專利名稱：蘋果黃酮粉劑的提取純化方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種化工技術(shù)領(lǐng)域的方法，具體地說，是一種蘋果黃酮粉劑的提取純化方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
黃酮化合物是廣泛存在水果和蔬菜中的一類次生代謝類物質(zhì)，近來發(fā)現(xiàn)他們具有很強(qiáng)的清除自由基能力，是蘋果中重要抗氧化物質(zhì)的來源，并主要存在于蘋果果皮和果肉中。蘋果皮的黃酮成分主要有蘆丁、槲皮素、根皮甙，以及兒茶素、花青素等黃烷-3醇結(jié)構(gòu)。目前蘋果黃酮已報(bào)道可作為天然抗氧化劑應(yīng)用于食品和醫(yī)藥中，雖然在化妝品領(lǐng)域還沒有成功的應(yīng)用，但由于含有大量供氫體，并能形成穩(wěn)定的自由基使其具有較強(qiáng)的抗氧化活性和自由基清除能力，因此可以起到維持皮膚中自由基平衡，延緩皮膚衰老的作用。我國年產(chǎn)蘋果渣100萬噸，綜合利用方面很薄弱，如能攻克蘋果黃酮的提取純化方法，獲得高純度黃酮，將有望成為高效價(jià)廉的化妝品功能性原料。
經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，中國專利“野生蘋果黃酮的提取方法”，專利公開號(hào)CN1616447A，該專利選用野生狀態(tài)的蘋果，采用整果壓榨、醇提和大孔樹脂吸附的方法進(jìn)行提取純化，可得到總黃酮70％以上。但大孔樹脂再生后，分離結(jié)果和得率受樹脂吸附作用影響較大，再生較為繁瑣，重復(fù)利用的效果并不令人滿意。野生蘋果黃酮可作為抗氧化劑用于食品和保健食品中，但未提到是否可用于化妝品領(lǐng)域中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種蘋果黃酮粉劑的提取純化方法及其應(yīng)用，使其工藝簡單，提取出高純度的黃酮類成分，蘋果黃酮純度可達(dá)到85％以上，并應(yīng)用于化妝品領(lǐng)域。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明所述蘋果黃酮粉劑的提取純化方法，包括以下步驟①選取蘋果渣，置于多功能提取罐中，加入蘋果渣質(zhì)量5-10倍的乙醇溶液，加熱攪拌提取，過濾后即得粗提液。
所述加熱，其溫度為40-100℃。
所述乙醇溶液，其質(zhì)量濃度為30％-95％。
所述攪拌提取，其時(shí)間為0.5-4小時(shí)。
②將步驟①得到的粗提液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至原體積的1/5-1/10，靜置冷卻后離心除去下層沉淀，制成濃縮液。
所述靜置冷卻后離心，是指靜置冷卻12小時(shí)后離心。
③將步驟②得到的濃縮液通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用乙醇洗脫。
所述乙醇，其質(zhì)量濃度為30-70％。
④收集步驟③的洗脫液，將洗脫液再次通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用乙醇洗脫。
所述乙醇，其質(zhì)量濃度為20-60％。
⑤收集步驟④的洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后經(jīng)離心噴霧干燥，制成蘋果黃酮粉劑。
采用本發(fā)明方法得到的蘋果黃酮粉劑，可以應(yīng)用于化妝品中，其在化妝品中的添加量為0.02％-0.5％，添加溫度為45℃，化妝品可以是乳液、膏霜、化妝水、精華素、面膜等。
葡聚糖凝膠樹脂的分離原理主要是分子篩作用，根據(jù)凝膠的孔徑和被分離化合物分子的大小而達(dá)到分離目的，多用于水溶性成份的分離，特點(diǎn)是化學(xué)性能穩(wěn)定，多次重復(fù)利用仍能保持較好的分離效果，再生處理簡單，因此在工藝上適合分離極性相對(duì)較強(qiáng)的黃酮類成分。本發(fā)明利用這一原理，蘋果渣提取液經(jīng)葡聚糖凝膠樹脂純化，可使成品中總黃酮含量達(dá)到85％以上，提取率達(dá)到1％以上。
根據(jù)衰老的自由基理論，體內(nèi)過量的活性氧自由基與不飽和脂肪酸作用生成丙二醛(MDA)等物質(zhì)，丙二醛與細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)等作用生成褐色素，沉淀于皮膚上便成為各種色斑。自由基也能使皮膚內(nèi)的膠原纖維、彈性纖維交聯(lián)和變性、變脆、失去彈性，當(dāng)皮膚內(nèi)的水分不足時(shí)，容易使彈性纖維斷裂而形成皺紋。由蘋果黃酮的結(jié)構(gòu)可知，苯環(huán)上的電子的離域作用使酚羥基容易離子化，是強(qiáng)供氫體，能使具有高度氧化性的自由基還原，由于電子離域作用而形成相對(duì)來說比較穩(wěn)定的自由基，從而能夠終止自由基鏈反應(yīng)，阻止新自由基產(chǎn)生，避免了自由基對(duì)細(xì)胞的損傷作用。經(jīng)試驗(yàn)證明蘋果黃酮可通過清除自由基起到促進(jìn)皮膚新陳代謝，延緩皮膚皺紋產(chǎn)生，改善皮膚彈性，保護(hù)DNA紫外線輻射損傷，減少色素沉著等作用。
本發(fā)明的積極效果①所用原料為蘋果加工后的廢棄物蘋果渣，成本低且避免了資源浪費(fèi)。②在蘋果黃酮生產(chǎn)過程中不存在對(duì)環(huán)境的污染，便于工業(yè)化生產(chǎn)。③本發(fā)明的工藝提取率達(dá)到1％以上，蘋果黃酮純度可達(dá)到85％以上。④通過科學(xué)實(shí)驗(yàn)確定了蘋果黃酮清除自由基、延緩衰老等作用，且對(duì)皮膚無刺激、無過敏，可廣泛應(yīng)用于化妝品中。
具體實(shí)施例方式
下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
實(shí)施例1取蘋果渣10公斤，置于多功能提取罐中，加入質(zhì)量濃度為30％的乙醇溶液100升，加熱至100℃下攪拌提取0.5小時(shí)，過濾后得粗提液86升。將粗提液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至8.6升，靜置冷卻12小時(shí)后離心除去下層沉淀得到濃縮液7升。將濃縮液通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用質(zhì)量濃度為30％乙醇洗脫。收集的洗脫液再次通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用質(zhì)量濃度為20％乙醇洗脫。共收集洗脫液21升，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后經(jīng)離心噴霧干燥，制成蘋果黃酮粉劑120克，經(jīng)紫外分光光度法檢測總黃酮含量為86.5％。
對(duì)本實(shí)施例所制的蘋果黃酮測定其清除·OH的活力。選用Fenton反應(yīng)體系產(chǎn)生·OH，加入不同濃度的蘋果黃酮樣品進(jìn)行抑制，用比色法測定其吸光度值，計(jì)算抑制率。經(jīng)測定，蘋果黃酮對(duì)·OH的半抑制濃度(IC50)為0.26mg/ml。該結(jié)果說明蘋果黃酮具有顯著清除·OH自由基的能力。
將本實(shí)施例所制的蘋果黃酮測定其對(duì)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖活性。采用MTT法(四甲基偶氮唑鹽)測試經(jīng)不同濃度的蘋果黃酮處理后皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的活力變化。經(jīng)測定，蘋果黃酮在0.05mg/ml濃度下促進(jìn)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖達(dá)46％。該結(jié)果表明蘋果黃酮具有促進(jìn)皮膚細(xì)胞增殖、延緩皮膚衰老的能力。
經(jīng)1999年版《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中的皮膚安全性評(píng)價(jià)程序測試，蘋果黃酮在10％濃度下對(duì)皮膚和眼結(jié)膜刺激反應(yīng)均為陰性。
蘋果黃酮在45℃下添加入乳液化妝品體系中，添加量為0.02％，制成抗衰老乳液化妝品，經(jīng)試用無皮膚過敏性反應(yīng)。
實(shí)施例2取蘋果渣10公斤，置于多功能提取罐中，加入質(zhì)量濃度為95％的乙醇溶液80升，加熱至40℃下攪拌提取4小時(shí)，過濾后得粗提液74升。將粗提液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至14.8升，靜置冷卻12小時(shí)后離心除去下層沉淀得到濃縮液12升。將濃縮液通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用質(zhì)量濃度為70％乙醇洗脫。收集的洗脫液再次通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用質(zhì)量濃度為60％乙醇洗脫。共收集洗脫液23升，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后經(jīng)離心噴霧干燥，制成蘋果黃酮粉劑160克，經(jīng)紫外分光光度法檢測總黃酮含量為88.4％。
對(duì)本實(shí)施例所制的蘋果黃酮測定了其清除O2-的活力。選用鄰苯三酚自氧化體系產(chǎn)生O2-，加入不同濃度的蘋果黃酮樣品進(jìn)行抑制，用比色法測定其吸光度值，計(jì)算抑制率。經(jīng)測定，蘋果黃酮對(duì)O2-的半抑制濃度(IC50)為0.38mg/ml。該結(jié)果說明蘋果黃酮具有顯著清除O2-自由基的能力。
將本實(shí)施例所制的蘋果黃酮測定其對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的增殖活性。采用MTT法(四甲基偶氮唑鹽)測試經(jīng)不同濃度的蘋果黃酮處理后皮膚成纖維細(xì)胞的活力變化。經(jīng)測定，蘋果黃酮在0.05mg/ml濃度下促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞的增殖達(dá)37％。該結(jié)果表明蘋果黃酮具有促進(jìn)皮膚細(xì)胞增殖、延緩皮膚衰老的能力。
經(jīng)1999年版《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中的皮膚安全性評(píng)價(jià)程序測試，蘋果黃酮在10％濃度下對(duì)皮膚和眼結(jié)膜刺激反應(yīng)均為陰性。
蘋果黃酮粉劑在45℃下添加入精華素化妝品體系中，添加量為0.5％，制成抗衰老精華素化妝品，經(jīng)試用無皮膚過敏性反應(yīng)。
實(shí)施例3取蘋果渣10公斤，置于多功能提取罐中，加入質(zhì)量濃度為60％的乙醇溶液50升，加熱至70℃下攪拌提取2小時(shí)，過濾后得粗提液48升。將粗提液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至6升，靜置冷卻12小時(shí)后離心除去下層沉淀得到濃縮液5.5升。將濃縮液通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用質(zhì)量濃度為50％乙醇洗脫。收集的洗脫液再次通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用質(zhì)量濃度為40％乙醇洗脫。共收集洗脫液22升，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后經(jīng)離心噴霧干燥，制成蘋果黃酮粉劑135克，經(jīng)紫外分光光度法檢測總黃酮含量為87.2％。
對(duì)本實(shí)施例所制的蘋果黃酮測定了其清除RO·的活力。選用DPPH比色法(二苯代苦味肼基自由基分光法)體系產(chǎn)生RO·，加入不同濃度的蘋果黃酮樣品進(jìn)行抑制，用比色法測定其吸光度值，計(jì)算抑制率。經(jīng)測定，蘋果黃酮對(duì)RO·的半抑制濃度(IC50)為0.43mg/ml。該結(jié)果說明蘋果黃酮具有顯著清除RO·自由基的能力。
將本實(shí)施例所制的蘋果黃酮測定其對(duì)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的抗脂質(zhì)過氧化能力。采用硫代巴比妥酸比色法(TBA)測定經(jīng)不同濃度的蘋果黃酮處理后細(xì)胞脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA(丙二醛)的含量變化。經(jīng)測定，蘋果黃酮在0.01mg/ml濃度下降低皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的MDA含量達(dá)48％。該結(jié)果表明蘋果黃酮具有抗脂質(zhì)過氧化、延緩皮膚衰老的能力。
經(jīng)1999年版《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中的皮膚安全性評(píng)價(jià)程序測試，蘋果黃酮在10％濃度下對(duì)皮膚和眼結(jié)膜刺激反應(yīng)均為陰性。
蘋果黃酮粉劑在45℃下添加入面膜化妝品體系中，添加量為0.3％，制成抗衰老面膜化妝品，經(jīng)試用無皮膚過敏性反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.一種蘋果黃酮粉劑的提取純化方法，其特征在于，包括以下步驟①選取蘋果渣，置于多功能提取罐中，加入蘋果渣質(zhì)量5-10倍的乙醇溶液，加熱攪拌提取，過濾后即得粗提液；②將步驟①得到的粗提液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至原體積的1/5-1/10，靜置冷卻后離心除去下層沉淀，制成濃縮液；③將步驟②得到的濃縮液通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用乙醇洗脫；④收集步驟③的洗脫液，將洗脫液再次通過葡聚糖凝膠LH-20樹脂柱，用乙醇洗脫；⑤收集步驟④的洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后經(jīng)離心噴霧干燥，制成蘋果黃酮粉劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘋果黃酮粉劑的提取純化方法，其特征是，步驟①中，所述加熱，其溫度為40-100℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘋果黃酮粉劑的提取純化方法，其特征是，步驟①中，所述乙醇溶液，其質(zhì)量濃度為30％-95％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘋果黃酮粉劑的提取純化方法，其特征是，步驟①中，所述攪拌提取，其時(shí)間為0.5-4小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘋果黃酮粉劑的提取純化方法，其特征是，步驟②中，所述靜置冷卻后離心，是指靜置冷卻12小時(shí)后離心。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘋果黃酮粉劑的提取純化方法，其特征是，步驟③中，所述乙醇，其質(zhì)量濃度為30-70％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘋果黃酮粉劑的提取純化方法，其特征是，步驟④中，所述乙醇，其質(zhì)量濃度為20-60％。
8.一種如權(quán)利要求1所述的蘋果黃酮粉劑的應(yīng)用，其特征在于，所述蘋果黃酮粉劑應(yīng)用在化妝品上，其在化妝品中的添加量為0.02％-0.5％。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的蘋果黃酮粉劑的應(yīng)用，其特征是，所述蘋果黃酮粉劑，其添加溫度為45℃。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的蘋果黃酮粉劑的應(yīng)用，其特征是，所述化妝品，包括乳液、膏霜、化妝水、精華素、面膜。
全文摘要
一種化工技術(shù)領(lǐng)域的蘋果黃酮粉劑的提取純化方法，步驟為選取蘋果渣，置于多功能提取罐中，加入蘋果渣質(zhì)量5－10倍的乙醇溶液，加熱攪拌提取，過濾后即得粗提液；將粗提液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至原體積的1/5－1/10，靜置冷卻后離心除去下層沉淀，制成濃縮液；將濃縮液通過葡聚糖凝膠LH－20樹脂柱，用乙醇洗脫；收集洗脫液，將洗脫液再次通過葡聚糖凝膠LH－20樹脂柱，用乙醇洗脫；收集上步洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后經(jīng)離心噴霧干燥，制成蘋果黃酮粉劑。所述蘋果黃酮粉劑在化妝品中的添加量為0.02％－0.5％。本發(fā)明工藝簡單，提取率達(dá)到1％以上，提取出的蘋果黃酮純度可達(dá)到85％以上，并應(yīng)用于化妝品領(lǐng)域。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101084869SQ20071004229
公開日2007年12月12日 申請(qǐng)日期2007年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月21日
發(fā)明者李新華, 張彥, 金素心, 劉雪梅, 劉惠娟 申請(qǐng)人:上海利盛生化有限公司