本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，特別涉及一種通過(guò)分子動(dòng)力學(xué)模擬方法來(lái)考察黃酮類化合物與雄激素受體的構(gòu)型變化而篩分黃酮類化合物的抗雄活性的方法。

背景技術(shù)：

內(nèi)分泌干擾物是指可模擬人體激素而擾亂人體內(nèi)分泌干擾系統(tǒng)的物質(zhì)，不僅影響生物的生殖系統(tǒng)、誘發(fā)癌癥，甚至?xí)溂暗诙?、第三代。雌激素受體、雄激素受體和甲狀腺受體作為核受體超家族的重要組成部分，是介導(dǎo)內(nèi)分泌干擾效應(yīng)的重要靶點(diǎn)。一部分內(nèi)分泌干擾物可以模擬天然激素激活這些靶點(diǎn)，該效應(yīng)稱為擬-雌/雄/甲狀腺激素效應(yīng)，另一部分內(nèi)分泌干擾物可以抑制天然激素的作用，這一效應(yīng)稱為抗-雌/雄/甲狀腺激素效應(yīng)。目前已被報(bào)道的相關(guān)的內(nèi)分泌干擾物種類繁多，比如雙酚A類、酞酸酯類、多氯聯(lián)苯類、多溴聯(lián)苯醚類等等。不僅如此，每年新增的化學(xué)品更是不計(jì)其數(shù)，需要對(duì)海量化學(xué)品的潛在內(nèi)分泌干擾活性進(jìn)行高效率篩分。針對(duì)這三類受體介導(dǎo)的內(nèi)分泌干擾物，已經(jīng)建立了許多實(shí)驗(yàn)方法用以篩選。目前主要的篩選方法有基于體內(nèi)的生物標(biāo)志法、組學(xué)方法，體外試驗(yàn)中的酵母雙雜交、報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)法以及競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)等等。但是這些實(shí)驗(yàn)方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，如果完全依靠它們來(lái)進(jìn)行內(nèi)分泌干擾物的篩查是不現(xiàn)實(shí)的。

基于這樣一些挑戰(zhàn)，計(jì)算機(jī)虛擬篩選內(nèi)分泌干擾物成為了有力的工具和輔助手段，比如定量結(jié)構(gòu)效應(yīng)關(guān)系(quantitative structure-activity relationship，QSAR)已經(jīng)被廣泛使用，并且取得了很多成果。QSAR方法的基礎(chǔ)是通過(guò)比較化合物的結(jié)構(gòu)從而預(yù)測(cè)其活性，但現(xiàn)實(shí)中有大量的化合物結(jié)構(gòu)相似，卻存在活性有無(wú)的差別。也就是說(shuō)，目前的QSAR方法基于結(jié)構(gòu)的相似活性相似的原理僅能夠預(yù)測(cè)那些已知有活性、且結(jié)構(gòu)相似的化合物的活性，而不能夠判斷化合物活性有無(wú)。因此，在具體實(shí)踐過(guò)程中，絕大多數(shù)研究者們只選擇有活性化合物作為研究對(duì)象，經(jīng)常忽視那些無(wú)活性化合物的存在，這是QSAR方法最大的缺陷，也是QSAR無(wú)法在預(yù)測(cè)化合物內(nèi)分泌干擾活性領(lǐng)域得到有效應(yīng)用的真正原因。為了彌補(bǔ)這一缺陷，必須找到一種能預(yù)判化合物活性有無(wú)的快速有效方法。

大量研究表明，化合物產(chǎn)生內(nèi)分泌干擾效應(yīng)主要通過(guò)以下幾個(gè)步驟：首先，化合物要與受體相互結(jié)合(發(fā)生在配體結(jié)合域)并相互作用，達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定狀態(tài)；其次，配體-受體復(fù)合物進(jìn)行同源或者異源二聚化或四聚化；最后，二聚體或四聚體識(shí)別特定的染色體DNA序列，并與共調(diào)節(jié)因子(包括共激活和共抑制因子)結(jié)合，從而產(chǎn)生對(duì)目標(biāo)基因的調(diào)控，即產(chǎn)生內(nèi)分泌干擾效應(yīng)。配體與本發(fā)明涉及的雄激素受體結(jié)合發(fā)生在配體結(jié)合域中，該區(qū)域有11個(gè)α螺旋構(gòu)成(為了與其他核受體名稱上的統(tǒng)一，把第二條螺旋直接命名為H3，第三條螺旋直接命名為H4，依次類推)。研究發(fā)現(xiàn)，該區(qū)域的構(gòu)型變化將直接影響核受體的生物功能，其中尤為重要的是H12的位置的變化。一般認(rèn)為，配體(也即小分子化合物)進(jìn)入受體的配體結(jié)合域，與結(jié)合口袋內(nèi)的殘基發(fā)生范德華作用、電相互作用、氫鍵作用、疏水作用等，在這些力的共同作用下，配體和受體發(fā)生運(yùn)動(dòng)，最終穩(wěn)定在特定位置后，才能發(fā)生轉(zhuǎn)錄作用。對(duì)于受體而言，運(yùn)動(dòng)的主要特征是其H12的變化，最終穩(wěn)定在特定的位置，與其他相對(duì)穩(wěn)定的螺旋提供一個(gè)與共激活因子/共抑制因子結(jié)合的表面。對(duì)于配體而言，其運(yùn)動(dòng)的主要特征是是否能一直存在于結(jié)合區(qū)域，并且是否能在結(jié)合區(qū)域穩(wěn)定存在。此外，由于雄激素受體屬于核受體家族中“類雌激素受體”，與甲狀腺激素受體(Thyroid hormone receptor,TR)等不同，該受體只發(fā)生同源二聚化，不會(huì)受到其他核受體轉(zhuǎn)錄的影響。因此，我們可以通過(guò)模擬手段考察配體、H12的運(yùn)動(dòng)來(lái)預(yù)判在真實(shí)的生物體系中，對(duì)應(yīng)小分子的受體活性。

分子動(dòng)力學(xué)模擬(molecular dynamics simulation，MD)是一種基于計(jì)算機(jī)考察原子和分子物理運(yùn)動(dòng)的模擬技術(shù)。其基本原理是，給定模擬體系的初始態(tài)，依靠牛頓力學(xué)來(lái)模擬分子體系的運(yùn)動(dòng)，以在由分子體系的不同狀態(tài)構(gòu)成的系綜中抽取樣本，從而計(jì)算體系的構(gòu)型積分，并以構(gòu)型積分的結(jié)果為基礎(chǔ)進(jìn)一步計(jì)算體系的宏觀性質(zhì)。該方法已經(jīng)被大量用于解釋藥物激活靶點(diǎn)的機(jī)理上，但是作為一種準(zhǔn)確篩分工具，卻從來(lái)沒(méi)有被應(yīng)用。該技術(shù)可以作為QSAR預(yù)測(cè)化合物內(nèi)分泌干擾效應(yīng)的前提技術(shù)。

張愛(ài)茜等曾將分子動(dòng)力學(xué)技術(shù)用于識(shí)別具有ER激動(dòng)和拮抗作用的有機(jī)物(張愛(ài)茜,藺遠(yuǎn),彭素芬,劉磊,高常安,韓朔睽.一種有機(jī)物雌激素受體激動(dòng)和拮抗作用的識(shí)別方法[P].江蘇：CN101381894,2009-03-11)，但是該方法僅針對(duì)ER，且未引入蛋白變構(gòu)的概念。

于紅霞等曾將分子動(dòng)力學(xué)技術(shù)用于篩選核受體介導(dǎo)內(nèi)分泌干擾物(于紅霞，史薇，王小享.基于分子動(dòng)力學(xué)模擬的核受體介導(dǎo)內(nèi)分泌干擾物質(zhì)的虛擬篩選方法[P].江蘇：CN201310288617.3，213-9-25)，但該方法僅能通過(guò)比對(duì)波形進(jìn)行大致判斷，無(wú)法進(jìn)行定量預(yù)測(cè)，預(yù)測(cè)精度低，實(shí)用性差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是根據(jù)雄激素受體與黃酮類化合物之間的相互作用關(guān)系，提供一種基于計(jì)算機(jī)技術(shù)、省時(shí)省力經(jīng)濟(jì)的篩分黃酮類化合物抗雄活性方法，為化學(xué)品安全和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供技術(shù)支撐。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種基于分子動(dòng)力學(xué)模擬篩分黃酮類化合物抗雄活性方法，包括以下步驟：

(1)構(gòu)建黃酮類化合物和雄激素受體的配體-受體復(fù)合物分子結(jié)構(gòu)；

(2)對(duì)分子配體-受體復(fù)合物分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)模擬；

(3)建立模擬結(jié)果區(qū)分模型；

(4)對(duì)模擬結(jié)果根據(jù)模型進(jìn)行判斷：如果化合物位于有活性區(qū)域，則判斷化合物為有抗雄活性；如果化合物位于無(wú)活性區(qū)域，則判斷化合物為無(wú)抗雄活性；如果化合物位于模糊區(qū)域，則進(jìn)行步驟五和六；

(5)模擬結(jié)果中配體在A環(huán)有甲氧基且受體于配體形成的氫鍵數(shù)量少于設(shè)定值時(shí)，判斷判斷化合物為無(wú)抗雄活性；

(6)觀察受體和配體運(yùn)動(dòng)軌跡，如果配體的運(yùn)動(dòng)軌跡已經(jīng)脫離了雄激素受體的結(jié)合口袋，判定化合物無(wú)抗雄活性；如果受體在模擬過(guò)程結(jié)束后出現(xiàn)“mousetrap”現(xiàn)象，判定化合物有抗雄活性；

(7)如化合物經(jīng)步驟五和六均判斷為無(wú)抗雄活性，則判斷化合物為無(wú)抗雄活性，否則判斷化合物為有抗雄活性；

(8)對(duì)判斷有抗雄活性的化合物建立CoMSIA預(yù)測(cè)模型，預(yù)測(cè)具有抗雄活性黃酮化合物的活性大小。

所述步驟1中配體-受體復(fù)合物分子結(jié)構(gòu)的構(gòu)建采用以下步驟：構(gòu)建黃酮類化合物的分子結(jié)構(gòu)和雄激素受體初始態(tài)結(jié)構(gòu)，進(jìn)行能量?jī)?yōu)化，并賦予Gasteiger-Huckel電荷；利用Sybyl7.3的軟件將配體對(duì)接入受體文件，范圍閾值和膨脹系數(shù)分別為0.5和0，選取對(duì)接得分最高的構(gòu)象作為初始構(gòu)象，將之與受體合并，組成復(fù)合物；

所述雄激素受體的初始態(tài)結(jié)構(gòu)采用雄激素受體的氨基酸序列文件，導(dǎo)入Swiss-Model網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器中，然后以ERα初始態(tài)的蛋白晶體結(jié)構(gòu)為模板進(jìn)行同源模建。

所述步驟2中進(jìn)行動(dòng)力學(xué)模擬，采用GROMACS軟件進(jìn)行，對(duì)配體和受體都賦予CHARMM27力場(chǎng)，其中受體的力場(chǎng)參數(shù)為軟件自帶，而配體的力場(chǎng)參數(shù)由Swiss-Param賦予；將整個(gè)系統(tǒng)放入被TIP3P水分子占據(jù)的模型立方體盒子中，復(fù)合物距離盒子邊界的最短距離為1納米，加入鈉離子或氯離子保證系統(tǒng)的電性平衡；用最陡下降法和共軛梯度法實(shí)現(xiàn)整個(gè)系統(tǒng)的能量收斂，然后系統(tǒng)升溫至300K并一直維持，并賦予1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓；約束受體蛋白后進(jìn)行50ps的分子動(dòng)力學(xué)模擬，最后撤銷約束進(jìn)行模擬。

所述動(dòng)力學(xué)模擬中電相互作用使用particle mesh Ewald算法，范德華力以1納米截?cái)喟霃?，模擬的步長(zhǎng)2fs，一個(gè)體系進(jìn)行20ns的模擬。

所述模擬結(jié)果區(qū)分模型建立采用以下步驟：選取48種典型的黃酮類作為篩選集，構(gòu)建48個(gè)黃酮-雄激素受體復(fù)合物，體系經(jīng)過(guò)預(yù)處理后使用Gromacs進(jìn)行分子動(dòng)力學(xué)模擬，體系維持在1atm，截?cái)喟霃皆O(shè)為動(dòng)力學(xué)模擬步長(zhǎng)為2fs，每2ps保存一個(gè)構(gòu)象，每個(gè)體系進(jìn)行20ns的動(dòng)力學(xué)模擬；然后對(duì)H12進(jìn)行均方根偏差分析，有抗雄活性的化合物的H12在8ns保持穩(wěn)定，而其他體系的H12一直保持波動(dòng)；將H12在8～20ns的均方根偏差導(dǎo)入R語(yǔ)言，獲得區(qū)分模型。

本發(fā)明的基本原理是利用分子動(dòng)力學(xué)計(jì)算雄激素受體結(jié)合受試化合物后發(fā)生的構(gòu)型變化，基于H12鏈在8～20ns時(shí)間波動(dòng)情況、化合物與受體在8～20ns時(shí)間內(nèi)形成氫鍵情況、配體小分子運(yùn)動(dòng)軌跡、配體小分子在模擬期間波動(dòng)情況來(lái)綜合判定受試化合物是否有相關(guān)的受體活性。

采用本發(fā)明方法可以模擬黃酮類化合物于雄激素受體結(jié)合后相互作用的動(dòng)態(tài)過(guò)程，基于分子動(dòng)力學(xué)模擬鑒別物質(zhì)是否具有受體抗性，然后利用CoMSIA模型來(lái)預(yù)測(cè)這些有抗性但活性未知的黃酮類化合物活性。該方法成本低廉，操作簡(jiǎn)便，為大規(guī)模預(yù)測(cè)黃酮類化合物抗雄活性提供了用力的工具，也為進(jìn)一步篩分具有抗雄活性的黃酮類藥物提供支撐。

本方法首次引入定量判斷，并運(yùn)用定量和定性結(jié)合來(lái)提高預(yù)判的精確度，使得抗性和無(wú)抗性黃酮的區(qū)分率達(dá)到87.5％，無(wú)抗性黃酮的篩除率達(dá)到90％，不僅能夠大幅削減實(shí)驗(yàn)室工作量，減少試驗(yàn)品消耗，節(jié)約資源，還能大幅提高QSAR預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性，使得QSAR能夠真正實(shí)現(xiàn)應(yīng)用。

附圖說(shuō)明

圖1是實(shí)施例的區(qū)分模型，圓圈代表實(shí)測(cè)有活性化合物，三角形代表實(shí)測(cè)無(wú)活性化合物。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不僅限于實(shí)施例。

(1)在chemdraw內(nèi)構(gòu)建受試化合物的分子結(jié)構(gòu)，在高斯09軟件中用密度泛函方法b3lyp/6-311G*基組進(jìn)行能量?jī)?yōu)化，然后利用Sybyl7.3軟件賦予Gasteiger-Huckel電荷。本研究中需要的是受體的自由態(tài)結(jié)構(gòu)，從蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(PDB)獲得ER的自由態(tài)結(jié)構(gòu)，其PDB編號(hào)是1A52，然后以1A52作為模板，利用Swiss-Model網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器構(gòu)建AR的初始結(jié)構(gòu)。構(gòu)建的結(jié)果用拉氏圖法進(jìn)行檢驗(yàn)，證明結(jié)果的合理性。所有結(jié)構(gòu)都用spdv檢查，缺失的殘基用該軟件自動(dòng)補(bǔ)齊。然后利用Sybyl7.3軟件的Surflex-dock模塊尋找受體大分子活性口，將受試化合物分別對(duì)接入口袋。選取對(duì)接打分值最高的化合物構(gòu)象作為活性構(gòu)象，將之與受體合并，組成復(fù)合物用于分子動(dòng)力學(xué)模擬。

(2)然后對(duì)構(gòu)建好的配體-受體復(fù)合物進(jìn)行分子動(dòng)力學(xué)模擬。的分子動(dòng)力學(xué)模擬都是基于GROMACS軟件包，該軟件相比于AMBER等其他分子動(dòng)力學(xué)軟件具有更快速的運(yùn)算速度，適宜于大規(guī)模的篩選。對(duì)配體和受體都賦予CHARMM27力場(chǎng)，其中受體的力場(chǎng)參數(shù)為軟件自帶，而配體的力場(chǎng)參數(shù)有Swiss-Param賦予。將整個(gè)系統(tǒng)放入被TIP3P水分子占據(jù)的模型立方體盒子中，復(fù)合物距離盒子邊界的最短距離為1納米。為了保證系統(tǒng)的電性平衡，在體系中加入鈉離子或氯離子。用最陡下降法和共軛梯度法實(shí)現(xiàn)整個(gè)系統(tǒng)的能量收斂，然后系統(tǒng)升溫至300K并一直維持，并賦予1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓。約束受體蛋白后進(jìn)行50ps的分子動(dòng)力學(xué)模擬，最后撤銷約束進(jìn)行模擬。電相互作用使用particle mesh Ewald(PME)算法，范德華力以1納米截?cái)喟霃剑M的步長(zhǎng)2fs，一個(gè)體系一般進(jìn)行20ns的模擬。

(3)根據(jù)模擬的結(jié)果提取受體H12(receptor-H12)空間位置的均方根偏差(root mean square deviation，RMSD)，使用R語(yǔ)言包計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)殘差：RMSD(i)＝a×time(i)+b+ε(i)，其中ε是殘差，a和b是常數(shù)。建立標(biāo)準(zhǔn)偏差和殘差之間的相關(guān)性，獲得區(qū)分模型。當(dāng)化合物位于有活性區(qū)域時(shí)，認(rèn)為該化合物為有抗雄活性；但化合物位于無(wú)活性區(qū)域時(shí)，認(rèn)為該化合物無(wú)抗雄活性；當(dāng)化合物位于模糊區(qū)域時(shí)，則需要進(jìn)行進(jìn)一步判斷。

(4)根據(jù)模擬結(jié)果提取受體-配體相互作用過(guò)程中形成的氫鍵(hydrogen bond)，分析8-20ns間受體于配體形成的氫鍵數(shù)量。當(dāng)配體在A環(huán)有甲氧基且在8-20ns間形成氫鍵數(shù)量很少，認(rèn)為該化合物無(wú)抗雄活性。

(5)觀察受體和配體運(yùn)動(dòng)軌跡，如果配體的運(yùn)動(dòng)軌跡已經(jīng)脫離了雄激素受體的結(jié)合口袋，判定化合物無(wú)抗雄活性；如果受體在模擬過(guò)程結(jié)束后出現(xiàn)“mousetrap”現(xiàn)象，判定化合物有抗雄活性。

(6)使用技術(shù)方案(4)-(5)對(duì)技術(shù)方案(3)中無(wú)活性組合模糊組的化合物進(jìn)行驗(yàn)證和區(qū)分：若這兩組中化合物滿足技術(shù)方案(4)和(5)中關(guān)于有(無(wú))活性判定，則化合物有(無(wú))活性。

(7)運(yùn)用sybyl軟件中CoMSIA模塊，基于已知黃酮化合物抗雄活性，建立CoMSIA預(yù)測(cè)模型，預(yù)測(cè)未知活性但判定具有抗雄活性黃酮化合物的活性大小。

實(shí)施例

初始態(tài)受體文件構(gòu)建：

AR屬于“雌激素類”核受體，其初始態(tài)結(jié)構(gòu)并未獲得，但ERα初始態(tài)的蛋白晶體結(jié)構(gòu)已經(jīng)由前人通過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得(PDB code:1A52)。“雌激素類”核受體的特點(diǎn)是在激活態(tài)/抑制態(tài)的H12位置差異明顯，因此AR也具有相同特性。從美國(guó)國(guó)家生物信息中心數(shù)據(jù)庫(kù)(national center for biotechnology information,NCBI)獲AR的氨基酸序列文件，導(dǎo)入Swiss-Model網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器中，然后以1A52為模板進(jìn)行同源模建。同源模建完成后要在Pymol軟件中進(jìn)行疊合處理，將新構(gòu)建H11-H12以H11為疊合參考系疊合至實(shí)驗(yàn)PDB文件，將構(gòu)建的H12合并至原文件的H1-H11獲得新的結(jié)構(gòu)文件，也即受體的初始態(tài)結(jié)構(gòu)。過(guò)程中，需要的AR的PDB文件是1T7T。

配體-受體復(fù)合物構(gòu)建：

利用本發(fā)明對(duì)蛋白文件和小分子文件進(jìn)行預(yù)處理，用于進(jìn)一步的分子對(duì)接與分子動(dòng)力學(xué)模擬。在chemdraw12.0內(nèi)繪制小分子的二維結(jié)構(gòu)式，然后用chem3D12.0的MM2模塊進(jìn)行初步優(yōu)化。優(yōu)化得到的結(jié)構(gòu)用高斯軟件進(jìn)行量子優(yōu)化。其中量子優(yōu)化利用密度泛函方法進(jìn)行，在6-311G*基組上進(jìn)行。最后對(duì)所有小分子統(tǒng)一地賦予Gasteiger-Huckel電荷。所有用于分子動(dòng)力學(xué)模擬的受體文件也都要進(jìn)行預(yù)處理。先用spdbv對(duì)氨基酸缺損的支鏈進(jìn)行修補(bǔ)，在Sybyl7.3內(nèi)對(duì)每個(gè)蛋白文件加氫原子，同時(shí)賦予Gasteiger-Huckel電荷。

利用Sybyl7.3的Surflex-Dock模塊將小分子對(duì)接入受體文件。用自動(dòng)搜索方法搜尋對(duì)接口袋，范圍閾值和膨脹系數(shù)分別設(shè)為0.5和0。然后將小分子對(duì)接入對(duì)接口袋，每一個(gè)小分子將得到得分最高的是個(gè)構(gòu)象，我們選取得分最高的構(gòu)象作為分子動(dòng)力學(xué)模擬的初始構(gòu)象。

建立黃酮類的抗雄激素活性區(qū)分模型：

選取48種典型的黃酮類作為篩選集，采用本發(fā)明構(gòu)建48個(gè)黃酮-AR復(fù)合物，體系經(jīng)過(guò)預(yù)處理后使用Gromacs進(jìn)行分子動(dòng)力學(xué)模擬。其中包括結(jié)構(gòu)10000步最陡下降法優(yōu)化、50ps升溫至300K、200ps的常溫常壓(NPT)系綜平衡和最終的模擬過(guò)程。在模擬過(guò)程中，體系維持在1atm，截?cái)喟霃皆O(shè)為動(dòng)力學(xué)模擬步長(zhǎng)為2fs，每2ps保存一個(gè)構(gòu)象用于結(jié)果分析。

每個(gè)體系進(jìn)行20ns的動(dòng)力學(xué)模擬，然后通過(guò)對(duì)H12的RMSD的分析發(fā)現(xiàn)，有抗雄活性的化合物的H12在8ns之前就保持穩(wěn)定，而其他體系的H12一直保持波動(dòng)。我們將H12在8-20ns的RMSD導(dǎo)入R語(yǔ)言，獲得區(qū)分模型，13個(gè)黃酮化合物位于有活性區(qū)，27個(gè)位于無(wú)活性區(qū)、7個(gè)位于模糊區(qū)。分析黃酮化合物8-20ns模擬時(shí)間內(nèi)生成的氫鍵數(shù)量，當(dāng)某一化合物在A環(huán)有甲氧基但很少生成氫鍵的情況下，認(rèn)為該化合物無(wú)活性。在活性區(qū)域中的櫻黃素(prunetin)由于在A環(huán)有甲氧基且很少氫鍵，認(rèn)為該化合物無(wú)抗雄活性；在模糊區(qū)域中的7-甲氧基黃酮也同樣為無(wú)抗雄活性。此外，在活性組中，6-甲氧基黃烷酮表現(xiàn)出“mousetrap”現(xiàn)象，再一次確定活性；在非活性組中，3-羥基-6-甲氧基黃酮直接在模擬過(guò)程中從結(jié)合口袋中逃逸，再次確定無(wú)活性。通過(guò)本發(fā)明，48個(gè)黃酮化合物中的42個(gè)可以判定是否具有抗雄活性；31個(gè)無(wú)抗雄活性黃酮化合物中的27個(gè)可以被明確鑒定出來(lái)，鑒別率高達(dá)90％。鑒別結(jié)果與我們通過(guò)MDA-kb2實(shí)驗(yàn)結(jié)果和文獻(xiàn)結(jié)果相一致。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明做任何形式的限制。凡是依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)和方法實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明的技術(shù)和方法方案的范圍內(nèi)。