專利名稱：一種防治阿爾茨海默病或衰老的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種預(yù)防和治療阿爾茨海默病或衰老的藥物組 合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一種慢性的、與年齡相關(guān)的大腦 變性性疾病，以學(xué)習(xí)、記憶等大腦認知功能損害為主要表現(xiàn)。隨著人口老齡化進 程的加速，AD的發(fā)病率和患病率有逐年升高的趨勢，已給患者、家庭和社會帶來 沉重的精神和經(jīng)濟負擔(dān)。具報道，在歐美國家，60歲以上老年人4% — 12%發(fā)生 癡呆，其中半數(shù)以上為AD。新近的調(diào)查結(jié)果顯示，我國癡呆發(fā)病率與歐美國家接
近，癡呆的老年患者已經(jīng)超過500萬例，其中AD占到2/3之多。
目前，AD的確切發(fā)病機理尚不清楚、也缺乏有效的預(yù)防和治療措施。近年來 對AD發(fā)病機理的研究多集中在氧化應(yīng)激方面，因為氧化應(yīng)激是機體老化過程中主 要的生物學(xué)機制之一，自由基在AD發(fā)生發(fā)展中的起著重要作用，而線粒體是細胞 內(nèi)自由基產(chǎn)生的主要來源。而AD特征性病理變化之一的老年斑主要成分是P淀粉 樣蛋白(e-amyloid, AP)，越來越多的研究表明，由A P介導(dǎo)的線粒體氧化損傷 在AD發(fā)生發(fā)展中的起著至關(guān)重要的作用。
吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone， PQQ)是小分子化合物，最早是從 微生物中發(fā)現(xiàn)。有研究發(fā)現(xiàn)，高等真核生物體內(nèi)也有PQQ存在。PQQ是細菌中多種 重要酶類的輔基，并能影響呼吸鏈功能與體內(nèi)自由基水平。研究顯示，PQQ缺乏的 小鼠生長緩慢，生殖能力差，并容易產(chǎn)生關(guān)節(jié)炎癥，因此認為，PQQ可能是體內(nèi)必需 的維生素之一。目前認為，PQQ的主要生理功能有抗氧化、改善線粒體呼吸鏈功
能(主要是脫氫酶復(fù)合體ni)、促神經(jīng)生長作用等。
苯磷硫胺是硫胺素(維生素B1)脂溶性衍生物，其吸收、提高a-酮戊二酸脫 氫酶和轉(zhuǎn)酮醇酶等活性的生理作用優(yōu)于硫胺素數(shù)十倍，具有顯著抗氧化、改善線 粒體呼吸鏈功能(主要是脫氫酶復(fù)合體I)及核酸合成功能等。
輔酶Q10是生物體內(nèi)廣泛存在的脂溶性醌類化合物，在人體呼吸鏈中質(zhì)子移位及電子傳遞中起重要作用，能作為細胞代謝和細胞呼吸激活劑，還是重要的抗氧 化劑和非特異性免疫增強劑，具有促進氧化磷酸化反應(yīng)，保護生物膜結(jié)構(gòu)完整性， 能激活人體細胞和細胞能量的營養(yǎng)，具有提高人體免疫力、增強抗氧化、延緩衰 老和增強人體活力的作用。
研制有效的防治阿爾茨海默病或衰老的藥物已是本領(lǐng)域研究者的關(guān)注熱點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種防治阿爾茨海默病或衰老的藥物組合物。涉及含吡 咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone， PQQ)、苯磷硫胺和/或輔酶Q10的藥物 組合物及其制備方法和防、治阿爾茨海默病或衰老藥物中的用途。
本發(fā)明藥物組合物由吡咯喹啉醌和苯磷硫胺和/或輔酶Q10組成。
所述的PQQ，其分子式C14H6N208;分子量約為330。經(jīng)動物實驗表明，其具 有改善野生型和AD老年小鼠的線粒體功能、清除體內(nèi)自由基、拮抗氧化損傷的功 能，從而能顯著改善小鼠的認知功能、延長平均期望壽命。
所述的藥物組合物中各組分的重量配比是(每日計量)
吡咯喹啉醌0. 1 畫毫克，苯磷硫胺1 讓毫克，輔酶Q10 1 畫毫克。
所述的吡咯喹啉醌按常規(guī)方法制成片劑、粉劑、噴霧劑、水針劑、粉針劑、直 腸栓劑或皮膚貼劑(透皮給藥)。
所述的苯磷硫胺或輔酶Q10可選用其不同制劑。
本發(fā)明藥物進行了動物實驗，連續(xù)或分不同時間段給藥達6個月，每日給藥 劑量1毫克至1000毫克，其中，采用吡咯喹啉醌加苯磷硫胺；或加苯磷硫胺和輔 酶QIO，其中，吡咯喹啉醌劑量為每日0.1毫克至1000毫克，苯磷硫胺和/或輔酶 Q10每日劑量分別為1毫克至1000毫克。
本發(fā)明觀測了轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠和野生型老年小鼠治療組與對照組的 認知功能、平均期望壽命、體重及海馬神經(jīng)發(fā)生功能、腦內(nèi)tau蛋白異常磷酸化、 AP淀粉樣蛋白分泌和沉積、神經(jīng)纖維纏結(jié)、丙二醛等指標變化情況。結(jié)果表明， 與對照組相比，吡咯喹啉醌和苯磷硫胺或/和輔酶Q10具有顯著的改善老年野生型 小鼠、AD模型小鼠的認知功能、延長平均期望壽命、增強海馬神經(jīng)發(fā)生功能、減 少tau蛋白異常磷酸化和A e淀粉樣蛋白分泌與沉積等AD特征性病理變化等作用，同時所述藥物還能有效降低腦組織丙二醛含量、增加NADPH/NADP+的比例，顯示其 顯著的抗氧化損傷作用。以上作用均證明所述藥物組合物具有預(yù)防和治療AD與衰 老的作用。
所述的轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠為6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠，用藥量一般 按3毫克/公斤/日計算，所述的野生型老年小鼠為12月齡的野生昆明種小鼠其連 續(xù)6個月使用每日劑量為0.1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌和1毫克-1000毫克苯磷 硫胺，用藥量一般按200毫克/公斤/日計算。
上述藥物的動物實驗中，采用Y迷宮檢測小鼠的學(xué)習(xí)、記憶和總反應(yīng)時間等認 知功能情況；飼養(yǎng)至一半小鼠死亡的時間，以此指標來推算可能的平均期望壽命; 分別用BrdU、 DCX、 Neun、磷酸化tau蛋白、AP淀粉樣蛋白抗體進行組織細胞免 疫熒光染色；組織勻漿測定丙二醛、NADPIANADP+等。
本發(fā)明的動物實驗結(jié)果，揭示了吡咯喹啉醌和苯磷硫胺、輔酶Q10的藥物組 合物具有通過調(diào)制硫胺素相關(guān)的蛋白酶活性而改善腦細胞能量代謝、拮抗氧化損
傷途徑來預(yù)防和治療阿爾茨海默病和衰老的作用，具有重大的理論意義和潛在的 社會與經(jīng)濟價值。
具體實施例方式
實施例1動物實驗
1) 制備不同劑型的吡咯喹啉醌
按常規(guī)方法，分別制備吡咯喹啉醌片劑、粉劑、粉針劑、直腸栓劑、皮膚貼 劑(透皮給藥)、水針劑、噴霧劑等；
2) 不同劑型吡咯喹啉醌的臨床應(yīng)用實驗， 應(yīng)用不同劑型的吡咯喹啉醌，通過口 (含)服、肌肉注射、腹腔注射、靜脈
注射、噴霧給藥、直腸給藥或透皮給藥的不同途徑，使用每日0. 1毫克-1000毫克 預(yù)防或治療阿爾茨海默病或衰老；
3) 動物實驗療效觀測，
通過口服或腹腔注射給藥方式，給予昆明種自然衰老小鼠、轉(zhuǎn)基因阿爾茨海 默病模型小鼠連續(xù)服用吡咯喹啉醌6個月，按每日每千克體重1毫克給藥，以非 治療組為對照組，結(jié)果顯示，吡咯喹啉醌治療組具有顯著改善治療動物的認知功能、延長其平均期望壽命作用，證明吡咯喹啉醌具有預(yù)防和治療阿爾茨海默病與 衰老的作用；
連續(xù)或分不同時間段給藥達6個月，每日給藥劑量O. l毫克至1000毫克，其 中，采用吡咯喹啉醌加苯磷硫胺；或加苯磷硫胺和輔酶QIO。其中，吡咯喹啉醌劑 量均為每日0. 1毫克至1000毫克，苯磷硫胺或輔酶Q10每日劑量分別為1毫克至 1000毫克。
結(jié)果顯示，吡咯喹啉醌和苯磷硫胺和/或輔酶Q10聯(lián)合應(yīng)用預(yù)防和治療阿爾茨 海默病或衰老具有同樣效果。 實施例2
1、 常規(guī)方法制備吡咯喹啉醌片劑；
2、 通過經(jīng)口給藥途徑，給6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠或12月齡的野生昆明 種小鼠連續(xù)6個月使用每日劑量為0. 1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌；
3、 連續(xù)或分不同時間段給藥達6個月，每日給藥劑量O. 1毫克至1000毫克， 其中，采用吡咯喹啉醌加苯磷硫胺；或加苯磷硫胺和輔酶QIO。其中，吡咯喹啉醌 劑量均為每日0. 1毫克至1000毫克，苯磷硫胺或輔酶Q10每日劑量分別為1毫克 至1000毫克。
結(jié)果顯示，治療組小鼠具有顯著改善認知功能、延長小鼠平均期望壽命作用， 吡咯喹啉醌和苯磷硫胺和/或輔酶Q10聯(lián)合應(yīng)用具有預(yù)防和治療阿爾茨海默病與衰 老的作用。 實施例3
1、 常規(guī)方法制備吡咯喹啉醌水針劑；
2、 通過腹腔給藥途徑，給6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠或12月齡的野生昆明 種小鼠連續(xù)6個月使用每日劑量為0. 1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌；
3、 連續(xù)或分不同時間段給藥達6個月，每日給藥劑量O. l毫克至1000毫克， 其中，采用吡咯喹啉醌加苯磷硫胺；或加苯磷硫胺和輔酶QIO。其中，吡咯喹啉醌 劑量均為每日0. 1毫克至1000毫克，苯磷硫胺或輔酶Q10每日劑量分別為1毫克 至1000毫克。
結(jié)果顯示，治療組小鼠具有顯著改善認知功能、延長小鼠平均期望壽命作用， 吡咯喹啉醌和苯磷硫胺和/或輔酶Q10聯(lián)合應(yīng)用具有預(yù)防和治療阿爾茨海默病與衰老的作用。 實施例4
1、常規(guī)方法制備吡咯喹啉醌水針劑；
2、通過噴霧給藥途徑，給6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠或12月齡的野生昆明 種小鼠連續(xù)6個月使用每日劑量為0. 1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌；
3、連續(xù)或分不同時間段給藥達6個月，每日給藥劑量O. 1毫克至1000毫克， 其中，采用吡咯喹啉醌加苯磷硫胺；或加苯磷硫胺和輔酶QIO。其中，吡咯喹啉醌 劑量均為每日0. 1毫克至1000毫克，苯磷硫胺或輔酶Q10每日劑量分別為1毫克 至1000毫克。
結(jié)果顯示，治療組小鼠具有顯著改善認知功能、延長小鼠平均期望壽命作用， 吡咯喹啉醌和苯磷硫胺和/或輔酶Q10聯(lián)合應(yīng)用具有預(yù)防和治療阿爾茨海默病與衰 老的作用。 實施例5
1、 常規(guī)方法制備吡咯喹啉醌苯磷硫胺水針劑；
2、 通過腹腔給藥途徑，給6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠或12月齡的野生昆明 種小鼠連續(xù)6個月使用每日劑量為0. 1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌和1毫克-1000 毫克苯磷硫胺；
3、 結(jié)果顯示，吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫胺治療組小鼠具有顯著改善認知功能、 延長小鼠平均期望壽命作用，證明吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫胺具有預(yù)防和治療阿爾 茨海默病與衰老的作用。
實施例6
1、 常規(guī)方法制備吡咯喹啉醌苯磷硫胺水針劑；
2、 通過噴霧給藥途徑，給6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠或12月齡的野生昆明 種小鼠連續(xù)6個月使用每日劑量為0. 1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌和1毫克-1000 毫克苯磷硫胺；
3、 結(jié)果顯示，吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫胺治療組小鼠具有顯著改善認知功能、 延長小鼠平均期望壽命作用，結(jié)果證明吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫胺具有預(yù)防和治療 阿爾茨海默病與衰老的作用。實施例7
1、 依據(jù)文獻報道的常規(guī)方法，制備吡咯喹啉醌苯磷硫胺水針劑；
2、 通過靜脈給藥途徑，給6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠或12月齡的野生 昆明種小鼠連續(xù)1個月使用每日劑量為0. 1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌和1毫 克-IOOO毫克苯磷硫胺；
3、 結(jié)果顯示，吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫胺治療組小鼠具有顯著改善認知功 能、延長小鼠平均期望壽命作用，結(jié)果證明吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫胺具有預(yù)防 和治療阿爾茨海默病與衰老的作用。
實施例8
1、 常規(guī)方法制備吡咯喹啉醌苯磷硫胺輔酶Q10水針劑；
2、 通過腹腔給藥途徑，給6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠或12月齡的野生 昆明種小鼠連續(xù)6個月使用每日劑量為0. 1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌、1毫 克-1000毫克苯磷硫胺、l毫克-1000毫克輔酶Q10;
3、 結(jié)果顯示，吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫胺、輔酶Q10治療組小鼠具有顯 著改善認知功能、延長小鼠平均期望壽命作用，結(jié)果證明吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷 硫胺、輔酶Q10具有預(yù)防和治療阿爾茨海默病與衰老的作用。
實施例9
1、 常規(guī)方法制備吡咯喹啉醌苯磷硫胺輔酶Q10水針劑；
2、 通過噴霧給藥途徑，給6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠或12月齡的野生 昆明種小鼠連續(xù)6個月使用每日劑量為0. 1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌、1毫 克-IOOO毫克苯磷硫胺、1毫克-1000毫克輔酶Q10;
3、結(jié)果顯示，吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫胺輔酶Q10治療組小鼠具有顯著 改善認知功能、延長小鼠平均期望壽命作用，結(jié)果證明苯磷硫胺具有預(yù)防和 治療阿爾茨海默病與衰老的作用。
實施例10
1、 依據(jù)文獻報道的常規(guī)方法，制備吡咯喹啉醌苯磷硫胺輔酶Q10水針劑；
2、 通過靜脈給藥途徑，給6月齡的轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠或12月齡的野生昆明種小鼠連續(xù)1個月使用每日劑量為0.1毫克-1000毫克吡咯喹啉醌、1毫 克-1000毫克苯磷硫胺、1毫克-1000毫克輔酶Q10;
3、結(jié)果顯示，吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫胺、輔酶Q10治療組小鼠具有顯著 改善認知功能、延長小鼠平均期望壽命作用，結(jié)果證明吡咯喹啉醌聯(lián)合苯磷硫 胺、輔酶Q10具有預(yù)防和治療阿爾茨海默病與衰老的作用。
權(quán)利要求
1、一種防治阿爾茨海默病或衰老的藥物組合物，其特征是由吡咯喹啉醌和苯磷硫胺和/或輔酶Q10組成，所述的吡咯喹啉醌，其分子式C14H6N2O8；分子量330；所述的藥物組合物中各組分的重量配比是，每日計量吡咯喹啉醌0.1～1000毫克，苯磷硫胺1～1000毫克，輔酶Q101～1000毫克。
2、 按權(quán)利要求1所述的防治阿爾茨海默病或衰老的藥物組合物，其特征是 所述的吡咯喹啉醌選自片劑、粉劑、噴霧劑、水針劑、粉針劑、直腸栓劑或皮膚 貼劑。
3、 按權(quán)利要求1所述的防治阿爾茨海默病或衰老的藥物組合物，其特征是 所述的苯磷硫胺或輔酶Q10選用其不同制劑。
4、 權(quán)利要求1的藥物組合物，其中的吡咯喹啉醌和苯磷硫胺在制備預(yù)防和治 療阿爾茨海默病或衰老藥物中的用途。
5、 權(quán)利要求l的藥物組合物，其中的吡咯喹啉醌、苯磷硫胺和輔酶Q10在 制備預(yù)防和治療阿爾茨海默病或衰老藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種含吡咯喹啉醌、苯磷硫胺和/或輔酶Q10藥物組合物及其制備方法和預(yù)防、治療阿爾茨海默病或衰老藥物中的用途。經(jīng)動物實驗證實，本發(fā)明藥物組合物具有改善野生型和阿爾茨海默病老年小鼠的線粒體功能、清除體內(nèi)自由基、拮抗氧化損傷的功能，從而能顯著改善小鼠的認知功能、延長平均期望壽命，具有預(yù)防和治療阿爾茨海默病和衰老的作用，和廣泛臨床應(yīng)用前景?？芍苽漕A(yù)防和治療阿爾茨海默病或衰老的藥物。
文檔編號A61P25/00GK101317849SQ20071004229
公開日2008年12月10日 申請日期2007年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月20日
發(fā)明者鐘春玖, 顧建新 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院