專利名稱：一種環(huán)化抗菌肽及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種環(huán)化抗菌肽其制備方法以及在制備治療細菌、真菌感染的藥物中的應(yīng)用，該環(huán)化抗菌肽對細菌和真菌及其耐藥菌株有比果蠅肽更顯著的殺菌活性。
背景技術(shù)：
抗菌肽(antimicrobial peptides, AMPs)是生物體經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種具有生物活性的小分子多肽，一般由20-60個氨基酸組成，其分子量在2-7KD左右，隨著研究的深入，抗菌肽已成為生物醫(yī)藥和農(nóng)牧領(lǐng)域研究熱點。迄今為止，已有幾百種抗菌肽分別在動物、植物、微生物和人體中被發(fā)現(xiàn)，它們具有對細菌、真菌的廣譜殺菌作用。昆蟲具有極強的適應(yīng)能力和防御能力，在地球上廣為分布。昆蟲的幼蟲能在腐爛潮濕的環(huán)境中生長，而成蟲通常成為傳播微生物(包括動植物病原微生物)的載體，這主要是因為昆蟲具有強大的先天免疫系統(tǒng)。昆蟲的先天免疫包括細胞免疫和體液免疫。當外來物突破昆蟲第一道由外表皮組成的物理防線后，就可激活體內(nèi)產(chǎn)生一系列的應(yīng)答，包括血細胞的包圍、吞噬及伴隨的黑化反應(yīng)(稱之為細胞免疫)，以及抗菌肽的合成和分泌。果蠅妝(Dorsocm)氨基酸序列為=Gly-Lys-Pro-Arg-Pro-Tyr-Ser-Pro-Arg-Pro-Thr-Ser-His-Pro-Arg-Pro-1le-Arg-Val,它是從黑腹果妮(Drosophila melanogaster)中分離出來的一種天然抗菌肽。盡管已有報道和研究果蠅肽對微生物表現(xiàn)出非常有效的廣譜抗菌活性，包括革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌和真菌，而且沒有溶血性。由它合成的環(huán)化抗菌肽——果蠅肽截短環(huán)化肽(命名為DTCP)活性更強，因而更適合生物醫(yī)藥和農(nóng)牧行業(yè)應(yīng)用。本發(fā)明對果蠅肽序列進行改造，獲得了環(huán)化抗菌肽-果蠅肽截短環(huán)化肽(DTCP)
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種環(huán)化抗菌肽及其制備方法。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用固相合成方法獲得式I結(jié)構(gòu)的DTCP。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開了所述DTCP的應(yīng)用，所述DTCP具有抑制細菌和真菌的作用。利用Pioneer多肽合成儀(美國應(yīng)用系統(tǒng)生物公司)制備本發(fā)明所述的DTCPjlJ用96孔板法檢測多肽的殺菌活性，結(jié)果表明本發(fā)明的DTCP殺菌活性強于果蠅肽的殺菌活性?？咕鷬y在聞效殺菌的同時也有可能作用于聞等有機體包括人體細胞，因為抗菌妝的作用方式都是在細胞膜上穿孔使得細胞發(fā)生滲漏死亡。所以把抗菌肽能否使紅細胞發(fā)生滲漏作為其是否有毒性的一個標準，如果抗菌肽能使紅細胞中的血紅蛋白發(fā)生滲漏，就可以通過檢測0D490值確定毒性的大小。因此本發(fā)明還檢測了 DTCP對人體紅細胞的溶血活性，實驗表明，DTCP溶血率值很低，證實本發(fā)明環(huán)化抗菌肽的溶血毒性極小。此外，又對本發(fā)明DTCP進行動物體內(nèi)急性毒性試驗，證明DTCP無毒性作用。又進行DTCP對小白鼠急性感染金黃色葡萄球菌的抑制作用的試驗，表明DTCP對金黃色葡萄球菌感染有顯著的抑制作用。本發(fā)明具有如下優(yōu)點:本發(fā)明DTCP比果蠅肽的殺菌活性有較大提高，具有更高效抑菌效果，可以抑制動物體內(nèi)多種致病菌，并且無溶血毒性，因此本發(fā)明環(huán)化抗菌肽可應(yīng)用于制備細菌或真菌感染引起的疾病的藥物。


圖1是DTCP質(zhì)譜圖表I是DTCP對不同細菌的最小抑菌濃度(MIC)表2是DTCP溶血活性檢測結(jié)果
具體實施例方式實施例1DTCP的制備采用固相化學(xué)法合成DTCP，儀器為Pioneer多肽合成儀。合成具體步驟包括TFA剪切、反向柱純化、質(zhì)譜鑒定。具體步驟如下:DTCP 序列為
權(quán)利要求
1.一種環(huán)化抗菌肽，其特征在于，所述環(huán)化抗菌肽的氨基酸序列為:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種環(huán)化抗菌肽，包括治療有效量的權(quán)利要求1的環(huán)化抗菌肽或者其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種環(huán)化抗菌肽及其制備方法及在制備治療細菌、真菌感染的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種環(huán)化抗菌肽及其制備方法——果蠅肽(GKPRPYSPRPTSHPRPIRV)截短環(huán)化肽，此環(huán)化抗菌肽對耐藥細菌菌株具有比果蠅肽更強的殺菌活性，所述環(huán)化抗菌肽的制備方法為固相化學(xué)合成法。本發(fā)明的有益效果為可以用于制備治療革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌和真菌感染引起的疾病的藥物。
文檔編號A61P31/10GK103204910SQ20121014988
公開日2013年7月17日 申請日期2012年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月15日
發(fā)明者王從峰, 李帥偉 申請人:廣州格拉姆生物科技有限公司