本發(fā)明涉及一種三七黃酮的分離提取方法。

背景技術(shù)：

黃酮類化合物是自然界分布較廣的一類化合物，三七全植株中，三七葉中總黃酮含量較高，含量2%左右，根莖中黃酮含量0.5%，三七莖葉中總黃酮含量高于三七根莖中總黃酮含量。三七莖葉是采挖三七后被大量拋棄的可利用資源，根據(jù)初步調(diào)查三七莖葉每年可利用資源3000t-4000t，目前僅利用了10%不到；因此三七莖葉中黃酮類物質(zhì)具有開發(fā)價值。

三七黃酮具有止咳平喘祛痰、活血化瘀、保護心肌損傷、擴張血管、抗高血壓，改善微循環(huán)、清除氧自由基等作用。

三七黃酮主含黃酮和黃酮甙類，主要為山奈酚、槲皮素類及其甙類。

三七黃酮提取工藝和專利報道較少，在粗提環(huán)節(jié)中大多采用水提法，水提取法能得到大量黃酮甙類化合物，水溶性較差的黃酮類化合物則難以提取完全，具有局限性。在初純化工藝過程中通常使用ab-8、nk大孔吸附樹脂等，制備所得黃酮含量較低，針對性較差，因三七皂苷和三七黃酮極性相似，洗脫條件基本一樣，現(xiàn)有技術(shù)很難將三七黃酮和三七皂苷分離開，針對現(xiàn)有方法提取三七黃酮提取分離率低、純度低等問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種簡單、分離效果好、提取率高的三七莖葉黃酮的分離提取方法，本發(fā)明方法具體內(nèi)容如下：

（1）將三七或三七莖葉粉碎后置于提取罐中，加入生藥質(zhì)量8-10倍的體積濃度70%-80%的乙醇溶液，同時加入氨水調(diào)節(jié)混合物ph為8-10，加熱回流提取2次以上，合并每次提取液濃縮到清膏加入稀鹽酸調(diào)節(jié)ph值至中性，繼續(xù)濃縮干燥得棕黃色粉末；

（2）將步驟（1）干燥物粉碎后，加入其質(zhì)量5-7倍體積濃度70%-90%的丙酮水溶液，室溫密閉攪拌提取2-4小時，過濾后，濾渣再加入2體積濃度70%-90%的丙酮水溶液提取一次，丟棄濾渣，合并2次丙酮提取液；

（3）減壓回收濾液中丙酮得流浸膏，向流浸膏中加入乙醇溶液，攪拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量達到體積濃度25-30%，過濾去除不溶物得澄清三七黃酮粗提液；

（4）將步驟（3）三七黃酮粗提液經(jīng)過氫鍵大孔樹脂進行吸附，吸附后純凈水沖洗到流出液為無色，然后用體積濃度70%-80%的乙醇溶液解析，解析流速為1-2柱體積/h，收集流出的解析液，濃縮得濃縮液；

（5）將步驟（4）濃縮液進行聚酰胺柱層析，上樣完后純凈水沖洗到洗出液為無色，然后用體積濃度35-45%的乙醇溶液解析聚酰胺柱，解析流速為0.5柱體積/h，收集解析液；最后用體積濃度70%-80%的乙醇溶液解析三七黃酮，解析流速為1-2柱體積/h；

（6）將步驟（5）體積濃度35-45%的乙醇溶液解析液減壓濃縮干燥得三七黃酮甙，該粉末水溶性較好，以槲皮素為對照，uv法進行含量測定，黃酮甙含量大于85%；將體積濃度70%-80%乙醇溶液解析液減壓濃縮干燥得三七黃酮；該粉末微溶于水，溶于乙醇，以槲皮素為對照，uv法進行含量測定，黃酮含量大于92%。

所述步驟（4）中氫鍵大孔樹脂型號為hpd417或ads-17，用量為生藥質(zhì)量的0.3-0.5倍，上柱流速為1.5-2柱體積/h。

所述步驟（5）中上樣流速為1-2柱體積/h。

所述聚酰胺樹脂用量為生藥質(zhì)量的0.2-0.4倍。

所述步驟（5）中使用4-5倍柱體積的體積濃度35-45%的乙醇溶液進行解析，解析大極性黃酮甙。

所述步驟（5）中使用2-3倍柱體積的體積濃度70-80%的乙醇溶液進行解析，解析小極性黃酮類物質(zhì)。

本發(fā)明優(yōu)點和技術(shù)效果如下：

本發(fā)明方法利用三七皂苷類化合物很難溶解于丙酮，而三七黃酮在丙酮中溶解性較好的特點，采用丙酮純化粗提取物；在樹脂純化環(huán)節(jié)針對黃酮分子的酚羥基結(jié)構(gòu)特點，選擇具有較好吸附能力和吸附選擇性的氫鍵大孔吸附樹脂，能較好的吸附黃酮類化合物，通過本發(fā)明方法能獲得高純度三七總黃酮；且本發(fā)明方法操作簡單，適于工業(yè)化生產(chǎn)和市場推廣應(yīng)用。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明，但本發(fā)明保護范圍不局限于所述內(nèi)容。

實施例1：本三七莖葉黃酮的分離提取方法如下：

（1）將三七莖葉1kg粉碎至60目，將粉末置于提取罐加入生藥質(zhì)量8倍的體積濃度70%的乙醇溶液，同時加入氨水調(diào)節(jié)混合物ph為8，加熱回流提取2次，第一次2小時，第二次1小時，合并兩次提取液加入稀鹽酸調(diào)節(jié)ph值至中性，減壓真空濃縮干燥得棕黃色粉末；

（2）將步驟（1）干燥物粉碎后，加入干燥物質(zhì)量5倍的體積濃度90%的丙酮水溶液，室溫密閉攪拌罐中攪拌提取4小時，過濾后，濾渣再加入2體積濃度90%的丙酮水溶液提取一次，丟棄濾渣，合并2次丙酮提取液；

（3）減壓回收濾液中丙酮得流浸膏，向流浸膏中加入乙醇溶液，攪拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量達到體積濃度25%，過濾去除不溶物得澄清三七黃酮粗提液；

（4）將步驟（3）三七黃酮粗提液經(jīng)氫鍵大孔樹脂進行吸附，樹脂用量為0.3倍生藥質(zhì)量，樹脂型號為hpd417，上柱流速為1.5bv/h，吸附后純凈水沖洗到無色；然后用體積濃度70%的乙醇溶液解析三七黃酮，解析流速為1bv/h，收集黃色解析液，減壓濃縮得混懸狀濃縮液；

（5）將步驟（4）濃縮液進行聚酰胺柱層析，上樣流速為1bv/h，聚酰胺粉末用量為0.2倍生藥質(zhì)量，上樣完后純凈水沖洗到無色，然后用4倍柱體積的體積濃度35%乙醇溶液解析聚酰胺柱，解析流速為0.5柱體積/h，收集解析液，主含黃酮甙類物質(zhì)；繼續(xù)用2倍柱體積體積濃度70%的乙醇溶液解析三七黃酮，解析流速為1柱體積/h；

（6）將步驟（5）體積濃度35%的乙醇溶液解析液減壓濃縮干燥得黃白色三七葉黃酮甙粉末12.6g，該粉末水溶性較好，以槲皮素為對照，uv法進行含量測定，三七黃酮甙含量為90%；將體積濃度70%乙醇溶液解析液減壓濃縮干燥得黃白色三七黃酮粉末5.4g，該粉末微溶于水，溶于乙醇，以槲皮素為對照，uv法進行含量測定，三七黃酮含量為97%。

實施例2:本三七莖葉黃酮的分離提取方法如下：

（1）將三七莖葉1kg粉碎至60目，將粉末置于提取罐加入生藥質(zhì)量9倍的體積濃度80%的乙醇溶液，同時加入氨水調(diào)節(jié)混合物ph為9，加熱回流提取2次，第一次2小時，第二次1小時，合并兩次提取液加入稀鹽酸調(diào)節(jié)ph值至中性，減壓真空濃縮干燥得棕黃色粉末；

（2）將步驟（1）干燥物粉碎后，加入干燥物質(zhì)量6倍的體積濃度80%的丙酮水溶液，室溫密閉攪拌罐中攪拌提取3小時，過濾后，濾渣再加入2體積濃度80%的丙酮水溶液提取一次，丟棄濾渣，合并2次丙酮提取液；

（3）減壓回收濾液中丙酮得流浸膏，向流浸膏中加入乙醇溶液，攪拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量達到體積濃度30%，過濾去除不溶物得澄清三七黃酮粗提液；

（4）將步驟（3）三七黃酮粗提液經(jīng)氫鍵大孔樹脂進行吸附，樹脂用量為0.4倍生藥質(zhì)量，樹脂型號為ads-17，上柱流速為2bv/h，吸附后純凈水沖洗到無色；然后用體積濃度75%的乙醇溶液解析三七黃酮，解析流速為1.5bv/h，收集黃色解析液，減壓濃縮得混懸狀濃縮液；

（5）將步驟（4）濃縮液進行聚酰胺柱層析，上樣流速為1bv/h，聚酰胺粉末用量為0.3倍生藥質(zhì)量，上樣完后純凈水沖洗到無色，然后用5倍柱體積的體積濃度45%乙醇溶液解析聚酰胺柱，收集解析液，主含水溶性三七黃酮甙物質(zhì)；繼續(xù)用3倍柱體積體積濃度80%的乙醇溶液解析三七黃酮；

（6）將步驟（5）體積濃度45%的乙醇溶液解析液減壓濃縮干燥得黃白色三七葉黃酮甙粉末14.7，該粉末水溶性較好，以槲皮素為對照，uv法進行含量測定，黃酮甙含量為87%；將體積濃度80%乙醇溶液解析液減壓濃縮干燥得黃白色三七黃酮粉末6.3，該粉末微溶于水，溶于乙醇，以槲皮素為對照，uv法進行含量測定，黃酮含量為94%。

實施例3：本三七莖葉黃酮的分離提取方法如下：

（1）將三七葉1kg粉碎至60目，將粉末置于提取罐加入生藥質(zhì)量10倍的體積濃度75%的乙醇溶液，同時加入氨水調(diào)節(jié)混合物ph為10，加熱回流提取3次，第一次2小時，第二次1小時，第3次1h，合并3次提取液加入稀鹽酸調(diào)節(jié)ph值至中性，減壓真空濃縮干燥得棕黃色粉末；

（2）將步驟（1）干燥物粉碎后，加入干燥物質(zhì)量7倍的體積濃度70%的丙酮水溶液，室溫密閉攪拌罐中攪拌提取2小時，過濾后，濾渣再加入2體積濃度70%的丙酮水溶液提取一次，丟棄濾渣，合并2次丙酮提取液；

（3）減壓回收濾液中丙酮得流浸膏，向流浸膏中加入乙醇溶液，攪拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量達到體積濃度27%，過濾去除不溶物得澄清三七黃酮粗提液；

（4）將步驟（3）三七黃酮粗提液經(jīng)氫鍵大孔樹脂進行吸附，樹脂用量為0.5倍生藥質(zhì)量，樹脂型號為ads-17，上柱流速為2bv/h，吸附后純凈水沖洗到無色；然后用體積濃度75%的乙醇溶液解析三七黃酮，解析流速為2bv/h，收集黃色解析液，減壓濃縮得混懸狀濃縮液；

（5）將步驟（4）濃縮液進行聚酰胺樹脂柱層析，上樣流速為2bv/h，60目聚酰胺樹脂用量為0.4倍生藥質(zhì)量，上樣完后純凈水沖洗到無色，然后用4倍柱體積的體積濃度40%乙醇溶液解析聚酰胺柱，收集解析液，主含水溶性三七葉黃酮甙物質(zhì)；繼續(xù)用2.5倍柱體積體積濃度75%的乙醇溶液解析三七黃酮；

（6）將步驟（5）體積濃度40%的乙醇溶液解析液減壓濃縮干燥得黃白色三七葉黃酮甙粉末17.01，該粉末水溶性較好，以槲皮素為對照，uv法進行含量測定，黃酮甙含量為85%；將體積濃度75%乙醇溶液解析液減壓濃縮干燥得黃白色三七黃酮粉末7.29，該粉末微溶于水，溶于乙醇，以槲皮素為對照，uv法進行含量測定，黃酮含量為92%。