)>tdm的合成向tdmim5.0g(6.5mmol)添加乙醇50ml、離子交換水4.6g(258.0mmol)、鹽酸(4m二噁烷溶液)16.1ml(64.5mmol)，在60℃攪拌3小時(shí)。通過tlc分析(展開溶劑：氯仿/甲醇＝99.5/0.5(v/v)，磷酸硫酸銅顯色)，確認(rèn)tdmim和作為中間體的單異亞丙基體消失，結(jié)束反應(yīng)。向反應(yīng)液添加己烷50ml，在25℃攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層?；厥丈蠈?己烷層)，向其中添加乙腈50ml。在25℃攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層。除去乙腈層之后，再次進(jìn)行乙腈洗滌。蒸餾除去得到的己烷層的溶劑，得到了微褐色液體4.1g。將得到的微褐色液體4.0g利用硅膠柱色譜進(jìn)行純化(洗脫液：己烷/乙酸乙酯＝98/2～95/5(v/v))，得到了tdm2.6g。通過1h-nmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tdm，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),δ1.25-1.35ppm(m,24h,ch3-(ch2)3-),δ1.63ppm(m,8h,-ch2-ch2-o-),2.01ppm(q,8h,ch3-(ch2)3-ch2-),δ2.77ppm(t,8h,-ch2-ch2-ch2-o-),3.26-3.84ppm(m,18h,-o-ch2-ch-ch-oh,-ch2-ch2-o-),5.33-5.38ppm(m,8h,-ch＝ch-)<酯化>tdm二丙烯酸酯體的合成向脫水甲苯5.0g添加tdm500mg(0.68mmol)、三乙胺275mg(2.72mmol)并攪拌。向其中滴加了溶解于脫水甲苯1.0g的丙烯酰氯246mg(2.72mmol)。在25℃攪拌1h，之后過濾析出物質(zhì)，得到了tdm二丙烯酸酯體的甲苯溶液。<氨基化>向tdm二丙烯酸酯體的甲苯溶液添加2.0m二甲基胺/四氫呋喃溶液1.7ml(二甲基胺3.40mmol)，在70℃攪拌1h。反應(yīng)溶液冷卻至25℃，添加10wt％食鹽水5.0g，攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層。除去下層(水層)，向上層(甲苯層)添加25wt％食鹽水5.0g，攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層。除去下層(水層)，利用無水硫酸鎂500mg使上層(甲苯層)脫水，過濾之后，濃縮濾液，得到了微黃色液體406mg。將得到的微黃色液體中300mg利用硅膠柱色譜進(jìn)行純化(洗脫液：己烷/乙酸乙酯＝99/1～95/5(v/v))，得到了241mg的tdm-c3-dma。通過1hnmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tdm-c3-dma，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),δ1.27-1.38ppm(m,24h,ch3-(ch2)3-),δ1.63ppm(m,8h,-ch2-ch2-o-),δ2.01ppm(q,8h,ch3-(ch2)3-ch2-),δ2.23ppm(s,12h,-n-(ch3)2),δ2.49ppm(t,4h,-o-co-ch2-ch2-),δ2.60ppm(m,4h,-o-co-ch2-ch2-),δ2.77ppm(t,8h,-ch2-ch2-ch2-o-),δ3.43(m,8h,-ch2-ch2-o-),δ3.53ppm(m,6h,-o-ch2-ch-ch-o-co-),δ5.39-5.30ppm(m,10h,-ch＝ch-,-o-ch2-ch-ch-o-co-)[實(shí)施例5](tlmes-c3-dma的合成)<酯化>dtbdps-tlmes的合成向氯仿45ml加入dtbdps-m4.0g(6.1mmol)、亞油酸(日油公司制，純度≥99％)9.4g(33.4mmol)、0.7g的dmap(6.1mmol)，使其溶解。向其中添加7.6g的edc(39.5mmol)，在30℃攪拌5小時(shí)。通過tlc分析(展開溶劑：氯仿，過磷酸硫酸銅顯色)，確認(rèn)dtbdps-m及作為中間體的單～三酯體消失，結(jié)束反應(yīng)。從反應(yīng)溶液蒸餾除去溶劑之后，溶解于己烷60ml中。向己烷溶液添加乙腈30ml，在25℃攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘，進(jìn)行分層?；厥占和閷樱ㄟ^蒸餾除去溶劑，得到微黃色液體11.1g。將得到的微黃色液體10.0g利用硅膠柱色譜進(jìn)行純化(洗脫液：己烷/乙酸乙酯＝99.5/0.5～99/1(v/v))，得到了6.8g的dtbdps-tlmes。通過1h-nmr(600mhz，cdcl3)分析得到的dtbdps-tlmes，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),δ1.03ppm(s,18h,(ch3-)3c-),δ1.25-1.37ppm(m,64h,ch3-(ch2)3-,＝ch-(ch2)4-ch2-ch2-),δ1.47-1.54ppm(m,8h,-ch2-ch2-co-o-),δ2.04ppm(q,16h,-ch2-ch2-ch＝ch-),δ2.11-2.32(m,8h,ch2-co-o-),δ2.77ppm(t,8h,＝ch-ch2-ch＝),δ3.62-3.74ppm(m,4h,-o-ch2-ch-),δ4.99ppm(m,2h,-o-ch2-ch-ch-),δ5.32-5.39ppm(m,16h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-),δ5.57ppm(m,2h,-o-ch2-ch-ch-),δ7.33-7.63ppm(m,20h,tbu-si(-ph)2-)<脫保護(hù)>tlmes的合成將3.00g的dtbdps-tlmes(1.8mmol)溶解于四氫呋喃中，一邊攪拌一邊冷卻至5℃。通過以不超過10℃的方式進(jìn)行滴加，依次添加了乙酸(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制)0.7g(12.3mmol)、及tbaf(1m四氫呋喃溶液)(東京化成工業(yè)株式會(huì)社制)10.5ml(10.5mmol)。滴加后，在25℃攪拌7小時(shí)。通過tlc分析(展開溶劑：氯仿，磷酸硫酸銅顯色)，確認(rèn)dtbdps-tlmes及作為中間體的單甲硅烷基體消失，結(jié)束反應(yīng)。用氯仿30ml稀釋反應(yīng)溶液之后，添加5wt％碳酸氫鈉水溶液30ml，在25℃攪拌10分鐘。攪拌后靜置10分鐘進(jìn)行分層，回收有機(jī)層。得到的有機(jī)層進(jìn)一步利用離子交換水30ml進(jìn)行水洗，之后蒸餾除去溶劑，得到微黃色液體3.0g。將得到的微黃色液體2.8g利用硅膠柱色譜進(jìn)行純化(洗脫液：己烷/乙酸乙酯＝97/3～80/20(v/v))，得到了1.9g的tlmes。通過1h-nmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tlmes，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),δ1.25-1.37ppm(m,64h,ch3-(ch2)3-,＝ch-(ch2)4-ch2-ch2-),δ1.61ppm(m,8h,-ch2-ch2-co-o-),δ2.04ppm(q,16h,-ch2-ch2-ch＝ch-),δ2.26-2.37(m,8h,-ch2-co-o-),δ2.77ppm(t,8h,＝ch-ch2-ch＝),δ2.90-5.23ppm(m,8h,-o-ch2-ch-ch-),δ5.32-5.39ppm(m,16h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-)<酯化>tlmes二丙烯酸酯體的合成向脫水甲苯17g添加1.7g的tlmes(1.4mmol)、三乙胺0.6g(5.5mmol)，在25℃攪拌。向其中滴加了溶解于脫水甲苯3.4g的丙烯酰氯0.5g(5.5mmol)。在25℃攪拌1h之后，過濾析出物質(zhì)，得到了tlmes二丙烯酸酯體的甲苯溶液。<氨基化>tlmes-c3-dma的合成向tlmes二丙烯酸酯體的甲苯溶液添加2.0m二甲基胺/四氫呋喃溶液6.9ml(13.8mmol)，在70℃攪拌1h。將反應(yīng)溶液冷卻至25℃，添加10wt％食鹽水17g攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層。除去下層(水層)，向上層(甲苯層)添加25wt％食鹽水17g，攪拌10分鐘，之后靜置10分鐘進(jìn)行分層。除去下層(水層)，利用無水硫酸鎂1.0g使上層(甲苯層)脫水，過濾之后，濃縮濾液，得到了微黃色液體1.4g。將得到的微黃色液體1.4g利用硅膠柱色譜進(jìn)行純化(洗脫液：己烷/乙酸乙酯＝99/1～97/3(v/v))，得到了0.5g的tlmes-c3-dma。通過1h-nmr(600mhz，cdcl3)分析得到的tlmes-c3-dma，確認(rèn)為目的物質(zhì)。δ0.89ppm(t,12h,ch3-ch2-),δ1.25-1.37ppm(m,64h,ch3-(ch2)3-,＝ch-(ch2)4-ch2-ch2-),δ1.61ppm(m,8h,-ch2-ch2-co-o-),δ2.06ppm(q,16h,-ch2-ch2-ch＝ch-),δ2.22-2.36(m,20h,-(ch2)6-ch2-co-o-,(ch3)2-n-),δ2.47-2.64ppm(m,8h,(ch3)2-n-(ch2)2-co-o-),δ2.78ppm(t,8h,＝ch-ch2-ch＝),δ4.04ppm,δ4.30ppm,δ5.11ppm,δ5.47ppm(m,8h,-o-ch2-ch-ch-),δ5.32-5.39ppm(m,16h,-ch＝ch-ch2-ch＝ch-)[實(shí)施例6]各種mend的制備(1)由sirna和魚精蛋白構(gòu)成的核酸靜電復(fù)合體的形成將sirna(hokkaidosystemscience株式會(huì)社)以2mg/ml、4mg/ml的方式溶解于ultrapurednase/rnase-freedistilledwater(invitrogen；thermofischerscientific公司)，制備了sirna溶液。作為載體的核，將該sirna溶液、魚精蛋白溶液(calbiochem；merckmillipore公司)用10mmhepes緩沖液分別稀釋至0.3mg/ml、0.2mg/ml，一邊攪拌0.3mg/mlsirna250μl一邊每次少量滴加0.2mg/ml魚精蛋白250μl，制備了sirna與魚精蛋白的靜電復(fù)合體(以下，稱為“sirna復(fù)合體”)(n/p比＝1.0)。作為針對factorvii(以下，稱為“fvii”)的sirna的序列，使用了akincetal.,moleculartherapy,17(5),872-879(may2009)中記載的序列(未經(jīng)化學(xué)修飾)。(2)封裝sirna的mend的制備(作為陽離子脂質(zhì)，單獨(dú)使用了tlm-c2-dma、tlm-c3-dma、tlm-c4-dma、tdm-c3-dma、tlmes-c3-dma、dlindap、dodap)將陽離子脂質(zhì)(tlm-c2-dma(實(shí)施例1)、tlm-c3-dma(實(shí)施例2)、tlm-c4-dma(實(shí)施例3)、tdm-c3-dma(實(shí)施例4)、tlmes-c3-dma(實(shí)施例5)、dlindap(比較例1)、dodap(比較例2))的90％丁醇溶液和chol溶液，以陽離子脂質(zhì)：chol＝7:3的摩爾比，以總脂質(zhì)為3000nmol的方式在1.7ml管中混合。進(jìn)一步，將作為peg脂質(zhì)的peg2000-dmg溶液以相對于總脂質(zhì)的3mol％進(jìn)行添加，分別以使得總量為400μl的方式添加90％丁醇，制成了脂質(zhì)溶液。在另外的1.7ml管中，將sirna復(fù)合體(sirna含量：160μg)與包含130mmnacl的20mm檸檬酸緩沖液(ph4)進(jìn)行混合，使得總計(jì)114μl，制備了sirna溶液。一邊通過渦旋震蕩混合器攪拌脂質(zhì)溶液，一邊添加sirna溶液進(jìn)行混合。用1ml進(jìn)樣針(27g)取該混合溶液的總量，緩慢注入正在劇烈攪拌的檸檬酸緩沖液2ml中(5ml管)。用磷酸緩沖生理鹽水(以下，稱為“pbs”)進(jìn)行稀釋，使用amiconultra-15100kdevice(merckmillipore公司)，進(jìn)行超濾(1000g，15分鐘，30℃)而濃縮。隨后，用pbs進(jìn)行稀釋，再次進(jìn)行超濾而濃縮。最后，用pbs調(diào)整使得形成為目標(biāo)脂質(zhì)濃度，得到了封裝sirna的mend。通過該操作制備的mend根據(jù)使用的陽離子脂質(zhì)不同，以下稱為“tlm-c2-dmamend”、“tlm-c3-dmamend”、“tlm-c4-dmamend”、“tdm-c3-dmamend”、“tlmes-c3-dmamend”、“dlindapmend”、“dodapmend”。(3)封裝sirna的mend的制備(作為陽離子脂質(zhì)，混合tlm-c2-dma、tlm-c3-dma、tlm-c4-dma中的2種進(jìn)行使用)將tlm-c2-dma(實(shí)施例1)、tlm-c3-dma(實(shí)施例2)、tlm-c4-dma(實(shí)施例3)的以表4所述的摩爾比混合而成的脂質(zhì)的90％丁醇溶液(tlm-cx-dmamix)，分別以tlm-cx-dmamix:chol＝7:3的摩爾比，以總脂質(zhì)為3000nmol的方式在1.7ml管中混合。進(jìn)一步，將作為peg脂質(zhì)的peg2000-dmg以相對于總脂質(zhì)的3mol％的量進(jìn)行添加，分別以使得總量為400μl的方式添加90％丁醇，制成了脂質(zhì)溶液。在另外的1.7ml管中，將sirna復(fù)合體(sirna含量：160μg)與10mm的蘋果酸緩沖液(ph7.4)進(jìn)行混合使得總計(jì)50μl，制備了sirna溶液。一邊用渦旋震蕩混合器攪拌脂質(zhì)溶液，一邊添加sirna溶液進(jìn)行混合。用1ml進(jìn)樣針(27g)取該混合溶液的總量，緩慢注入正在劇烈攪拌的蘋果酸緩沖液2ml中(5ml管)。用pbs進(jìn)行稀釋，使用amiconultra-15100kdevice(merckmillipore公司)進(jìn)行超濾(1000g，10分鐘，30℃)而濃縮。隨后，用pbs進(jìn)行稀釋，再次進(jìn)行超濾而濃縮。最后，用pbs調(diào)整溶液使得形成為目標(biāo)脂質(zhì)濃度，得到了封裝sirna的mend。通過該操作制備的mend，如表4記載所述，根據(jù)使用的陽離子脂質(zhì)的比率不同，以下稱為“第1mend”、“第2mend”、“第3mend”、“第4mend”。[表4]mend名稱脂質(zhì)混合比第1mendtlm-c2-dma:tlm-c3-dma＝0.21:0.79第2mendtlm-c3-dma:tlm-c4-dma＝0.75:0.25第3mendtlm-c3-dma:tlm-c4-dma＝0.50:0.50第4mendtlm-c3-dma:tlm-c4-dma＝0.25:0.75(4)利用乙醇稀釋法的mrna封裝mend的制備(分別使用tlm-c3-dma、tdm-c3-dma)將陽離子脂質(zhì)(tlm-c3-dma(實(shí)施例2)、tdm-c3-dma(實(shí)施例4))的99.5％乙醇溶液以陽離子脂質(zhì)：dope:chol＝3:3:4的比率，以總脂質(zhì)量為131nmol的方式在5ml管中混合。另外，將作為peg脂質(zhì)的peg2000-dmg以相對于總脂質(zhì)的3mol％的量進(jìn)行添加，使得總量為30ml。準(zhǔn)備了這樣的4管。另外在另外準(zhǔn)備的1.5ml管中，添加編碼熒光素酶的mrna(用mmessagemmachinet7ultratranscriptionkit(lifetechnologies公司)制備)3mg，這里添加包含30mmnacl的20mm蘋果酸緩沖液(ph3.0)使得總量為45ml，此溶液也與脂質(zhì)溶液同樣準(zhǔn)備了4管。將脂質(zhì)溶液一邊渦旋震蕩一邊與mrna溶液混合，接著添加925ml的100mm2-嗎啉代乙磺酸(以下，稱為“mes”)緩沖液(ph5.5)進(jìn)行混合，并潷析進(jìn)入預(yù)先添加了2ml的mes緩沖液的vivaspinturbo15(sartorius公司制。以下，稱為“vivaspin”。)中。進(jìn)一步向該5ml管添加2ml的mes緩沖液，并渦旋震蕩進(jìn)行洗滌，相同地潷析進(jìn)入vivaspin。該操作重復(fù)4次，最后向vivaspin直接添加2ml的mes緩沖液，在25℃，1000g離心進(jìn)行超濾。進(jìn)一步添加pbs充分稀釋，在相同條件下進(jìn)行超濾。用pbs調(diào)整該溶液使其成為目標(biāo)濃度，得到了mrna封裝mend。通過該操作制備的mend根據(jù)使用的陽離子脂質(zhì)不同，以下稱為“tlm-c3-dmammend”、“tdm-c3-dmammend”。作為編碼熒光素酶的mrna的序列，使用了miuraetal.,nucleicacidsresearch,43(3),1317-1331(2015)的“supplementarydata”中記載的序列。[實(shí)施例7]各種mend的粒徑、多分散度、表面電位、sirna封裝率、sirna回收率的測定對各種mend的粒徑、多分散度以及表面電位用動(dòng)態(tài)光散射法(zetasizernano；malverninstrumentsltd.)進(jìn)行了測定。對sirna封裝率及sirna回收率而言，用ribogreen(invitrogen；thermofischerscientific公司)進(jìn)行了測定。將實(shí)施例6(2)或(3)中制備的各種mend用10mmhepes緩沖液(ph7.4)稀釋成1000ng/ml，將其制成樣品溶液。另外，將mend的制備中使用的sirna復(fù)合體用10mmhepes緩沖液(ph7.4)階梯性稀釋成0～2000ng/ml，將其制成標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。在這些溶液之外，準(zhǔn)備了用10mmhepes緩沖液將葡聚糖硫酸、tritonx-100、ribogreen分別稀釋成0.08mg/ml、0.4％、5μl/ml而成的測定溶液。另外，也準(zhǔn)備了用10mmhepes緩沖液替換tritonx-100而成的溶液。向96孔板添加標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液或樣品溶液50μl，進(jìn)一步分別加入含有或者不含tritonx-100的測定溶液50μl并混合，以700rpm攪拌5分鐘之后，測定了在激發(fā)波長500nm及觀測波長525nm的熒光強(qiáng)度。通過用含有tritonx-100的條件下測定時(shí)的sirna量除以1000ng/ml，算出了sirna回收率。再從以含有tritonx-100的條件測定時(shí)的sirna量減去以不含tritonx-100的條件測定時(shí)的sirna量，通過用含有tritonx-100的條件測定時(shí)的sirna量除以該值，算出了sirna封裝率。結(jié)果示于表5及表6。[表5][表6][實(shí)施例8]mend的pka評(píng)價(jià)準(zhǔn)備了符合在ph3.0～10.0的范圍的各種ph的、包含終濃度150mm的nacl的20mm的檸檬酸緩沖液、磷酸鈉緩沖液及trishcl緩沖液。向這些緩沖液中添加了實(shí)施例6(2)或(3)中制備的mend使得脂質(zhì)濃度為30μm，進(jìn)一步以使得為6μm的方式添加了6-(對甲苯胺基)-2-萘磺酸鈉鹽，使最終容量為100μl。隨后，在37℃測定了在激發(fā)波長321nm及觀測波長447nm的熒光強(qiáng)度。以各mend中熒光強(qiáng)度的最大值為100％，最小值為0％，以百分率計(jì)，算出相對熒光強(qiáng)度。另外，將相對熒光強(qiáng)度為50％的ph作為pka。結(jié)果示于表7及表8。[表7]mend名稱mend的pkatlm-c2-dmamend4.67tlm-c3-dmamend5.89tlm-c4-dmamend6.83tdm-c3-dmamend6.14tlmes-c3-dmamend5.78dlindapmend5.34dodapmend5.44[表8]mend名稱mend的pka第1mend5.81第2mend6.28第3mend6.56第4mend6.74[實(shí)施例9]tlm-c2-dmamend、tlm-c3-dmamend、tlm-c4-dmamend、tdm-c3-dmamend、tlmes-c3-dmamend的膜融合能力試驗(yàn)從雄性icr小鼠采血，回收紅細(xì)胞，懸浮于生理鹽水。將包含一定量的紅細(xì)胞的生理鹽水，添加至pbs(ph7.4)或10mm磷酸-10mm蘋果酸緩沖生理鹽水(ph6.5、5.5)。接下來，添加含有實(shí)施例6(2)制備的mend的pbs溶液，使脂質(zhì)終濃度為300μmol/l。另外，以添加了不含有mend的相同量的pbs的溶液作為陰性對照(nc)，將以下液體作為陽性對照(pc)：添加了不含有mend的相同量的pbs之后，添加tritonx-100并使得終濃度為0.02％(w/v)、使紅細(xì)胞溶解的液體。將這些在37℃溫育45分鐘，之后在4℃，400×g的條件下離心分離5分鐘，回收上清，通過測定在545nm的吸光度，定量了血紅蛋白從紅細(xì)胞的滲出量。接下來，以pc的測定值為100％，以百分率表示各樣品的測定值(溶血活性)。該百分率越高，顯示膜融合能力越高。將結(jié)果示于圖1。和dodapmend、dlindapmend比較，tlm-c2-dmamend、tlm-c3-dmamend、tlm-c4-dmamend、tdm-c3-dmamend、tlmes-c3-dmamend顯示了高膜融合能力。尤其是，tlm-c3-dmamend、tlmes-c3-dmamend僅在ph5.5顯示了高膜融合能力。[實(shí)施例10]基于第1mend、第2mend、第3mend、第4mend的膜融合能力試驗(yàn)從雄性icr小鼠采血，回收紅細(xì)胞，懸浮于生理鹽水。將pbs調(diào)整為ph7.4、6.5、5.5后，添加了包含一定量的紅細(xì)胞的生理鹽水。接下來，分別添加了包含實(shí)施例6(2)中制備的tlm-c3-dmamend及tlm-c4-dmamend、實(shí)施例6(3)中制備的mend的pbs3.3μl、10μl及30μl。另外，以添加了不含有mend的相同量的pbs的溶液作為陰性對照(nc)，將添加了不含有mend的相同量的pbs之后添加tritonx-100至0.5％(w/v)的、使紅細(xì)胞溶解的液體作為陽性對照(pc)。將這些在37℃溫育30分鐘，之后在4℃，400×g的條件下離心分離5分鐘，回收上清，通過測定在545nm的吸光度，測定了血紅蛋白的量。接下來，以pc的測定值為100％，以百分率表示各測定值(溶血活性)。該百分率越高，顯示膜融合能力越高。將結(jié)果示于圖2。在第2mend、第3mend、第4mend中顯示了比tlm-c3-dmamend高的膜融合能力。尤其是，與第3mend、第4mend比較，第2mend僅在ph5.5顯示了高的膜融合能力。[實(shí)施例11]tlm-c2-dmamend、tlm-c3-dmamend、tlm-c4-dmamend、dlindapmend、dodapmend的體內(nèi)敲低活性試驗(yàn)將包含以實(shí)施例6(2)所示的方法制備的mend的溶液，以0.5mg/kg從尾靜脈給予4周齡的雄性小鼠。24小時(shí)后采血，通過將該血液樣品以1000g，10分鐘，4℃進(jìn)行離心，回收上清得到了血漿。對血漿中的factorvii(fvii)的量而言，使用biophenfviichromogenicassay(sysmexbiomed公司)進(jìn)行定量，將未處理組(nt)的fvii表達(dá)量作為1，以相對值(血漿中的相對fvii量)示出了mend給予組的fvii表達(dá)量。將結(jié)果示于圖3?？捎^察到與dlindapmend、dodapmend比較，tlm-c3-dmamend、tlm-c4-dmamend的fvii表達(dá)量降低。尤其是，tlm-c3-dmamend顯示了最高的敲低活性。[實(shí)施例12]tlm-c3-dmamend、tdm-c3-dmamend、tlmes-c3-dmamend的體內(nèi)敲低活性試驗(yàn)將包含以實(shí)施例6(2)所示的方法制備的mend的溶液，以0.1mg/kg從尾靜脈給予4周齡的雄性小鼠。24小時(shí)后采血，通過將該血液樣品以1000g，10分鐘，4℃進(jìn)行離心，回收上清得到了血漿。對血漿中factorvii(fvii)的量而言，使用biophenfviichromogenicassay(hyphenbiomed公司)進(jìn)行定量，將未處理組(nt)的fvii表達(dá)量作為1，以相對值(血漿中的相對fvii量)示出了mend給予組的fvii表達(dá)量。將結(jié)果示于圖4?？梢妕dm-c3-dmamend、tlmes-c3-dmamend的fvii表達(dá)量也降低，與tlm-c3-dmamend比較，顯示出了基本相同的敲低活性。[實(shí)施例13]tlm-c3-dmamend、tlm-c4-dmamend、及第1mend、第2mend、第3mend、第4mend的體內(nèi)敲低活性試驗(yàn)將以實(shí)施例6(2)所示的方法制備的tlm-c3-dmamend的溶液及tlm-c4-dmamend溶液、以實(shí)施例6(3)所示的方法制備的mend溶液，以0.1mg/kg從尾靜脈給予4周齡的雄性小鼠。24小時(shí)后采血，通過將該血液樣品以1000g，10分鐘，4℃進(jìn)行離心，回收上清得到了血漿。對血漿中factorvii(fvii)的量而言，使用biophenfviichromogenicassay(sysmexbiomed公司)進(jìn)行定量，將未處理組(nt)的fvii表達(dá)量作為1，以相對值(血漿中的相對fvii量)示出了mend給予組的fvii表達(dá)量。將結(jié)果示于圖5。在第1mend、第2mend中顯示出了高于tlm-c3-dmamend的敲低活性，第2mend顯示了較高較大的敲低活性。[實(shí)施例14]體內(nèi)的mrna表達(dá)試驗(yàn)將以實(shí)施例6(4)所示的方法制備的tlm-c3-dmammend溶液、tdm-c3-dmammend溶液用pbs稀釋至使得mrna為1mg/100ml，將其在頸部進(jìn)行皮下給予6周齡的雌性icr小鼠。在5.5小時(shí)后，將預(yù)先制備使得為3mg/200ml/匹的熒光素(vivoglotmluciferin,invivograde，promega公司制)的生理鹽水溶液，從腹腔內(nèi)給予各小鼠，30分鐘后，利用ivistmluminaii(caliperlifesciences公司)觀察mrna給予部位的發(fā)光并進(jìn)行定量。將結(jié)果示于圖6。在tlm-c3-dmammend及tdm-c3-dmammend中均確認(rèn)到發(fā)光，均顯示了mrna表達(dá)活性。其中，在tdm-c3-dmammend中顯示最強(qiáng)的發(fā)光量，顯示mrna表達(dá)活性較高。工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明的試劑可以高效率地將功能性核酸遞送至細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，因此對核酸醫(yī)藥品開發(fā)、生化學(xué)實(shí)驗(yàn)有用。本申請以在日本申請的日本特愿2014-166041(申請日：2014年8月18日)為基礎(chǔ)，并將其內(nèi)容全部包含于本說明書。當(dāng)前第1頁12